Metode laboratorijske dijagnoze HIV infekcije. Pravila za dijagnozu HIV infekcije

Proizvedeno na nekoliko različitih načina. Čini se da nema ništa lakše nego prepoznati ovu bolest uzimanjem uzoraka krvi. Ali nije tako. Dijagnoza HIV-a doista se može otkriti na ovaj način, ali daljnja istraživanja provode se različitim metodama. O njima u velikoj mjeri ovisi koji će se tretman pacijentu propisati i koje će se mjere poduzeti naknadno. Među najčešćim i najučinkovitijim metodama uobičajeno je razlikovati probirnu analizu i imunološko blotiranje. Svaki od njih treba detaljnije razmotriti.

Dijagnostika AIDS-a: probirna analiza

U početnoj fazi dijagnosticiranja HIV infekcije koristi se probirni test ili ELISA test metoda. Razvijajući ovu metodu u laboratoriju, proteini virusa su umjetno stvoreni. Na poseban način reagiraju na antitijela. Potonji se proizvode u tijelu kada se u njemu pojave stanice zaražene strašnom bolešću. U tom se slučaju laboratorijska dijagnostika HIV-a provodi pomoću umjetnih enzima. U interakciji s antitijelima one se boje u određenoj boji. Traka s indikatorom, nakon što na nju dođe krv, stavlja se pod poseban aparat, uz pomoć kojeg je moguće utvrditi ima li osoba ovu bolest ili ne. Suvremene metode dijagnostike HIV-a, uključujući ELISA, omogućuju utvrđivanje činjenice zaraze ili njezine odsutnosti s velikom točnošću. Ali, kao i sva oprema, i uređaj za analizu probira ima pogrešku. Zbog toga, ako je potrebno, analizu pacijent ponavlja.

Važno je znati da je ELISA test jedna od najranijih metoda za utvrđivanje prisutnosti virusa imunodeficijencije u tijelu. HIV infekcija je dijagnoza koja se može otkriti tek nekoliko tjedana nakon infekcije. Kada zaražene stanice uđu u krvotok, imunološki sustav tijela počinje se aktivno opirati. Stvaraju se antitijela koja se laboratorijskim istraživanjima otkrivaju nakon dva ili tri tjedna. Rano dijagnosticiranje HIV infekcije pomoću ELISA testa omogućuje otkrivanje antitijela na virus imunodeficijencije u ljudskoj krvi. To je njegova glavna razlika od ostalih suvremenih metoda.

Vrijedno je napomenuti da se kod nekih ljudi antitijela na ovu bolest počinju stvarati kasnije. Od trenutka zaraze do početka ovog procesa može proći od tri do šest tjedana. Zato medicinski stručnjaci preporučuju probirne testove četiri do pet tjedana nakon nezaštićenog seksa ili drugog razloga za sumnju na slučajnu infekciju.

ELISA metode za laboratorijsku dijagnozu HIV infekcije razvijene su već dugo. Danas postoje četiri generacije testova. Najtočniji i najučinkovitiji su oni koji su razvijeni posljednji. Laboratorijska dijagnostika HIV infekcije i AIDS-a pomoću treće i četvrte generacije ELISA testova provodi se pomoću rekombinantnih proteina i peptida. Osjetljivost ovih testova na antitijela koja proizvodi tijelo je 92 - 93%. Govorimo o ruskim istraživačkim metodama. Europljani su naučili raditi takve testove s osjetljivošću od 99%.

Suvremene metode laboratorijske dijagnostike HIV infekcije temeljene na ELISA-i koriste se ne samo za otkrivanje prisutnosti bolesti. Uz pomoć screening analize moguće je pratiti širenje virusa imunodeficijencije, kao i prikupiti testni materijal prije uzimanja krvi od darivatelja.

ELISA je standardna metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije: kako se provodi, zašto daje lažni rezultat?

Dijagnoza HIV-a i AIDS-a ELISA-om standardni je postupak. Krv pacijenta vadi se iz vene. Za analizu je dovoljno pet mililitara materijala. Klinička dijagnostika HIV-a tipa 2 i tipa 1 provodi se najmanje osam sati nakon jela. Liječnici preporučuju to ujutro natašte. Rezultati cjelovite studije poznati su nakon dva ili tri dana. Ekspresni pregled vrši se za manje vremena. To obično traje samo nekoliko sati. Međutim, pogreška se u ovom slučaju povećava. Izričita dijagnoza HIV-a neophodna je u hitnim slučajevima, na primjer kada pacijent treba hitnu operaciju. Takva se analiza nužno provodi prije neplaniranih kirurških intervencija, jer ako pacijent ima virus imunodeficijencije, liječnici promatraju povećane sigurnosne mjere. Klinička dijagnoza HIV infekcije u kratkom vremenskom razdoblju također je neophodna u slučaju kada se donatorska krv mora uzeti brzo kako bi se spasio drugi pacijent.

Postoje slučajevi kada je osobi dijagnosticirana AIDS ili HIV, ali kao rezultat toga nije potvrđena ili obrnuto. Zašto se to događa u slučaju ELISA testa? Lažno negativan rezultat može biti posljedica činjenice da krv nije bila pravilno pripremljena za istraživanje. Ponekad je razlog tome pogrešno izvršenje njezine ograde. Lažno negativni rezultat prilikom provjere dijagnoze HIV infekcije nije potvrđen ni u slučaju kada su materijali za istraživanje uzeti prerano. Napokon, nakon infekcije trebala su proći najmanje tri tjedna. Postoje slučajevi kada je rezultat otkrivanja virusa imunodeficijencije lažno pozitivan. To je zbog općeg stanja imunološkog i hormonalnog sustava ljudskog tijela. U većini slučajeva pacijent ima bolesti koje su rezultat lažno pozitivnog rezultata. Govorimo o alkoholnom hepatitisu, u kojem jetra proizvodi posebne enzime, što može dovesti do pogrešne dijagnoze HIV-a. Trudnoća i određene autoimune bolesti, zajedno s multiplim mijelomom, također mogu uzrokovati lažne pozitivne rezultate. Ovaj bi popis mogao obuhvaćati dijalizne bolesnike i one koji su bili cijepljeni neposredno prije diferencijalne dijagnoze HIV-a.

Govoreći o screening analizi, važno je napomenuti da ova metoda istraživanja zahtijeva potvrdu. Liječnici, prije postavljanja dijagnoze HIV-a na temelju nje, moraju pacijenta poslati na imunološko blotiranje.

Glavne metode laboratorijske dijagnoze HIV infekcije: imunološko blotiranje

AIDS, čija su dijagnoza i liječenje usko povezani, otkriva se na više načina odjednom. Kao što je gore spomenuto, jedan ELISA test nije dovoljan da se konačno utvrdi dijagnoza. Diferencijalna dijagnoza HIV infekcije u ovom je slučaju dopunjena imunološkim blotiranjem. U modernoj medicini naziva se konačnom potvrdnom metodom za postavljanje dijagnoze. Za istraživanje u ovom slučaju koriste se proteini sadržani u krvi pacijenta. Odvajaju se u posebnom gelu, nakon čega laboratorijski radnici imaju priliku proučavati molekularni sastav krvi.

Vrijeme dijagnoze HIV-a ovom metodom je od jednog do tri dana. Za istraživanje se uzima krv iz vene ispitanika koja se stavlja na tester s gelom. Rezultat koji se dovodi u pitanje može se dogoditi tijekom trudnoće, prisutnosti onkoloških procesa, tuberkuloze. Lažno negativna reakcija na test može se pojaviti ako je studija izvedena pogrešno i ako je provedena prerano. Od trenutka zaraze trebala bi proći najmanje tri tjedna. Napokon, vrijeme nakon kojeg se HIV dijagnosticira izravno ovisi o stanju imuniteta.

Ostale metode dijagnosticiranja AIDS-a i HIV-a

Radiološka dijagnostika za AIDS koristi se u pravilu u terminalnoj ili sekundarnoj fazi. Uz njihovu pomoć moguće je ustanoviti promjene koje se u tijelu događaju zbog sekundarnih bolesti ili oportunističkih infekcija.

Bioresonančna HIV dijagnostika, koja se naziva i nelinearnim skeniranjem, koristi se uglavnom u privatnim klinikama za otkrivanje virusa imunodeficijencije. Službena medicina ovu metodu smatra nedovoljno točnom i učinkovitom. Možda će poboljšanje nelinearne dijagnostike u budućnosti omogućiti prepoznavanje ove strašne dijagnoze već u razdoblju inkubacije.

