Sistemi di test immunologico "ds-ifa-hbeAg" e "ds-ifa-anti-hbe. Analisi per la sifilide

Per condurre una valutazione completa dello stato del corpo, viene utilizzato il metodo diagnostico ELISA. Il dosaggio immunoenzimatico è progettato per diagnosticare immunodeficienze infettive, ematologiche, primarie e secondarie.

Cos'è l'analisi ELISA

Molti pazienti sono interessati al metodo ELISA: cos'è, perché lo studio viene condotto. Il test immunoassorbente legato all'enzima ha iniziato ad essere utilizzato relativamente di recente. Inizialmente, le strutture antigeniche sono state studiate con il suo aiuto ed è stato eseguito solo per scopi scientifici. Quindi gli scienziati sono giunti alla conclusione che con l'aiuto di enzimi è possibile identificare anticorpi specifici che si presentano in risposta alla malattia in corso.

Inizialmente, questa tecnica era utilizzata solo da istituzioni mediche di profilo ristretto, principalmente presso le stazioni di trasfusione di sangue. Il metodo ELISA è di particolare importanza per rilevare l'infezione da HIV.

Oggi questo metodo ha una vasta gamma di applicazioni. I laboratori moderni lo usano per diagnosticare:

• tumori;
• disturbi ormonali;
• infezioni;
• processi infettivi cronici o precedentemente trasferiti;
• elminti.

Se si verifica un processo infettivo nel corpo, questo tipo di diagnosi è considerato il più ottimale per determinare il tipo di malattia.

L'essenza del metodo e delle sue tipologie

Metodo ELISA: cos'è, qual è l'essenza di questo tipo di ricerca? Questa e molte altre domande interessano i pazienti. La base di questo metodo diagnostico è il legame delle cellule immunitarie del corpo agli antigeni degli agenti infettivi. Il complesso risultante viene determinato utilizzando un enzima speciale.

Per comprendere il principio del metodo ELISA, è necessario sapere come procede la reazione antigene-anticorpo. L'antigene è una molecola derivata da proteine \u200b\u200bestranea al corpo, che penetra insieme all'infezione. Anche le particelle del sangue di qualcun altro che non corrispondono al gruppo sono considerate antigeni. Nell'organismo provocano una risposta immunitaria volta a proteggere da sostanze estranee. Pertanto, il corpo umano produce anticorpi - immunoglobuline che possono legarsi agli antigeni, formando un complesso immunitario. Tali composti sono molto più facili da riconoscere e distruggere dalle cellule immunitarie.

La reazione per la presenza di tali immunocomplessi viene effettuata in condizioni di laboratorio, utilizzando composti già pronti per determinare se ce ne sono di simili nel sangue.

L'essenza del metodo ELISA è abbastanza semplice, tuttavia, poiché viene eseguito un esame del sangue per rilevare molte infezioni e malattie, ce ne sono molte delle sue varietà. Ognuno differisce nello schema di esecuzione e nell'area di applicazione. Può essere ELISA diretto o indiretto. Il metodo diretto implica l'utilizzo di anticorpi immobilizzati che reagiscono con gli antigeni. Il vantaggio principale di questo metodo è che tutti i processi possono essere automatizzati, il che significa che la diagnostica richiede poco tempo.

Il metodo indiretto presume che vengano utilizzati anticorpi secondari. E sulla fase solida, l'antigene è immobilizzato. L'analisi consente di determinare gli anticorpi contro vari antigeni. Questo aiuta a ottenere un risultato più accurato, ma il metodo è complesso.

Benefici della ricerca

Il metodo ELISA presenta molti vantaggi rispetto ad altri metodi diagnostici. I principali includono quanto segue:

• alta sensibilità;
• stabilità di conservazione degli ingredienti;
• velocità di diagnostica;
• è possibile utilizzare una piccola quantità di materiale di prova;
• c'è la possibilità di automatizzare tutti i processi;
• l'infezione può essere rilevata nelle prime fasi.

Questo metodo diagnostico è universale, quindi è adatto per condurre un esame di massa. Con l'aiuto dell'analisi è possibile tracciare le dinamiche del decorso del processo infettivo.

