El valor de los grupos sanguíneos según el sistema AVO. Sistemas sanguíneos antigénicos

Análisis de anticuerpos por sistema ABO - un estudio clínico general destinado a detectar alfa- o beta-isohemaglutininas en sangre - anticuerpos IgG naturales contra los antígenos A o B faltantes. Se determinan en caso de incompatibilidad entre la madre y el feto para los antígenos del sistema ABO. La detección de anticuerpos antigrupo en la sangre de una mujer embarazada es necesaria para el diagnóstico de conflictos intergrupales y la implementación oportuna de medidas terapéuticas para prevenir el aborto espontáneo, el parto prematuro y la enfermedad hemolítica del feto (recién nacido). La sangre se extrae de una vena. Método de investigación: reacción de aglutinación. Normalmente (con una baja probabilidad de conflicto intergrupal), el resultado es negativo. Los resultados del análisis están listos en un día hábil.

Los anticuerpos según el sistema ABO o anticuerpos antigrupo son inmunoglobulinas, que se producen cuando aparece un antígeno en la sangre que es incompatible en una relación grupal. El grupo sanguíneo depende de las proteínas especiales presentes en el lado externo de la membrana de los eritrocitos: los aglutinógenos. En la práctica médica, se determinan los aglutinógenos A, B y D. En personas con grupo sanguíneo I, eritrocitos sin proteínas A y B, con grupo II - con proteínas de tipo A, con grupo III - con proteínas de tipo B, con grupo IV - con proteínas de tipo A y B. La presencia o ausencia de aglutinógeno D determina un factor Rh positivo o negativo. Los anticuerpos anti-grupo son producidos por el cuerpo cuando los glóbulos rojos con aglutinógenos A o B desconocidos ingresan al torrente sanguíneo. La reacción de estos anticuerpos conduce a la destrucción de glóbulos rojos extraños.

La producción de anticuerpos según el sistema ABO es posible con transfusiones de sangre, cuando se mezcla la sangre del feto y la madre. Teóricamente, la incompatibilidad de grupo de la sangre se determina en los siguientes casos: si el receptor (madre) tiene el grupo sanguíneo I o III, y el donante (feto) - II; si el receptor (madre) tiene un grupo sanguíneo I o II y el donante (feto) tiene III; si el receptor (madre) tiene un grupo sanguíneo I, II o III y el donante (feto) tiene IV. En la práctica, la producción de anticuerpos antigrupo se observa con mayor frecuencia en mujeres con grupo sanguíneo I, ya que no contiene aglutinógenos A y B y, al mismo tiempo, es el más común. El inmunoconflicto durante el embarazo puede conducir a la eritroblastosis del recién nacido, con transfusiones de sangre, a la hemólisis intravascular de los eritrocitos. Están en riesgo los receptores después de varias transfusiones, así como las mujeres embarazadas que se han sometido a transfusiones de sangre, interrupciones artificiales y naturales, que tienen hijos con enfermedad hemolítica.

Para un análisis de sangre para anticuerpos usando el sistema ABO, se extrae sangre de una vena. El método de investigación más común es la reacción de aglutinación mediante gel difuso. Los resultados se utilizan en obstetricia y ginecología en la planificación y seguimiento del embarazo, así como en cirugía y medicina de reanimación al realizar transfusiones de sangre.

Indicaciones

Un análisis de sangre para anticuerpos de acuerdo con el sistema ABO está indicado para mujeres durante el embarazo si existe la posibilidad de desarrollar un conflicto de grupo inmunológico. Al determinar el riesgo, se tiene en cuenta la combinación de grupos sanguíneos de los padres. La presencia de anticuerpos en la sangre se determina con mayor frecuencia en mujeres embarazadas con grupo I, si II, III o IV se transmitieron del padre al niño. Las combinaciones de II materno + III o IV paterno, III materno + II o IV paterno también son probabilísticamente conflictivas. Al prescribir un análisis, también se tienen en cuenta otros factores de riesgo: alteración de la permeabilidad placentaria, trauma abdominal, procedimientos de diagnóstico invasivos (por ejemplo, amniocentesis). En todos estos casos, es posible que los eritrocitos fetales entren en la sangre de la madre, seguidos de la producción de anticuerpos antigrupo. Es imposible determinar clínicamente la presencia de un conflicto inmunológico de este tipo: la mujer no siente ningún cambio. Pero si no rastrea el título de anticuerpos, existe el riesgo de desarrollar una enfermedad hemolítica en el niño, que se manifiesta por edema, coloración amarillenta, anemia, agrandamiento del bazo e hígado, en casos graves, retrasos en el desarrollo.

Otra indicación para analizar la sangre en busca de anticuerpos según el sistema ABO son las complicaciones después de la transfusión de sangre. En un conflicto grupal, a menudo se desarrolla hemólisis intravascular aguda, una reacción a la destrucción de los glóbulos rojos en la sangre inyectada. Se manifiesta como una sensación de ardor en el lugar de la infusión, fiebre, escalofríos, dolor en la espalda y el tronco y ataques de pánico. Al monitorear el embarazo, la decisión de realizar un análisis la toma el médico, teniendo en cuenta la totalidad de los factores de riesgo para el desarrollo de un conflicto grupal. Una prueba de sangre para anticuerpos que utiliza el sistema ABO no es una prueba de detección, a diferencia de, por ejemplo, una prueba de anticuerpos anti-eritrocitos. Esto se debe al hecho de que un conflicto inmunológico de este tipo se desarrolla con poca frecuencia, y la enfermedad hemolítica avanza de forma leve y se manifiesta principalmente por la ictericia de los recién nacidos.

Preparación para análisis y muestreo de material.

El material para el análisis de anticuerpos por el sistema ABO es sangre venosa. El procedimiento de recogida se suele realizar por la mañana. No hay requisitos especiales para la preparación, es recomendable donar sangre 4-6 horas después de comer. Los últimos 30 minutos deben transcurrir en un ambiente tranquilo, sin estrés físico o emocional. La sangre se extrae de la vena cubital utilizando un sistema de vacío sin anticoagulante o con un activador de coagulación. Almacenado a una temperatura de 2 a 8 ° C, dentro de 2-3 horas se entrega al laboratorio.

Los anticuerpos del sistema ABO se determinan en sangre mediante el método de aglutinación. El procedimiento de investigación consta de varias etapas. Primero, la muestra de prueba se agrega a microtubos con gel de filtración. Luego se colocan en una incubadora por un tiempo, luego en una centrífuga. Los eritrocitos, que están unidos a los anticuerpos anti-grupo, son más grandes y, por lo tanto, no atraviesan el gel, sino que permanecen en su superficie. Como resultado de la centrifugación, los eritrocitos libres se depositan en el fondo del tubo. La distribución de eritrocitos se utiliza para evaluar la presencia de anticuerpos en la muestra. La preparación de los resultados de la investigación lleva 1 día.

Valores normales

Los anticuerpos del sistema ABO se presentan en dos tipos: α y β. Los primeros se producen para el aglutinógeno A, los segundos para el aglutinógeno B. Ambos tipos de anticuerpos pueden ser naturales e inmunes, es decir, adquiridos como resultado de la sensibilización. Normalmente, el título de anticuerpos α naturales es de 1: 8 a 1: 256, el título de anticuerpos β naturales es de 1: 8 a 1: 128. Normalmente, no se detectan anticuerpos inmunes contra el grupo. La disminución fisiológica en el nivel de anticuerpos naturales se puede determinar en niños y ancianos.

Valores crecientes

El motivo del aumento de los valores del análisis de anticuerpos según el sistema ABO es la sensibilización del organismo, provocada por la ingesta de un antígeno que es incompatible por grupos. En estos casos, los títulos de anticuerpos antigrupo naturales aumentan y, en ocasiones, se determinan los anticuerpos antigrupo inmunitarios de forma completa e incompleta. La mayoría de las veces, las desviaciones de esta naturaleza se diagnostican en mujeres embarazadas con grupo sanguíneo I, ya que los eritrocitos no tienen aglutinógenos ni de tipo A ni de tipo B, y la frecuencia del grupo es del 45%.

Disminución de valores

Una disminución en los valores del análisis de anticuerpos según el sistema ABO no tiene valor diagnóstico; algunas patologías, por ejemplo, agammaglobulinemia, enfermedad de Hodgkin, leucemia linfocítica crónica, pueden convertirse en sus causas. En ausencia de isoinmunización con factores específicos, los anticuerpos antigrupo inmunes están ausentes y los títulos naturales son bajos.

