Asins grupu vērtība pēc AVO sistēmas. Antigēnu asins sistēmas

Antivielu analīze, izmantojot ABO sistēmu - vispārējs klīniskais pētījums, kura mērķis ir atklāt alfa vai beta izohemaglutinīnus - dabiskās IgG antivielas pret trūkstošajiem A vai B antigēniem. Nosaka gadījumā, ja māte un auglis nav saderīgi ar ABO sistēmas antigēniem. Antigrupu antivielu noteikšana grūtnieces asinīs ir nepieciešama starpgrupu konflikta diagnosticēšanai un savlaicīgai terapeitisko pasākumu īstenošanai, lai novērstu spontāno abortu, priekšlaicīgas dzemdības, augļa (jaundzimušā) hemolītisko slimību. Asinis tiek ņemtas no vēnas. Pētījuma metode - aglutinācijas reakcija. Parasti (ar nelielu starpgrupu konfliktu varbūtību) rezultāts ir negatīvs. Analīzes rezultātu gatavība ir viena darba diena.

Antivielas saskaņā ar ABO sistēmu vai antigrupu antivielas ir imūnglobulīni, kas rodas, ja asinīs parādās antigēns, kas nav savienojams ar grupu. Asins grupa ir atkarīga no īpašajiem proteīniem, kas atrodas eritrocītu membrānas ārējā pusē - aglutinogēniem. Medicīnas praksē nosaka aglutinogēnus A, B un D. Cilvēkiem ar I asins grupu eritrocīti bez A un B olbaltumvielām, ar II grupu - ar A tipa olbaltumvielām, ar III grupu - ar B tipa olbaltumvielām, ar IV grupu - ar tipa olbaltumvielām A un B. Aglutinogēna D klātbūtne vai trūkums nosaka pozitīvu vai negatīvu Rh faktoru. Anti-grupas antivielas organisms ražo, kad sarkanās asins šūnas ar nepazīstamiem aglutinogēniem A vai B nonāk šo asinsritē.Šo antivielu reakcija izraisa svešu sarkano asins šūnu iznīcināšanu.

Antivielu ražošana saskaņā ar ABO sistēmu ir iespējama ar asins pārliešanu, ja tiek sajauktas augļa un mātes asinis. Teorētiski grupas asins nesaderību nosaka šādos gadījumos: ja recipientam (mātei) ir I vai III asins grupa un donoram (auglim) II; ja recipientam (mātei) ir I vai II asins grupa un donoram (auglim) ir III; ja recipientam (mātei) ir I, II vai III asins grupa un donoram (auglim) ir IV. Praksē antigrupu antivielu veidošanos visbiežāk novēro sievietēm ar I asins grupu, jo tā nesatur aglutinogēnus A un B un tajā pašā laikā tā ir visizplatītākā. Imūnkonflikts grūtniecības laikā var izraisīt jaundzimušā eritroblastozi, ar asins pārliešanu - eritrocītu intravaskulāru hemolīzi. Riska grupā ir saņēmēji pēc vairākām pārliešanām, kā arī grūtnieces, kurām veikta asins pārliešana, mākslīgi un dabiski pārtraukumi, kurām ir bērni ar hemolītisku slimību.

Lai veiktu asins analīzi antivielām, izmantojot ABO sistēmu, asinis tiek ņemtas no vēnas. Visizplatītākā pētījumu metode ir aglutinācijas reakcija, izmantojot difūzu gēlu. Rezultāti tiek izmantoti dzemdniecībā un ginekoloģijā, plānojot un kontrolējot grūtniecību, kā arī ķirurģijā un reanimācijas medicīnā asins pārliešanas laikā.

