Il valore dei gruppi sanguigni secondo il sistema AVO. Sistemi sanguigni antigenici

13.08.2020

Analisi degli anticorpi con il sistema ABO - uno studio clinico generale finalizzato alla rilevazione delle alfa o beta isoemoagglutinine nel sangue - anticorpi IgG naturali contro gli antigeni mancanti A o B. Vengono determinati in caso di incompatibilità tra la madre e il feto per gli antigeni del sistema ABO. La rilevazione di anticorpi antigruppo nel sangue di una donna incinta è necessaria per la diagnosi del conflitto intergruppo e l'implementazione tempestiva di misure terapeutiche al fine di prevenire aborto spontaneo, parto prematuro, malattia emolitica del feto (neonato). Il sangue viene prelevato da una vena. Metodo di ricerca - reazione di agglutinazione. Normalmente (con una bassa probabilità di conflitto intergruppo), il risultato è negativo. I risultati dell'analisi sono pronti in un giorno lavorativo.

Gli anticorpi secondo il sistema ABO o gli anticorpi antigruppo sono immunoglobuline, che vengono prodotte quando nel sangue appare un antigene incompatibile in una relazione di gruppo. Il gruppo sanguigno dipende dalle proteine \u200b\u200bspeciali presenti sul lato esterno della membrana eritrocitaria - agglutinogeni. Nella pratica medica vengono determinati gli agglutinogeni A, B e D. Nelle persone con gruppo sanguigno I, eritrociti senza proteine \u200b\u200bA e B, con gruppo II - con proteine \u200b\u200bdi tipo A, con gruppo III - con proteine \u200b\u200bdi tipo B, con gruppo IV - con proteine \u200b\u200bdi tipo A e B. La presenza o l'assenza dell'agglutinogeno D determina un fattore Rh positivo o negativo. Gli anticorpi anti-gruppo vengono prodotti dall'organismo quando entrano nel flusso sanguigno globuli rossi con agglutinogeni A o B. La reazione di questi anticorpi porta alla distruzione di globuli rossi estranei.

La produzione di anticorpi secondo il sistema ABO è possibile con le trasfusioni di sangue, quando il sangue del feto e della madre viene miscelato. Teoricamente, l'incompatibilità di gruppo del sangue è determinata nei seguenti casi: se il ricevente (madre) ha il gruppo sanguigno I o III e il donatore (feto) - II; se il ricevente (madre) ha I o II gruppo sanguigno e il donatore (feto) ha III; se il ricevente (madre) ha il gruppo sanguigno I, II o III e il donatore (feto) ha IV. In pratica, la produzione di anticorpi antigruppo è più spesso osservata nelle donne con gruppo sanguigno I, poiché non contiene agglutinogeni A e B e, allo stesso tempo, è il più comune. L'immunoconferenza durante la gravidanza può portare a eritroblastosi del neonato, con trasfusioni di sangue - a emolisi intravascolare degli eritrociti. A rischio sono i riceventi dopo diverse trasfusioni, così come le donne in gravidanza che hanno subito trasfusioni di sangue, interruzioni artificiali e naturali, che hanno figli con malattia emolitica.

Per un esame del sangue per gli anticorpi utilizzando il sistema ABO, il sangue viene prelevato da una vena. Il metodo di ricerca più comune è la reazione di agglutinazione utilizzando un gel diffuso. I risultati vengono utilizzati in ostetricia e ginecologia per la pianificazione e il monitoraggio della gravidanza, nonché in chirurgia e medicina rianimatoria durante le trasfusioni di sangue.

Indicazioni

Un esame del sangue per gli anticorpi secondo il sistema ABO è indicato per le donne durante la gravidanza se c'è la probabilità di sviluppare un conflitto di gruppo immunologico. Quando si determina il rischio, viene presa in considerazione la combinazione dei gruppi sanguigni dei genitori. La presenza di anticorpi nel sangue è più spesso determinata nelle donne in gravidanza del gruppo I, se II, III o IV sono stati trasmessi dal padre al bambino. Inoltre, anche le combinazioni di II materna + III o IV paterna, III materna + II o IV paterna sono probabilisticamente contrastanti. Quando si prescrive un'analisi, vengono presi in considerazione anche altri fattori di rischio: alterata permeabilità placentare, trauma addominale, procedure diagnostiche invasive (ad esempio, amniocentesi). In tutti questi casi, è possibile che gli eritrociti fetali entrino nel sangue della madre, seguiti dalla produzione di anticorpi antigruppo. È impossibile determinare clinicamente la presenza di un conflitto immunologico di questo tipo: la donna non avverte alcun cambiamento. Ma se non si monitora il titolo anticorpale, esiste il rischio di sviluppare una malattia emolitica nel bambino, che si manifesta con edema, ingiallimento, anemia, ingrossamento della milza e del fegato e, nei casi più gravi, ritardi nello sviluppo.

Un'altra indicazione per testare il sangue per gli anticorpi secondo il sistema ABO sono le complicanze dopo la trasfusione di sangue. In un conflitto di gruppo, si sviluppa spesso un'emolisi intravascolare acuta, una reazione alla distruzione dei globuli rossi nel sangue iniettato. Si manifesta come una sensazione di bruciore nel sito di infusione, febbre, brividi, dolore alla schiena e al tronco e attacchi di panico. Durante il monitoraggio della gravidanza, la decisione di condurre un'analisi viene presa dal medico, tenendo conto della totalità dei fattori di rischio per lo sviluppo del conflitto di gruppo. Un esame del sangue per gli anticorpi che utilizza il sistema ABO non è un test di screening, a differenza, ad esempio, di un test per gli anticorpi anti-eritrociti. Ciò è dovuto al fatto che un conflitto immunologico di questo tipo si sviluppa raramente e la malattia emolitica procede in una forma lieve e si manifesta principalmente con l'ittero dei neonati

Preparazione per analisi e campionamento del materiale

Il materiale per il test degli anticorpi da parte del sistema ABO è il sangue venoso. La procedura di raccolta viene solitamente eseguita al mattino. Non ci sono requisiti speciali per la preparazione, si consiglia di donare il sangue 4-6 ore dopo aver mangiato. Gli ultimi 30 minuti dovrebbero essere trascorsi in un ambiente calmo, senza stress fisico o emotivo. Il sangue viene prelevato dalla vena cubitale utilizzando un sistema a vuoto senza anticoagulante o con un attivatore della coagulazione. Conservato a una temperatura compresa tra 2 e 8 ° C, entro 2-3 ore viene consegnato al laboratorio.

Gli anticorpi del sistema ABO vengono determinati nel sangue mediante il metodo di agglutinazione. La procedura di ricerca si compone di diverse fasi. In primo luogo, il campione di prova viene aggiunto alle microtubi con gel di filtrazione. Quindi vengono posti in un incubatore per un po ', quindi in una centrifuga. Gli eritrociti, che sono attaccati agli anticorpi anti-gruppo, sono più grandi e quindi non passano attraverso il gel, ma rimangono sulla sua superficie. Come risultato della centrifugazione, gli eritrociti liberi si depositano sul fondo della provetta. La distribuzione degli eritrociti viene utilizzata per valutare la presenza di anticorpi nel campione. La preparazione dei risultati della ricerca richiede 1 giorno.

Valori normali

Gli anticorpi del sistema ABO sono presentati in due tipi: α e β. I primi sono prodotti per l'agglutinogeno A, i secondi per l'agglutinogeno B. Entrambi i tipi di anticorpi possono essere naturali e immuni, cioè acquisiti a seguito di sensibilizzazione. Normalmente, il titolo degli anticorpi α naturali va da 1: 8 a 1: 256, il titolo degli anticorpi β naturali va da 1: 8 a 1: 128. Gli anticorpi antigruppo immunitari non vengono normalmente rilevati. La diminuzione fisiologica del livello di anticorpi naturali può essere rilevata nei bambini e negli anziani.

Valori crescenti

Il motivo dell'aumento dei valori dell'analisi degli anticorpi secondo il sistema ABO è la sensibilizzazione dell'organismo, provocata dall'assunzione di un antigene incompatibile su base di gruppo. In questi casi, i titoli degli anticorpi antigruppo naturali aumentano e talvolta vengono determinati gli anticorpi antigruppo immuni di forme piene e incomplete. Molto spesso, deviazioni di questa natura vengono diagnosticate nelle donne in gravidanza con gruppo sanguigno I, poiché gli eritrociti non hanno agglutinogeni di tipo A o tipo B e la frequenza del gruppo è del 45%.