Indicazioni per l'analisi e il campionamento

Uno studio che utilizza il metodo ELISA può essere prescritto per il sospetto di molte malattie:

Il sangue venoso viene esaminato per la presenza di anticorpi. Prima dell'analisi, da essa vengono isolati elementi che possono complicare lo studio. Possono essere raccolti anche altri fluidi biologici.

Per ottenere le informazioni più accurate, il prelievo di sangue viene eseguito a stomaco vuoto. Se la procedura è stata prescritta per determinare un'infezione latente, alcune settimane prima dell'analisi, è necessario interrompere l'assunzione di farmaci antibatterici e antivirali. A seconda dell'attrezzatura del laboratorio in cui è stato prelevato il materiale, il risultato può essere ottenuto entro 24 ore. In casi urgenti, questo tempo è ridotto a diverse ore.

Analisi per la sifilide

L'uso del metodo ELISA aiuta a determinare la presenza di molte infezioni nel corpo, in particolare la sifilide. Per lo studio, il sangue viene prelevato da una vena a stomaco vuoto. Quindi, viene effettuato uno studio per aiutare a determinare non solo la presenza della malattia nel corpo, ma anche il momento esatto della sua insorgenza, poiché durante il decorso della malattia alcuni anticorpi vengono sostituiti da altri in un ordine rigorosamente definito.

Nella fase acuta, che indica un decorso prolungato della malattia, o con un'esacerbazione di un'infezione cronica, si troveranno nel sangue immunoglobuline di tipo M. La presenza di immunoglobuline di tipo A indica che l'infezione è presente nell'organismo da più di 4 settimane. Le immunoglobuline del gruppo G indicano l'altezza della malattia o la terapia precedente.

In base al grado di colore dei fori, viene valutata l'intensità del decorso del processo infettivo, poiché la sua saturazione dipende dal numero di immunocomplessi formati.

Test HIV

Il metodo ELISA viene utilizzato anche per analizzare in questo caso, ha alcune caratteristiche che sono associate al decorso e alla progressione della malattia. Questo metodo di ricerca è considerato il più accettabile per la determinazione, ma dovrebbe essere eseguito non prima di un mese dopo l'esposizione a fattori di rischio. Ciò è dovuto alla presenza di un periodo di incubazione che va dai 45 giorni ai 6 mesi. Ecco perché l'analisi deve essere ripetuta sei mesi dopo.

• ascariasis;
• giardiasi;
• toxoplasmosi, ecc.

Nonostante tutti i vantaggi, ci sono anche degli svantaggi del metodo ELISA. Lo svantaggio principale è che quando si esegue uno studio, il medico deve avere un'ipotesi sulla malattia in anticipo.

Se non è possibile trovare accidentalmente l'agente patogeno e determinarne le proprietà del dosaggio immunologico. Il test indica solo la presenza di anticorpi nel sangue del paziente. Inoltre, questa analisi è piuttosto costosa.

Decodifica dell'analisi

Il risultato di un ELISA di alta qualità sarà la presenza di anticorpi o la loro assenza nel sangue. Se viene eseguita l'analisi quantitativa, la concentrazione di anticorpi può essere espressa in un valore numerico o in un certo numero di segni +.

Inoltre, indicatori come:

L'indicatore IgM indica il corso di un processo infettivo acuto nel corpo. La sua completa assenza può indicare l'assenza dell'agente eziologico della malattia o il suo passaggio allo stadio cronico.

Una lettura IgA con un test IgM negativo indica un'infezione cronica o latente. La presenza simultanea di IgM e IgA indica che la malattia è in una fase acuta. La presenza di IgG indica il passaggio della malattia allo stadio cronico o il completo recupero e lo sviluppo dell'immunità.

Ora ci sono test ELISA speciali che puoi eseguire da solo.

Titolari del brevetto RU 2515051:

L'invenzione si riferisce al campo della biotecnologia e della medicina. Sistema di test immunologico per determinare il tempo probabile dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), incluso l'HIV-1 gruppo O, nel siero umano (plasma). Il sistema di test include un immunosorbente basato su antigeni del virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1 e HIV-1 gruppo O env), soluzione di diluizione del campione (PPC) e reagenti di rilevamento (coniugati, cromogeno / substrato). L'invenzione si riferisce anche a un metodo per determinare la probabile tempistica dell'infezione con il virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), incluso l'HIV-1 gruppo O, nel siero umano (plasma) esaminando il siero del sangue del paziente utilizzando il saggio di immunoassorbimento enzimatico descritto. L'invenzione rende possibile determinare rapidamente e facilmente la probabile tempistica dell'infezione da HIV. 2 n.p. cristalli f, 4 tab., 2 ex.