Tratamiento de desviaciones de la norma.

Un análisis de sangre para anticuerpos según el sistema ABO tiene el mayor valor pronóstico cuando se monitorean embarazos en mujeres con grupo sanguíneo I. Sus resultados permiten identificar el estado de sensibilización a factores de grupo y prevenir el desarrollo de un conflicto inmunológico que conduzca a la eritroblastosis del recién nacido. Si se detecta un aumento en el título de anticuerpos antigrupo naturales, se determinan los anticuerpos inmunes, entonces es necesario buscar el consejo del obstetra-ginecólogo que lidera el embarazo. La decisión sobre la necesidad y las tácticas de la terapia la toma un especialista individualmente.

El procedimiento de determinación de grupos sanguíneos según el sistema ABO consiste en detectar los antígenos A y B en los eritrocitos mediante anticuerpos estándar y utilizar aglutininas en el plasma o suero de la sangre analizada con eritrocitos estándar. La técnica se desarrolló a principios del siglo XX y todavía se utiliza activamente en medicina. La determinación de los antígenos A y B se realiza gracias a las tsoliclonas anti-A y anti-B.

Conceptos básicos

En los donantes, no solo se determinan siempre los antígenos en los eritrocitos, sino también las aglutininas en suero (plasma) utilizando eritrocitos estándar. La sangre venosa se utiliza como biomaterial. Antes del estudio, es necesario dejar los alimentos grasos un día antes del análisis y no fumar durante media hora antes de realizar la prueba. Los grupos sanguíneos se determinan dos veces: primero en el departamento médico, donde se recolecta el material, y luego se confirman mediante investigaciones en el laboratorio.

La determinación de grupos sanguíneos según el sistema ABO es la principal prueba utilizada en transfusiología. Algunos animales también tienen un sistema de grupos sanguíneos similar, como los chimpancés, los gorilas y los bonobos.

Historia de descubrimiento

En ciencia, existe una opinión generalmente aceptada de que el método para determinar los grupos sanguíneos de acuerdo con el sistema ABO fue identificado por primera vez por Karl Landsteiner, un científico austriaco, en 1900. Luego describió en su trabajo tres tipos de antígenos. Por ello, treinta años después, fue galardonado con el Premio Nobel de Medicina y Fisiología. Debido al hecho de que antes no había vínculos estrechos entre científicos, se estableció más tarde que el serólogo checo Jan Jansky, independientemente de la investigación de K. Landsteiner, describió por primera vez cuatro grupos sanguíneos humanos, pero su investigación no fue conocida por una amplia audiencia. Actualmente, es la clasificación desarrollada por Y. Yansky que se utiliza en Rusia y las repúblicas de la ex URSS. En los Estados Unidos, W.L. Moss escribió un trabajo similar en 1910.

Método de determinación de grupos sanguíneos según el sistema ABO utilizando tsoliclones

El tipo de sangre debe determinarse en una habitación con buena iluminación, observando un rango de temperatura de 15 a 25 grados centígrados, ya que las desviaciones de esta norma pueden afectar los resultados de la prueba. Las iniciales y el apellido del paciente están escritos en la placa o placa. De izquierda a derecha o en círculo, se aplican las designaciones estándar de grupos (O (I), A (II), B (III)). Debajo de ellos se coloca gota a gota el suero correspondiente con pipetas separadas para cada tipo. Luego se les agrega la sangre del paciente. El material de investigación se toma del lóbulo de la oreja o del dedo. Esto es requerido por la técnica de determinación del grupo sanguíneo según el sistema ABO.

También es legal usar glóbulos rojos en el tubo de ensayo después de que se haya formado el coágulo. Es necesario que la cantidad de suero sea diez veces la cantidad de sangre agregada. Después de eso, las gotas se mezclan con varillas de vidrio (por separado para cada una). Dentro de cinco minutos, agitando suavemente la placa, observe la aparición de la reacción de hemaglutinación. Se encuentra en el hecho de que aparecen pequeños bultos rojos que luego se fusionan en otros más grandes. En este momento, el suero pierde casi por completo su color.

Para eliminar la falsa hemaglutinación por simple pegado de eritrocitos, después de tres minutos, agregue una gota de solución salina y verifique si persiste la aglutinación. Si es así, entonces es cierto. Eso es todo, la definición de grupos sanguíneos según el sistema ABO ya está completa.

interpretación de resultados

Como resultado, se pueden observar cuatro reacciones:

• no se produce aglutinación con ninguno de los sueros; el primer grupo es O (I);
• la reacción se manifestó con los sueros I (ab) y III (a) - el segundo grupo A (II);
• la aglutinación ocurre con los sueros I (ab) y II (b) - el tercer grupo B (III);
• si la reacción ocurre con tres sueros, es necesario realizar un procedimiento adicional con reactivos del grupo AB (IV), que son estándar; si no hay aglutinación en tal gota, podemos asumir que este es el cuarto grupo sanguíneo AB (IV).

Método rápido para el factor Rh

El método para determinar los grupos sanguíneos según el sistema ABO implica la detección simultánea del factor Rh (Rh).

La superficie de la placa se humedece preliminarmente y se escriben en ella "suero control" y "suero anti-rhesus". Luego se colocan una o dos gotas de los reactivos requeridos debajo de las inscripciones y se les agrega el material analizado. Para ello, también puede utilizar sangre de un dedo (en la misma cantidad que el volumen de suero) o los eritrocitos que quedan en el fondo del tubo tras la aparición de un coágulo (la mitad del volumen de suero). La elección del material no afecta el resultado final. Luego, la sangre y el suero se mezclan con una varilla de vidrio seca, después de lo cual se espera la reacción durante cinco minutos. Para eliminar lecturas falsas, se agrega una solución isotónica de cloruro de sodio después de tres a cuatro minutos (solo unas pocas gotas). La determinación del grupo sanguíneo de acuerdo con el sistema ABO y Rh se realiza con mucha frecuencia.

Si se produce una aglutinación de eritrocitos en el suero, esto indica una sangre Rh positiva. Según las estadísticas, Rh + se encuentra en el 85% de la población mundial. Su ausencia nos permite hablar de afiliación Rh negativa. Si aparece aglutinación en el suero de control, entonces se ha vuelto inutilizable. Desafortunadamente, el algoritmo de determinación del grupo sanguíneo ABO no siempre funciona perfectamente.

¿Qué errores se pueden cometer con esta técnica?

Las inexactitudes en la determinación de la pertenencia de la sangre a un grupo en particular dependen de las siguientes razones:

• Técnico.
• La especificidad biológica de la sangre en estudio.
• Carácter defectuoso de sueros estándar y eritrocitos.

Errores técnicos

Posibles errores en la determinación del grupo sanguíneo del sistema ABO de forma cruzada:

Errores biológicos específicos

Los errores asociados con la especificidad biológica de la sangre analizada se dividen en dos tipos.

• Depende de las características de los eritrocitos.
• Errores debidos a las características biológicas del suero.

Consideremos cada tipo con más detalle.

Depende de las características de los eritrocitos.

• Aglutinación tardía debida a formas "débiles" de eritrocitos y antígenos. Para evitar errores, es necesario determinar el grupo sanguíneo de donantes y receptores utilizando eritrocitos estándar. El aglutinógeno A2 debe identificarse volviendo a analizar con otros tipos de reactivos y otros materiales de vidrio, aumentando el tiempo de registro de la reacción.
• "Panagglutinación" ("autoaglutinación"): la capacidad de la sangre de mostrar la misma reacción inespecífica con todos los sueros, incluido el propio. Después de cinco minutos, la gravedad de dicha aglutinación se debilita, aunque debería aumentar. Se observan casos similares en pacientes con cáncer, pacientes quemados, etc. Como control, es necesario evaluar la manifestación de aglutinación de los eritrocitos analizados en el suero estándar del cuarto grupo y solución salina. Con "panaglutinación", el grupo sanguíneo se determina como resultado de un triple lavado de eritrocitos. Si no da el resultado deseado, vale la pena volver a extraer una muestra de sangre en un tubo calentado antes del procedimiento y colocar la muestra en un termocontenedor para ayudar a mantener la temperatura de 37 grados Celsius o más. Luego se debe llevar al laboratorio donde se mantiene la temperatura indicada anteriormente y se utiliza solución salina calentada, placa y reactivos.