Diminuzione dei valori

Una diminuzione dei valori dell'analisi per gli anticorpi secondo il sistema ABO non ha valore diagnostico, alcune patologie possono diventarne le cause, ad esempio, l'agammaglobulinemia, la malattia di Hodgkin, la leucemia linfocitica cronica. In assenza di isoimmunizzazione con fattori specifici, gli anticorpi antigruppo immunitari sono assenti ei titoli naturali sono bassi.

Trattamento delle deviazioni dalla norma

Un esame del sangue per gli anticorpi secondo il sistema ABO ha il maggior valore prognostico quando si monitorano le gravidanze in donne con gruppo sanguigno I. I suoi risultati consentono di identificare lo stato di sensibilizzazione a fattori di gruppo e di prevenire lo sviluppo di un conflitto immunologico che porta all'eritroblastosi del neonato. Se viene rilevato un aumento del titolo di anticorpi antigruppo naturali, vengono determinati gli anticorpi immunitari, quindi è necessario chiedere consiglio all'ostetrico-ginecologo che guida la gravidanza. La decisione sulla necessità e sulla tattica della terapia viene presa da uno specialista individualmente.

La procedura per determinare i gruppi sanguigni secondo il sistema ABO consiste nel rilevare gli antigeni A e B negli eritrociti utilizzando anticorpi standard e utilizzando agglutinine nel plasma o nel siero del sangue analizzato con eritrociti standard. La tecnica è stata sviluppata all'inizio del XX secolo ed è ancora utilizzata attivamente in medicina. La determinazione degli antigeni A e B viene effettuata grazie agli tsolicloni anti-A e anti-B.

Concetti basilari

Nei donatori vengono sempre determinati non solo gli antigeni negli eritrociti, ma anche le agglutinine nel siero (plasma) utilizzando eritrociti standard. Il sangue venoso viene utilizzato come biomateriale. Prima dello studio, è necessario rinunciare ai cibi grassi un giorno prima dell'analisi e non fumare mezz'ora prima di fare il test. I gruppi sanguigni vengono determinati due volte: prima nel reparto medico, dove viene procurato il materiale, e poi confermato dalla ricerca in laboratorio.

La determinazione dei gruppi sanguigni secondo il sistema ABO è il test principale utilizzato in transfusiologia. Alcuni animali hanno anche un sistema di gruppo sanguigno simile, come scimpanzé, gorilla e bonobo.

Storia della scoperta

Nella scienza, è opinione generalmente accettata che il metodo per determinare i gruppi sanguigni secondo il sistema ABO sia stato scoperto per la prima volta da Karl Landsteiner, uno scienziato austriaco, nel 1900. Poi ha descritto nel suo lavoro tre tipi di antigeni. Per questo, trent'anni dopo, è stato insignito del Premio Nobel per la Medicina e la Fisiologia. A causa del fatto che prima non c'erano stretti legami tra scienziati, è stato successivamente stabilito che il sierologo ceco Jan Jansky, indipendentemente dalla ricerca di K. Landsteiner, ha descritto per primo quattro gruppi sanguigni umani, ma la sua ricerca non era nota a un vasto pubblico. Al momento, è la classificazione sviluppata da Y. Yansky che viene utilizzata in Russia e nelle repubbliche dell'ex Unione Sovietica. Negli Stati Uniti, W.L. Moss creò un'opera simile nel 1910.

Metodo per determinare i gruppi sanguigni secondo il sistema ABO utilizzando tsolicloni

Il gruppo sanguigno deve essere determinato in una stanza con una buona illuminazione, osservando un intervallo di temperatura compreso tra 15 e 25 gradi Celsius, poiché le deviazioni da questa norma possono influenzare i risultati del test. Le iniziali e il cognome del paziente sono scritti sulla targa o sulla targa. Da sinistra a destra o in un cerchio, vengono applicate le designazioni standard dei gruppi (O (I), A (II), B (III)). Sotto di essi, goccia a goccia, viene posto il siero corrispondente con pipette separate per ogni tipo. Quindi viene aggiunto il sangue del paziente. Il materiale per la ricerca viene prelevato dal lobo dell'orecchio o dal dito. Ciò è richiesto dalla tecnica di determinazione del gruppo sanguigno secondo il sistema ABO.

È anche legale utilizzare i globuli rossi nella provetta dopo che il coagulo si è formato. È necessario che la quantità di siero sia dieci volte la quantità di sangue aggiunto. Successivamente, le gocce vengono miscelate con bacchette di vetro (separatamente per ciascuna). Entro cinque minuti, agitando delicatamente la piastra, osserva l'aspetto della reazione di emoagglutinazione. Si trova nel fatto che compaiono piccoli grumi rossi, quindi si fondono in quelli più grandi. In questo momento, il siero perde quasi completamente il suo colore.

Per eliminare la falsa emoagglutinazione mediante semplice incollaggio di eritrociti, dopo tre minuti aggiungere una goccia di soluzione salina e verificare se l'agglutinazione persiste. Se è così, allora è vero. Ecco fatto, la definizione dei gruppi sanguigni secondo il sistema ABO è ora completa.

Interpretazione dei risultati

Di conseguenza, si possono osservare quattro reazioni:

nessuna agglutinazione si verifica con nessuno dei sieri - il primo gruppo è O (I);
la reazione si è manifestata con i sieri I (ab) e III (a) - il secondo gruppo A (II);
l'agglutinazione avviene con i sieri I (ab) e II (b) - il terzo gruppo B (III);
se la reazione avviene con tre sieri, è necessario eseguire una procedura aggiuntiva con reagenti del gruppo AB (IV) standard; se non c'è agglutinazione in tale goccia, possiamo presumere che questo sia il 4 ° gruppo sanguigno AB (IV).

Metodo rapido per il fattore Rh

Il metodo per determinare i gruppi sanguigni secondo il sistema ABO prevede la rilevazione simultanea del fattore Rh (Rh).

La superficie della piastra viene preliminarmente inumidita e su di essa vengono scritti "siero di controllo" e "siero anti-rhesus". Quindi una o due gocce dei reagenti richiesti vengono poste sotto le iscrizioni e ad esse viene aggiunto il materiale analizzato. Per questo, puoi anche usare il sangue di un dito (nella stessa quantità del volume del siero) o gli eritrociti rimasti sul fondo della provetta dopo la comparsa di un coagulo (metà del volume del siero). La scelta del materiale non influisce sul risultato finale. Quindi il sangue e il siero vengono miscelati con una bacchetta di vetro asciutta, dopodiché la reazione è prevista per cinque minuti. Per eliminare le false letture, una soluzione isotonica di cloruro di sodio viene aggiunta dopo tre o quattro minuti (solo poche gocce). La determinazione del gruppo sanguigno secondo il sistema ABO e Rh viene eseguita molto spesso.

Se si verifica l'agglutinazione degli eritrociti nella goccia di siero, ciò indica un sangue Rh positivo. Secondo le statistiche, Rh + si trova nell'85% della popolazione mondiale. La sua assenza ci permette di parlare di affiliazione Rh-negativa. Se l'agglutinazione appare nel siero di controllo, è diventato inutilizzabile. Sfortunatamente, l'algoritmo di determinazione del gruppo sanguigno ABO non funziona sempre perfettamente.

Quali errori si possono fare con questa tecnica?

Le imprecisioni nel determinare l'appartenenza del sangue a un particolare gruppo dipendono dai seguenti motivi:

Tecnico.
La specificità biologica del sangue in esame.
Carattere difettoso dei sieri standard e degli eritrociti.

Errori tecnici

Possibili errori nella determinazione del gruppo sanguigno del sistema ABO in modo incrociato:

Errori biologici specifici

Gli errori associati alla specificità biologica del sangue analizzato si dividono in due tipi.

Dipende dalle caratteristiche degli eritrociti.
Errori dovuti alle caratteristiche biologiche del siero.

Consideriamo ogni tipo in modo più dettagliato.