Dijagnoza HIV infekcije: serološka metoda i njene značajke

Ovo je relativno nova tehnika u kojoj se laboratorijski kriteriji za dijagnosticiranje HIV infekcije temelje na principu antigen-antitijelo. U slučaju virusa imunodeficijencije, u ljudskom se tijelu događa potraga za antitijelima na virus. Za to se koristi umjetno izvedeni antigen, na koji antitijela moraju reagirati. Specifični serološki biljezi HIV infekcije uzrokuju specifične promjene u sastavu krvi. Treba napomenuti da je ova metoda istraživanja najučinkovitija u akutnoj fazi koja završava serokonverzijom. Slijedi asimptomatsko razdoblje latencije, tijekom kojeg nije lako pronaći antigen.

Referentna dijagnoza HIV infekcije: opis i značajke

Referentne vrijednosti HIV-a smatraju se najtočnijima u utvrđivanju dijagnoze. Ova metoda istraživanja kombinira ELISA test i imunološki blot. Dijagnostički referentni laboratorij za HIV omogućuje prikupljanje testova i njihovu naknadnu obradu na dva načina odjednom. To vam omogućuje da dobijete najtočniji rezultat u roku od 24 sata. Ponovna provjera analize dobivene u referentnom laboratoriju nužna je samo ako su podaci ELISA testa i imunološki bloting u suprotnosti. To je prilično rijetka pojava koja se najčešće javlja kod osoba s gore opisanim popratnim bolestima.

Dijagnostika HIV-a jedan je od primarnih zadataka s kojima se suočavaju zaposlenici dermatovenerološkog dispanzera, kao i zaposlenici poliklinike.

Liječnici bolest karakteriziraju kao vrlo podmuklu. Karakterizira ga kronični tijek i ne reagira na cjelovito liječenje. Važno ga je pravovremeno otkriti kako bi se preuzela kontrola i spriječilo nekontrolirano širenje. Koje su značajke virusa ljudske imunodeficijencije i kako se može zaraziti, pacijente često zanima.

Koji su načini dijagnosticiranja bolesti i koji znakovi upućuju na infekciju?

Danas odasvud možete čuti koliko je opasna HIV infekcija. Međutim, malo tko objašnjava koja je to opasnost. Kao rezultat toga, pacijenti imaju nepotpun skup podataka i kao rezultat toga prijetnju ne shvaćaju ozbiljno. Ali HIV je izuzetno opasan. Klasificirana je kao polako progresivna virusna bolest sklona kroničnom tijeku. U ovoj je patologiji primarno pogođen imunološki sustav.

Liječnici skreću pozornost pacijentima na činjenicu da smrt ne nastupa od samog virusa imunodeficijencije, kao takva.

Osoba umire od popratnih infekcija, tijelo više nije sposobno pružiti punu zaštitu od kojih. Također, uzrok smrti su tumori raka, koji se nisu u stanju boriti protiv smanjenog imuniteta.

U stvari, mehanizam kojim HIV infekcija utječe na imunološki sustav prilično je složen. Kao što primjećuju liječnici, pacijenti to ne trebaju temeljito razumjeti. Dovoljno je znati da bolest može smanjiti razinu imuniteta na kritične vrijednosti. Kao rezultat toga, tijelo se neće moći obraniti od raznih vanjskih utjecaja, koji će prije ili kasnije dovesti do smrti.

Kako nastaje infekcija

Važno je shvatiti da je zaraza HIV-om danas okružena širokim nizom mitova.

Pacijenti su vrlo slabo informirani o tome kada se mogu zaraziti i kada je zdravlje izvan opasnosti.

Prvo što treba zapamtiti je da je HIV vrlo krhak u svom okruženju. To znači da je patogeni mikroorganizam sposoban živjeti u potpunosti i dugo samo u ljudskom tijelu. Ne podnosi zagrijavanje preko 50 stupnjeva (trenutno umire). Također ne može odoljeti procesima sušenja. Ne sadrže sve tjelesne tekućine dovoljno virusa da bi se mogla dogoditi infekcija.

Najveću opasnost predstavljaju:

• krv;
• pre-ejakulat;
• sperma;
• iscjedak iz ženske rodnice;
• limfa;
• majčino mlijeko.

Ako bilo koja od ovih tekućina dođe u kontakt sa sluznicom u kojoj postoji mikrotrauma ili s ozlijeđenom kožom, dolazi do infekcije.

Također je moguće ako strana tekućina izravno ulazi u krvotok. Slina i suze, suprotno uvriježenom mišljenju, nisu prijetnja. Zbog prirode virusa i njegove niske stope preživljavanja, prenosi se na nekoliko načina:

• genitalni trakt tj. s nezaštićenim spolnim odnosom, koji neizbježno podrazumijeva kontakt bioloških tekućina i sluznica tijela osjetljivih na patogen;
• parenteralni put tj. prijenos virusa krvlju tijekom transfuzije ili zbog uporabe nesterilnih instrumenata u medicinske svrhe;
• vertikalni put tj. od majke do djeteta (danas, ako žena uzima antiretrovirusnu terapiju i odbije dojiti, vjerojatnost zaraze djeteta tijekom poroda je svedena na minimum).

Važno je shvatiti da ako su za infekciju kroz kožu potrebne mikrotraume ili otvorene rane, tada za infekciju kroz sluznicu to nije nužan uvjet. Razlika se objašnjava činjenicom da sluznica i koža ljudskog tijela imaju potpuno drugačiju strukturu. Ova razlika se mora uzeti u obzir.

Koji su znakovi sumnje na HIV

Mnoge pacijente zanima pitanje na koje se znakove obično sumnja da su zaraženi virusom humane imunodeficijencije.

• nerazumno povišenje temperature sistemskog tipa, što se ne može objasniti bilo kojom drugom infekcijom i koje traje dugo unatoč mjerama poduzetim za liječenje;
• snažno povećanje limfnih čvorova u veličini (prije svega, čvorovi u području prepona pate, ali također je moguće njihovo sudjelovanje u cijelom tijelu);

• snažno smanjenje tjelesne težine, što se ne može objasniti prehranom, stresom, hormonalnim poremećajima i drugim razlozima;
• pritužbe na poremećaje stolice koji već dugo prate pacijenta i nije moguće pronaći razlog zašto su se pojavili;
• izražena tendencija prijelaza bilo koje zarazne bolesti u kronične oblike, a priroda patogena nije puno važna, i bakterijske i virusne patologije su kronične;
• razvijaju se bolesti izazvane uvjetno patogenom mikroflorom, koja ne predstavlja prijetnju osobi čiji je imunitet u potpunosti funkcionalan (na primjer, mikoplazmoza, ureaplazmoza, kandidijaza itd.).

Klinika za zarazu HIV-om vrlo je nespecifična, kako kažu liječnici. Zbog toga je često teško postaviti dijagnozu. Mnogi pacijenti potpuno zanemaruju alarmantne simptome, radije ne traže medicinsku pomoć. Čak i ako bolest snažno utječe na njihovu opću dobrobit.

Važno je shvatiti da se infekcija HIV-om možda neće dugo osjećati. A kad se pojave prvi znakovi, osoba ih možda neće ni povezati s mogućnošću zaraze i pokušati se liječiti kod kuće.

Dijagnostičke metode

Laboratorijska dijagnostika HIV-a razvijena je već dugo i uspješno se koristi za dijagnosticiranje ove opasne bolesti.

Bolest se ne može prepoznati samo po simptomima. Stoga potvrđivanje dijagnoze na temelju laboratorijskih tehnika često igra odlučujuću ulogu.

Postoje razne metode za dijagnosticiranje HIV-a. U Rusiji se na prvom mjestu daje prednost imunološkom blotiranju, kao i ELISA reakcijama. Te se metode često koriste kao metode probira, na primjer prilikom provjere medicinskog osoblja.

ELISA sustavi

Pacijenti često pitaju svoje liječnike kojom metodom započinju dijagnostičku pretragu ako sumnjaju na infekciju virusom ljudske imunodeficijencije.

Svaki nadležni liječnik reći će da prednost treba dati imunološkom ispitivanju enzima. Upravo je ova tehnika prva dijagnostička faza u Rusiji.

Princip ELISA analize je jednostavan. U laboratoriju su liječnici stvorili posebne proteine. Sposobni su otkriti i komunicirati s antitijelima koja stvara tijelo kao odgovor na kontakt s HIV-om. Tada se u sustav dodaje poseban indikatorski enzim koji mijenja boju. U završnoj fazi, materijal se obrađuje pomoću posebnog aparata, a liječnik dobiva konačni rezultat.

ELISA je vrlo popularna.

Prije svega, zbog činjenice da se rezultati mogu dobiti čak i ako nije prošlo više od nekoliko tjedana od uvođenja patogena u tijelo.