L'INVENZIONE si riferisce al campo della biotecnologia e della medicina. E può essere utilizzato per determinare la probabile tempistica dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), compreso l'HIV-1 gruppo O, nel siero umano (plasma).

La diffusione dell'infezione da HIV rimane un vero problema nel mondo moderno. Poiché una diagnostica tempestiva e di alta qualità è un modo reale per ridurre la diffusione dell'infezione da HIV, lo sviluppo di un sistema di test efficace in grado di determinare il probabile periodo di infezione è un compito importante della società moderna.

Un'analisi della tecnica nota ha mostrato l'esistenza di numerosi metodi e test proposti da diversi autori per determinare gli stadi dell'infezione da HIV utilizzando vari metodi. Noto, ad esempio, un test genetico molecolare basato sulla determinazione della carica virale del sangue periferico mediante il metodo della reazione a catena della polimerasi (PCR) (Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. e altri. Timazid in combinazione con Khivid e Invirase nella terapia complessa dei pazienti con infezione da HIV - Epidemiologia e malattie infettive - 1998. - No. 5 - p.51-52). Un metodo noto per valutare le fasi dell'infezione da HIV (Clinical Immunology and Allergology sotto la direzione di G. Lawlor Jr. - M.: Practice, 2000. - S. 585-587), che consiste nel determinare il livello di β 2 -microglobulina sierica. Viene descritto un metodo per diagnosticare gli stadi dell'infezione da HIV (VV Pokrovsky et al. "Diagnosi clinica e trattamento dell'infezione da HIV. - M.: GOU VUNMC RF, 2001. - P.11), che consiste nel determinare il numero assoluto di linfociti CD4 + sangue periferico. Esiste anche un metodo noto per diagnosticare le fasi dell'infezione da HIV, basato sul fatto che quando si esamina il siero del sangue del paziente con il metodo ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), la densità ottica (OD) del campione di siero sanguigno iniziale, che riflette il livello di anticorpi specifici per l'HIV, e la DO del campione di siero iniziale incubato per 10 minuti con 100 μl di soluzione di isotiocianato di sodio 3,5 M. Con una diminuzione dell'OP del 40% o meno, viene diagnosticato lo stadio A - linfoadenopatia generalizzata, con una diminuzione dell'OP nell'intervallo del 40-60% - stadio B - angiomatosi bacillare, candidosi orofaringea, ecc., E con una diminuzione dell'OP del 60% o più - stadio C - AIDS (RU 2251701).

Pertanto, l'analisi della tecnica anteriore ha mostrato che nessuna delle fonti esistenti può servire come l'analogo più vicino all'invenzione rivendicata, poiché tutti questi documenti si riferiscono a metodi e test che determinano lo stadio dell'infezione da HIV e nessuna delle fonti descritte contiene soluzioni volte a determinare il probabile intervallo di tempo dell'infezione. L'invenzione rivendicata riguarda un sistema di test che determina il probabile periodo di infezione da HIV. L'analisi della tecnica nota non ha rivelato soluzioni simili volte a risolvere il problema.

La presente invenzione rivendica una serie di reagenti "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" per determinare il tempo probabile di infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), incluso HIV-1 gruppo O, nel siero umano (plasma). Il test è inteso per test aggiuntivi su campioni positivi all'HIV con un risultato positivo confermato in una macchia immunitaria. È possibile studiare campioni con esito indeterminato o negativo dello studio in un immunocompressore, in cui sia confermata la presenza dell'HIV RNA e / o dell'antigene HIV-1 p24.

La presente invenzione dichiara inoltre un metodo per utilizzare questo set di reagenti "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" per determinare la probabile infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), incluso HIV-1 gruppo O, nel siero (plasma ) sangue umano.

Il risultato tecnico dell'invenzione rivendicata è determinare la probabile tempistica dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), compreso l'HIV-1 gruppo O, la semplicità del test, che consente di utilizzare l'invenzione rivendicata per la sorveglianza epidemiologica delle dinamiche di diffusione dell'infezione da HIV, le dinamiche identificazione di sieroconvertitori in una determinata popolazione (età-sesso, gruppi sociali della popolazione), nonché durante le indagini epidemiologiche su casi e focolai di infezione da HIV.