Dipendente dalle caratteristiche degli eritrociti

Agglutinazione tardiva dovuta a forme "deboli" di eritrociti e antigeni. Per evitare errori, è necessario determinare il gruppo sanguigno di donatori e riceventi utilizzando eritrociti standard. L'agglutinogeno A 2 deve essere identificato ripetendo il test con altri tipi di reagenti e altre vetrerie, aumentando il tempo di registrazione della reazione.
"Panagglutinazione" ("autoagglutinazione") - la capacità del sangue di mostrare la stessa reazione aspecifica con tutti i sieri, compreso il proprio. Dopo cinque minuti, la gravità di tale agglutinazione si indebolisce, sebbene dovrebbe aumentare. Casi simili si osservano in malati di cancro, pazienti ustionati, ecc. Come controllo, è necessario valutare la manifestazione di agglutinazione degli eritrociti analizzati nel siero standard del quarto gruppo e soluzione salina. Quando il gruppo sanguigno "panagglutination" è determinato come risultato del triplo lavaggio degli eritrociti. Se non dà il risultato desiderato, vale la pena prelevare nuovamente un campione di sangue in una provetta riscaldata prima della procedura e mettere il campione in un thermocontainer per aiutare a mantenere la temperatura di 37 gradi Celsius e oltre. Quindi dovrebbe essere portato in laboratorio, dove viene mantenuta la temperatura di cui sopra e vengono utilizzati soluzione salina riscaldata, piastra e reagenti.

A volte gli eritrociti del sangue analizzato sono disposti come "colonne di monete" e possono essere scambiati per agglutinati. Se si aggiungono due gocce di soluzione isotonica e si agita delicatamente la compressa, i globuli rossi sono nella posizione corretta.
Agglutinazione incompleta o mista che si verifica nei pazienti con il secondo, terzo e quarto gruppo a seguito di trapianto di midollo osseo o nei primi tre mesi dopo la trasfusione di sangue 0 (I).

Siero biologico

Errori associati all'uso di sieri e eritrociti standard difettosi

I sieri deboli con una durata di conservazione passata o con un titolo inferiore a 1:32 sono in grado di generare un'agglutinazione debole e tardiva. L'uso di tali reagenti è inaccettabile.

L'uso di eritrociti o sieri standard inutilizzabili, preparati in condizioni non sterili e conservati in modo insufficiente, porta alla comparsa di agglutinazioni "batteriche" di natura aspecifica.

Ci sono molte ipotesi popolari sui gruppi sanguigni del sistema ABO, che è apparso immediatamente dopo la sua scoperta in varie culture del mondo. Quindi, ad esempio, negli anni '30 del secolo scorso in Giappone e in altri paesi, una teoria che collega un gruppo sanguigno con un particolare tipo di personalità ha guadagnato popolarità. Teorie simili sono popolari oggi.

C'è anche un'opinione secondo cui una persona con il gruppo A è suscettibile a gravi postumi di una sbornia, O è associata a buoni denti e il gruppo A2 ha il più alto livello di QI. Ma tali affermazioni non sono state scientificamente provate.

Abbiamo esaminato la determinazione dei gruppi sanguigni mediante il sistema ABO utilizzando sieri standard.

Questo sistema è il principale che determina la compatibilità o l'incompatibilità del sangue trasfuso. Comprende due importanti antigeni geneticamente determinati: A e B - e due tipi di anticorpi, le agglutinine ae b. Le combinazioni di agglutinogeni e agglutinine definiscono 4 gruppi del sistema ABO. Questo sistema è l'unico in cui il plasma di persone non immuni ha anticorpi naturali contro l'antigene mancante. L'agglutinogeno A nella maggior parte delle persone è ben pronunciato (ha un grande potere antigenico): con gli anticorpi anti-A (a), dà una pronunciata reazione di agglutinazione degli eritrociti. In circa il 12% degli individui nei gruppi A (11) e AB (IV), l'antigene ha proprietà antigeniche deboli, è designato come antigene A2. Quindi, esiste un gruppo di antigeni A: A1 (forte) e A2, A3, A4 più debole, ecc. può portare a errori. Le specie deboli dell'antigene B sono molto rare. Gli anticorpi del sistema ABO a (anti-A) eb (anti-B) sono una normale proprietà del plasma sanguigno, che non cambia qualitativamente durante la vita di una persona, eb sono anticorpi pieni e freddi. Nella maggior parte dei casi, non si trovano nei neonati e compaiono durante i primi tre mesi di vita o addirittura un anno. Le agglutinine del gruppo raggiungono il pieno sviluppo all'età di 18 anni e nella vecchiaia il loro titolo (livello) diminuisce, il che si osserva anche negli stati di immunodeficienza. Oltre al normale (naturale) gruppo angitsl e in alcuni casi, ci sono anticorpi immunitari anti-A e anti-B. Il motivo più comune è la gravidanza, in cui la madre e il feto hanno gruppi sanguigni diversi, più spesso se la madre è del gruppo 1 (0), feto 11 (A) o W (B). La determinazione del gruppo sanguigno è necessaria per una trasfusione di sangue compatibile. In questo caso, è necessario aderire alla regola: gli eritrociti del donatore non devono contenere l'antigene corrispondente agli anticorpi del ricevente, cioè A e a, B e B, poiché altrimenti si verificherà una massiccia distruzione degli eritrociti iniettati da parte degli anticorpi del paziente - emolisi, che può portare alla morte del ricevente. Gli anticorpi di gruppo del donatore possono essere ignorati, poiché sono diluiti con il plasma del ricevente. Pertanto, il gruppo sanguigno O (I), che non contiene agglutinogeni, può essere trasfuso in persone con qualsiasi gruppo sanguigno. Gli individui con gruppo sanguigno 0 (1) sono considerati "donatori universali". Il sangue del gruppo A (P) può essere trasfuso in riceventi del gruppo A (P) e del gruppo AB (IV), che non hanno agglutinine nel plasma. Il gruppo sanguigno H (III) può essere trasfuso a individui con gruppo H (III) e AB (IV).

La determinazione dei gruppi sanguigni del sistema ABO viene eseguita con i seguenti metodi.

I. Determinazione del gruppo sanguigno utilizzando sieri isoemoagglutinanti standard. Con questo metodo si stabilisce la presenza o l'assenza di agglutinogeni nel sangue e, in base a ciò, si traggono conclusioni sul gruppo di appartenenza del sangue in esame.

2. Determinazione del gruppo sanguigno in modo incrociato, cioè utilizzando simultaneamente sieri isoemoagglutinanti standard ed eritrociti standard. In questo metodo, così come nel primo, viene determinata la presenza o l'assenza di agglutinogeni e, inoltre, la presenza o l'assenza di agglutinine di gruppo viene stabilita utilizzando eritrociti standard.

3. Determinazione del gruppo sanguigno mediante anticorpi monoclonali (COLICLONS).

ERRORI NELLA DETERMINAZIONE DEI GRUPPI SANGUE

Errori tecnici. La violazione delle regole delineate per determinare i gruppi sanguigni può portare a una valutazione errata dei risultati della reazione. Una deviazione dalle regole può essere:

Uso di sieri standard o eritrociti scadenti (scaduti, contaminati da sieri essiccati);

Mischiare campioni di sangue;

Posizionamento errato di sieri o fotociti standard nei rack;

Ordine di applicazione errato dei reagenti standard sulla piastra;

Rapporto errato tra siero e globuli rossi (non 10: 1);

Ricerca a temperature inferiori a 15 ° C (si verifica agglutinazione fredda) o superiori a 25 ° C (l'agglutinazione rallenta);

Mancato rispetto del tempo richiesto per la reazione (5 minuti);

Non aggiungere soluzione salina seguita da oscillazione del piatto;

Non utilizzare una reazione di controllo con il gruppo siero ABo (IV);

L'uso di pipette, bastoncini, piatti sporchi o bagnati.

In tutti i casi di risultato non chiaro o dubbio, è necessario rideterminare il gruppo sanguigno con un metodo incrociato utilizzando sieri standard di altre serie.

Errori associati alle caratteristiche biologiche del sangue analizzato.

Determinazione errata del gruppo A 2 e A 2 B. Gli eritrociti con un antigene debole A con antisiero formano piccoli agglutinati che emergono lentamente. La reazione può essere considerata negativa, cioè il gruppo A 2 è erroneamente registrato come O (1) e A 2 B - come B (W). Il rischio di un tale errore è particolarmente alto in presenza di errori tecnici (il rapporto tra siero ed eritrociti è 10: 1, la temperatura è superiore a 25 ° C, i risultati vengono presi in considerazione prima di 5 minuti).

Errori associati alla presenza di agglutinabilità aspecifica degli eritrociti studiati. Questo fenomeno si osserva in pazienti con tumori maligni, leucemia, sepsi, ustioni, cirrosi epatica, anemia emolitica autoimmune ed è causato da disproteinemia. Il gruppo di controllo con siero ABo (IV) rivela la presenza di agglutinazioni aspecifiche. In questi casi, è necessario rideterminare l'affiliazione al gruppo utilizzando il metodo incrociato. Nelle gocce, dove si osserva l'agglutinazione, è possibile aggiungere una soluzione fisiologica riscaldata fino a 37 °. Se necessario, è possibile lavare gli eritrociti in esame con soluzione salina calda (37 °) e rideterminare il gruppo sanguigno.