Važno je razumjeti da imunološki test enzima ne otkriva sam virus u krvi, već antitijela na njega.

U mnogih se ljudi mogu početi proizvoditi kasnije od dva tjedna, što može dovesti do pogreške rezultata. Postoji nekoliko generacija ELISA testova.

Najmoderniji i vrlo precizni su oni koji pripadaju 3. i 4. generaciji. Liječnici napominju da je najbolje, ako postoji izbor, dati prednost europskim reagensima, jer njihova točnost doseže 99%. Vrijeme za dobivanje ELISA rezultata je u prosjeku 2 do 10 dana.

Zašto ELISA može biti lažna

Važno je razumjeti da enzimski test može dati i lažno pozitivne i lažno negativne rezultate. Iako je rizik od takvog razvoja događaja izuzetno mali.

Pacijent može dobiti lažno negativne rezultate ako je analiza predana prerano, a antitijela još nisu imala vremena stvoriti se u tijelu.

Da bi se isključila takva reakcija, pacijentima se preporučuje testiranje nekoliko puta u različitim intervalima.

Lažno pozitivan test javlja se kod nekih bolesti. Na primjer, pacijenti sa:

• alkoholni hepatitis;
• mijelomi u velikom broju;
• neke autoimune bolesti;
• žene tijekom trudnoće itd.

Kod takvih bolesti ljudska se krv nadoknađuje antitijelima. Oni po strukturi mogu nalikovati antitijelima na HIV, što zbunjuje reagense, izazivajući reakciju. Naravno, posljednjih godina testni sustavi postaju sve osjetljiviji. Međutim, problem lažnih rezultata još nije u potpunosti riješen.

Imunobloting

U suvremenim uvjetima nemoguće je postaviti pozitivnu dijagnozu HIV-a oslanjajući se samo na ELISA. Potrebno je potvrditi dobivene rezultate, što se provodi pomoću reakcije imunološkog blotiranja (imunoblotting, IB).

Da bi se izveo IB, laboratorij mora imati posebne test trake. Na njih se nanose virusni proteini. Prije analize, pacijentova krv uzeta iz vene priprema se na poseban način.

Rezultirajući biološki materijal dodaje se gelu u kojem se proteini odvajaju prema težini. Zatim se prethodno pripremljena traka spušta u rezultirajuću masu.

Traka se navlaži (javlja se mrljanje), na njoj se otkriju pruge ako u materijalu ima proteina HIV-a. Ako nema proteina, vlaženje ne mijenja izgled trake.

Postoji nekoliko tumačenja Western blottinga. Međutim, bez obzira koju metodu određena bolnica ili laboratorij koristi za dekodiranje, vjerojatnost točne dijagnoze iznosi 99,9%.

Mogu li imunoblotiranje dati netočne rezultate, često se pitaju pacijenti? Da, to je moguće, na primjer, ako je pacijent bolestan od tuberkuloze, trudna je ili pati od onkologije.

PCR u pomoć

PCR je još jedna metoda koja može dijagnosticirati virus ljudske imunodeficijencije u krvi i drugim biološkim tekućinama, gdje je njegova koncentracija prilično visoka.

Kao što liječnici primjećuju, lančana reakcija polimeraze može dati pozitivan rezultat u roku od 10 dana nakon prvog kontakta tijela s infekcijom.

Važno je razumjeti da PCR u nekim slučajevima daje lažno pozitivne rezultate. To se objašnjava činjenicom da metoda ima vrlo visoku osjetljivost.

Kao rezultat, često reagira na slična antitijela, što ukazuje na potpuno različite patološke procese u tijelu pacijenta.

Unatoč velikoj osjetljivosti i maloj vjerojatnosti dobivanja lažnih rezultata, PCR se ne koristi široko. To se objašnjava s nekoliko čimbenika. Prvo, za izvođenje lančane reakcije polimeraze potrebna je posebna oprema čija je cijena prilično visoka. Drugo, osoblje koje radi s opremom mora biti visoko kvalificirano, što također može uzrokovati poteškoće. Te značajke zajedno čine PCR skupom dijagnostičkom metodom i kao rezultat toga nisu dostupne svima.

Unatoč činjenici da PCR nije probirna metoda, koristi se, na primjer, za testiranje novorođenčeta na infekciju virusom humane imunodeficijencije.

Express sustavi za dijagnostiku

Liječnici i znanstvenici su se jako potrudili stvoriti brze testove za procjenu HIV infekcije. Kao što liječnici primjećuju, prilikom korištenja ovih sustava moguće je dobiti rezultat u roku od 15 minuta nakon provedenog testa.

Brzi HIV testovi temelje se na principu imunokromatografije. Sustav obično uključuje traku natopljenu posebnim reagensima.

Zadatak pacijenta je primijeniti krv, spermu ili bilo koju drugu biološku tekućinu koja može sadržavati antitijela na virus.

Ako ih se pronađe, na traci će se pojaviti dvije obojene pruge, od kojih je jedna kontrolna, a druga dijagnostička. Ako ne, tada će se pojaviti samo kontrolna traka.

Važno je shvatiti da brzi testovi ne daju stopostotno jamstvo da osoba nije zaražena ili, naprotiv, zaražena HIV-om. U svakom slučaju, rezultati dobiveni uz njihovu pomoć moraju se potvrditi u laboratoriju pomoću imunoblotinga.

Express sustavi za testiranje prikladni su za pacijente koji se žele smiriti kod kuće. Međutim, kao što primjećuju liječnici, čak i ako je uz njihovu pomoć osoba dobila negativan rezultat, ako sumnjate na negativne promjene u tijelu, ipak biste se trebali posavjetovati s liječnikom.

Kojem biste se liječniku trebali obratiti ako sumnjate na infekciju

Mnogi se pacijenti pitaju kojem liječniku trebaju otići ako sumnjaju na zarazu HIV-om. Prije svega, preporuča se posjetiti venereologa. Upravo je ovaj medicinski stručnjak specijaliziran za bolesti koje se mogu prenijeti s osobe na osobu spolnim kontaktom.

Venereolog će moći provesti nadležni pregled, prikupiti anamnezu i odlučiti koji su pregledi potrebni pacijentu za postavljanje točne dijagnoze. Prema vlastitom nahođenju, pacijenta može uputiti i u zaraznu bolnicu. Pogotovo ako i dalje sumnja da ima HIV.

Virus humane imunodeficijencije česta je bolest. Svatko tko je seksualno aktivan može se suočiti s njim.

Poznavanje karakteristika širenja i dijagnoze ove bolesti u suvremenoj je stvarnosti vitalno ako pacijent želi održati svoje zdravlje i dugovječnost. Samo pravovremeni posjet liječniku omogućit će vam da infekciju poduzmete pod kontrolu i zaštitite se od nje!

Klinička i laboratorijska dijagnostika HIV infekcije ima tri smjera:

1. Utvrđivanje činjenice HIV infekcije, dijagnoza HIV infekcije.
2. Određivanje stadija kliničkog tijeka bolesti i identifikacija sekundarnih bolesti.
3. Predviđanje napredovanja kliničkog tijeka bolesti, laboratorijsko praćenje učinkovitosti liječenja i nuspojava antiretrovirusnih lijekova.

1. Utvrđivanje HIV infekcije, dijagnoza HIV infekcije

Za utvrđivanje HIV infekcije koriste se sljedeći specifični pokazatelji: antitijela na HIV, HIV antigeni, HIV RNA i provirusna DNA. Protutijela na HIV određuju se enzimski povezanim imunosorbentom (ELISA) ili imunoblotiranjem, što je u biti vrsta ELISA-e. Antigeni (proteini) HIV-a određuju se ELISA-om. Uz pomoć molekularno genetičkih metoda lančane reakcije polimeraze (PCR) i bDNA mogu se odrediti HIV RNA i provirusna DNA. Upotreba dodatne metode hibridizacije nukleinskih kiselina sa specifičnim DNK sondama omogućuje provjeru specifičnosti DNA sekvenci dobivenih tijekom PCR-a. PCR osjetljivost je otkrivanje virusnih gena u jednoj od pet tisuća stanica.

U slučaju primarne infekcije, primjećuje se sljedeća dinamika HIV biljega u krvi zaraženih osoba. U prvom mjesecu, kao rezultat aktivacije replikacijskog procesa, dolazi do naglog povećanja virusnog opterećenja (sadržaj HIV RNA u plazmi), a zatim, zbog širenja virusa i masivne infekcije ciljnih stanica u krvi i limfnim čvorovima, postaje moguće odrediti proviralnu DNA. Činjenica otkrivanja DNA provirusa integrirane u genom ciljne stanice od presudne je dijagnostičke vrijednosti.