• A veces, los eritrocitos de la sangre analizada se disponen como "columnas de monedas" y pueden confundirse con aglutinados. Si agrega dos gotas de solución isotónica y agita suavemente la tableta, los glóbulos rojos están en la posición correcta.
• Aglutinación incompleta o mixta que se produce en pacientes del segundo, tercer y cuarto grupo como consecuencia de un trasplante de médula ósea o en los primeros tres meses tras la transfusión sanguínea 0 (I).

Suero biológico

Errores asociados con el uso de eritrocitos y sueros estándar defectuosos

Los sueros débiles con una vida útil pasada o con un título inferior a 1:32 son capaces de generar una aglutinación débil y tardía. El uso de tales reactivos es inaceptable.

El uso de eritrocitos o sueros estándar inutilizables, preparados en condiciones no estériles y conservados de manera insuficiente, conduce a la aparición de aglutinación "bacteriana", que es de naturaleza inespecífica.

Hay muchas suposiciones populares sobre los grupos sanguíneos del sistema ABO, que aparecieron inmediatamente después de su descubrimiento en varias culturas del mundo. Entonces, por ejemplo, en los años 30 del siglo pasado en Japón y en algunos otros países, una teoría que conecta un grupo sanguíneo con un tipo particular de personalidad ganó popularidad. Hoy en día son populares teorías similares.

También existe la opinión de que una persona con el grupo A es susceptible a una resaca severa, O se asocia con buenos dientes y el grupo A2 tiene el nivel de CI más alto. Pero tales afirmaciones no se han probado científicamente.

Examinamos la determinación de grupos sanguíneos según el sistema ABO utilizando sueros estándar.

Este sistema es el principal que determina la compatibilidad o incompatibilidad de la sangre transfundida. Incluye dos importantes antígenos determinados genéticamente: A y B, y dos tipos de anticuerpos contra ellos, aglutininas ay b. Las combinaciones de aglutinógenos y aglutininas definen 4 grupos del sistema ABO. Este sistema es el único en el que el plasma de personas no inmunes tiene anticuerpos naturales contra el antígeno faltante. El aglutinógeno A en la mayoría de las personas es bien pronunciado (tiene un gran poder antigénico): con anticuerpos anti-A (a), da una reacción pronunciada de aglutinación de eritrocitos. En aproximadamente el 12% de los individuos de los grupos A (11) y AB (IV), el antígeno tiene propiedades antigénicas débiles, se designa como antígeno A2. Por lo tanto, hay un grupo de antígenos A: A1 (fuerte) y A2, A3, A4 más débil, etc. La existencia de un antígeno A débil debe recordarse al determinar los grupos sanguíneos, ya que los eritrocitos con tales antígenos son capaces de producir solo una aglutinación tardía y débil, que puede dar lugar a errores. Las especies de antígeno B débil son muy raras. Los anticuerpos del sistema ABO a (anti-A) yb (anti-B) son una propiedad normal del plasma sanguíneo, que no cambia cualitativamente durante la vida de una persona, yb son anticuerpos completos y fríos. En la mayoría de los casos, no se encuentran en los recién nacidos y aparecen durante los primeros tres meses de vida o incluso un año. Las aglutininas de grupo alcanzan el desarrollo completo a la edad de 18 años, y en la vejez su título (nivel) disminuye, lo que también se observa en estados de inmunodeficiencia. Además del grupo normal (natural) angitsl y en algunos casos existen anticuerpos inmunes anti-A y anti-B. La razón más común de esto es el embarazo, en el que la madre y el feto tienen diferentes grupos sanguíneos, más a menudo si la madre es del grupo 1 (0), feto 11 (A) o W (B). La determinación del grupo sanguíneo es necesaria para una transfusión de sangre compatible. En este caso, es necesario cumplir con la regla: los eritrocitos del donante no deben contener el antígeno correspondiente a los anticuerpos del receptor, es decir, A y a, B y B, ya que de lo contrario se producirá una destrucción masiva de los eritrocitos inyectados por los anticuerpos del paciente: hemólisis, que puede provocar la muerte del receptor. Los anticuerpos del grupo del donante pueden ignorarse, ya que se diluyen con el plasma del receptor. Por lo tanto, el grupo sanguíneo O (I), que no contiene aglutinógenos, se puede transfundir a personas con cualquier grupo sanguíneo. Las personas con 0 (1) tipo de sangre se consideran "donantes universales". La sangre del grupo A (P) se puede transfundir a los receptores del grupo A (P) y del grupo AB (IV), que no tienen aglutininas en el plasma. El grupo sanguíneo H (W) se puede transfundir a individuos con los grupos H (W) y AB (IV).

La determinación de los grupos sanguíneos del sistema ABO se realiza mediante los siguientes métodos.

I. Determinación del grupo sanguíneo utilizando sueros isohemaglutinantes estándar. Con este método se establece la presencia o ausencia de aglutinógenos en la sangre y, en base a ello, se llega a una conclusión sobre el grupo perteneciente a la sangre en estudio.

2. Determinación del grupo sanguíneo de forma cruzada, es decir, utilizando simultáneamente sueros isohemaglutinantes estándar y eritrocitos estándar. Con este método, así como con el primero, se determina la presencia o ausencia de aglutinógenos y, además, se establece la presencia o ausencia de grupo aglutininas utilizando eritrocitos estándar.

3. Determinación del grupo sanguíneo mediante anticuerpos monoclonales (COLICLONES).

ERRORES EN LA DETERMINACIÓN DE GRUPOS DE SANGRE

Errores técnicos. La violación de las reglas establecidas para determinar los grupos sanguíneos puede conducir a una evaluación incorrecta de los resultados de la reacción. Una desviación de las reglas puede ser:

Uso de sueros o eritrocitos estándar de calidad inferior (vencidos, contaminados con sueros secantes);

Mezcla de muestras de sangre;

Colocación incorrecta de sueros estándar o fotocitos en las gradillas;

Orden incorrecto de aplicación de los reactivos estándar a la placa;

Proporción incorrecta de suero a glóbulos rojos (no 10: 1);

Investigación a temperaturas inferiores a 15 ° C (se produce aglutinación en frío) o superior a 25 ° C (la aglutinación se ralentiza);

Incumplimiento del tiempo requerido para la reacción (5 minutos);

No agregue solución salina seguido de balanceo del plato;

No utilice una reacción de control con suero del grupo ABo (IV);

El uso de pipetas, varillas, platos sucios o húmedos.

En todos los casos de un resultado poco claro o dudoso, es necesario volver a determinar el grupo sanguíneo mediante un método cruzado utilizando sueros estándar de otras series.

Errores asociados a las características biológicas de la sangre analizada.

Determinación incorrecta del grupo A 2 y A 2 B. Los eritrocitos con un antígeno A débil con antisuero forman aglutinados pequeños que emergen lentamente. La reacción se puede considerar negativa, es decir, el grupo A 2 se registra erróneamente como O (1) y A 2 B - como B (W). El riesgo de tal error es especialmente alto en presencia de errores técnicos (la proporción de suero y eritrocitos es 10: 1, la temperatura es superior a 25 ° C, los resultados se tienen en cuenta antes de 5 minutos).

Errores asociados a la presencia de aglutinabilidad inespecífica de los eritrocitos estudiados. Este fenómeno se observa en pacientes con tumores malignos, leucemia, sepsis, quemaduras, cirrosis hepática, anemia hemolítica autoinmune y está causado por disproteinemia. El control con suero ABo (IV) del grupo revela la presencia de aglutinación inespecífica. En estos casos, es necesario volver a determinar la pertenencia al grupo utilizando el método cruzado. En gotas, donde se observa aglutinación, se puede agregar una solución fisiológica calentada a 37 °. Si es necesario, puede lavar los eritrocitos en estudio con solución salina tibia (37 °) y volver a determinar el grupo sanguíneo.

Errores asociados a la presencia de extraaglutininas. En el suero sanguíneo de personas de los grupos A2 (P) y A2B (IV), en aproximadamente el 1% de los casos, se detectan anticuerpos contra el antígeno A1 - A1. Esto complica la determinación del grupo sanguíneo por el método cruzado, ya que el suero de tales individuos aglutina eritrocitos estándar del grupo A (P), es decir, se manifiesta como suero del grupo 0 (1).