Errori associati alla presenza di extraagglutinine. Nel siero del sangue di persone dei gruppi A2 (P) e A2B (IV), in circa l'1% dei casi, vengono rilevati anticorpi contro l'antigene A1 - A1. Ciò complica la determinazione del gruppo sanguigno con il metodo incrociato, poiché il siero di tali individui agglutina gli eritrociti standard del gruppo A (P), cioè si manifesta come siero del gruppo 0 (1).

In alcune malattie, c'è una diminuzione dell'agglutinabilità degli eritrociti, in particolare del gruppo A (P).

Negli stati di immunodeficienza, gli anziani hanno una diminuzione del livello di agglutinine di gruppo.

In tutti i casi in cui si ottiene un risultato dubbio, la determinazione del gruppo sanguigno deve essere ripetuta con il metodo incrociato utilizzando sieri di maggiore attività.

18. Antigeni Rhesus. Gruppi del sistema Rh. Significato clinico. Metodi per determinare gli antigeni Rhesus e possibili errori.

Gli antigeni Rhesus sono i secondi più importanti nella pratica trasfusionale dopo i gruppi sanguigni ABO. Durante il periodo di introduzione attiva della trasfusione di sangue nella clinica, il numero di complicanze post-trasfusionali dopo ripetute trasfusioni di sangue ABO compatibile con l'antigene è notevolmente aumentato. Il sistema Rhesus comprende sei antigeni, per designare quali due nomenclature vengono utilizzate in parallelo: Wiener (Rh 0, rh ", rh", Hr 0, hr ", hr"); Fisher e Reis (D, C, E, d, c, e).

Rh 0 - D, rh "- C, rh" - E, Hr 0 - d, hr "- c, hr" - e.

Poiché l'antigene Rho (D) è il più attivo in questo sistema, è chiamato fattore Rh. È a seconda della presenza o dell'assenza di questo fattore che le persone si dividono in Rh-positivo (Rh +) e Rh-negativo (Rh-). Questa divisione è accettata solo in relazione ai destinatari. Gli antigeni rh "(C) e rh" (E) sono meno attivi di Rho (D), ma possono essere prodotti anticorpi anche nelle persone che non contengono gli antigeni C ed E negli eritrociti. Pertanto, i requisiti per gli eritrociti di donatori Rh negativi sono più rigorosi. Gli eritrociti non dovrebbero contenere solo l'antigene D, ma anche gli antigeni C ed E. Hro (d), hr "(c), hr" (e) sono caratterizzati da una bassa attività, sebbene gli anticorpi hr "(c) possano causare conflitti isoimmunologici. Nell'1-3% degli individui Rh positivi negli eritrociti ha una versione debole dell'antigene D - D ", che determina la presenza di piccole e discutibili agglutinazioni nel determinare il fattore Rh. In questi casi, l'affiliazione Rh del sangue della ricevente o della donna incinta è indicata come Rh negativo (Rh-) e l'affiliazione Rh del sangue del donatore come Rh positivo (Rh +). Non è consentita la trasfusione di sangue con Angen Du a destinatari Rh-negativi. Gli antigeni Rhesus si formano a 8-10 settimane di embriogenesi e la loro antigenicità può persino superare l'attività degli antigeni negli adulti. Il sistema Rh, a differenza del sistema ABO, non ha anticorpi naturali. Gli anticorpi anti-Rhesus sorgono solo dopo l'immunizzazione di un organismo Rh negativo a seguito della trasfusione di sangue Rh positivo o della gravidanza con un feto Rh positivo. Nel corpo degli individui sensibilizzati, gli anticorpi agli antigeni Rh persistono per diversi anni, a volte per tutta la vita. Nella maggior parte dei casi, il titolo degli anticorpi anti-Rhesus diminuisce gradualmente, ma aumenta di nuovo bruscamente quando il sangue Rh positivo rientra nel corpo. Gli anticorpi Rh differiscono per specificità (anti-D, an-III C, ecc.) E proprietà sierologiche (complete e incomplete). Gli anticorpi completi causano l'agglutinazione degli eritrociti in mezzo salino a temperatura ambiente. Per la manifestazione di agglutinazione sotto l'influenza di anticorpi incompleti, sono necessarie condizioni speciali: temperatura elevata, mezzo colloidale (gelatina, proteine \u200b\u200bdel siero di latte). Gli anticorpi completi (IgM) vengono sintetizzati all'inizio della risposta immunitaria e presto scompaiono dal sangue. Gli anticorpi incompleti (IgG, IgA) compaiono più tardi, vengono sintetizzati a lungo e sono la causa dello sviluppo della malattia emolitica nei neonati, poiché attraversano la placenta e danneggiano le cellule del feto.

Determinazione dell'affiliazione Rh del sangue

Il metodo per determinare il fattore Rh dipende dalla forma degli anticorpi Rh nel siero standard e dal metodo di produzione. Un'istruzione di accompagnamento è allegata al siero anti-Rhesus con una descrizione del metodo per il quale è destinata questa serie di sieri dispensati.

In ogni studio, per verificare la specificità e l'attività del siero anti-rhesus, è necessario impostare un controllo. Per il controllo, vengono utilizzati eritrociti Rh-positivi standard del gruppo 0 (1) o dello stesso gruppo del sangue da analizzare e eritrociti Rh-negativi standard dello stesso gruppo del sangue da esaminare.

Quando si determina l'appartenenza Rh da due serie di sieri standard nei casi in cui sono utilizzati con metodi diversi, il risultato è considerato vero se coincide in entrambe le serie di studi dopo aver controllato i campioni di controllo che confermano la specificità e l'attività di ciascuna serie di siero anti-Rhesus, cioè in assenza agglutinazione con eritrociti standard Rh-negativi dello stesso gruppo e presenza di agglutinazione con eritrociti standard Rh-positivi dello stesso gruppo o gruppo 0 (1) e in campioni di controllo senza siero (reagente) anti-Rhesus. Se si osserva una reazione debole o dubbia durante la determinazione dell'aderenza Rh, il sangue di questa persona deve essere riesaminato con la stessa e altre serie di siero anti-Rh ed è desiderabile includere siero contenente anticorpi completi. Se allo stesso tempo tutte le serie di sieri contenenti anticorpi incompleti danno anche una reazione debole o dubbia, e con anticorpi completi la reazione è negativa, significa che gli eritrociti contengono un tipo debole di antigene Rh, il cosiddetto fattore D u. In questi casi, l'affiliazione Rh del sangue del paziente o della donna incinta è indicata come Rh negativo (Rh-) e l'affiliazione Rh del sangue del donatore come Rh positivo (Rh +), impedendo così la trasfusione del suo sangue a destinatari Rh negativi.

La determinazione del fattore Rh può essere effettuata anche con i seguenti metodi.

Determinazione del fattore Rh Rh 0 (D) mediante reazione di conglutinazione utilizzando gelatina (in una provetta riscaldata a 46-48 ° C).

Determinazione del fattore Rh Rho (D) mediante reazione di conglutinazione in un mezzo siero su un piano riscaldato.

Determinazione del fattore Rh Rh 0 (D) mediante reazione di agglutinazione in mezzo salino in piccole provette. La reazione di agglutinazione in mezzo salino è adatta per lavorare solo con siero contenente anticorpi Rh completi.

Determinazione del fattore Rh Rh 0 (D) utilizzando anticorpi monoclonali.

Determinazione del fattore Rh Rho (D) mediante test di Coombs indiretto.

19 Anemia. Classificazione e breve descrizione. Eziologia e patogenesi delle anemie. L'anemia (dal greco anemia - mancanza di sangue) è un ampio gruppo di malattie caratterizzate da una diminuzione della quantità di emoglobina o emoglobina ed eritrociti per unità di volume sanguigno. Le anemie sono diverse per eziologia, meccanismi di sviluppo, quadro clinico ed ematologico, quindi ci sono molte classificazioni diverse, ma non sono abbastanza perfette. LI Idelson ha proposto una classificazione operativa delle anemie per i medici: 1) anemie acute post-emorragiche; 2) anemia da carenza di ferro; 3) anemie associate a ridotta sintesi o utilizzo di porfirine (sideroblastiche); 4) anemia associata a ridotta sintesi di DNA, RNA (megaloblastico); 5) anemia emolitica; 6) anemia associata ad inibizione della proliferazione delle cellule del midollo osseo (ipoplastiche, aplastiche); 7) anemia associata alla sostituzione del midollo osseo ematopoietico con un processo tumorale (metaplastico).