Virusno opterećenje odražava intenzitet replikacijskog procesa u zaraženim stanicama. Tijekom razdoblja primarne infekcije, razina virusnog opterećenja je različita kada je zaražena različitim podtipovima HIV-a, ali dinamika njegovih promjena približno je jednaka. Dakle, kada je, na primjer, zaraženo podtipom B, ako je u prvom mjesecu nakon zaraze virusno opterećenje 700 kopija / ml, tada u 2. mjesecu dolazi do smanjenja na 600, u 3. - na 100, u 4. - na 50 kopije / ml. Takva se dinamika opaža u pozadini povećanja sadržaja specifičnih antitijela na HIV u krvi. Sadržaj provirusne DNA u mononuklearnim stanicama krvi bolesnika zaraženih HIV-om karakterizira relativna postojanost tijekom prvih 6 mjeseci s blagim fluktuacijama nekih podtipova. Dakle, opterećenja RNA i DNA nisu identična.

Tijekom faze inkubacije, neko vrijeme ne dolazi do stvaranja specifičnih antitijela na HIV u količini dovoljnoj za određivanje postojećim laboratorijskim metodama. Prije registracije protutijela, vrlo kratko se opaža pojava u krvi proteina Nef koji potiskuje replikacijski proces i strukturnog proteina p24. Antigen p24 može se otkriti u krvi metodom enzimsko-imunološkog ispitivanja već za 1-2 ped nakon infekcije i određivati \u200b\u200bdo 8. tjedna, a zatim se njegov sadržaj naglo smanjuje. Nadalje, u kliničkom tijeku HIV infekcije dolazi do drugog porasta sadržaja p24 proteina u krvi. Pada na stvaranje AIDS-a. Nestanak slobodnih (ne vezanih antitijelima) p24 proteina jezgre u krvi i pojava specifičnih antitijela na HIV proteine \u200b\u200boznačavaju početak serokonverzije (slika 9.6).

Viremija i antigenemija uzrokuju stvaranje specifičnih IgM antitijela (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Slobodna antitijela klase IgM i IgG na protein p24 mogu se pojaviti počev od 2. tjedna, njihov sadržaj raste unutar 2-4 tjedna, dosežući određenu razinu, na kojoj ostaje mjesecima (IgM) i godinama (IgG) (slika. 9,7).

Pojava potpune serokonverzije, kada se u perifernoj krvi zabilježi visoka razina specifičnih IgG antitijela na strukturne proteine \u200b\u200bHIV-a p24, gp41, gp120, gp160, uvelike olakšava dijagnozu HIV infekcije. Protutijela na HIV pojavljuju se u 90-95% zaraženih unutar 3 mjeseca nakon zaraze, u 5-9% - u razdoblju od 3 do 6 mjeseci od trenutka zaraze i u 0,5-1% - kasnije.

Unatoč činjenici da se antitijela na HIV pojavljuju posljednja, glavni laboratorijski dijagnostički pokazatelj do danas je otkrivanje specifičnih antitijela ELISA-om i imunoblotiranjem.

Podaci prikazani u tablici 9.2 [pokazati] i 9.3 [pokazati] , jasno pokazuju visoku osjetljivost suvremenih enzimskih imunosorbentnih testova u određivanju antitijela na HIV, koja premašuje osjetljivost imunoblottinga. U nekim slučajevima, nakon primitka primarnog pozitivnog rezultata na ELISA, to se može potvrditi imunoblotiranjem tek nakon 2-3 tjedna.

Prilikom ispitivanja bolesnika zaraženih HIV-om (zaraženih HIV-om) pomoću imunobloting testnih sustava vodećih svjetskih tvrtki, u svim se slučajevima otkrivaju antitijela na gp160 i p24 / 25, u 38,8-93,3% slučajeva otkrivaju se antitijela na druge proteine \u200b\u200b(tablica. 9.4 [pokazati] ).

Poteškoće u otkrivanju protutijela u bolesnika s HIV infekcijom mogu nastati tijekom razdoblja masovne viremije i antigenemije, kada su postojeća specifična protutijela u krvi povezana s virusnim česticama, a replikativni postupak nadmašuje proizvodnju novih protuvirusnih protutijela. Ova situacija može nastati i nestati tijekom zaraznog procesa.

U bolesnika s prvotno oslabljenim imunološkim sustavom, viremija i antigenemija pojavljuju se ranije i ostaju na visokoj razini do ishoda bolesti. U takvih je bolesnika nizak sadržaj slobodnih antitijela na HIV iz dva razloga - nedovoljna proizvodnja antitijela B-limfocitima i vezivanje antitijela virionima i topljivim HIV-proteinima, pa su za određivanje infekcije potrebni testni sustavi s povećanom osjetljivošću ili modifikacije metoda analize koje osiguravaju stupanj oslobađanja antitijela od imunoloških kompleksa.

Najčešće se smanjenje sadržaja protutijela na HIV iz naznačenih razloga događa u terminalnoj fazi, kada se protutijela na HIV u serumu ne mogu otkriti niti enzimski vezanim imunosorbentnim testom niti metodom imunoblotiranja (Western blot). Uz pojavu specifičnih antitijela na HIV, imunološki odgovor u prva 4 mjeseca karakterizira smanjenje sadržaja zaraženih CD4 + stanica u krvi i porast CD8 + stanica. Nadalje, sadržaj stanica koje nose CD4 i CD8 receptore stabilizira se i ostaje nepromijenjen neko vrijeme. Povećanje sadržaja CD8-limfocita zaštitna je reakcija, jer citotoksičnost ovisno o stanicama ostvaruju limfociti CD8 +, čiji je cilj uništavanje stanica zaraženih HPV-om. U početku citotoksični limfociti (CTL) reagiraju na regulatorni protein Nef virusa, koji igra važnu ulogu u smanjenju virusnog (RNA) opterećenja u plazmi HIV-zaražene osobe u prvim mjesecima. Tada se formira odgovor CTL-a drugima, uklj. strukturni, HIV proteini, uslijed čega se, 12 mjeseci nakon infekcije, citotoksični učinak značajno povećava.

Sheme za laboratorijsku dijagnozu HIV infekcije

Uzimajući u obzir zadanu dinamiku specifičnih biljega HIV infekcije u praksi, preporučljivo je pridržavati se sljedećih laboratorijskih dijagnostičkih shema kod odraslih (slike 9.8-9.10).

Dijagrami odražavaju tri glavne faze primarne laboratorijske dijagnoze HIV infekcije:

1. Projekcija.
2. Referenca.
3. Stručnjak.

Potreba za nekoliko faza laboratorijske dijagnostike prvenstveno je zbog ekonomskih razloga. Tako, na primjer, trošak provođenja jedne stručne studije uz pomoć domaćih testnih sustava korištenjem metode imunoblottinga iznosi do 40 USD, probir (pomoću ELISA) - oko 0,2, odnosno omjer je 1: 200.

U prvoj fazi (slika 9.8.) Ispitanici se testiraju na antitijela na HIV pomoću jednog enzimski povezanog imunosorbentnog testa dizajniranog za otkrivanje antitijela na obje vrste virusa - HIV-1 i HIV-2.

Proizvođači predloženih ispitnih sustava koriste antivirusni lizat, rekombinantne proteine \u200b\u200bi sintetičke peptide. Svaki od navedenih nositelja antigenih determinanti HIV-a ima svoje prednosti i nedostatke. Stoga, pri odabiru testnih kompleta s približno jednakom cijenom, trebaju se preferirati kompleti s najvećom osjetljivošću (po mogućnosti 100%). Među ispitnim sustavima iste cijene i osjetljivosti, preporučljivo je zadržati se na onima s maksimalnom specifičnošću.

Na temelju virusnog lizata stvoreni su prvi testni sustavi za laboratorijsku dijagnozu HIV infekcije. Osamdesetih godina 20. stoljeća takve su testne sustave karakterizirale osjetljivost manja od 100% i niska specifičnost, što se očitovalo velikim brojem (do 60%) lažno pozitivnih rezultata.

Tijekom stvaranja viriona u kulturi limfocita, njegova se membrana stvara iz vanjske membrane i stoga sadrži antigene glavnog kompleksa histokompatibilnosti klase I i II. Ova okolnost uzrokuje lažno pozitivne reakcije ako su u krvi bolesnika prisutna antitijela na aloantigene histokompatibilnosti.

Kasnije, za dobivanje virusa, predloženo je korištenje kulture makrofaga, u kojoj se virusne čestice uglavnom formiraju unutarstanično pupanjem ne iz vanjske stanične membrane, već iz membrana endoplazmatskog retikuluma. Ova je tehnologija smanjila broj lažno pozitivnih rezultata.