Indikācijas

Asins analīze pret antivielām saskaņā ar ABO sistēmu ir paredzēta sievietēm grūtniecības laikā, ja pastāv imunoloģisko grupu konflikta iespējamība. Nosakot risku, tiek ņemta vērā vecāku asins grupu kombinācija. Antivielu klātbūtne asinīs visbiežāk tiek noteikta grūtniecēm ar I grupu, ja II, III vai IV tika pārnestas no tēva uz bērnu. Probabilistiski pretrunīgas ir arī II mātes + III vai IV tēva, III mātes + II vai IV tēva kombinācijas. Izrakstot analīzi, tiek ņemti vērā arī citi riska faktori: traucēta placentas caurlaidība, vēdera trauma, invazīvas diagnostikas procedūras (piemēram, amniocentēze). Visos šajos gadījumos augļa eritrocīti var iekļūt mātes asinīs, kam seko antigrupu antivielu ražošana. Klīniski noteikt šāda veida imunoloģiskā konflikta klātbūtni nav iespējams - sieviete nejūt nekādas izmaiņas. Bet, ja jūs nesekojat antivielu titram, tad bērnam ir risks saslimt ar hemolītisko slimību, kas izpaužas kā tūska, dzeltenums, anēmija, palielināta liesa un aknas, smagos gadījumos - attīstības kavēšanās.

Vēl viena norāde uz asins pārbaudi antivielu noteikšanai saskaņā ar ABO sistēmu ir komplikācijas pēc asins pārliešanas. Grupu konfliktā bieži attīstās akūta intravaskulāra hemolīze - reakcija uz sarkano asins šūnu iznīcināšanu injicētajās asinīs. Tas izpaužas kā dedzinoša sajūta infūzijas vietā, drudzis, drebuļi, sāpes mugurā un stumbrā, kā arī panikas lēkmes. Uzraugot grūtniecību, lēmumu veikt analīzi pieņem ārsts, ņemot vērā riska faktoru kopumu grupas konflikta attīstībai. Asins analīze antivielām, izmantojot ABO sistēmu, nav skrīninga tests, atšķirībā no, piemēram, anti-eritrocītu antivielu testa. Tas ir saistīts ar faktu, ka šāda veida imunoloģisks konflikts attīstās reti, un hemolītiskā slimība norit vieglā formā un galvenokārt izpaužas ar jaundzimušo dzelti

Sagatavošanās analīzei un materiāla paraugu ņemšana

Materiāls antivielu testēšanai, izmantojot ABO sistēmu, ir venozās asinis. Savākšanas procedūra parasti tiek veikta no rīta. Sagatavošanai nav īpašu prasību, asinis ieteicams ziedot 4-6 stundas pēc ēšanas. Pēdējās 30 minūtes jāpavada mierīgā vidē, bez fiziska vai emocionāla stresa. Asinis tiek ņemtas no kubitālās vēnas, izmantojot vakuuma sistēmu bez antikoagulanta vai ar koagulācijas aktivatoru. Uzglabā temperatūrā no 2 līdz 8 ° C, 2-3 stundu laikā nogādā laboratorijā.

Antivielas saskaņā ar ABO sistēmu asinīs nosaka ar aglutinācijas metodi. Pētījuma procedūra sastāv no vairākiem posmiem. Pirmkārt, testa paraugu pievieno mikrocaurulītēm ar filtrēšanas želeju. Tad tos uz brīdi ievieto inkubatorā, pēc tam centrifūgā. Eritrocīti, kas ir piesaistīti antigrupu antivielām, ir lielāki un tāpēc neiziet cauri gēlam, bet paliek uz tā virsmas. Centrifugēšanas rezultātā caurules apakšpusē brīvie eritrocīti nosēžas. Eritrocītu sadalījums tiek izmantots, lai novērtētu antivielu klātbūtni paraugā. Pētījuma rezultātu sagatavošana ilgst 1 dienu.

Normālās vērtības

ABO sistēmas antivielas ir divu veidu - α un β. Pirmie tiek ražoti pret aglutinogēnu A, otrie - pret aglutinogēnu B. Abi antivielu veidi var būt dabiski un imūni, tas ir, iegūti sensibilizācijas rezultātā. Parasti dabisko α-antivielu titrs ir no 1: 8 līdz 1: 256, dabisko β-antivielu titrs ir no 1: 8 līdz 1: 128. Imūnās antigrupas antivielas parasti netiek atklātas. Fizioloģisko dabisko antivielu līmeņa pazemināšanos var noteikt bērniem un gados vecākiem cilvēkiem.