L'anemia può essere una malattia indipendente o un sintomo concomitante o una complicazione di alcune malattie interne, malattie infettive e oncologiche. Esistono anemie multifattoriali, cioè di genesi mista, ad esempio: anemia emolitica con carenza di ferro, anemia aplastica con componente emolitica, ecc.

Dipende da:

1) i valori dell'indicatore di colore distinguono tra anemie:

Normocromico (indice di colore 0.9-1.1);

Ipocromico (indice di colore inferiore a 0,85);

Ipercromico (indice di colore maggiore di 1,15);

2) il valore del diametro medio degli eritrociti:

Normocitico (diametro medio degli eritrociti 7,2-7,5 micron)

Microcitico (il diametro medio degli eritrociti è inferiore a 6,5 \u200b\u200bmicron),

Macrocitico (il diametro medio degli eritrociti è superiore a 8,0 micron),

Megalocytic (il diametro medio di erythrocytes è più di 12 micrometri);

3) i valori del volume medio di eritrociti in femtolitri (fl, 1 fl è 1 micron 3):

Normocytic (volume medio di erythrocytes 87 ± 5 fl);

Microcitico (il volume medio di erythrocytes è inferiore a 80 fl);

Macrocitico (il volume medio degli eritrociti è superiore a 95 fl);

4) il livello dei reticolociti nel sangue periferico.

Rigenerativo (il numero di reticolociti è 0,5-5%);

Iperregenerativo (il numero di reticolociti è superiore al 5%);

Ipo e sono generativi (il numero di reticolociti è ridotto o sono assenti, nonostante il decorso grave dell'anemia).

Il livello dei reticolociti è un indicatore della funzione rigenerativa del midollo osseo in relazione all'eritropoiesi.

Le anemie normocromiche includono acuta post-emorragica (nei primi giorni dopo la perdita di sangue), ipo e aplastica, emolitica non sferocitica, emolitica autoimmune, metaplastica (con leucemia, mieloma, ecc.), Nonché anemia che si sviluppa con disturbi endocrini (ipofunzione), surrene malattie renali, infezioni croniche.

Le anemie ipocromiche comprendono carenza di ferro, siroblastico, alcune mielotossiche, emolitiche (talassemia).

B12- (folico) -carente, alcune anemie emolitiche (microsferocitosi ereditaria, se prevalgono microsferociti tra gli eritrociti in uno striscio) sono ipercromiche. A volte l'anemia carente di vitamina B1 2 è normocromica.

Quelle normocitiche includono anemie emolitiche acute post-emorragiche, aplastiche, autoimmuni, ecc.

Le anemie microcitiche includono carenza di ferro, anemie sideroblastiche, anemie macrocitiche - anemie carenti di vigamin-B12- (folico), ecc.

Quelle rigenerative includono le anemie post-emorragiche; a iperregenerative - anemie emolitiche, soprattutto dopo una crisi emolitica; alle anemie ipo e areregenerative - ipoplastiche, aplastiche.

Il midollo osseo reagisce allo sviluppo di carenza di ferro, anemie emolitiche per irritazione, iperplasia del germoglio rosso. Con le anemie ipoplastiche, si verifica un progressivo declino dell'eritropoiesi fino al suo completo esaurimento.

20. Diagnostica di laboratorio delle anemie sature e insature di ferro. Anemia da carenza di ferro. Tipi di carenza di ferro. Test di laboratorio che riflettono la carenza di ferro nel corpo. L'immagine del sangue periferico e del midollo osseo in IDA. Diagnostica di laboratorio dell'anemia sideroblastica. Metabolismo e ruolo del ferro nell'organismo

Il ferro è di grande importanza per il corpo, fa parte dell'emoglobina, della mioglobina, degli enzimi respiratori. È distribuito tra le immobilizzazioni.

Fondo di emoglobina. Il ferro emoglobinico costituisce il 60-65% del contenuto di ferro totale nel corpo.

Fondo di riserva. Questo è il ferro della ferritina e dell'emosiderina, che si depositano nel fegato, nella milza, nel midollo osseo, nei muscoli. Costituisce il 30-40% del livello di ferro nel corpo. La ferritina è un complesso idrosolubile di ferro ferrico e proteina di apoferritina, contenente il 20% di ferro. Rappresenta una frazione labile della riserva di ferro. Se necessario, è facilmente utilizzabile per le esigenze di eritropoiesi. L'emosiderina è una proteina insolubile in acqua, che è simile alla ferritina nella composizione, ma contiene più ferro - 25-30%. È una frazione stabile e saldamente fissata delle riserve di ferro del corpo.

Il fondo di trasporto è rappresentato dal ferro legato alla transferrina proteica di trasporto. Costituisce l'1% del contenuto di ferro nel corpo.

Il fondo tissutale è rappresentato da ferro, enzimi contenenti ferro (citocromi, perossidasi, ecc.), Mioglobina. Costituisce l'1% del contenuto di ferro nel corpo.

Il contenuto totale di ferro nel corpo degli adulti è di 4-5 g ed entra nel corpo con la dieta. Contenuto in prodotti di origine animale e vegetale (carne, soprattutto manzo, fegato, uova, legumi, mele, albicocche secche, ecc.). Il ferro viene assorbito molto meglio dai prodotti animali che dagli alimenti vegetali, poiché è contenuto in essi sotto forma di eme. Quindi, il 20-25% viene assorbito dalla carne, l'11% dal pesce, il 3-5% del ferro contenuto nei prodotti vegetali. L'assorbimento del ferro è favorito dall'acido ascorbico, acidi organici (citrico, malico, ecc.), Inibisce l'assorbimento del tannino, alto contenuto di grassi nella dieta. L'assorbimento del ferro dal cibo è limitato. Durante il giorno vengono assorbiti 2-2,5 mg di ferro, per un breve periodo dopo forti emorragie possono essere assorbiti fino a 3 mg di ferro. La quantità principale di ferro viene assorbita nel duodeno e nella parte iniziale del digiuno. Piccole quantità di ferro possono essere assorbite in tutte le parti dell'intestino tenue.

L'assorbimento del ferro avviene in due fasi: 1) la mucosa intestinale cattura il ferro fornito con la dieta; 2) il ferro dalla mucosa intestinale passa nel sangue, caricato sulla transferrina e trasportato ai siti di utilizzo e al deposito. La transferrina trasferisce anche il ferro dai suoi fondi e dalle cellule del sistema dei mononucleari fagocitici, in cui si verifica la distruzione degli eritrociti, al midollo osseo, dove viene parzialmente utilizzato per la sintesi dell'emoglobina e parzialmente depositato sotto forma di depositi di ferro, nonché in altri luoghi di stoccaggio del ferro. Di solito 1/3 della transferrina si lega al ferro. Si chiama transferrina legata o ferro sierico. Normalmente, il contenuto di ferro sierico negli uomini e nelle donne è rispettivamente di 13-30 e 12-25 μmol / l. La parte della transferrina che non è legata al ferro è chiamata transferrina libera o capacità sierica di legare il ferro insatura e latente. La quantità massima di ferro che la transferrina può attaccare prima della saturazione è indicata come capacità sierica totale di legare il ferro (TIBC) (normalmente 30-85 μmol / L). La differenza tra TIBS e ferro sierico riflette la capacità latente di legare il ferro, e il rapporto tra ferro sierico e TIBC, espresso in percentuale, riflette la percentuale di saturazione della transferrina con ferro (norma 16-50%). Per giudicare la quantità di riserve di ferro e il corpo eseguire:

Studio del livello di ferritina nel siero con metodi radioimmuni;

Test desferale. Il desferal (desferoxamina) è un chelante che, dopo essere stato introdotto nel corpo, si lega selettivamente alle riserve di ferro, cioè la ferritina ferro, e la espelle nelle urine. Il paziente viene iniettato una volta per via intramuscolare con 500 mg di desferal, viene raccolta l'urina giornaliera e viene determinato il contenuto di ferro. Dopo la somministrazione di desferal, da 0,8 a 1,2 mg di ferro viene normalmente escreto nelle urine, mentre nei pazienti con anemia da carenza di ferro o in presenza di una carenza di ferro latente, la quantità di ferro escreta nelle urine diminuisce drasticamente;

Contando nel puntato del midollo osseo il numero di sideroblasti e nel sangue periferico - siderociti. I sideroblasti sono normoblasti, cioè cellule nucleate della riga rossa, nel citoplasma di cui si rivelano i granuli blu di riserve di ferro - ferritina. Normalmente, il 20-40% dei normoblasti sono sideroblasti. I siderociti sono eritrociti in cui si trovano i granuli di ferritina. Nel sangue periferico normale: fino all'1% dei siderociti. I granuli di ferritina nei sideroblasti e nei siderociti vengono rilevati con una colorazione speciale con blu di Prussia.