L'essenza della soluzione tecnica proposta sta nel fatto che la determinazione del probabile periodo di infezione da HIV-1 viene effettuata utilizzando un sistema di test, che include un immunosorbente basato su antigeni del virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1 env e HIV-1 gruppo O), soluzione di diluizione campioni (PPC) e reagenti di rilevamento (coniugati, cromogeno / substrato). I campioni di prova vengono testati nativi e diluiti nella soluzione di diluizione del campione. In base ai risultati del test, i campioni sono suddivisi in "early" e "late". Campioni "precoci" - il periodo probabile di infezione fino a 9 mesi dal momento dell'infezione, campioni "tardivi" - il periodo probabile di infezione di 9 mesi o più dal momento dell'infezione. L'appartenenza di un campione a "early" o "late" è valutata dalla percentuale di calo della densità ottica (DO) del campione diluito rispetto a quello non diluito.

Questi esempi servono per illustrare forme di realizzazione specifiche dell'invenzione e non intendono limitare i diritti del richiedente. L'ambito dei diritti del richiedente include tutte le possibili varianti dell'invenzione, comprese quelle non elencate in questa sezione.

Come immunosorbente, vengono utilizzati antigeni ricombinanti contenenti le regioni immunodominanti di HIV-1 e HIV-1 gruppo O env. Conjugate-1 è una miscela di antigeni ricombinanti HIV-1 gp41 e HIV-1 gp41 gruppo O coniugati con biotina. Nella prima fase, i campioni di prova, i campioni di controllo e le loro diluizioni 1: 101, nonché il PPC vengono incubati con coniugato-1. Gli anticorpi specifici presenti nei campioni testati e positivi al controllo si legano agli antigeni adsorbiti nei pozzetti della micropiastra e agli antigeni coniugati alla biotina e formano complessi stabili. I campioni in eccesso e il coniugato-1 vengono rimossi mediante lavaggio. Nella fase successiva, nei pozzetti viene aggiunta streptavidina coniugata con perossidasi di rafano (coniugato-2). Il coniugato 2 si lega al complesso antigene-anticorpo-antigene presente nel pozzetto. Il coniugato-2 in eccesso viene rimosso mediante lavaggio e quindi il cromogeno / substrato viene aggiunto ai pozzetti. Nei pozzetti con il coniugato legato-2 si sviluppa un colore blu, che diventa giallo quando viene aggiunta la soluzione di arresto. I risultati vengono registrati utilizzando uno spettrofotometro.

Come immunosorbente, vengono utilizzati antigeni ricombinanti contenenti le regioni immunodominanti di HIV-1 e HIV-1 gruppo O env. Viene utilizzato un coniugato: una miscela di antigeni ricombinanti HIV-1 gp41 e HIV-1 gp41 gruppo O coniugati con perossidasi di rafano. Durante l'analisi, i campioni, i controlli e le loro diluizioni, nonché la PPC vengono incubati con il coniugato nei pozzetti rivestiti con l'antigene della piastra. Il complesso stabile risultante dopo la rimozione del campione in eccesso e del coniugato si manifesta con l'aggiunta di un cromogeno / substrato. In questo caso, si sviluppa un colore blu, che diventa giallo quando viene aggiunta la soluzione di arresto. I risultati vengono registrati utilizzando uno spettrofotometro.

L'appartenenza dei campioni studiati a "precoce" o "in ritardo" è stimata dal calo% di OD durante la diluizione del campione, che è calcolato dalla formula:

% D e n i e O P \u003d 100% - INFORMAZIONI SU P rov e d Campione - O P s r. R R S O P intero n circa g o campione × 100%,

dove Opsr. RRS - il valore medio del RRP (calcolato da diversi valori del RRP RR).

I campioni studiati dovrebbero essere considerati "precoci": se la caduta di PO è\u003e 40%.

I campioni esaminati sono da considerarsi "in ritardo": se il calo di OD è ≤40%.

Un esempio di calcolo della% di calo in OD durante la diluizione di un campione è mostrato nella Tabella 1.