Vērtību palielināšana

Antivielu analīzes vērtību pieauguma iemesls saskaņā ar ABO sistēmu ir ķermeņa sensibilizācija, ko izraisa antigēna uzņemšana, kas nav saderīgs ar grupas īpašībām. Šajos gadījumos palielinās dabisko antigrupu antivielu titri, un dažreiz tiek noteiktas pilnīgas un nepilnīgas imūnās antigrupas antivielas. Visbiežāk šāda veida novirzes tiek diagnosticētas grūtniecēm ar I asins grupu, jo eritrocītos nav ne A, ne B tipa aglutinogēnu, un grupas biežums ir 45%.

Vērtību samazināšanās

Antivielu analīzes vērtību samazinājumam saskaņā ar ABO sistēmu nav diagnostiskas vērtības; par tās cēloņiem var kļūt dažas patoloģijas, piemēram, agammaglobulinēmija, Hodžkina slimība, hroniska limfoleikoze. Ja nav izoimmunizācijas ar specifiskiem faktoriem, imūnās antigrupas antivielas nav, un dabisko titru līmenis ir zems.

Ārstēšana novirzēm no normas

Asins analīzei antivielām saskaņā ar ABO sistēmu ir vislielākā prognostiskā vērtība, kontrolējot grūtniecību sievietēm ar I asins grupu. Tās rezultāti ļauj noteikt sensibilizācijas stāvokli grupas faktoriem un novērst imunoloģiskā konflikta attīstību, kas izraisa jaundzimušā eritroblastozi. Ja tiek konstatēts paaugstināts dabisko antigrupu antivielu titrs, tiek noteiktas imūnās antivielas, tad ir nepieciešams lūgt padomu no akušiera-ginekologa, kurš vada grūtniecību. Lēmumu par terapijas nepieciešamību un taktiku speciālists pieņem individuāli.

Asins grupu noteikšanas procedūra, izmantojot ABO sistēmu, ir A un B antigēnu noteikšana eritrocītos, izmantojot standarta antivielas, un aglutinīnu lietošana analizēto asiņu plazmā vai serumā ar standarta eritrocītiem. Tehnika tika izstrādāta 20. gadsimta sākumā un joprojām tiek aktīvi izmantota medicīnā. Antigēnu A un B noteikšana tiek veikta, pateicoties anti-A un anti-B tsolikloniem.

Pamatjēdzieni

Donoros vienmēr nosaka ne tikai antigēnus eritrocītos, bet arī aglutinīnus serumā (plazmā), izmantojot standarta eritrocītus. Venozās asinis tiek izmantotas kā biomateriāls. Pirms pētījuma ir nepieciešams atteikties no taukainiem ēdieniem dienu pirms analīzes un nesmēķēt pusstundu pirms testa veikšanas. Asins grupas tiek noteiktas divas reizes: vispirms medicīnas nodaļā, kur materiāls tiek savākts, un pēc tam to apstiprina ar pētījumiem laboratorijā.

Asins grupu noteikšana pēc ABO sistēmas ir galvenais transfusioloģijā izmantotais tests. Dažiem dzīvniekiem ir arī līdzīga asins grupu sistēma, piemēram, šimpanzes, gorillas un bonobos.

Atklājumu vēsture

Zinātnē ir vispārpieņemts viedoklis, ka metodi asins grupu noteikšanai pēc ABO sistēmas pirmo reizi identificēja austriešu zinātnieks Karls Landšteiners 1900. gadā. Tad viņš savā darbā aprakstīja trīs veidu antigēnus. Par to trīsdesmit gadus vēlāk viņam tika piešķirta Nobela prēmija medicīnā un fizioloģijā. Sakarā ar to, ka starp zinātniekiem iepriekš nebija ciešas saites, vēlāk tika noskaidrots, ka čehu serologs Jans Janskis neatkarīgi no K. Landšteinera pētījumiem vispirms aprakstīja četras cilvēka asins grupas, taču viņa pētījumi nebija zināmi plašai auditorijai. Pašlaik Krievijā un bijušās PSRS republikās izmanto Y. Yansky izstrādāto klasifikāciju. Amerikas Savienotajās Valstīs W.L.Moss uzrakstīja līdzīgu darbu 1910. gadā.