Il corpo è caratterizzato da perdite fisiologiche di ferro nelle urine, feci, bile, cellule esfoliate della mucosa intestinale, con sudore, durante il taglio di capelli e unghie. Le donne perdono ferro con il ciclo.

Lo sviluppo dell'anemia da carenza di ferro è preceduto da una carenza di ferro latente (latente). I pazienti sviluppano disturbi e segni clinici caratteristici della piemia da carenza di ferro, ma meno pronunciati (debolezza, pallore moderato della pelle e delle mucose visibili, mal di testa, palpitazioni, spesso una perversione del gusto e dell'olfatto, pelle secca, unghie fragili, ecc.). L'esame non rivela ancora cambiamenti nel contenuto di emoglobina, eritrociti e altri indicatori del sangue periferico. Ma vengono rilevate irregolarità nel metabolismo del ferro: il ferro sierico diminuisce, la capacità di legare il ferro totale e latente del siero aumenta, la percentuale di saturazione della transferrina diminuisce e il livello delle riserve di ferro diminuisce. Questa è la sideropenia senza anemia. La carenza latente di ferro può svilupparsi a qualsiasi età, specialmente nelle donne, negli adolescenti e nei bambini. Se la carenza di ferro latente non viene compensata, ma si approfondisce, l'anemia da carenza di ferro viene impastata.

Informazioni generali sullo studio

Il gruppo sanguigno ABO è un sistema che riflette la presenza o l'assenza di antigeni sulla superficie degli eritrociti e di anticorpi nel plasma sanguigno. ABO (si legge "a-ba-zero") è il sistema di gruppi sanguigni più comune in Russia.

Gli eritrociti sulla loro superficie trasportano molecole di segnalazione - antigeni - agglutinogeni. I due principali antigeni incorporati nella molecola degli eritrociti sono A e B. I gruppi sanguigni vengono determinati in base alla presenza o all'assenza di questi antigeni. Il sangue delle persone che hanno l'antigene A sui loro eritrociti appartiene al secondo gruppo - A (II), il sangue di coloro che hanno l'antigene B sui loro eritrociti appartiene al terzo gruppo - B (III). Se entrambi gli antigeni A e B sono presenti sugli eritrociti, questo è il quarto gruppo - AB (IV). Succede anche che nessuno di questi antigeni venga rilevato nel sangue sugli eritrociti - quindi questo è il primo gruppo - O (I).

Normalmente, il corpo produce anticorpi contro quegli antigeni (A o B) che non si trovano sugli eritrociti: si tratta di agglutinine nel plasma sanguigno. Cioè, nelle persone con il secondo gruppo sanguigno - A (II) - gli antigeni A sono presenti sugli eritrociti e gli anticorpi contro gli antigeni B saranno contenuti nel plasma - sono designati come anti-B (beta-agglutinina). Poiché gli stessi antigeni (agglutinogeni) sulla superficie degli eritrociti e le agglutinine nel plasma (A e alfa, B e beta) reagiscono tra loro e provocano l '"adesione" degli eritrociti, non possono essere contenuti nel sangue di una persona.

La scoperta del sistema di gruppo ABO ha permesso di capire perché le trasfusioni di sangue a volte hanno avuto successo e talvolta hanno causato gravi complicazioni. È stato formulato il concetto di compatibilità del gruppo sanguigno. Ad esempio, se una persona con un secondo gruppo sanguigno - A (II), che contiene anticorpi contro l'antigene B, viene trasfusa con un terzo gruppo sanguigno - B (III), si verificherà una reazione tra antigeni e anticorpi, che porterà all'adesione e alla distruzione dei globuli rossi e può avere gravi conseguenze fino alla morte. Pertanto, i gruppi sanguigni durante la trasfusione devono essere compatibili.

Il gruppo sanguigno è determinato dalla presenza o assenza di adesione eritrocitaria utilizzando sieri contenenti antigeni e anticorpi standard.

Nei centri trasfusionali, le sacche di sangue o gli emocomponenti dei donatori sono etichettati "O (I)", "A (II)", "B (III)" o "AB (IV)" per aiutarti a trovare rapidamente sangue del gruppo giusto quando è necessario.

A cosa serve la ricerca?

Per scoprire quale sangue può essere somministrato in sicurezza a un paziente. È estremamente importante assicurarsi che il sangue donato sia compatibile con il sangue del ricevente, la persona a cui verrà trasfuso. Se il sangue del donatore oi suoi componenti contengono anticorpi contro gli antigeni contenuti negli eritrociti del ricevente, può svilupparsi una grave reazione trasfusionale, causata dalla distruzione degli eritrociti nel letto vascolare.

Quando è programmato lo studio?

Prima della trasfusione di sangue, sia a coloro che ne hanno bisogno che ai donatori.

La trasfusione di sangue e dei suoi componenti è più spesso richiesta nelle seguenti situazioni:

- anemia grave
- sanguinamento che si verifica durante o dopo l'intervento chirurgico
- lesioni gravi
- massiccia perdita di sangue di qualsiasi origine,
- cancro ed effetti collaterali della chemioterapia,
- disturbi della coagulazione del sangue, in particolare l'emofilia.
Prima dell'intervento.

DISPOSIZIONI GENERALI

Il sistema del gruppo sanguigno ABO è costituito da due agglutinogeni di gruppo - A e B e due corrispondenti agglutinine nel plasma - alfa (anti-A) e beta (anti-B). Varie combinazioni di questi antigeni e anticorpi formano quattro gruppi sanguigni: gruppo 0 (1) - entrambi gli antigeni sono assenti; gruppo A (II) - solo l'antigene A è presente sugli eritrociti; gruppo B (III) - solo l'antigene B è presente sugli eritrociti; gruppo AB (IV) - gli antigeni A e B sono presenti sugli eritrociti.

L'unicità del sistema ABO sta nel fatto che nel plasma di persone non immunizzate ci sono anticorpi naturali contro l'antigene assenti sugli eritrociti: nelle persone del gruppo 0 (1) - anticorpi contro A e B; nelle persone del gruppo A (II) - anticorpi anti-B; nelle persone del gruppo B (III) - anticorpi anti-A; gli individui del gruppo AB (IV) non hanno anticorpi contro gli antigeni del sistema ABO.

Nel testo seguente, gli anticorpi anti-A e anti-B saranno indicati come anti-A e anti-B.

La determinazione del gruppo sanguigno ABO viene effettuata identificando antigeni e anticorpi specifici (reazione doppia o incrociata). Anti-A e anti-B vengono rilevati nel siero del sangue utilizzando eritrociti standard A (II) e B (III). La presenza o l'assenza di antigeni A e B sugli eritrociti viene stabilita utilizzando anticorpi monoclonali o policlonali (sieri emoagglutinanti standard) di specificità appropriata.

La determinazione del gruppo sanguigno viene eseguita due volte: ricerca primaria - nel reparto medico (squadra di raccolta del sangue); ricerca di conferma - nel dipartimento di laboratorio. L'algoritmo per condurre studi di laboratorio immunoematologici durante la trasfusione di sangue è mostrato in Fig. 18.1.

Il risultato della determinazione del gruppo sanguigno viene registrato nell'angolo in alto a destra del frontespizio dell'anamnesi o nel registro del donatore (scheda) con la data e firmato dal medico che ha effettuato la determinazione.

Nel nord-ovest della Russia, la distribuzione dei gruppi sanguigni del sistema ABO nella popolazione è la seguente: gruppo 0 (I) - 35%; gruppo A (II) - 35-40%; gruppo B (III) - 15-20%; gruppo AB (IV) - 5-10%.

Va notato che esistono diversi tipi (varianti deboli) sia dell'antigene A (in misura maggiore) che dell'antigene B. I tipi più comuni di antigene A - A 1 e A 2. La prevalenza dell'antigene A 1 negli individui dei gruppi A (II) e AB (IV) è dell'80% e dell'antigene A 2 - circa il 20%. I campioni di sangue con A2 possono contenere anticorpi anti-A1 che interagiscono con gli eritrociti standard del gruppo A (II). La presenza di anti-A1 viene rilevata mediante determinazione incrociata dei gruppi sanguigni e test di compatibilità individuale.