En algunas enfermedades, hay una disminución de la aglutinabilidad de los eritrocitos, especialmente del grupo A (P).

En estados de inmunodeficiencia, los ancianos tienen una disminución en el nivel de aglutininas del grupo.

En todos los casos de obtención de un resultado dudoso, la determinación del grupo sanguíneo debe repetirse por el método cruzado utilizando sueros de mayor actividad.

18.Antígenos Rhesus. Grupos del sistema Rh. Significación clínica. Métodos de determinación de antígenos rhesus y posibles errores.

Los antígenos Rhesus son los segundos más importantes en la práctica de transfusiones después de los grupos sanguíneos ABO. Durante el período de introducción activa de la transfusión de sangre en la clínica, el número de complicaciones posteriores a la transfusión después de la transfusión repetida de sangre ABO compatible con antígenos ha aumentado significativamente. El sistema Rhesus incluye seis antígenos, que se designan en paralelo usando dos nomenclaturas: Wiener (Rh 0, rh ", rh", Hr 0, hr ", hr"); Fisher y Reis (D, C, E, d, c, e).

Rh 0 - D, rh "- C, rh" - E, Hr 0 - d, hr "- c, hr" - e.

Dado que el antígeno Rho (D) es el más activo en este sistema, se le llama factor Rh. Dependiendo de la presencia o ausencia de este factor, las personas se dividen en Rh positivo (Rh +) y Rh negativo (Rh-). Esta división se acepta solo en relación con los destinatarios. Los antígenos rh "(C) y rh" (E) son menos activos que Rho (D), pero también se pueden producir anticuerpos contra ellos en personas que no contienen los antígenos C y E en los eritrocitos. Por tanto, los requisitos para eritrocitos de donantes Rh negativos son más estrictos. Los eritrocitos no solo deben contener el antígeno D, sino también C y E. Los antígenos Hro (d), hr "(c), hr" (e) se caracterizan por una baja actividad, aunque los anticuerpos hr "(c) pueden causar conflictos isoinmunológicos. En 1-3% de los individuos Rh positivos en eritrocitos tiene una versión débil del antígeno D - D ", lo que determina la presencia de aglutinación pequeña y cuestionable en la determinación del factor Rh. En estos casos, la afiliación Rh de la sangre del receptor o de la mujer embarazada se indica como Rh negativo (Rh-) y la afiliación Rh de la sangre del donante como Rh positivo (Rh +). No se permite la transfusión de sangre con Angen D u a receptores Rh negativos. Los antígenos Rhesus se forman a las 8-10 semanas de embriogénesis y su antigenicidad puede incluso superar la actividad de los antígenos en adultos. El sistema Rh, a diferencia del sistema ABO, no tiene anticuerpos naturales. Los anticuerpos anti-Rhesus surgen solo después de la inmunización de un organismo Rh negativo como resultado de una transfusión de sangre Rh positivo o un embarazo con un feto Rh positivo. En el cuerpo de las personas sensibilizadas, los anticuerpos contra los antígenos Rh persisten durante varios años, a veces durante toda la vida. En la mayoría de los casos, el título de anticuerpos anti-rhesus disminuye gradualmente, pero aumenta de nuevo drásticamente cuando la sangre Rh positiva vuelve a entrar al cuerpo. Los anticuerpos Rh difieren en especificidad (anti-D, an-III C, etc.) y propiedades serológicas (completas e incompletas). Los anticuerpos completos provocan la aglutinación de eritrocitos en medio salino a temperatura ambiente. Para la manifestación de aglutinación bajo la influencia de anticuerpos incompletos, se requieren condiciones especiales: temperatura elevada, medio coloidal (gelatina, proteína de suero). Los anticuerpos completos (IgM) se sintetizan al comienzo de la respuesta inmune y pronto desaparecen de la sangre. Los anticuerpos incompletos (IgG, IgA) aparecen más tarde, se sintetizan durante mucho tiempo y son la causa del desarrollo de la enfermedad hemolítica en los recién nacidos, ya que atraviesan la placenta y dañan las células del feto.

Determinación de la afiliación Rh de la sangre

El método para determinar el factor Rh depende de la forma de los anticuerpos Rh en el suero estándar y el método de su producción. Se adjunta una instrucción al suero anti-rhesus con una descripción del método para el que está destinada esta serie de sueros dispensados.

En cada estudio, para comprobar la especificidad y actividad del suero anti-rhesus, es necesario establecer un control. Para el control, se utilizan eritrocitos estándar Rh positivos del grupo 0 (1) o del mismo grupo que la sangre de prueba, y eritrocitos estándar Rh negativos del mismo grupo necesariamente que la sangre de prueba.

Al determinar la pertenencia al Rh mediante dos series de sueros estándar en los casos en que se utilizan por métodos diferentes, el resultado se tiene en cuenta como verdadero si coincide en ambas series de estudios después de comprobar las muestras de control que confirman la especificidad y la actividad de cada serie de suero anti-Rhesus, es decir, en ausencia aglutinación con eritrocitos estándar Rh negativos del mismo grupo y presencia de aglutinación con eritrocitos estándar Rh positivos del mismo grupo o grupo 0 (1) y en muestras de control sin suero (reactivo) anti-rhesus. Si se observa una reacción débil o dudosa al determinar la adherencia al Rh, entonces la sangre de esta persona debe volver a examinarse con la misma serie y con otras series de suero anti-Rh, y es deseable incluir suero que contenga anticuerpos completos. Si, al mismo tiempo, todas las series de sueros que contienen anticuerpos incompletos también dan una reacción débil o dudosa, y la reacción con anticuerpos completos es negativa, esto significa que los eritrocitos contienen un tipo débil de antígeno rhesus, el llamado factor D u. En estos casos, la afiliación Rh de la sangre del paciente o de la mujer embarazada se indica como Rh negativo (Rh-) y la afiliación Rh de la sangre del donante como Rh positivo (Rh +), evitando así la transfusión de su sangre a los receptores Rh negativos.

La determinación del factor Rh también se puede realizar mediante los siguientes métodos.

Determinación del factor Rh Rh 0 (D) mediante una reacción de conglutinación utilizando gelatina (en un tubo de ensayo calentado a 46-48 ° C).

Determinación del factor Rh Rho (D) mediante una reacción de conglutinación en un medio de suero en un plano calentado.

Determinación del factor Rh Rh 0 (D) por aglutinación en medio salino en pequeños tubos de ensayo. La reacción de aglutinación en medio salino es adecuada para trabajar solo con suero que contiene anticuerpos Rh completos.

Determinación del factor Rh Rh 0 (D) mediante anticuerpos monoclonales.

Determinación del factor Rh Rho (D) mediante prueba de Coombs indirecta.

19 Anemia. Clasificación y breve descripción. Etiología y patogenia de las anemias. La anemia (del griego anemia - falta de sangre) es un gran grupo de enfermedades caracterizadas por una disminución en la cantidad de hemoglobina o hemoglobina y eritrocitos por unidad de volumen sanguíneo. Las anemias son diferentes en etiología, mecanismos de desarrollo, cuadro clínico y hematológico, por lo que existen muchas clasificaciones diferentes, pero no son lo suficientemente perfectas. LI Idelson propuso una clasificación de trabajo de las anemias para los médicos: 1) anemias agudas poshemorrágicas; 2) anemia por deficiencia de hierro; 3) anemias asociadas con alteración de la síntesis o utilización de porfirinas (sideroblásticas); 4) anemia asociada con alteración de la síntesis de ADN, ARN (megaloblástico); 5) anemia hemolítica; 6) anemia asociada con la inhibición de la proliferación de células de la médula ósea (hipoplásicas, aplásicas); 7) anemias asociadas a la sustitución de la médula ósea hematopoyética por un proceso tumoral (metaplásico).

La anemia puede ser una enfermedad independiente o un síntoma concomitante o una complicación de algunas enfermedades internas, enfermedades infecciosas y oncológicas. Existen anemias polifactoriales, es decir, génesis mixta, por ejemplo: anemia hemolítica con deficiencia de hierro, anemia aplásica con componente hemolítico, etc.