Metode asins grupu noteikšanai pēc ABO sistēmas, izmantojot tsoliclones

Asins grupa jānosaka telpā ar labu apgaismojumu, ievērojot temperatūras diapazonu no 15 līdz 25 grādiem pēc Celsija, jo novirzes no šīs normas var ietekmēt testa rezultātus. Pacienta iniciāļi un uzvārds ir uzrakstīti uz plāksnes vai plāksnes. No kreisās uz labo pusi vai pa apli tiek lietoti grupu standarta apzīmējumi (O (I), A (II), B (III). Zem tiem pa pilienam ievieto atbilstošo serumu ar atsevišķām pipetēm katram tipam. Tad viņiem pievieno pacienta asinis. Materiāls pētījumiem tiek ņemts no auss ļipiņas vai pirksta. To prasa asins grupas noteikšanas tehnika saskaņā ar ABO sistēmu.

Pēc tromba izveidošanās ir likumīgi izmantot sarkanās asins šūnas mēģenē. Ir nepieciešams, lai seruma daudzums būtu desmit reizes lielāks par pievienoto asiņu daudzumu. Pēc tam pilienus sajauc ar stikla stieņiem (katram atsevišķi). Piecu minūšu laikā, viegli sakratot plāksni, vērojiet hemaglutinācijas reakcijas parādīšanos. Tas ir konstatēts faktā, ka parādās mazi sarkani gabali, pēc tam saplūst lielākos. Šajā laikā serums gandrīz pilnībā zaudē savu krāsu.

Lai novērstu nepatiesu hemaglutināciju, vienkārši pielīmējot eritrocītus, pēc trim minūtēm jāpievieno viens fizioloģiskā šķīduma piliens un jāpārbauda, \u200b\u200bvai aglutinācija turpinās. Ja tā, tad tā ir taisnība. Tas tā, asins grupu definīcija pēc ABO sistēmas tagad ir pabeigta.

Rezultātu interpretācija

Rezultātā var novērot četras reakcijas:

• nevienā no serumiem nenotiek aglutinācija - pirmā grupa ir O (I);
• reakcija izpaudās ar I (ab) un III (a) serumiem - otro A (II) grupu;
• aglutinācija notiek ar I (ab) un II (b) serumiem - trešo B (III) grupu;
• ja reakcija notiek ar trim serumiem, ir jāveic papildu procedūra ar standarta AB (IV) grupas reaģentiem; ja šādā pilienā nav aglutinācijas, mēs varam pieņemt, ka šī ir 4. AB (IV) asins grupa.

Ātra Rh faktora metode

Asins grupu noteikšanas metode saskaņā ar ABO sistēmu ietver vienlaicīgu Rh faktora (Rh) noteikšanu.

Plāksnes virsma ir iepriekš samitrināta, un uz tās ir uzrakstīts "kontroles serums" un "anti-rēzus serums". Tad zem uzrakstiem ievieto vienu vai divus pilienus vajadzīgo reaģentu un tiem pievieno analizēto materiālu. Lai to izdarītu, jūs varat arī izmantot pirkstu galu asinis (tādā pašā daudzumā kā seruma tilpums) vai sarkanās asins šūnas, kas paliek tūbiņas apakšpusē pēc tromba parādīšanās (puse no seruma tilpuma). Materiāla izvēle neietekmē gala rezultātu. Tad asinis un serumu sajauc ar sausu stikla stieni, pēc kura reakcija gaidāma piecas minūtes. Lai izslēgtu viltus rādījumus, pēc trim līdz četrām minūtēm (tikai dažus pilienus) pievieno izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu. Asins grupas noteikšana pēc ABO un Rh sistēmas tiek veikta ļoti bieži.