Per la determinazione differenziata delle varianti dell'antigene A (A1 e A2), è necessario utilizzare reagenti specifici (fitoemoagglutinine o anticorpi monoclonali anti-A1. I pazienti dei gruppi A2 (II) e A2B (IV) devono essere trasfusi con emocomponenti contenenti eritrociti, rispettivamente, dei gruppi A 2 (II) e A 2 B (IV). Possono essere raccomandate anche trasfusioni di eritrociti lavati: 0 (I) - per pazienti con gruppo sanguigno A 2 (II); 0 (I) e B (III) - per pazienti con gruppo sanguigno A 2 B (II).

Tabella 18.4. Risultati della determinazione del gruppo sanguigno ABO
Risultati della ricerca						Affiliazione di gruppo del sangue testato
eritrociti con reagente			siero (plasma) con eritrociti standard
anti-AB	anti-A	anti-B	0 (I)	A (II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (I)
+	+	-	-	-	+	A (II)
+	-	+	-	+	-	B (III)
+	+	+	-	-	-	AB (IV)
Designazioni: + - presenza di agglutinazione, - - assenza di agglutinazione

Determinazione dell'affiliazione al gruppo sanguigno secondo il sistema ABO

I gruppi sanguigni sono determinati da sieri standard (reazione semplice) ed eritrociti standard (reazione doppia o crociata).

Il gruppo sanguigno è determinato da una semplice reazione con due serie di sieri isoemoagglutinanti standard.

Determinazione del progresso [spettacolo] .
La determinazione del gruppo sanguigno viene eseguita con una buona illuminazione e temperature da + 15 a + 25 ° C su compresse. Sul lato sinistro del tablet, scrivi 0 (1), al centro - A (II), sul lato destro - B (III). Al centro del bordo superiore della compressa è annotato il cognome del donatore o il numero del sangue da analizzare. Utilizzare sieri standard attivi di tre gruppi (O, A, B) con un titolo di almeno 1:32, due serie. I sieri sono posti in appositi rack su due file. Una pipetta etichettata corrisponde a ciascun siero. Il siero del gruppo AB (IV) viene utilizzato per un controllo aggiuntivo.
Una o due gocce di siero standard vengono applicate sulla piastra in due file: siero del gruppo 0 (1) - a sinistra, siero del gruppo A (II) - al centro, siero del gruppo B (III) - a destra.
Gocce di sangue da un polpastrello o una provetta vengono applicate con una pipetta o una bacchetta di vetro vicino a ciascuna goccia di siero e mescolate con una bacchetta. La quantità di sangue dovrebbe essere 8-10 volte inferiore a quella del siero. Dopo la miscelazione, la piastra o la compressa vengono oscillate delicatamente a mano per facilitare l'agglutinazione dei globuli rossi più rapida e precisa. Quando inizia l'agglutinazione, ma non prima di 3 minuti dopo, una goccia di soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% viene aggiunta alle gocce di siero con eritrociti, dove si è verificata l'agglutinazione, e l'osservazione viene continuata fino a quando sono trascorsi 5 minuti. Dopo 5 minuti, leggere la reazione alla luce trasmessa.
Se l'agglutinazione è indistinta, viene aggiunta una goccia di soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% alla miscela di siero e sangue, dopodiché si conclude sull'affiliazione al gruppo (Tabella 18.4).
Risultati della reazione [spettacolo] .
1. L'assenza di agglutinazione in tutte e tre le gocce indica che non c'è agglutinogeno nel sangue in esame, cioè il sangue appartiene al gruppo 0 (I).
2. L'inizio dell'agglutinazione in gocce con siero 0 (I) e B (III) indica che c'è l'agglutinogeno A nel sangue, cioè il sangue appartiene al gruppo A (II).
3. La presenza di agglutinazione in gocce con sieri dei gruppi 0 (I) e A (II) indica che il sangue del test contiene agglutinogeno B, cioè sangue del gruppo B (III).
4. L'agglutinazione in tutte e tre le gocce indica la presenza di agglutinogeni A e B nel sangue in esame, cioè il sangue appartiene al gruppo AB (IV). Tuttavia, in questo caso, dato che l'agglutinazione con tutti i sieri è possibile a causa di una reazione aspecifica, è necessario applicare due o tre gocce di siero standard del gruppo AB (IV) su una piastra o su una piastra e aggiungere 1 goccia del sangue da analizzare. Il siero e il sangue vengono mescolati e il risultato della reazione viene osservato per 5 minuti.
  Se l'agglutinazione non si è verificata, il sangue in esame viene riferito al gruppo AB (IV). Se l'agglutinazione compare con il siero del gruppo AB (IV), la reazione è aspecifica. In caso di debole agglutinazione e in tutti i casi dubbi, il sangue viene ritestato con sieri standard di altre serie.

Determinazione della doppia reazione ABO del gruppo sanguigno
(secondo sieri standard ed eritrociti standard)

Gli eritrociti standard sono una sospensione al 10-20% di eritrociti nativi freschi (o cellule di prova lavate dal conservante) dei gruppi 0 (I), A (II) e B (III) in una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% o in una soluzione citrato-salina. Gli eritrociti standard nativi possono essere utilizzati per 2-3 giorni se conservati in soluzione salina isotonica a + 4 ° C. Gli eritrociti standard in scatola vengono conservati a + 4 ° C per 2 mesi e lavati dalla soluzione conservante prima dell'uso.

Le fiale o le fiale con sieri standard ed eritrociti standard vengono collocate in appositi rack con etichettatura appropriata. Per lavorare con i reagenti di tipizzazione, vengono utilizzate pipette lavate a secco, separate per ogni reagente. Per il lavaggio di bacchette e pipette di vetro (plastica), i becher vengono preparati con una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%.

Per determinare il gruppo, prendi 3-5 ml di sangue in una provetta senza stabilizzatore. Il sangue dovrebbe stabilizzarsi per 1,5-2 ore a una temperatura di + 15-25 ° C.

Determinazione del progresso [spettacolo] .
Alla piastra vengono applicate due gocce (0,1 ml) di sieri standard dei gruppi 0 (I), A (II), B (III) di due serie. Di conseguenza, ogni gruppo di sieri ha una piccola goccia (0,01 ml) di eritrociti standard dei gruppi 0 (I), A (II), B (III). Una goccia di siero di prova viene aggiunta ai sieri standard e due gocce di siero di prova vengono aggiunte agli eritrociti standard. La quantità di sangue dovrebbe essere 8-10 volte inferiore a quella del siero. Le gocce vengono miscelate con una bacchetta di vetro e, agitando la compressa tra le mani per 5 minuti, si monitora l'inizio dell'agglutinazione. Se l'agglutinazione è indistinta, una goccia di soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% (0,1 ml) viene aggiunta in aggiunta alla miscela di siero e sangue, dopodiché si conclude sull'affiliazione al gruppo (Tabella 18.4).
Valutazione dei risultati della determinazione del gruppo sanguigno del sistema ABO [spettacolo] .
1. La presenza di agglutinazione con eritrociti standard A e B e l'assenza di agglutinazione in tre sieri standard di due serie indica che il siero in esame contiene entrambe le agglutinine - alfa e beta, mentre gli eritrociti in esame non contengono agglutinogeni, ovvero il sangue appartiene al gruppo 0 (I) ...
2. La presenza di agglutinazione con sieri standard dei gruppi 0 (I), B (III) e con eritrociti standard del gruppo B (III) indica che gli eritrociti del test contengono l'agglutinogeno A e il siero del test contiene l'agglutinina beta. Pertanto, il sangue appartiene al gruppo A (II).
3. La presenza di agglutinazione con sieri standard dei gruppi 0 (I), A (II) e con eritrociti standard del gruppo A (II) indica che gli eritrociti studiati contengono agglutinogeno B e il siero in esame contiene agglutinina alfa. Di conseguenza, il sangue appartiene al gruppo B (III).
4. La presenza di agglutinazione con tutti i sieri standard e l'assenza di agglutinazione con tutti gli eritrociti standard indica che entrambe le agglutinine sono presenti negli eritrociti in studio, cioè il sangue appartiene al gruppo AB (IV).

Determinazione dell'affiliazione al gruppo sanguigno
utilizzando tsoliclones anti-A e anti-B

Gli tsoliklones anti-A e anti-B (anticorpi monoclonali contro gli antigeni A e B) sono progettati per determinare il gruppo sanguigno del sistema ABO umano invece dei sieri isoemoagglutinanti standard. Per ciascuna determinazione del gruppo sanguigno, utilizzare un lotto di reagenti anti-A e anti-B.