Dependiendo de:

1) los valores del indicador de color distinguen entre anemia:

Normocrómico (índice de color 0,9-1,1);

Hipocrómico (índice de color inferior a 0,85);

Hipercrómico (índice de color superior a 1,15);

2) el valor del diámetro medio de los eritrocitos:

Normocítico (diámetro medio de eritrocitos de 7,2 a 7,5 micrones)

Microcítico (el diámetro medio de los eritrocitos es inferior a 6,5 \u200b\u200bmicrones),

Macrocítico (el diámetro promedio de los eritrocitos es de más de 8.0 micrones),

Megalocítico (el diámetro promedio de los eritrocitos es más de 12 micrones);

3) el volumen promedio de eritrocitos en femtolitros (fl, 1 fl es 1 micrón 3):

Normocítico (volumen medio de eritrocitos 87 ± 5 fl);

Microcítico (el volumen medio de eritrocitos es inferior a 80 fl);

Macrocítico (el volumen promedio de eritrocitos es más de 95 fl);

4) el nivel de reticulocitos en la sangre periférica.

Regenerativo (el número de reticulocitos es 0.5-5%);

Hiperregenerativo (el número de reticulocitos es más del 5%);

Hipo y aregenerativo (el número de reticulocitos está reducido o ausente, a pesar del curso severo de la anemia).

El recuento de reticulocitos es un indicador de la función regenerativa de la médula ósea en relación con la eritropoyesis.

Las anemias normocrómicas incluyen poshemorrágicas agudas (en los primeros días después de la pérdida de sangre), hipo y aplásicas, hemolíticas no esferocíticas, hemolíticas autoinmunes, metaplásicas (con leucemia, mieloma, etc.), así como anemias que se desarrollan con trastornos endocrinos (hipofunción), glándulas suprarrenales. enfermedad renal, infecciones crónicas.

Las anemias hipocrómicas incluyen deficiencia de hierro, sirioblásticas, algunas mielotóxicas, hemolíticas (talasemia).

B12- (fólico) deficiente, algunas anemias hemolíticas (microesferocitosis hereditaria, si los microesferocitos predominan entre los eritrocitos en el frotis) son hipercrómicas. A veces, la anemia por deficiencia de vitamina B1 2 es normocrómica.

Las normocíticas incluyen anemias hemolíticas agudas poshemorrágicas, aplásicas, autoinmunes, etc.

Las anemias microcíticas incluyen deficiencia de hierro, anemias sideroblásticas, macrocíticas - anemias por deficiencia de vigamina B12 (fólico), etc.

Los regenerativos incluyen anemias poshemorrágicas; a anemias hiperregenerativas - hemolíticas, especialmente después de una crisis hemolítica; a hipo y areregenerativas - hipoplásicas, anemias aplásticas.

La médula ósea reacciona al desarrollo de deficiencia de hierro, anemias hemolíticas por irritación, hiperplasia del brote rojo. En las anemias hipoplásicas se observa una disminución progresiva de la eritropoyesis hasta su completo agotamiento.

20. Diagnóstico de laboratorio de anemias saturadas e insaturadas con hierro. La anemia por deficiencia de hierro. Tipos de deficiencia de hierro. Pruebas de laboratorio que reflejan la deficiencia de hierro en el cuerpo. La imagen de sangre periférica y médula ósea en IDA. Diagnóstico de laboratorio de anemia sideroblástica. Metabolismo y función del hierro en el organismo.

El hierro es de gran importancia para el organismo, forma parte de la hemoglobina, la mioglobina y las enzimas respiratorias. Se distribuye entre activos fijos.

Fondo de hemoglobina. El hierro de la hemoglobina constituye el 60-65% del hierro total en el cuerpo.

Fondo de Reserva. Este es el hierro de la ferritina y la hemosiderina, que se depositan en el hígado, el bazo, la médula ósea y los músculos. Constituye el 30-40% del nivel de hierro en el cuerpo. La ferritina es un complejo soluble en agua de hierro férrico y proteína apoferritina, que contiene un 20% de hierro. Representa una fracción lábil del stock de reserva de hierro. Si es necesario, se usa fácilmente para las necesidades de eritropoyesis. La hemosiderina es una proteína insoluble en agua, que tiene una composición cercana a la ferritina, pero contiene una mayor cantidad de hierro: 25-30%. Es una fracción estable y firmemente fijada de las reservas de hierro del cuerpo.

El fondo de transporte está representado por el hierro unido a la proteína de transporte, transferrina. Contiene 1% del contenido de hierro del organismo.

El fondo de tejido está representado por hierro, enzimas que contienen hierro (citocromos, peroxidasa, etc.), mioglobina. Contiene 1% del contenido de hierro del organismo.

El contenido total de hierro en el cuerpo de los adultos es de 4-5 g. Ingresa al cuerpo con la dieta. Contenidos en productos de origen animal y vegetal (carnes, especialmente vacuno, hígado, huevos, legumbres, manzanas, orejones, etc.). El hierro se absorbe mucho mejor de los productos animales que de los alimentos vegetales, ya que está contenido en ellos en forma de hemo. Entonces, el 20-25% se absorbe de la carne, el 11% del pescado, el 3-5% del hierro contenido en los productos vegetales. La absorción de hierro es favorecida por el ácido ascórbico, ácidos orgánicos (cítrico, málico, etc.), inhibe la absorción de taninos y un alto contenido en grasas en la dieta. La absorción de hierro de los alimentos es limitada. Durante el día, se absorben 2-2.5 mg de hierro, durante un corto tiempo después de un sangrado abundante, se pueden absorber hasta 3 mg de hierro. La principal cantidad de hierro se absorbe en el duodeno y en la parte inicial del yeyuno. Se pueden absorber pequeñas cantidades de hierro en todas las partes del intestino delgado.

La absorción de hierro se produce en dos etapas: 1) la mucosa intestinal captura el hierro suministrado con la dieta; 2) el hierro de la mucosa intestinal pasa a la sangre, se carga en transferrina y se envía a los lugares de uso y al depósito. La transferrina también transfiere hierro de sus fondos y células del sistema de mononucleares fagocíticos, en el que se produce la destrucción de eritrocitos, a la médula ósea, donde se usa en parte para la síntesis de hemoglobina y en parte se deposita en forma de depósitos de hierro, así como a otros lugares de almacenamiento de hierro. Por lo general, 1/3 de la transferrina se une al hierro. Se llama transferrina unida o hierro sérico. Normalmente, el contenido de hierro sérico en hombres y mujeres es de 13-30 y 12-25 μmol / l, respectivamente. La parte de transferrina que no está unida al hierro se denomina transferrina libre o capacidad de unión a hierro sérico latente e insaturado. La cantidad máxima de hierro que la transferrina podría unir a la saturación se denomina capacidad total de unión al hierro sérico (TIBC) (normalmente 30-85 μmol / L). La diferencia entre los indicadores de TIBC y hierro sérico refleja la capacidad de unión de hierro latente, y la relación de hierro sérico a TIBC, expresada como porcentaje, refleja el porcentaje de saturación de transferrina con hierro (norma 16-50%). Para juzgar la cantidad de reservas de hierro y el cuerpo realizan:

Estudio del nivel de ferritina en suero por métodos radioinmunes;

Prueba de Desferal. Desferal (desferoxamine) es un quelante que, después de ser introducido en el cuerpo, se une selectivamente a las reservas de hierro, es decir, ferritina de hierro, y lo excreta en la orina. Se inyecta al paciente una vez por vía intramuscular con 500 mg de desferal, se recoge la orina diaria y se determina el contenido de hierro. Después de la administración de desferal, normalmente se excretan de 0,8 a 1,2 mg de hierro en la orina, mientras que en pacientes con anemia ferropénica o en presencia de una ferropenia latente, la cantidad de hierro excretada en la orina disminuye drásticamente;

Contando en el punteado de la médula ósea el número de sideroblastos, y en la sangre periférica - siderocitos. Los sideroblastos son normoblastos, es decir, células nucleadas de la fila roja, en cuyo citoplasma se revelan gránulos azules de reservas de hierro (ferritina). Normalmente, el 20-40% de los normoblastos son sideroblastos. Los siderocitos son eritrocitos en los que se encuentran gránulos de ferritina. En sangre periférica normal: hasta el 1% de los siderocitos. Los gránulos de ferritina en sideroblastos y siderocitos se detectan con una tinción especial con azul de Prusia.