Ja seruma pilienā notiek eritrocītu aglutinācija, tas norāda uz pozitīvām Rh asinīm. Saskaņā ar statistiku Rh + ir sastopams 85% pasaules iedzīvotāju. Tās trūkums ļauj runāt par Rh negatīvu piederību. Ja kontroles serumā parādās aglutinācija, tā ir kļuvusi nelietojama. Diemžēl ABO asins grupas noteikšanas algoritms ne vienmēr darbojas perfekti.

Kādas kļūdas var pieļaut ar šo tehniku?

Neprecizitātes, nosakot asins piederību noteiktai grupai, ir atkarīgas no šādiem iemesliem:

• Tehnisks.
• Pētāmo asiņu bioloģiskā specifika.
• Standarta serumu un eritrocītu trūkums.

Tehniskas kļūdas

Iespējamās kļūdas, nosakot ABO sistēmas asins grupu krustojumā:

Bioloģiski specifiskas kļūdas

Kļūdas, kas saistītas ar analizēto asiņu bioloģisko specifiku, iedala divos veidos.

• Atkarīgs no eritrocītu īpašībām.
• Kļūdas seruma bioloģisko īpašību dēļ.

Apsvērsim katru veidu sīkāk.

Atkarīgs no eritrocītu īpašībām

• Novēlota aglutinācija "vājo" eritrocītu un antigēnu formu dēļ. Lai izvairītos no kļūdām, ir jānosaka donoru un recipientu asins grupa, izmantojot standarta eritrocītus. Aglutinogēns A2 jāidentificē, atkārtoti pārbaudot ar cita veida reaģentiem un citiem stikla izstrādājumiem, palielinot reakcijas reģistrācijas laiku.
• "Panaglutinācija" ("autoaglutinācija") - asins spēja izrādīt tādu pašu nespecifisku reakciju ar visiem serumiem, ieskaitot tās serumus. Pēc piecām minūtēm šādas aglutinācijas smagums vājinās, lai gan tam vajadzētu palielināties. Līdzīgi gadījumi tiek novēroti vēža slimniekiem, apdegušiem pacientiem utt. Kā kontrolei nepieciešams novērtēt analizēto eritrocītu aglutinācijas izpausmi ceturtās grupas standarta serumā un fizioloģisko šķīdumu. Ar "panaglutināciju" asins grupu nosaka trīskārtīgas eritrocītu mazgāšanas rezultātā. Ja tas nedod vēlamo rezultātu, ir vērts atkārtoti ievilkt asins paraugu mēģenē, kas uzsildīta pirms procedūras, un ievietot paraugu termokonteinerā, lai palīdzētu uzturēt temperatūru 37 grādi pēc Celsija. Tad tas jānogādā laboratorijā, kur tiek uzturēta iepriekš norādītā temperatūra, un tiek izmantots karsēts sāls šķīdums, plāksne un reaģenti.

• Dažreiz analizējamo asiņu eritrocīti ir sakārtoti kā "monētu kolonnas", un tos var sajaukt ar aglutinātiem. Ja pievienojat divus pilienus izotoniskā šķīduma un maigi sakratāt tableti, sarkano asins šūnu stāvoklis ir pareizs.
• Nepilnīga vai jaukta aglutinācija, kas rodas pacientiem ar otro, trešo un ceturto grupu kaulu smadzeņu transplantācijas rezultātā vai pirmajos trīs mēnešos pēc asins pārliešanas 0 (I).

Bioloģiskais serums

Kļūdas, kas saistītas ar defektu standarta eritrocītu un serumu lietošanu

Vāji serumi ar iepriekšēju glabāšanas laiku vai titrs, kas mazāks par 1:32, spēj izraisīt vāju un novēlotu aglutināciju. Šādu reaģentu izmantošana ir nepieņemama.

Nelietojamu standarta eritrocītu vai serumu izmantošana, kas sagatavota nesterilos apstākļos un nepietiekami konservēta, rada nespecifiska rakstura "baktēriju" aglutināciju.

Ir daudz populāru pieņēmumu par ABO sistēmas asinsgrupām, kas parādījās tūlīt pēc tās atklāšanas dažādās pasaules kultūrās. Tā, piemēram, pagājušā gadsimta 30. gados Japānā un dažās citās valstīs popularitāti ieguva teorija, kas asins grupu saista ar noteiktu personības veidu. Līdzīgas teorijas ir populāras arī mūsdienās.