Jedan od najboljih u pogledu najvažnijih karakteristika - osjetljivosti i specifičnosti - prepoznati su sustavi za ispitivanje enzimskog imunološkog ispitivanja, koji koriste kombinaciju pročišćenog virusnog lizata sa sintetičkim peptidima, koji su antigenski najznačajniji dijelovi proteina virusa, ili rekombinantnih proteina.

Osjetljivost ispitnog sustava također ovisi o karakteristikama ostalih komponenata kompleta. Dakle, testni sustavi u kojima se koriste konjugati koji prepoznaju antitijela ne samo iz klase IgG, već i za IgM i IgA, omogućuju otkrivanje ranije faze serokonverzije. Čini se da obećava upotreba testnih sustava uz pomoć kojih je moguće istovremeno odrediti i antivirusna antitijela i p24 antigen, što laboratorijsku dijagnozu HIV infekcije čini još ranije.

Primarni pozitivni rezultat mora se ponovno provjeriti ponovnim ispitivanjem uzorka u istom ispitnom sustavu, ali po mogućnosti u drugoj šarži i kod drugog laboratorijskog asistenta. Ako se tijekom druge studije dobije negativan rezultat, studija se provodi treći put.

Nakon potvrde pozitivnog rezultata, poželjno je ponovno vaditi krv i testirati je na antitijela na HIV kao primarnu. Ponovljeno uzimanje uzoraka krvi sprječava pogrešku uzrokovanu netočnim označavanjem epruveta i ispunjavanjem obrazaca za preporuku.

Pozitivan serumski serum u fazi probira šalje se na referentne studije provedene pomoću dva ili tri visoko specifična ELISA test sustava. U slučaju dva pozitivna rezultata, provodi se stručna studija metodom imunoblottinga.

Korištenje enzimskih imunoanaliza u referentnoj dijagnostici, koje se mogu koristiti za razlikovanje specifičnih antitijela na HIV-1 i HIV-2, olakšava daljnji rad i omogućuje vam da odmah proučite pozitivan uzorak u stručnoj fazi koristeći odgovarajuće imunobloting (HIV-1 ili HIV-2) ...

Laboratorijsko stručno mišljenje o HIV infekciji izrađuje se samo na temelju pozitivnog Western blot rezultata. Pri provođenju stručne dijagnostike potrebno je koristiti nomenklaturu gena i genskih proizvoda HIV-a koju je 1990. godine predložila skupina stručnjaka SZO (Tablica 9.5. [pokazati] ).

Specifičnost traka na imunoblotu treba procijeniti vrlo pažljivo i pažljivo, koristeći rezultate ispitivanja kontrolnih seruma (pozitivnih i negativnih), koji se provode paralelno s ispitivanjem eksperimentalnih uzoraka, te uzorak imunoblota s oznakom proteina HIV-a (koji je proizvođač priložio testnom sustavu). Tumačenje dobivenih rezultata treba provesti u skladu s uputama priloženim ispitnom sustavu. Kriterij pozitivnosti je u pravilu obvezna prisutnost antitijela na dva proteina (prekursora, vanjska ili transmembranska) kodirana env genom, te moguća prisutnost antitijela na produkte dvaju drugih strukturnih gena za HIV - gag i pol (tablica 9.6. [pokazati] ).

U slučaju dobivanja sumnjivog rezultata, potrebno je koristiti popis preporuka za konačno razjašnjenje rezultata imunoblotinga (tablica 9.7. [pokazati] ).

Prema preporukama Ruskog znanstvenog i metodološkog centra za prevenciju i kontrolu AIDS-a, smatra se pozitivnim rezultatom ako postoje antitijela na barem jedan od proteina gp41, gp120, gp160 u kombinaciji s antitijelima na druge specifične proteine \u200b\u200bHIV-1 ili bez njih. Te se preporuke daju na temelju iskustva sa serumima djece iz bolničkih žarišta, u kojima su antitijela često određivana samo na jedan od proteina ovojnice virusa.

Većina bolesnika koji su isprva ispitivani seropozitivno u ELISA-i pripadaju fazi perzistentne generalizirane limfadenopatije (PGL) ili asimptomatskoj fazi. Stoga se na imunoblotu (nitrocelulozna traka na kojoj se imobiliziraju HIV proteini) u pravilu određuje sljedeća kombinacija antitijela na HIV-1: antitijela na env ovojnice proteina gp160, gp120 i gp41, kodirani env genom, u kombinaciji s antitijelima na temeljne proteine \u200b\u200bp24 (protein nukleokapsid kodiran genom gena) i p31 / 34 (endonukleaza kodirana genom pol).

Pozitivne reakcije sa samo gag i / ili po proteinima mogu se javiti u slučaju rane faze serokonverzije, a također ukazuju na infekciju HIV-2 ili nespecifičnu reakciju.

U slučaju dobivanja sumnjivog rezultata, moguće je raznim metodološkim tehnikama razjasniti činjenicu zaraze HIV-om.

Ovisno o tehničkim mogućnostima (dostupnost dijagnostičkih kompleta i reagenasa, opreme s posebnom opremom i obuke osoblja), stručni laboratorij provodi dodatne dijagnostičke studije (slika 9.10).

U nekim je slučajevima poželjno koristiti molekularno genetske metode za određivanje genetskih sekvenci HIV-a u serumu, u limfocitima u krvi ili punkcijama limfnih čvorova. Provjera specifičnosti DNA sekvenci dobivenih kao rezultat PCR-a može se provesti metodom hibridizacije nukleinskih kiselina sa specifičnim DNA sondama.

Metode radioimunoprecipitacije (RIP) i neizravne imunofluorescencije (IFL) također se mogu koristiti za konačnu provjeru seruma sa sumnjivim rezultatima u imunoblotiranju.

Otkrivanje HIV RNA u krvnoj plazmi kvalitativnom ili kvantitativnom metodom nije značajno za dijagnozu HIV infekcije. Ovaj bi rezultat trebao biti potvrđen standardnim metodama, poput imunoblotinga, 2-4 mjeseca nakon primanja primarnog upitnog ili negativnog odgovora.

Izolacija HIV-a u staničnoj kulturi konačna je istina. Međutim, metoda je složena, skupa i provodi se samo u posebno opremljenim istraživačkim laboratorijima.

Sadržaj CD4 + - stanica u krvi nespecifičan je pokazatelj, međutim, u spornim slučajevima (ELISA "+", imunoblot "-", prisutnost kliničkih znakova HIV infekcije / AIDS-a) može se koristiti kao vodič za donošenje stručne odluke. Ako je u laboratoriju moguće provesti samo imunobloting, tada se trebate pridržavati preporuka navedenih u tablici. 9.7 i sl. 9.9.

Osobe čiji je stručni pregled seruma dao sumnjive (nesigurne) rezultate, osim slučajeva otkrivanja antitijela samo na p17 (HIV-1) ili p16 (HIV-2), trebalo bi ponovno testirati u roku od 6 mjeseci (nakon 3 mjeseca). U slučaju istinske HIV infekcije, nakon 3-6 mjeseci uočava se "pozitivan" trend u spektru antitijela - dodatno stvaranje antitijela na druge proteine \u200b\u200bvirusa. Lažnu reakciju karakterizira postojanje sumnjivog uzorka imunološkog blot-a dugo vremena ili nestajanje sumnjivih traka. Ako su nakon navedenog razdoblja rezultati ponovljenog imunoblotinga negativni ili ostanu sumnjivi, u nedostatku čimbenika rizika, kliničkih simptoma ili drugih čimbenika povezanih s HIV infekcijom, osoba se može smatrati seronegativnom za antitijela na HIV-1 i HIV-2.

Lažno pozitivni rezultati zbog sadržaja u krvi pacijenata antitijela na aloantigene histokompatibilnosti, koji su dio ovojnice HIV-a, pojavljuju se na imunoblotu u obliku traka na razini gp41 i gp31. Razlozi za druge nespecifične reakcije (na primjer, na p24, koji se često nalazi u osoba s autoimunim procesima) još nisu razjašnjeni.

Poboljšanje tehnologije proizvodnje enzimski povezanih imunosorbentnih sustava za ispitivanje omogućilo je postizanje visoke osjetljivosti - do 99,99%, dok je osjetljivost metode imunoblottinga 97%. Stoga negativni rezultat imunoblotinga s pozitivnim rezultatima ELISA-e može ukazivati \u200b\u200bna početno razdoblje serokonverzije, karakterizirano niskom razinom specifičnih antitijela. Stoga je potrebno ponoviti ispitivanje nakon 1,5-2 mjeseca, odnosno vremenskog razdoblja potrebnog za potpunu serokonverziju, kako bi se postigla koncentracija specifičnih antitijela u krvi koja je dovoljna za otkrivanje imunoblotiranjem.