È conveniente utilizzare Excel per la contabilità e l'elaborazione dei risultati. L'utilizzo di questa applicazione ti consentirà di eseguire calcoli automaticamente. Il programma per l'elaborazione dei risultati dei test si trova sul disco allegato al kit, oppure è disponibile sul sito Web dell'azienda.

Nello sviluppo e nella valutazione del test, sono stati utilizzati campioni di pannelli di sieroconversione (BBI, Inc., Zeptometrix, USA) e campioni di siero di sangue (plasma) positivo all'HIV con date probabili di infezione stabilite. La probabilità di determinare correttamente la durata dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), compreso il gruppo O dell'HIV-1, stabilita dai pannelli di sieroconversione, è del 100% (i dati sono presentati nella Tabella 2), sulla base di campioni di siero di persone con un periodo di infezione stabilito condizionatamente (n \u003d 129) è del 94% (tabelle 3, 4; i dati sono forniti in parte).

Il test "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" ha valutato la possibilità di esaminare campioni di siero sanguigno (plasma) contenenti anticorpi anti-HIV-1 di vari sottotipi, compreso l'HIV-1 gruppo O: pannello di riferimento QCS 42-28-327 -03R (GISK) (sottotipi A, B, C) (ad eccezione del campione n. 24, contenente anticorpi anti-HIV-2), 1 ° pannello internazionale di riferimento anti-HIV (codice NIBSC: 02/210) (sottotipi A, B, C, E) (ad eccezione del campione n. 5, contenente anticorpi anti-HIV-2), campioni di siero sanguigno (plasma) contenenti anticorpi anti-HIV-1 gruppo O (n. 1342, K00175, K00259; BioMex). I risultati indicano la possibilità di esaminare campioni di siero di sangue (plasma) contenenti anticorpi anti-HIV-1 appartenenti a vari sottotipi, inclusi quelli per HIV-1 gruppo O, nel test "DS-ELISA-HIV-AT-SROK".

La specificità del kit di reagenti "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" è stata determinata esaminando campioni di siero di sangue di donatori (n \u003d 352), che hanno mostrato un risultato negativo in ELISA. La specificità era del 100%. Inoltre, sono stati testati 255 campioni di siero di sangue (negativi all'ELISA):

■ 167 campioni di siero di sangue da donne in gravidanza e pazienti con malattie infettive;

■ 128 campioni di siero di sangue da pazienti con varie malattie non trasmissibili.

La specificità era del 100%.

I dati ottenuti mostrano l'elevata efficienza del sistema di test sviluppato "DS-ELISA-HIV-AT-DROK" nel determinare il tempo probabile di infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), incluso HIV-1 gruppo O, nel siero (plasma) sangue umano.

1. Un sistema immunosorbente legato all'enzima per determinare il momento probabile dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), incluso HIV-1 gruppo O, nel siero del sangue umano (plasma), caratterizzato dal fatto che include un immunosorbente basato su antigeni virali immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1 e HIV-1 gruppo O env), soluzione di diluizione del campione (PPC) e reagenti di rilevamento, che sono coniugati, cromogeno / substrato.

2. Un metodo per determinare la probabile tempistica dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1), compreso il gruppo O dell'HIV-1, nel siero (plasma) del sangue umano, basato su un diverso contenuto di anticorpi a seconda della durata dell'infezione, inclusa la divisione del campione di prova in due parti e diluizione di una di esse; studio di entrambe le parti (native e diluite) del campione di siero sanguigno del paziente utilizzando il sistema di dosaggio immunoenzimatico descritto nella rivendicazione 1; determinazione della densità ottica (OD) di campioni nativi e diluiti e PPC; calcolo del valore medio di OD RRS; calcolo della percentuale di goccia di OD del campione diluito rispetto a quello non diluito secondo la formula
% D e n i e O P \u003d 100% - INFORMAZIONI SU P rov e d. Campione - O P s r. R R S O P intero n circa g o campione × 100%,
allo stesso tempo, il periodo probabile di infezione è considerato "precoce" se la diminuzione dei PO è\u003e 40%, e "tardiva" - se la caduta dei PO è ≤40%.