Determinazione del progresso [spettacolo] .
Una grande goccia di tsolicloni anti-A e anti-B (0,1 ml) viene applicata alla piastra (piastra) sotto le iscrizioni appropriate: "Anti-A" o "Anti-B". Posizionare accanto a una piccola goccia del sangue di prova (rapporto del reagente del sangue - 1:10), quindi il reagente e il sangue vengono miscelati e l'andamento della reazione viene monitorato agitando delicatamente la compressa o la piastra.
L'agglutinazione con tsolicloni anti-A e anti-B di solito si verifica nei primi 5-10 s. L'osservazione deve essere eseguita per 2,5 minuti, a causa della possibilità di una successiva insorgenza di agglutinazione con eritrociti contenenti varietà deboli di antigeni A o B.
La valutazione dei risultati della reazione di agglutinazione con tsolicloni anti-A e anti-B è presentata nella tabella. 18.4, che include anche i risultati della determinazione delle agglutinine nel siero di donatori utilizzando eritrociti standard.

Se si sospetta agglutinazione spontanea in persone con gruppo sanguigno AB (IV), viene eseguito uno studio di controllo con una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%. La reazione dovrebbe essere negativa.

I cicloni anti-A (rosa) e anti-B (blu) sono prodotti sia in forma nativa che liofilizzata in fiale da 20, 50, 100 e 200 dosi con un solvente attaccato a ciascuna fiala, 2, 5, 10 , 20 ml rispettivamente.

Un ulteriore controllo della correttezza della determinazione del gruppo sanguigno ABO con reagenti anti-A e anti-B è il reagente monoclonale anti-AB ("Hematolog", Mosca). Si consiglia di utilizzare il reagente anti-AB in parallelo sia con sieri policlonali immunitari che con reagenti monoclonali. Come risultato della reazione con il reagente anti-AB, si sviluppa l'agglutinazione degli eritrociti dei gruppi A (II), B (III) e AB (IV); gli eritrociti del gruppo 0 (I) non hanno agglutinazione.

ERRORI NELLA DETERMINAZIONE DEGLI ACCESSORI DEL GRUPPO

Gli errori nella determinazione dei gruppi sanguigni possono dipendere da tre motivi:

tecnico;
inferiorità dei sieri standard e degli eritrociti standard;
caratteristiche biologiche del sangue in esame.

Gli errori per motivi tecnici includono:

a) disposizione errata dei sieri sulla piastra;
b) rapporti quantitativi errati di sieri ed eritrociti;
c) l'uso di compresse non sufficientemente pulite e altri oggetti che vengono a contatto con il sangue. Ci deve essere una pipetta separata per ogni siero; per sciacquare le pipette deve essere utilizzata solo una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%;
d) registrazione errata del sangue di prova;
e) inosservanza del tempo fissato per la reazione di agglutinazione; con fretta, se si tiene conto della reazione prima che siano trascorsi 5 minuti, l'agglutinazione può non verificarsi se nel sangue in esame sono presenti deboli agglutinogeni; se la reazione è sovraesposta per più di 5 minuti, le gocce possono seccarsi dai bordi, simulando l'agglutinazione, che porterà anche ad una conclusione errata;
f) l'assenza di agglutinazione dovuta alla temperatura ambiente elevata (superiore a 25 ° C). Per evitare questo errore, si consiglia di utilizzare siero di latte appositamente preparato per lavorare in climi caldi; determinare i gruppi sanguigni su un piatto o vassoio di plastica, la cui superficie esterna del fondo è immersa in acqua fredda.
g) centrifugazione impropria: una centrifugazione insufficiente può portare a un risultato falso negativo e una centrifugazione eccessiva può portare a un falso positivo.

Errori dovuti all'uso di sieri standard ed eritrociti standard difettosi:

a) sieri standard deboli con un titolo inferiore a 1:32 o con una data scaduta possono causare un'agglutinazione tardiva e debole;
b) l'uso di sieri standard o eritrociti inutilizzabili, preparati non sterili e non sufficientemente conservati, porta alla comparsa di agglutinazioni "batteriche" aspecifiche.

Errori dipendenti dalle caratteristiche biologiche del sangue analizzato:

Errori dipendenti dalle caratteristiche biologiche degli eritrociti studiati:

a) l'agglutinazione tarda e debole è spiegata da forme "deboli" di antigeni, erythrocytes, più spesso - dalla presenza di agglutinogeno debole A 2 nei gruppi A e AB. Allo stesso tempo, nel caso di determinazione del gruppo sanguigno senza esaminare il siero per la presenza di agglutinine (reazione semplice), possono verificarsi errori, a seguito dei quali il sangue del gruppo A 2 B è definito come gruppo B (III) e il sangue A2 - come gruppo 0 (I). Pertanto, al fine di evitare errori, la determinazione del gruppo sanguigno sia dei donatori che dei riceventi deve essere eseguita utilizzando eritrociti standard (reazione doppia o crociata). Per identificare l'agglutinogeno À 2, si consiglia di ripetere lo studio con altri tipi (lotti) di reagenti, utilizzando diverse vetrerie di laboratorio, con un aumento del tempo di registrazione della reazione.
I reagenti specifici per chiarire il gruppo sanguigno in presenza di varianti deboli dell'antigene A (A1, A2, A3) con il metodo della reazione di agglutinazione diretta sono anti-A sl tsoliclon e reagente anti-A).
b) "panagglutinazione" o "autoagglutinazione", cioè la capacità del sangue di dare la stessa agglutinazione aspecifica con tutti i sieri e anche con la propria. L'intensità di questa reazione si indebolisce dopo 5 minuti, mentre aumenta la vera agglutinazione. Si trova più spesso in pazienti ematologici, oncologici, ustionati, ecc. Per il controllo, si raccomanda di valutare se l'agglutinazione degli eritrociti testati si verifica nel siero standard del gruppo AB (IV) e nella soluzione fisiologica.
Il gruppo sanguigno in "panagglutinazione" può essere determinato dopo aver lavato gli eritrociti tre volte. Per eliminare l'agglutinazione aspecifica, la piastra viene posta in un termostato a + 37 ° C per 5 minuti, dopodiché l'agglutinazione aspecifica scompare, ma rimane quella vera. Si consiglia di ripetere la determinazione utilizzando anticorpi monoclonali, impostando il test di Coombs.
Nel caso in cui il lavaggio degli eritrociti non dia il risultato desiderato, è necessario prelevare nuovamente un campione di sangue in una provetta preriscaldata, posizionare il campione in un contenitore termico per mantenere una temperatura di + 37 ° C e consegnarlo al laboratorio per la ricerca. La determinazione del gruppo sanguigno deve essere eseguita a una temperatura di + 37 ° С, per la quale vengono utilizzati reagenti preriscaldati, soluzione salina e una compressa.
c) gli eritrociti del sangue testato vengono piegati in "colonne di monete", che durante la macroscopia possono essere scambiate per agglutinati. L'aggiunta di 1-2 gocce di soluzione isotonica di cloruro di sodio, seguita da un leggero dondolio della compressa, di solito distrugge le "monete".
d) agglutinazione mista o incompleta: alcuni eritrociti si agglutinano e altri rimangono liberi. È osservato nei pazienti dei gruppi A (II), B (III) e AB (IV) dopo trapianto di midollo osseo o durante i primi tre mesi dopo la trasfusione di sangue del gruppo 0 (I). L'eterogeneità degli eritrociti periferici è chiaramente verificata nel test del gel DiaMed.

Errori dipendenti dalle caratteristiche biologiche del siero studiato:

a) la rilevazione di anticorpi di diversa specificità durante i test di routine è il risultato di una precedente sensibilizzazione. È consigliabile determinare la specificità degli anticorpi e selezionare eritrociti tipizzati senza l'antigene per il quale è stata rilevata l'immunizzazione. Il ricevente immunizzato deve selezionare individualmente un sangue di donatore compatibile;
b) quando si rileva la formazione di "colonne di monete" di eritrociti standard in presenza del siero testato, è consigliabile confermare il risultato anormale utilizzando eritrociti standard del gruppo 0 (I). Per differenziare "colonne moneta" e veri agglutinati aggiungere 1-2 gocce di soluzione isotonica di cloruro di sodio e agitare la pastiglia, mentre le "colonne moneta" vengono distrutte;
c) l'assenza di anticorpi anti-A - o anti-B. Forse nei neonati e nei pazienti con soppressione dell'immunità umorale;

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LETTERATURA [spettacolo] .

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