Pozitivan rezultat (rezultati) studije u referentnoj ili jedinoj fazi probira laboratorijske dijagnoze HIV infekcije, odnosno pozitivan rezultat bilo kojeg testa enzimski vezanog imunosorbenta, koji u konačnici nije potvrđen stručnim metodama, tumači se kao prisutnost križno reagirajućih antitijela u krvi. Unakrsno reagiranje odnosi se na vezanje nespecifičnih mjesta protutijelima na HIV proteine \u200b\u200bili peptide koji se koriste kao antigena osnova u testnom sustavu u kojem se dobivaju pozitivni rezultati.

U nedostatku imunodeficijencije i kliničkih znakova HIV infekcije, takve se osobe smatraju seronegativnim za HIV antitijela i treba ih ukloniti iz registra.

Konačna dijagnoza HIV infekcije utvrđuje se samo na temelju svih kliničkih, epidemioloških i laboratorijskih podataka. Samo liječnik koji ima pravo pravo obavijestiti pacijenta o dijagnozi HIV infekcije.

Glavna metoda potvrdne (stručne) laboratorijske dijagnoze HIV infekcije je imunoblotting. Međutim, s obzirom na njegovu nižu osjetljivost u usporedbi s ELISA-om, brojni su istraživači predložili upotrebu kombinacije nekoliko testnih sustava za konačno utvrđivanje prisutnosti specifičnih antitijela na HIV. Na primjer, G. van der Groen i sur. predložio je alternativu metodi imunoblotinga za provjeru pozitivnih rezultata probirne faze laboratorijske dijagnoze HIV infekcije. Uključuje paralelno proučavanje materijala u tri testna sustava koji se temelje na različitim metodama detekcije specifičnih antitijela na HIV (nekoliko varijanti ELISA, test aglutinacije) korištenjem antigena različite prirode. Autori su uspjeli pronaći takve kombinacije testnih sustava, čija uporaba osigurava 100% osjetljivost i specifičnost u usporedbi s rezultatima dobivenim imunoblotiranjem.

Jeftinost ove metode stručne dijagnostike nedvojbena je prednost, međutim, nedostatak informacija o tome koji specifični proteini virusa imaju protutijela u krvi pacijenta ne omogućuje procjenu specifičnosti reakcije u svakom pojedinom slučaju, kao ni praćenje promjena u spektru protutijela u ranoj fazi serokonverzije.

Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije u djece rođene majkama zaraženim HIV-om ima svoje osobine. Od trenutka rođenja dulje vrijeme (do 15 mjeseci), majčina antitijela na HIV mogu cirkulirati u krvi takve djece. U placentnu barijeru prodiru samo imunoglobulini klase IgG, stoga otkrivanje nmmupoglobulina specifičnih za HPV klase IgM i IgA u djeteta omogućuje potvrdu zaraze, ali negativan rezultat ne može ukazivati \u200b\u200bna odsutnost HIV-a.

Djeca mlađa od 1 mjeseca još nemaju replikaciju HPV-a, a jedina metoda provjere je PCR. Određivanje antigena p24 u djece starije od 1 mjeseca također je potvrdna metoda.

Odsutnost antitijela na HIV u novorođenčadi ne znači da virus nije probio placentarnu barijeru. U svakom slučaju, djeca majki zaraženih HIV-om podliježu laboratorijskom dijagnostičkom pregledu i promatranju u roku od 36 mjeseci od rođenja.

Rezultati laboratorijskih testova na markere HIV infekcije zahtijevaju pažljivo tumačenje i trebaju se razmatrati samo zajedno s podacima epidemioloških i kliničkih ispitivanja. S druge strane, valja napomenuti da unatoč visokoj osjetljivosti suvremenih metoda, negativni rezultati istraživanja ne mogu u potpunosti isključiti prisutnost HIV infekcije. Stoga se negativni rezultat testa, na primjer imunoblotiranjem, može formulirati samo kao odsutnost specifičnih antitijela na HIV-1 i HIV-2.

Dijagnoza HIV infekcije u seronegativnih bolesnika

Kvaliteta testnih sustava koji se koriste u laboratorijskoj dijagnostici HIV infekcije poboljšava se svake godine, a njihova osjetljivost se povećava. Međutim, velika varijabilnost HIV-a može dovesti do pojave novih tipova, čija antitijela možda neće prepoznati postojeći testni sustavi. Uz to, postoje slučajevi atipičnog humoralnog odgovora imunološkog sustava domaćina na virus. Tako je L. Montagnier 1996. izvijestio o dva bolesnika sa AIDS-om kod kojih specifična antitijela nisu otkrivena u njihovoj krvi nekoliko godina, dijagnoza je postavljena na temelju kliničkih podataka i laboratorijski potvrđena samo izolacijom HPV-1 u staničnoj kulturi. U takvim je slučajevima potrebno koristiti preporuke SZO-a prema kojima je klinička dijagnoza HIV infekcije kod odraslih i djece moguća u prisutnosti jedne od 12 bolesti s indikatorom AIDS-a:

1. kandidijaza jednjaka, dušnika, bronha, pluća;
2. ekstrapulmonalna kriptokokoza;
3. kriptosporidioza s proljevom duže od jednog mjeseca;
4. citomegalovirusna lezija bilo kojeg organa (osim i pored jetre, slezene i limfnih čvorova kod pacijenta starijeg od 1 mjeseca):
5. infekcija uzrokovana virusom herpes simplex koji traje više od 1 mjeseca kod pacijenta starijeg od 1 mjeseca;
6. limfom mozga u pacijenta mlađeg od 60 godina;
7. limfocitna intersticijska upala pluća kod djeteta mlađeg od 13 godina;
8. disiminirana infekcija uzrokovana bakterijama iz skupine Micobacterium avium intracellulare ili M. Kansassii;
9. pneumocistis upala pluća;
10. progresivna multifokalna leukoencefalopatija;
11. toksoplazmoza središnjeg živčanog sustava u bolesnika starijih od 1 mjeseca.

Prisutnost jedne od ovih bolesti omogućuje dijagnosticiranje HIV infekcije u nedostatku mogućnosti provođenja laboratorijskog testa krvi na prisutnost antitijela na HIV ili čak i ako se dobije seronegativni rezultat.

Izvor: Medicinsko laboratorijska dijagnostika, programi i algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Peterburg, Intermedica, 2001

Samo posebni testovi mogu otkriti AIDS. Sam postupak ispitivanja sastoji se od otkrivanja antitijela koja tijelo stvara kao odgovor na pojavu virusa. Laboratorijske metode za dijagnozu AIDS-a uključuju četiri testa koja se koriste za otkrivanje bolesti.

Prva - ELISA (enzimski imunološki test) najčešća je dijagnostička metoda. Ova analiza može odrediti količinu antitijela koja su se nakupila u tijelu. To je obično moguće samo ako je virus ušao u krvotok i od tog trenutka su prošla tri mjeseca. Kao što pokazuje praksa, jedan posto rezultata daje lažno negativan ili lažno pozitivan rezultat.

Lažno negativan rezultat moguć je ako se antitijela još nisu razvila na virus ili ako je AIDS u završnoj fazi, odnosno virus je prisutan u krvi, ali ima ga toliko da antitijela i CD-4 stanice praktički izostaju. Da biste potvrdili negativan rezultat, možete ponovo proći ELISA, ali tek nakon 3 mjeseca.

U većini slučajeva lažno pozitivan rezultat daje se pregledom bolesnika koji pate od kroničnih autoimunih, zaraznih, onkoloških i drugih bolesti. Lažno pozitivan rezultat može se naći i u trudnica. Stoga se svaki pozitivan rezultat nužno provjerava, ali samo na imunoblotu - ovo je osjetljiviji test.

Ako je rezultat imunoblota pozitivan, posebno nakon ELISA rezultata, tada je pouzdanost 99,9%, a to je maksimalna točnost medicinskog testa (štoviše, bilo kojeg).

Drugi je imunoblot (potpuno imunološko blotiranje). Ovaj test otkriva prisutnost specifičnih antitijela na HIV. U ovom je slučaju rezultat negativan, pozitivan, sumnjiv (naziva se i neodređenim).

Dvojbeni rezultat može ukazivati \u200b\u200bna to da je HIV prisutan u krvotoku, za koji tijelo još nije razvilo čitav spektar antitijela. U tom se slučaju antitijela na HIV u serumu pojavljuju za 1-3-6 mjeseci. jedan za drugim, od trenutka kada je primljen prvi sumnjiv rezultat. Ako se rezultati potvrde, to ukazuje na zarazu HIV-om u početnoj fazi.