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L'invenzione si riferisce al campo della biotecnologia e della medicina. Sistema di test immunologico per determinare il tempo probabile dell'infezione da virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1, incluso l'HIV-1 gruppo O, nel siero umano. Il sistema di test include un immunosorbente a base di antigeni del virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1, una soluzione per diluire i campioni e rilevare i reagenti. L'invenzione si riferisce anche a un metodo per determinare la probabile tempistica dell'infezione con il virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1, incluso il gruppo O dell'HIV-1, nel siero umano esaminando il siero sanguigno del paziente utilizzando il saggio di immunosorbente legato all'enzima descritto. L'invenzione rende possibile determinare rapidamente e facilmente la probabile tempistica dell'infezione da HIV. 2 n.p. cristalli f, 4 tab., 2 ex.

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A.P. Rbyadin, T.I. ULANOVA
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Nizhny Novgorod
SISTEMI DI TEST Immunoenzimatici "DS-ELISA-HBeAg" e "DS-ELISA-anti-HBe" PER DIAGNOSTICA SPECIFICA E PREVISIONE DEI RISULTATI DELL'EPATITE B ACUTA E CRONICA
L'epatite B è una malattia infettiva virale caratterizzata da grave

danno epatico infiammatorio. Circa l'1% dei decessi si osserva in

periodo acuto della malattia, nel 4-10% dei casi si verifica una trasformazione in cronica

processo con la possibile formazione di successiva cirrosi epatica e primaria

epatocarcinoma.

Nonostante la tendenza al ribasso nell'incidenza dell'epatite B acuta, continua a formarsi un gruppo di pazienti epidemiologicamente pericoloso a cui è stata diagnosticata per la prima volta un'epatite virale cronica, nonché un gruppo di portatori del patogeno. Una prognosi sfavorevole rimane associata ad un'elevata incidenza di epatite B tra la popolazione in età riproduttiva, così come tra gli adolescenti.

Pertanto, ora sono particolarmente rilevanti le questioni del trattamento, della prevenzione e della diagnosi dell'epatite B. Al momento, i metodi di dosaggio immunoenzimatico sono ampiamente utilizzati per rilevare i marker di questa infezione. I marker sierologici più importanti per l'HBV sono l'antigene e (HBeAg) e gli anticorpi contro l'antigene e (anti-HBe). L'HBeAg è associato a infezione del sangue alta, che indica una replicazione attiva del virus dell'epatite B (HBV). È stato stabilito che titoli elevati di HBeAg corrispondono a un'elevata attività della DNA polimerasi e sono sempre combinati con il rilevamento di particelle Dane complete. Quando il siero contenente HBeAg entra nel sangue di una persona sana, il rischio di infezione è di molti ordini di grandezza superiore rispetto all'insorgenza della sieroconversione.

Nell'epatite B acuta, l'HBeAg si trova nel sangue nelle prime fasi del processo infettivo già alle prime manifestazioni cliniche della malattia, in ritardo di una settimana rispetto alla comparsa dell'HBsAg. L'epatite acuta ciclica B (HBV) è caratterizzata dalla circolazione a breve termine di HBeAg. Presto, a 2-3 settimane del periodo itterico, appare l'anti-HBe, che consente di prevedere un esito favorevole della malattia.

Anti-HBe circola nel sangue per 2-5 anni, meno spesso per diversi mesi.

L'inizio della sieroconversione HBeAg-anti-HBe segna una drastica diminuzione dell'attività

processo infettivo. La rilevazione di HBeAg nel sangue dei pazienti dopo 2 mesi dalla malattia indica la cronicità del processo patologico. In questo caso, l'anti-HBe può formarsi molti anni dopo la comparsa degli anticorpi contro l'HBcAg o potrebbe non essere rilevato affatto.

L'emergenza di anti-HBe può avere un valore prognostico sfavorevole in

periodo acuto di HBV in forme gravi, che corrisponde a una mutazione nella zona pre-core con

formazione del ceppo HBV "e-".

La proposta questo lavoro è stato lo sviluppo di altamente sensibili e specifici

sistemi di dosaggio immunoassorbente legato all'enzima per la rilevazione di HBeAg e anti-HBe e la valutazione delle loro caratteristiche principali.

Materiali e metodi.

1. Sistema di test immunologico "DS-ELISA-HBeAg". Il test corrente inizia

sono anticorpi policlonali di capra contro HBeAg ricombinante, prodotti da NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod, assorbiti sulla fase solida, e un coniugato, che è anticorpi policlonali di capra contro HBeAg ricombinante, marcato con perossidasi di rafano, prodotto da NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod. Lo schema di analisi è un "sandwich" a una fase, il tempo di reazione totale è di 1,5 ore. Il campione di siero viene analizzato non diluito.