Pastāv arī viedoklis, ka persona ar A grupu ir uzņēmīga pret smagām paģirām, O ir saistīta ar labiem zobiem, un A2 grupai ir visaugstākais IQ līmenis. Bet šādi apgalvojumi nav zinātniski pierādīti.

Mēs pārbaudījām asins grupu noteikšanu ar ABO sistēmu, izmantojot standarta serumus.

Šī sistēma ir galvenā, kas nosaka pārlieto asiņu savietojamību vai nesaderību. Tas ietver divus ģenētiski noteiktus svarīgus antigēnus: A un B - un divu veidu antivielas pret tiem, aglutinīnus a un b. Aglutinogēnu un aglutinīnu kombinācijas nosaka 4 ABO sistēmas grupas. Šī sistēma ir vienīgā, kur cilvēku, kas nav imūni, plazmā ir dabiskas antivielas pret trūkstošo antigēnu. Aglutinogēns A lielākajai daļai cilvēku ir labi izteikts (tam piemīt liela antigēna spēja): ar anti-A (a) antivielām tas dod izteiktu eritrocītu aglutinācijas reakciju. Aptuveni 12% A (11) un AB (IV) grupas indivīdu antigēniem ir vājas antigēnu īpašības, tas tiek apzīmēts kā A2 antigēns. Tādējādi pastāv antigēnu A grupa: A1 (spēcīgs) un vājāks A2, A3, A4 uc. Nosakot asins grupas, jāatceras par vāju antigēnu A, jo eritrocīti ar šādiem antigēniem spēj radīt tikai vēlu un vāju aglutināciju, var izraisīt kļūdas. Vājās B antigēnu sugas ir ļoti reti sastopamas. ABO sistēmas antivielas a (anti-A) un b (anti-B) ir normāla asins plazmas īpašība, kas cilvēka dzīves laikā kvalitatīvi nemainās, un B un B ir pilnīgas, aukstas antivielas. Vairumā gadījumu tie nav sastopami jaundzimušajiem un parādās pirmajos trīs dzīves mēnešos vai pat gadā. Grupas aglutinīni pilnībā attīstās līdz 18 gadu vecumam, un vecumā to titrs (līmenis) samazinās, kas novērojams arī imūndeficīta stāvokļos. Papildus normāli pastāvošajai (dabiskajai) angitsa grupai un dažos gadījumos rodas imūnās antivielas anti-A un anti-B. Visbiežākais iemesls tam ir grūtniecība, kurā mātei un auglim ir dažādas asins grupas, biežāk, ja māte ir 1. (0), 11. (A) vai W (B) grupa. Asins grupas noteikšana ir nepieciešama saderīgai asins pārliešanai. Šajā gadījumā ir jāievēro noteikums: donora eritrocītos nedrīkst būt antigēna, kas atbilst saņēmēja antivielām, t.i., A un a, B un b, jo pretējā gadījumā pacienta antivielas izraisīs lielu ievadīto eritrocītu iznīcināšanu - hemolīzi, kas var izraisīt recipienta nāvi. Donora grupas antivielas var neņemt vērā, jo tās atšķaida ar recipienta plazmu. Tāpēc O (I) asinsgrupu, kas nesatur aglutinogēnus, var pārliet cilvēkiem ar jebkuru asins grupu. Personas ar 0 (1) asins grupu tiek uzskatītas par “universāliem donoriem”. A (P) grupas asinis var pārliet A (P) un AB (IV) grupas saņēmējiem, kuru plazmā nav aglutinīnu. H (III) asins grupu var pārliet cilvēkiem ar H (III) un AB (IV) grupu.

ABO sistēmas asins grupu noteikšanu veic ar šādām metodēm.

I. Asins grupas noteikšana, izmantojot standarta izohemaglutinējošus serumus. Izmantojot šo metodi, asinīs tiek konstatēta aglutinogēnu klātbūtne vai trūkums, un, pamatojoties uz to, tiek izdarīts secinājums par pētāmo asiņu grupu.