Neizvjestan rezultat ovog testa može ukazivati \u200b\u200bna suprotno. Sama infekcija HIV-om ne postoji, ali ljudsko tijelo ima antitijela slična antitijelima na HIV. U pravilu se sumnjiv rezultat javlja kod trudnica, kod bolesnika s tuberkulozom, primatelja, pacijenata s karcinomom, kao i kod onih koji su primili višestruku transfuziju krvi (tj. Transfuziju krvi). Pacijenta čiji je rezultat ovog testa pokazao nesigurnost liječnik zarazne bolesti promatra šest mjeseci i testira se za 1-3-6 mjeseci.

Treći je PCR (lančana reakcija polimeraze). Ova dijagnoza AIDS-a omogućuje vam utvrđivanje DNA i RNA virusa. Ovo je prilično osjetljiva i učinkovita reakcija koja vam omogućuje proučavanje DNA kako biste dobili rezultat. U ovom se slučaju DNK uzima iz jedne stanice i ispituje množenjem karakterističnih sekvenci DNA

Ovaj test se primjenjuje:

• utvrditi koji se virus nalazi u tijelu (postoji HIV 1 i HIV-2);
• utvrditi prisutnost ili odsutnost HIV-a;
• utvrditi i kontrolirati virusno opterećenje;
• za utvrđivanje HIV statusa novorođenčeta koje je rođeno od majke zaražene HIV-om.

Ovaj test ima visoku osjetljivost: može otkriti virus čak i ako je prošlo desetak dana od navodnog trenutka zaraze. Tako visoka osjetljivost testa reagira na druge infekcije, stoga često daje lažno pozitivne rezultate. Rezultati ovog testa nisu osnova za konačnu dijagnozu.

Ovaj test zahtijeva visokokvalificirano medicinsko osoblje i sofisticiranu laboratorijsku opremu. Ovo je skup test i stoga se ne koristi u besplatnom testiranju na HIV.

Četvrti je ekspresni test. Ovaj se test koristi uglavnom u hitnim slučajevima - tijekom porođaja, iz zdravstvenih razloga tijekom operacije. Rezultati brzih testova obično se potvrđuju rutinskim testiranjem na HIV.

/ 16
Najgori Najbolje

Testiranje na HIV infekciju podliježe:

2. Osobe sa sumnjom ili potvrđenom dijagnozom: bakterijska infekcija u djece mlađe od 13 godina, višestruka i ponovljena; kandidijaza jednjaka, dušnika, bronha ili pluća; invazivni rak vrata maternice; diseminirana ili izvanplućna kokcidioidomikoza; ekstrapulmonalna kriptokokoza; kriptosporidioza s proljevom tijekom 1 mjeseca ili više; lezije citomegalovirusa drugih organa, osim jetre, slezene, limfnih čvorova u bolesnika starijih od 1 mjeseca; citomegalovirusni retinitis s gubitkom vida; herpetična infekcija koja uzrokuje multifokalne čireve koji ne zaraste u roku od jednog mjeseca, ili bronhitis, upala pluća, ezofagitis; diseminirana ili ekstrapulmonalna histoplazmoza; izosporoza s proljevom duže od 1 mjeseca; tuberkuloza raširena ili izvan pluća; plućna tuberkuloza u odraslih ili adolescenata starijih od 13 godina; ekstrapulmonalna tuberkuloza; druge bolesti uzrokovane mikobakterijama, osim diseminirane ili vanpulmonalne M. tuberculosis; upala pluća uzrokovana pneumocistima; progresivna multifokalna leukoencefalopatija; salmonela (osim Salmonella typhi) septikemija, ponavljajuća; toksoilaza-mozaik mozga u djece starije od 1 mjeseca; Kaposijevi sarkomi; limfoidna intersticijska upala pluća u djece mlađe od 13 godina; Burkittovi limfomi; imunoblastični limfom; primarni limfom mozga; sindrom rasipanja, hepatitis B, nosač HBsAg; infektivna mononukleoza; ponovljeni herpes zoster kod osoba starijih od 60 godina; spolno prenosive bolesti.

Visoko specijalizirani laboratorij provodi:

a) određivanje protutijela, antigena i imunih kompleksa koji cirkuliraju u krvi; uzgoj virusa, identifikacija njegovog genomskog materijala i enzima;

b) procjena funkcija stanične veze imunološkog sustava. Glavna uloga pripada metodama serološke dijagnostike, usmjerenim na određivanje antitijela, kao i antigena patogena u krvi i drugim biološkim tekućinama u tijelu.

Ispitivanje HIV antitijela provodi se kako bi se:

a) sigurnost transfuzije i transplantacije krvi;

b) nadzor, testiranje radi praćenja prevalencije HIV infekcije i proučavanja dinamike njene prevalencije u određenoj populaciji;

c) dijagnostika HIV infekcije, tj. dobrovoljno ispitivanje krvnog seruma praktički zdravih ljudi ili pacijenata s različitim kliničkim znakovima i simptomima sličnim HIV infekciji ili AIDS-u.

Sustav za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije zasnovan je na trostupanjskom principu. Prva faza je screening namijenjen provođenju primarnih krvnih testova na prisutnost antitijela na HIV proteine. Druga je faza referentna - omogućuje korištenje posebnih metodoloških tehnika za razjašnjavanje (potvrđivanje) primarnog pozitivnog rezultata dobivenog u fazi probira. Treći stručnjak za etan namijenjen je konačnoj provjeri prisutnosti i specifičnosti biljega HIV infekcije identificiranih u prethodnim fazama laboratorijske dijagnostike. Potreba za nekoliko faza laboratorijske dijagnostike prvenstveno je zbog ekonomskih razloga.

U praksi se koristi nekoliko testova koji omogućuju identificiranje zaraženih HIV-om s dovoljnim stupnjem pouzdanosti:

ELISA (ELISA) -test (enzimski imunološki test) otkrivanje prve razine karakterizira visoka osjetljivost, iako manje specifična od sljedeće;

Imunski blot (Western-blot), vrlo specifičan i najčešće korišten test za razlikovanje između HIV-1 i HIV-2;

Test antigenemije P25, učinkovit u početnim fazama infekcije;

Lančana reakcija polimeraze (PCR).

U slučajevima masovnog pregleda uzoraka krvi, preporučuje se ispitivanje smjesa seruma iz skupine ispitanika, sastavljenih na takav način da konačno razrjeđivanje svakog uzorka ne prelazi 1: 100. Ako je smjesa serumske struje pozitivna, ispituje se svaki serum pozitivne smjese. Ova metoda ne dovodi do gubitka osjetljivosti kako kod ELISA, tako i kod imunoblota, ali smanjuje troškove rada i troškove primarnog pregleda za 60-80%.

U primarnoj serodijagnozi HIV infekcije, ukupna antitijela određuju se probirnim probirnim testovima - ELISA i reakcijama aglutinacije. U drugoj fazi (arbitraža) koristi se složeniji test - imunoblot, koji omogućuje ne samo potvrđivanje ili odbijanje početnog zaključka, već i to na razini određivanja antitijela na pojedine virusne proteine.

Povezani imunosorbentni test (ELISA) je glavna i najčešće korištena metoda za određivanje antitijela na HIV. No, nedostaci primjene ELISA-e u serodijagnozi HIV infekcije uključuju česte lažno pozitivne rezultate. S tim u vezi, rezultat ELISA-e nije osnova za zaključak o HIV seropozitivnosti ispitanika. To je zbog nedovoljnog pročišćavanja imunosorbenta od balastnih proteina; spontano vezivanje serumskih antitijela za plastiku, ako njegova područja koja ne zauzima imunosorbent nisu dovoljno blokirana ili ih ne blokira potpuno poseban neutralni protein; unakrsna interakcija s HIV proteinima imunosorbenta različitih proteina prisutnih u krvi osoba s određenim, češće autoimunim patološkim procesima kao što su multipla skleroza, SLE, tuberkuloza; s čestim darivanjem, zaraznim i onkološkim bolestima, opeklinama, trudnoćom, ponovljenom transfuzijom krvi, transplantacijom organa i tkiva, kao i osobama na hemodijalizi; s prisutnošću reumatoidnog faktora u krvi, što često izaziva lažno pozitivne reakcije na HIV; prisutnost u krvi ispitanih ljudi antitijela na HIV gag-proteine \u200b\u200bi, prije svega, na protein p24 (očito se stvaraju antitijela na egzo- ili endogene, još uvijek neidentificirane retroviruse). Budući da se anti-p24 sintetizira bez greške u ranim fazama serokonverzije HIV-a, provodi se daljnje imunološko praćenje osoba s antitijelima na HIV gag proteine, kao i njihovo uklanjanje iz doniranja.