2. Sistema di test immunologico "DS-ELISA-anti-HBe". Il test si basa su

hBeAg ricombinante (AHBV 102), prodotto da NPO Diagnostic Systems,

Nizhny Novgorod, assorbito sulla fase solida e coniugato anti-IgG con perossidasi di rafano, prodotto da Sorbent Service, Mosca. La reazione avviene in due fasi. Il siero in esame a una diluizione di 1/10 viene aggiunto all'antigene immobilizzato e, dopo l'incubazione e la rimozione dei componenti non legati, gli immunocomplessi specifici vengono identificati utilizzando anticorpi monoclonali murini contro IgG umane marcate con perossidasi di rafano.

3. Per valutare i sistemi di test sviluppati, sono stati utilizzati 2178 campioni di siero

sangue. Di questi, 480 campioni di siero da donatori sani. 1680 campioni rappresentano

sono campioni di siero di sangue contenenti vari marcatori del virus dell'epatite B.

Diciotto campioni sono stati ottenuti in dinamica da pazienti con diagnosi clinica di epatite virale acuta B. Tutti i campioni sono stati preliminarmente testati per la presenza di HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc utilizzando sistemi di test prodotti da NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod: ELISA-HBsAg / m, DS-ELISA-HBeAg, DS-ELISA-anti-HBe "," ELISA-anti-HBs ".

4. La valutazione comparativa dei sistemi di test sviluppati è stata effettuata utilizzando

farmaco commerciale "Monolisa HBe", prodotto da BIO-RAD, Francia;

Risultati e discussione.NPO "Diagnostic Systems" ha sviluppato 2 nuovi kit diagnostici: "DS-ELISA-HBeAg" e "DS-ELISA-anti-HBe". Il sistema di test "DS-ELISA-HBeAg" è progettato per rilevare l'antigene e del virus dell'epatite B nel siero (plasma) del sangue umano mediante il test immunoassorbente legato all'enzima e può essere utilizzato per la diagnostica specifica, determinando l'attività del processo infettivo, prevedendo la gravità e l'esito dell'epatite B.

Il sistema di test "DS-ELISA-anti-HBe" è progettato per rilevare gli anticorpi IgG contro l'antigene e del virus dell'epatite B nel siero (plasma) del sangue umano e può essere

utilizzato per prevedere il decorso del processo infettivo e controllare la terapia per l'epatite B.

Per studiare la specificità dei nuovi test, è stata valutata la distribuzione

densità ottica (OD) di campioni di siero di sangue, contenenti e non contenenti

HBeAg o anti-HBe. Abbiamo utilizzato campioni di siero di sangue da donatori sani e campioni di siero di sangue raccolti per vari marcatori del virus dell'epatite B su

stazioni di trasfusione di sangue. I risultati della ricerca hanno mostrato una significativa separazione delle due popolazioni. I valori OD dei campioni di siero senza HBeAg variavano da 0,011 a 0,111 e il picco principale dei campioni di siero contenenti HBeAg variava da 2,186 a 3,186 (Figura 1a).

Fig. 1a. Distribuzione di OD dei campioni di siero con e senzaHBeAg nel sistema di test "DS-IFA-HBeAg»
Il picco corrispondente al gruppo di sieri con un OD basso (0,3-0,6) è probabilmente costituito da campioni di siero prelevati nelle prime fasi del processo infettivo.

Già nel periodo di incubazione nei pazienti, HBsAg e HBeAg vengono regolarmente registrati nel sangue, il che conferma il loro potenziale pericolo epidemiologico.

Intervallo di densità ottica dei campioni di siero che non contengono anti-HBe

era compreso tra 0,002 e 0,122 e il picco principale dell'OD dei campioni di siero contenenti anti-HBe era compreso tra 2,431 e 3,231 (Figura 1b).

Figura: 1b. Distribuzione di OD di campioni di siero con e senza anti-HEssere, nel sistema di test "DS-ELISA-anti-HBeAg»
Sono state studiate le caratteristiche della distribuzione di OD dei campioni positivi anti-HBe.

sieri contenenti ( n\u003d 78) e non contenente HBsAg ( n=56).