El cuerpo se caracteriza por pérdidas fisiológicas de hierro en orina, heces, bilis, células exfoliadas de la mucosa intestinal, con sudor, al cortar el cabello y las uñas. Las mujeres pierden hierro con su período.

El desarrollo de la anemia por deficiencia de hierro está precedido por una deficiencia de hierro latente (latente). Los pacientes desarrollan quejas y signos clínicos característicos de la piemia por deficiencia de hierro, pero menos pronunciados (debilidad, palidez moderada de la piel y mucosas visibles, dolores de cabeza, palpitaciones, a menudo una perversión del gusto y el olfato, piel seca, uñas quebradizas, etc.). El examen aún no revela cambios en el contenido de hemoglobina, eritrocitos y otros indicadores de sangre periférica. Pero se revelan irregularidades en el metabolismo del hierro: disminuye el hierro sérico, aumentan las capacidades de unión al hierro total y latente del suero, disminuye el porcentaje de saturación de transferrina y disminuye el nivel de reservas de hierro. Esto es sideropenia sin anemia. La deficiencia de hierro latente puede desarrollarse a cualquier edad, especialmente en mujeres, adolescentes y niños. Si la deficiencia de hierro latente no se compensa, sino que se profundiza, se amasa la anemia ferropénica.

Información general sobre el estudio

El grupo sanguíneo ABO es un sistema que refleja la presencia o ausencia de antígenos en la superficie de los eritrocitos y anticuerpos en el plasma sanguíneo. ABO (leído como "a-ba-zero") es el sistema de grupos sanguíneos más común en Rusia.

Los eritrocitos en su superficie transportan moléculas de señalización, antígenos, aglutinógenos. Los dos antígenos principales incluidos en la molécula de eritrocitos son A y B. Los grupos sanguíneos se determinan en función de la presencia o ausencia de estos antígenos. La sangre de las personas que tienen antígeno A en sus eritrocitos pertenece al segundo grupo: A (II), la sangre de quienes tienen antígeno B en sus eritrocitos pertenece al tercer grupo: B (III). Si los antígenos A y B están presentes en los eritrocitos, este es el cuarto grupo: AB (IV). También sucede que ninguno de estos antígenos se detecta en la sangre de los eritrocitos; entonces este es el primer grupo: O (I).

Normalmente, el cuerpo produce anticuerpos contra los antígenos (A o B) que no se encuentran en los eritrocitos, que son aglutininas en el plasma sanguíneo. Es decir, en personas con el segundo grupo sanguíneo, A (II), los antígenos A están presentes en los eritrocitos y los anticuerpos contra los antígenos B estarán contenidos en el plasma, se designan como anti-B (beta-aglutinina). Dado que los mismos antígenos (aglutinógenos) en la superficie de los eritrocitos y las aglutininas en el plasma (A y alfa, B y beta) reaccionan entre sí y provocan la "adherencia" de los eritrocitos, no pueden estar contenidos en la sangre de una persona.

El descubrimiento del sistema de grupos ABO permitió comprender por qué las transfusiones de sangre a veces tenían éxito y, a veces, causaban complicaciones graves. Se formuló el concepto de compatibilidad de grupos sanguíneos. Por ejemplo, si una persona con un segundo grupo sanguíneo, A (II), que contiene anticuerpos contra el antígeno B, se transfunde con un tercer grupo sanguíneo, B (III), se producirá una reacción entre los antígenos y los anticuerpos, que provocará la adhesión y destrucción de los glóbulos rojos y puede tener graves consecuencias. hasta la muerte. Por tanto, los grupos sanguíneos durante la transfusión deben ser compatibles.

El grupo sanguíneo se determina por la presencia o ausencia de adhesión de eritrocitos utilizando sueros que contienen antígenos y anticuerpos estándar.

En los centros de transfusión, las bolsas de sangre o los componentes sanguíneos de los donantes están etiquetados como "O (I)", "A (II)", "B (III)" o "AB (IV)" para ayudarlo a encontrar rápidamente sangre del grupo correcto cuando sea necesario.

¿Para qué se utiliza la investigación?

Para saber qué sangre se puede administrar de forma segura a un paciente. Es extremadamente importante asegurarse de que la sangre donada sea compatible con la sangre del receptor, la persona a quien se le va a transfundir. Si la sangre del donante o sus componentes contienen anticuerpos contra los antígenos contenidos en los eritrocitos del receptor, entonces puede desarrollarse una reacción transfusional grave, causada por la destrucción de los eritrocitos en el lecho vascular.

¿Cuándo está programado el estudio?

• Antes de la transfusión de sangre, tanto para quienes la necesitan como para los donantes.

La transfusión de sangre y sus componentes se requiere con mayor frecuencia en las siguientes situaciones:

• • anemia severa
  • sangrado que ocurre durante o después de la cirugía
  • lesiones graves
  • pérdida masiva de sangre de cualquier origen,
  • cáncer y efectos secundarios de la quimioterapia,
  • trastornos de la coagulación sanguínea, en particular hemofilia.
• Antes de la cirugía.

PROVISIONES GENERALES

El sistema de grupos sanguíneos ABO consta de dos grupos de aglutinógenos, A y B, y dos aglutininas correspondientes en plasma, alfa (anti-A) y beta (anti-B). Varias combinaciones de estos antígenos y anticuerpos forman cuatro grupos sanguíneos: grupo 0 (1) - ambos antígenos están ausentes; grupo A (II): solo el antígeno A está presente en los eritrocitos; grupo B (III): solo el antígeno B está presente en los eritrocitos; grupo AB (IV): los antígenos A y B están presentes en los eritrocitos.

La singularidad del sistema ABO radica en el hecho de que en el plasma de personas no inmunizadas hay anticuerpos naturales contra el antígeno ausentes en los eritrocitos: en personas del grupo 0 (1) - anticuerpos contra A y B; en personas del grupo A (II) - anticuerpos anti-B; en personas del grupo B (III) - anticuerpos anti-A; las personas del grupo AB (IV) no tienen anticuerpos contra los antígenos del sistema ABO.

En el siguiente texto, los anticuerpos anti-A y anti-B se denominarán anti-A y anti-B.

La determinación del grupo sanguíneo ABO se realiza mediante la identificación de antígenos y anticuerpos específicos (reacción doble o cruzada). Los anti-A y anti-B se detectan en suero sanguíneo usando eritrocitos estándar A (II) y B (III). La presencia o ausencia de los antígenos A y B en los eritrocitos se establece utilizando anticuerpos monoclonales o policlonales (sueros hemaglutinantes estándar) de especificidad apropiada.

La determinación del grupo sanguíneo se lleva a cabo dos veces: investigación primaria - en el departamento médico (equipo de recolección de sangre); investigación confirmatoria - en el departamento de laboratorio. El algoritmo para realizar estudios de laboratorio inmunohematológicos durante la transfusión de sangre se muestra en la Fig. 18.1.

El resultado de la determinación del grupo sanguíneo se registra en la esquina superior derecha de la hoja frontal del historial médico o en el registro de donantes (tarjeta) con la fecha y firmada por el médico que tomó la determinación.

En el noroeste de Rusia, la distribución de los grupos sanguíneos ABO en la población es la siguiente: grupo 0 (I) - 35%; grupo A (II) - 35-40%; grupo B (III) - 15-20%; grupo AB (IV) - 5-10%.

Cabe señalar que existen diferentes tipos (variantes débiles) tanto del antígeno A (en mayor medida) como del antígeno B. Los tipos más comunes de antígeno A - A 1 y A 2. La prevalencia del antígeno A 1 en individuos de los grupos A (II) y AB (IV) es del 80%, y del antígeno A 2, aproximadamente el 20%. Las muestras de sangre con A 2 pueden contener anticuerpos anti-A 1 que interactúan con eritrocitos estándar del grupo A (II). La presencia de anti-A1 se detecta mediante la determinación cruzada de grupos sanguíneos y mediante pruebas de compatibilidad individual.

Para la determinación diferenciada de las variantes del antígeno A (A1 y A2), es necesario utilizar reactivos específicos (fitohemaglutininas o anticuerpos monoclonales anti-A1. Los pacientes de los grupos A2 (II) y A2B (IV) necesitan ser transfundidos con hemoderivados que contengan eritrocitos, respectivamente, del grupo A 2 (II) y A 2 B (IV). También se pueden recomendar transfusiones de eritrocitos lavados: 0 (I) - para pacientes con grupo sanguíneo A 2 (II); 0 (I) y B (III) - para pacientes con grupo sanguíneo A 2 B (II).