Osjetljivost i specifičnost imunosorbentnog testa neprestano raste. Kao rezultat, ELISA četvrte generacije svojim dijagnostičkim mogućnostima nije inferiorna u odnosu na imunološko blotiranje i može se koristiti ne samo u skriningu, već iu potvrdnoj fazi dijagnosticiranja HIV infekcije [Smolskaya T. T., 1997].

Imunobloting je konačna metoda serološke dijagnostike, koja omogućuje konačni zaključak o HIV-pozitivnosti ili negativnosti ispitanika

Postoji jasna korelacija između rezultata ispitivanja seruma na imunoblotu i ELISA-i - dvostruko pozitivni u ELISA-i s različitim test sustavima, serumi su u 97-98% slučajeva tada HIV-pozitivni u imunoblotiranju. Ako su serumi bili pozitivni na ELISA samo u jednom od dva korištena testna sustava, u imunoblotu su pozitivni samo u 4% slučajeva. U 5% slučajeva, prilikom provođenja potvrdnih studija na osobama s pozitivnim podacima, ELISA-imunoblot može dati "neodređene" rezultate, a među njima, u oko 20% slučajeva, "neodređeni" rezultati uzrokuju antitijela na HIV-1 gag proteine \u200b\u200b(p55, p25, p18 ). Prisutnost antitijela samo na začepljene proteine \u200b\u200bHIV-1 razlog je za dodatno ispitivanje krvnog seruma na HIV-2 infekciju.

Evaluacija rezultata imunoblotinga provodi se strogo u skladu s uputama priloženim ispitnom sustavu. U nedostatku uputa o tumačenju rezultata u uputama, trebali bi se koristiti kriteriji SZO.

Nakon primitka pozitivnih rezultata studija u referentnoj fazi laboratorijske dijagnoze HIV infekcije i negativnog rezultata studije metodom imunološkog blotiranja, 6 mjeseci nakon prvog pregleda provodi se obavezna ponovljena ekspertska dijagnoza.

Ako rezultati imunoblotinga 12 mjeseci nakon ispitivanja prvog uzorka ostanu negativni ili nesigurni, u nedostatku čimbenika rizika, kliničkih simptoma ili drugih čimbenika povezanih s HIV infekcijom, subjekt se uklanja iz dispanzerskog promatranja.

Među serološkim metodama, u slučaju neizvjesnih rezultata, imunoblot se koristi kao stručna dijagnoza. radioimunoprecipitacija (POČIVAO U MIRU). Temelji se na upotrebi proteina virusa obilježenih radioaktivnim jodom, a talozi se otkrivaju pomoću beta brojača. Nedostaci metode uključuju visoku cijenu opreme, potrebu za opremom za te svrhe, posebne prostorije.

Osobe kojima je dijagnosticirana HIV infekcija podvrgavaju se stalnom dinamičkom promatranju uz obvezan laboratorijski pregled svakih 6 mjeseci.

Lančana reakcija polimeraze (PCR) otkriva unaprijed umnožene nukleotidne sekvence specifične za genom određenog patogena. Izolirano umnožavanje gena ili njegovog fragmenta, nazvano amplifikacija, PCR omogućuje provođenje u epruveti pomoću enzima termostabilne DNA polimeraze. U 2-3 sata PCR omogućuje dobivanje milijuna kopija određene regije virusa. U HIV infekciji, iz stanične RNA, uključujući RNA virusa, ako je reproducirana u stanici ili je integrirana u njen genom, dobiva se dovoljna količina provirusne DNA reverznom transkripcijom i hibridizacijom s označenim oligonukleotidnim "sondama" za analizu, koja se otkriva i kvantificira , kao i u odnosu na pripadnost HIV genomu, radioaktivnom ili drugom oznakom sonde, uspostavljajući homologiju DNA i virusno specifičnih aminokiselinskih sekvenci. PCR osjetljivost je otkrivanje virusnih gena u jednoj od pet tisuća stanica.

PCR, uključujući kvantitativni, može se koristiti samo za određivanje virusnog opterećenja plazme kako bi se riješilo pitanje započinjanja liječenja lijekom za pacijenta ili promjene antiretrovirusnih lijekova. PCR se ne može preporučiti za dijagnozu HIV infekcije, jer čak i najsuvremenije metode njegovog iskaza i reagensi omogućuju određivanje virusnog opterećenja ne nižeg od određene razine - 50 kopija / ml. Složenost PCR testiranja i njegova visoka cijena (oko 200 USD) negiraju njegovu široku upotrebu kao metode svakodnevne laboratorijske dijagnoze HIV infekcije. Dakle, PCR ostaje neophodan samo za procjenu virusnog opterećenja plazme u bolesnika s već utvrđenom dijagnozom HIV infekcije kako bi se riješio problem pacijentove terapije.

Faze laboratorijske dijagnoze HIV infekcije shematski su prikazane na sl. 1.

Lik: 1. Faze laboratorijske dijagnoze HIV infekcije

Tijekom infekcije HIV-om postoji razdoblje "mračnog laboratorijskog prozora" kada količina antitijela protiv HIV-a nije dovoljna za osjetljivost testnih sustava. To se razdoblje kreće od jednog tjedna do tri mjeseca od trenutka zaraze HIV-om, ovisno o razini osjetljivosti testnog sustava. S obzirom na ovu pojavu, poteškoće nastaju prilikom ispitivanja darovane krvi osoba koje su u spomenutom razdoblju zaraze HIV-om. Stoga je u većini zemalja svijeta uveden sustav za korištenje krvi tek nakon što se čuva 3-6 mjeseci kako bi se proveo obvezni ponovni pregled HIV infekcije davatelja ovih doza krvi i njezinih komponenata.

Fazu primarnih manifestacija karakterizira aktivnost replikacijskog procesa. Nova viremija i antigenemija uzrokuju stvaranje specifičnih antitijela klase IgM: anti-p24, anti-gp41, anti-gp120. Antigen p24 kod nekih zaraženih može se otkriti u krvi ELISA-om već 2 tjedna nakon infekcije i utvrditi do 8 tjedana. Nadalje, u kliničkom tijeku HIV infekcije dolazi do drugog porasta sadržaja p24 proteina u krvi, koji se događa tijekom formiranja stadija AIDS-a.

Pojava potpune serokonverzije, kada se u perifernoj krvi zabilježi visoka razina specifičnih IgG antitijela na strukturne proteine \u200b\u200bHIV-a gp41, p24, gpl20, uvelike olakšava dijagnozu HIV-infekcije. Većina komercijalnih kompleta dizajnirana je da ukazuje upravo na takva antitijela.

Poteškoće u otkrivanju protutijela u bolesnika s HIV infekcijom mogu nastati tijekom razdoblja masivne viremije i antigenemije, kada se raspoloživa specifična protutijela u krvi troše na vezanje virusnih čestica, a replikativni postupak nadmašuje proizvodnju novih antivirusnih protutijela.

U osoba s prvotno oslabljenim imunološkim sustavom viremija i antigenemija pojavljuju se ranije i ostaju na visokoj razini do ishoda bolesti. Istodobno, takvi bolesnici imaju nizak sadržaj slobodnih antitijela na HIV, iz dva razloga - nedovoljna proizvodnja antitijela B-limfocitima i vezivanje viriona i topivih proteina HIV-a antitijelima, stoga su za određivanje infekcije potrebni testni sustavi s povećanom osjetljivošću ili modifikacije metoda analize. korak oslobađanja antitijela iz imunoloških kompleksa.

Unatoč obilju specifičnih biljega HIV infekcije, najčešće se utvrđuje prisutnost ukupnih antitijela na HIV proteine. Izraz "ukupno" znači prisutnost dvije klase antitijela (IgG i IgM) i širokog spektra antitijela na različite, prije svega strukturne, HIV proteine.

Određivanje CD4 stanica. Glavni klinički i laboratorijski pokazatelj za dijagnosticiranje stadija HIV infekcije, stupanj uništenosti imunološkog sustava u bolesnika u svakodnevnom životu bilo je određivanje sadržaja CD4 + limfocita: smanjenje razine ispod 200 stanica / mm3 glavni je kriterij za dijagnosticiranje AIDS-a. Vjeruje se da sve osobe zaražene HIV-om s brojem CD4 + limfocita od 200 stanica / mm3 i nižim trebaju i antivirusnu terapiju i prevenciju pneumocystis pneumonije. Iako 1/3 zaraženih HIV-om s brojem limfocita C04 + manjim od 200 stanica / mm3 nema kliničke manifestacije, iskustvo je pokazalo da simptome razvijaju u sljedeća 2 mjeseca, pa se svi smatraju pacijentima s AIDS-om.