Figura: 2a. HBe-campioni di siero positivi contenentiHBsAg nel sistema di test "DS-ELISA-anti-HBe».

Fig. 2b. Caratteristiche della distribuzione di OP antiHBe- campioni di siero positivi che non contengono HBsAg nel sistema di test "DS-ELISA-anti-HBe».
Le densità ottiche dei campioni di siero anti-HBe positivi all'87% senza HBsAg variavano da 0,41 a 0,81 (Figura 2b). Tuttavia, solo il 14% dei campioni di siero anti-HBe-positivi contenenti HBsAg aveva OD in questo intervallo (Figura 2a). È noto che nella fase di convalescenza tardiva con reattività negativa all'HBsAg, i titoli anticorpali all'HBeAg diminuiscono gradualmente (Figura 2b). Pertanto, è possibile che la concentrazione predominante di campioni anti-HBe positivi corrispondesse a OD inferiore a 0,8.

I dati ottenuti indicano l'affidabilità della separazione di positivi e

campioni di siero negativi indipendentemente dallo stadio della malattia. Lo studio della sensibilità e specificità dei sistemi di test "DS-ELISA-HBeAg" e "DS-ELISA-antiHBe" è stato effettuato rispetto al test "Monolisa HBe" ("BIORAD", Francia) (tabella 1).

Tabella 1
Caratteristiche comparative di sensibilità e specificità

sistemi di test DS-ELISA-HBeAg e DS-ELISA-antiHB

I dati mostrati nella Tabella 1 mostrano il 100% di concordanza dei risultati.

È noto che l'indicazione combinata di HBeAg e anti-HBe, in particolare la loro valutazione quantitativa, ha un valore prognostico aggiuntivo. Il rapido aumento del titolo anti-HBe caratterizza una risposta immunitaria umorale attiva ed elimina praticamente la minaccia di cronicità. Abbiamo analizzato la variazione del contenuto di HBeAg / anti-HBe nei campioni di siero sanguigno di pazienti con diagnosi clinica di epatite virale acuta B (Tabella 2).

Tavolo 2
Dinamica della sieroconversione HBeAg / anti-HBe in pazienti con HBV

* dal ricovero in ospedale
Tutti i campioni di siero sono stati testati per i marcatori sierologici

OGB: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Il periodo di osservazione variava da 13 a 38 giorni. Nei pazienti n. 1, n. 2 e n. 6, gli anti-HBe sono stati trovati già sullo sfondo di una diminuzione del titolo HBeAg. Nei pazienti n. 3 e n. 4 l'anti-HBe è apparso dopo che l'HBeAg è scomparso dal siero del sangue rispettivamente nei giorni 21 e 8. L'analisi del rilevamento dell'HBeAg nel siero sanguigno del paziente n. 5 al momento del ricovero in ospedale ha mostrato un risultato negativo. Allo stesso tempo, il primo giorno dell'esame è stata registrata una conversione ad anti-HBe.

Tutti i soggetti hanno mostrato una tendenza all'aumento del titolo di anticorpi anti-HBeAg in

siero, che consente di prevedere dinamiche favorevoli della clinica

manifestazioni di OGV e pronta guarigione.

Lo studio di nuovi sistemi di test ha dimostrato la loro elevata affidabilità diagnostica. I risultati del confronto tra DS-ELISA-HBeAg "e" DS-ELISA-antiHBe "hanno mostrato una concordanza del 100% con il test" Monolisa HBe ".

Nello studio di campioni di siero di pazienti con epatite B in dinamica, test

confermato alta sensibilità e specificità.

Il breve tempo di incubazione dei campioni di prova e del coniugato (1 h) consente di determinare la tattica corretta per condurre misure terapeutiche nel più breve tempo possibile. I sistemi di test sviluppati sono facili da configurare ed economici (sono necessari 50 µl di siero per la determinazione dell'HBeAg e 10 µl di siero per la determinazione dell'anti-HBe). Le caratteristiche di alta qualità dei test consentono di utilizzarli con successo nella previsione del decorso del processo infettivo e nel monitoraggio della terapia per l'epatite B.
LETTERATURA

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Pubblicato: J. "Diagnostica clinica di laboratorio" - 2005.-№6-С-34-37