Cuadro 18.4. Resultados de la determinación del grupo sanguíneo ABO
Resultados de la investigacion						Afiliación de grupo de la sangre analizada
eritrocitos con reactivo			suero (plasma) con eritrocitos estándar
anti-AB	anti-A	anti-B	0 (yo)	A (II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (yo)
+	+	-	-	-	+	A (II)
+	-	+	-	+	-	B (III)
+	+	+	-	-	-	AB (IV)
Designaciones: + - presencia de aglutinación, - - ausencia de aglutinación

Determinación del grupo sanguíneo perteneciente al sistema ABO.

Los grupos sanguíneos se determinan mediante sueros estándar (reacción simple) y eritrocitos estándar (reacción doble o cruzada).

El grupo sanguíneo se determina mediante una reacción simple con dos series de sueros isohemaglutinantes estándar.

• Progreso de la determinación [show] .

  La determinación del grupo sanguíneo se realiza con buena iluminación y temperaturas de + 15 a + 25 ° C en tabletas. En el lado izquierdo de la tableta, escriba 0 (1), en el medio - A (II), en el lado derecho - B (III). En el medio del borde superior de la tableta, se anota el apellido del donante o el número de sangre que se analiza. Utilice sueros estándar activos de tres grupos (O, A, B) con un título de al menos 1:32, dos series. Los sueros se colocan en rejillas especiales en dos filas. Una pipeta etiquetada corresponde a cada suero. El suero del grupo AB (IV) se utiliza como control adicional.

  Se aplican una o dos gotas de suero estándar a la placa en dos filas: suero del grupo 0 (1) - a la izquierda, suero del grupo A (II) - en el medio, suero del grupo B (III) - a la derecha.

  Se aplican gotas de sangre de una punción en el dedo o de un tubo de ensayo con una pipeta o varilla de vidrio cerca de cada gota de suero y se mezclan con una varilla. La cantidad de sangre debe ser de 8 a 10 veces menor que la de suero. Después de mezclar, la placa o tableta se balancea suavemente con la mano para facilitar una aglutinación de glóbulos rojos más rápida y precisa. Cuando comienza la aglutinación, pero no antes de 3 minutos después, se agrega una gota de solución de cloruro de sodio al 0,9% a las gotas de suero con eritrocitos, donde se ha producido la aglutinación, y se continúa la observación hasta que hayan transcurrido 5 minutos. Después de 5 minutos, lea la reacción con luz transmitida.

  Si la aglutinación es indistinta, se agrega adicionalmente una gota de solución de cloruro de sodio al 0.9% a la mezcla de suero y sangre, luego de lo cual se llega a una conclusión sobre la afiliación grupal (Tabla 18.4).

• Resultados de la reacción [show] .
  1. La ausencia de aglutinación en las tres gotas indica que no hay aglutinógeno en la sangre en estudio, es decir, la sangre pertenece al grupo 0 (I).
  2. El inicio de la aglutinación en gotas con suero 0 (I) y B (III) indica que hay aglutinógeno A en la sangre, es decir, la sangre pertenece al grupo A (II).
  3. La presencia de aglutinación en gotas con sueros de los grupos 0 (I) y A (II) indica que la sangre de prueba contiene aglutinógeno B, es decir, sangre del grupo B (III).
  4. La aglutinación en las tres gotas indica la presencia de aglutinógenos A y B en la sangre en estudio, es decir, la sangre pertenece al grupo AB (IV). Sin embargo, en este caso, dado que la aglutinación con todos los sueros es posible debido a una reacción inespecífica, es necesario aplicar dos o tres gotas de suero estándar del grupo AB (IV) a una placa o placa y agregarles 1 gota de la sangre de prueba. Se mezclan suero y sangre y se observa el resultado de la reacción durante 5 minutos.

     Si no se produce aglutinación, la sangre en estudio se clasifica como AB (IV). Si aparece aglutinación con el suero del grupo AB (IV), entonces la reacción es inespecífica. En caso de aglutinación débil y en todos los casos dudosos, la sangre se vuelve a controlar con sueros estándar de otras series.

Determinación de la doble reacción del grupo sanguíneo ABO.
(según sueros estándar y eritrocitos estándar)

Los eritrocitos estándar son una suspensión al 10-20% de eritrocitos nativos frescos (o células de prueba lavadas del conservante) de los grupos 0 (I), A (II) y B (III) en solución de cloruro de sodio al 0,9% o solución salina de citrato. Los eritrocitos estándar nativos se pueden utilizar durante 2-3 días si se almacenan en solución salina isotónica a + 4 ° C. Los eritrocitos estándar enlatados se almacenan a + 4 ° C durante 2 meses y se lavan de la solución conservante antes de su uso.

Las ampollas o viales con sueros estándar y eritrocitos estándar se colocan en gradillas especiales con el etiquetado apropiado. Para trabajar con reactivos de tipificación, se utilizan pipetas limpias en seco, separadas para cada reactivo. Para lavar varillas y pipetas de vidrio (plástico), los vasos de precipitados se preparan con una solución de cloruro de sodio al 0,9%.

Para determinar el grupo, tome 3-5 ml de sangre en un tubo de ensayo sin estabilizador. La sangre debe asentarse durante 1,5-2 horas a una temperatura de + 15-25 ° C.

• Progreso de la determinación [show] .

  Se aplican a la placa dos gotas (0,1 ml) de sueros estándar de los grupos 0 (I), A (II), B (III) de dos series. Por consiguiente, cada grupo de sueros tiene una pequeña gota (0,01 ml) de eritrocitos estándar de los grupos 0 (I), A (II), B (III). Se agrega una gota de sangre de prueba a los sueros estándar y dos gotas de suero de prueba a los eritrocitos estándar. La cantidad de sangre debe ser de 8 a 10 veces menor que la de suero. Las gotas se mezclan con una varilla de vidrio y, agitando el comprimido en las manos durante 5 minutos, se controla el inicio de la aglutinación. Si la aglutinación es indistinta, se agrega adicionalmente una gota de solución de cloruro de sodio al 0.9% (0.1 ml) a la mezcla de suero y sangre, luego de lo cual se llega a una conclusión sobre la afiliación grupal (Tabla 18.4).

• Evaluación de los resultados de la determinación del grupo sanguíneo del sistema ABO. [show] .
  1. La presencia de aglutinación con los eritrocitos estándar A y B y la ausencia de aglutinación en tres sueros estándar de dos series indica que ambas aglutininas, alfa y beta, están presentes en el suero de prueba, y no hay aglutinógenos en los eritrocitos estudiados, es decir, la sangre pertenece al grupo 0 (I). ...
  2. La presencia de aglutinación con sueros estándar de los grupos 0 (I), B (III) y con eritrocitos estándar del grupo B (III) indica que los eritrocitos de prueba contienen aglutinógeno A y el suero de prueba contiene aglutinina beta. Por tanto, la sangre pertenece al grupo A (II).
  3. La presencia de aglutinación con sueros estándar de los grupos 0 (I), A (II) y con eritrocitos estándar del grupo A (II) indica que los eritrocitos estudiados contienen aglutinógeno B y el suero de prueba contiene aglutinina alfa. En consecuencia, la sangre pertenece al grupo B (III).
  4. La presencia de aglutinación con todos los sueros estándar y la ausencia de aglutinación con todos los eritrocitos estándar indica que ambas aglutininas están presentes en los eritrocitos en estudio, es decir, la sangre pertenece al grupo AB (IV).

Determinación de la afiliación a un grupo sanguíneo.
usando tsoliclones anti-A y anti-B

Las tsoliklonas anti-A y anti-B (anticuerpos monoclonales contra los antígenos A y B) están diseñadas para determinar el grupo sanguíneo del sistema ABO humano en lugar de los sueros isohemaglutinantes estándar. Para cada determinación de grupo sanguíneo, use un lote de reactivo anti-A y anti-B.

• Progreso de la determinación [show] .

  Se aplica una gota grande de tsoliclones anti-A y anti-B (0,1 ml) a la placa (placa) bajo las inscripciones correspondientes: "Anti-A" o "Anti-B". Coloque junto a una pequeña gota de la sangre de prueba (proporción de reactivo en sangre - 1:10), luego se mezclan el reactivo y la sangre y se monitorea el progreso de la reacción agitando suavemente la tableta o placa.

  La aglutinación con tsoliclonas anti-A y anti-B suele ocurrir en los primeros 5-10 s. La observación debe realizarse durante 2,5 minutos, debido a la posibilidad de un inicio tardío de la aglutinación con eritrocitos que contienen variedades débiles de antígenos A o B.

• La evaluación de los resultados de la reacción de aglutinación con tsoliclonas anti-A y anti-B se presenta en la tabla. 18.4, que también incluye los resultados de la determinación de aglutininas en el suero de donantes utilizando eritrocitos estándar.

Si se sospecha aglutinación espontánea en personas con grupo sanguíneo AB (IV), se realiza un estudio de control con solución de cloruro de sodio al 0,9%. La reacción debe ser negativa.

Los ciclones anti-A (rosa) y anti-B (azul) se producen tanto en forma nativa como liofilizada en ampollas de 20, 50, 100 y 200 dosis con un disolvente adherido a cada ampolla, 2, 5, 10 , 20 ml respectivamente.

Un control adicional de la exactitud de la determinación del grupo sanguíneo ABO con reactivos anti-A y anti-B es el reactivo monoclonal anti-AB ("Hematolog", Moscú). Es aconsejable utilizar el reactivo anti-AB en paralelo con sueros policlonales inmunes y reactivos monoclonales. Como resultado de la reacción con el reactivo anti-AB, se desarrolla la aglutinación de eritrocitos de los grupos A (II), B (III) y AB (IV); Los eritrocitos del grupo 0 (I) no tienen aglutinación.

ERRORES AL DETERMINAR ACCESORIOS DE GRUPO

Los errores en la determinación de los grupos sanguíneos pueden depender de tres razones:

1. técnico;
2. inferioridad de sueros estándar y eritrocitos estándar;
3. características biológicas de la sangre en estudio.

Los errores por razones técnicas incluyen:

• a) disposición incorrecta de los sueros en la placa;
• b) proporciones cuantitativas incorrectas de sueros y eritrocitos;
• c) el uso de tabletas insuficientemente limpias y otros elementos que entren en contacto con la sangre. Debe haber una pipeta separada para cada suero; Para enjuagar las pipetas sólo debe utilizarse una solución de cloruro de sodio al 0,9%;
• d) registro incorrecto de la sangre de prueba;
• e) incumplimiento del tiempo fijado para la reacción de aglutinación; con prisa, cuando se tiene en cuenta la reacción antes de que transcurran 5 minutos, es posible que no se produzca aglutinación si hay aglutinógenos débiles en la sangre de prueba; si la reacción se sobreexpone durante más de 5 minutos, las gotas pueden secarse de los bordes, simulando aglutinación, lo que también conducirá a una conclusión errónea;
• f) la ausencia de aglutinación debido a la temperatura ambiente alta (por encima de 25 ° C). Para evitar este error, es aconsejable utilizar suero especialmente preparado para trabajar en climas cálidos; para determinar los grupos sanguíneos en un plato o bandeja de plástico, cuya superficie exterior del fondo se sumerge en agua fría.
• g) centrifugación inadecuada: una centrifugación insuficiente puede dar lugar a un resultado falso negativo y una centrifugación excesiva puede dar lugar a un falso positivo.

Errores debidos al uso de sueros estándar y eritrocitos estándar defectuosos:

• a) los sueros estándar débiles con un título inferior a 1:32 o con fecha de vencimiento pueden provocar una aglutinación tardía y débil;
• b) el uso de sueros o eritrocitos estándar inutilizables, que se prepararon sin esterilizar y no se conservaron suficientemente, conduce a la aparición de aglutinación "bacteriana" inespecífica.

Errores en función de las características biológicas de la sangre analizada:

Errores en función de las características biológicas de los eritrocitos estudiados:

• a) la aglutinación tardía y débil se explica por formas "débiles" de antígenos, eritrocitos, más a menudo, por la presencia de aglutinógeno A 2 débil en los grupos A y AB. Al mismo tiempo, en el caso de determinar el grupo sanguíneo sin examinar el suero por la presencia de aglutininas (reacción simple), pueden ocurrir errores, como resultado de lo cual la sangre del grupo A 2 B se define como grupo B (III) y la sangre A2 - como grupo 0 (I). Por tanto, para evitar errores, la determinación del grupo sanguíneo tanto de donantes como de receptores debe realizarse utilizando eritrocitos estándar (reacción doble o cruzada). Para identificar el aglutinógeno А 2, se recomienda repetir el estudio con otros tipos (lotes) de reactivos, utilizando diferentes materiales de vidrio de laboratorio, con un aumento del tiempo de registro de la reacción.

  Los reactivos específicos para aclarar el grupo sanguíneo en presencia de variantes débiles del antígeno A (A1, A2, A3) por el método de reacción de aglutinación directa son el reactivo anti-A sl tsoliclon y anti-A).

• b) "panagglutinación" o "autoaglutinación", es decir, la capacidad de la sangre de producir la misma aglutinación inespecífica con todos los sueros e incluso con el propio. La intensidad de esta reacción se debilita después de 5 minutos, mientras que aumenta la verdadera aglutinación. Se encuentra con mayor frecuencia en pacientes hematológicos, oncológicos, pacientes quemados, etc. Para el control, se recomienda evaluar si se produce la aglutinación de los eritrocitos analizados en el suero estándar del grupo AB (IV) y la solución salina fisiológica.

  El grupo sanguíneo en "panagglutinación" se puede determinar después de lavar los eritrocitos tres veces. Para eliminar la aglutinación inespecífica, la placa se coloca en un termostato a + 37 ° C durante 5 minutos, después de lo cual desaparece la aglutinación inespecífica, pero permanece la verdadera. Se aconseja repetir la determinación mediante anticuerpos monoclonales, configurando la prueba de Coombs.

  En el caso de que el lavado de eritrocitos no dé el resultado deseado, es necesario volver a tomar una muestra de sangre en un tubo de ensayo precalentado, colocar la muestra en un recipiente térmico para mantener una temperatura de + 37 ° C y entregarla al laboratorio para investigación. La determinación del grupo sanguíneo debe llevarse a cabo a una temperatura de + 37 ° С, para lo cual se usan reactivos precalentados, solución salina y una tableta.

• c) los eritrocitos de la sangre analizada se pliegan en "columnas de monedas", que pueden confundirse con aglutinados durante la macroscopia. La adición de 1-2 gotas de solución isotónica de cloruro de sodio, seguida de un suave balanceo de la tableta, generalmente destruye las "barras de monedas".
• d) Aglutinación mixta o incompleta: algunos de los eritrocitos se aglutinan y otros quedan libres. Se observa en pacientes de los grupos A (II), B (III) y AB (IV) tras el trasplante de médula ósea o durante los primeros tres meses tras la transfusión de sangre del grupo 0 (I). La heterogeneidad de los eritrocitos periféricos se verifica claramente en la prueba de gel DiaMed.

Errores en función de las características biológicas del suero estudiado:

• a) la detección de anticuerpos de diferente especificidad durante las pruebas de rutina es el resultado de una sensibilización previa. Es aconsejable determinar la especificidad de los anticuerpos y seleccionar eritrocitos tipificados sin el antígeno al que se detectó la inmunización. El receptor inmunizado debe seleccionar individualmente un donante de sangre compatible;
• b) cuando se detecta la formación de "columnas de monedas" de eritrocitos estándar en presencia del suero analizado, es aconsejable confirmar el resultado anormal utilizando eritrocitos estándar del grupo 0 (I). Para diferenciar las "columnas de monedas" y los aglutinados verdaderos, agregue 1-2 gotas de solución isotónica de cloruro de sodio y agite la placa, mientras se destruyen las "columnas de monedas";
• c) la ausencia de anticuerpos anti-A o anti-B. Quizás en recién nacidos y pacientes con supresión de la inmunidad humoral;
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LITERATURA [show] .

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Una fuente: Diagnósticos, programas y algoritmos de laboratorio médico. Ed. profe. Karpishchenko A.I., San Petersburgo, Intermedica, 2001