2. Asins grupas noteikšana šķērsvirzienā, tas ir, vienlaikus izmantojot standarta izohemaglutinējošos serumus un standarta eritrocītus. Ar šo metodi, kā arī ar pirmo, tiek noteikta aglutinogēnu klātbūtne vai neesamība, un papildus tiek noteikta grupas aglutinīnu klātbūtne vai neesamība, izmantojot standarta eritrocītus.

3. Asins grupas noteikšana, izmantojot monoklonālās antivielas (COLICLONS).

KĻŪDAS ASINSKOPU NOTEIKŠANĀ

Tehniskas kļūdas. Pārkāpjot noteiktos asins grupu noteikšanas noteikumus, var nepareizi novērtēt reakcijas rezultātus. Atkāpe no noteikumiem var būt:

Standartiem neatbilstošu serumu vai eritrocītu (kuru derīguma termiņš ir beidzies, piesārņoti ar žāvējošiem serumiem) izmantošana;

Asins paraugu sajaukšana;

Nepareiza standarta serumu vai fotocītu novietošana statīvos;

Nepareiza standarta reaģentu lietošanas kārtība uz plāksnes;

Nepareiza seruma un sarkano asins šūnu attiecība (nevis 10: 1);

Pētījumi temperatūrā, kas mazāka par 15 ° C (notiek auksta aglutinācija) vai augstāka par 25 ° C (aglutinācija palēninās);

Reakcijai nepieciešamā laika neievērošana (5 minūtes);

Nepievienojiet fizioloģisko šķīdumu, kam seko plāksnes šūpošana;

Nelietojiet kontroles reakciju ar seruma ABo (IV) grupu;

Piesārņotu vai mitru pipetu, spieķu, plākšņu izmantošana.

Visos neskaidra vai šaubīga rezultāta gadījumos ir nepieciešams atkārtoti noteikt asins grupu, izmantojot krustenisko metodi, izmantojot citu sēriju standarta serumus.

Kļūdas, kas saistītas ar analizēto asiņu bioloģiskajām īpašībām.

Nepareiza A 2 un A 2 B grupas noteikšana. Eritrocīti ar vāju antigēnu A ar antiserumu veido mazus, lēni izdalošus aglutinātus. Reakciju var ņemt vērā kā negatīvu, tas ir, grupa A2 ir kļūdaini reģistrēta kā O (1), un A2 B - kā B (W). Šādas kļūdas risks ir īpaši augsts, ja ir tehniskas kļūdas (seruma un eritrocītu attiecība ir 10: 1, temperatūra ir augstāka par 25 ° C, rezultāti tiek ņemti vērā agrāk nekā 5 minūtes).

Kļūdas, kas saistītas ar pētīto eritrocītu nespecifisko aglutinējamību. Šī parādība tiek novērota pacientiem ar ļaundabīgiem audzējiem, leikēmiju, sepsi, apdegumiem, aknu cirozi, autoimūno hemolītisko anēmiju, un to izraisa disproteinēmija. Kontrole ar grupas ABo (IV) serumu atklāj nespecifiskas aglutinācijas klātbūtni. Šajos gadījumos ir nepieciešams no jauna noteikt piederību grupai, izmantojot krustenisko metodi. Pilienos, kur novēro aglutināciju, var pievienot fizioloģisko šķīdumu, kas sasildīts līdz 37 °. Ja nepieciešams, pētītos eritrocītus varat mazgāt ar siltu (37 °) fizioloģisko šķīdumu un atkārtoti noteikt asins grupu.

Kļūdas, kas saistītas ar ekstraglutinīnu klātbūtni. A2 (P) un A2B (IV) grupas personu asins serumā aptuveni 1% gadījumu tiek konstatētas antivielas pret A1 antigēnu - a1. Tas sarežģī asins grupas noteikšanu ar krustenisko metodi, jo šādu indivīdu serums aglutinē A (P) grupas standarta eritrocītus, t.i., tas izpaužas kā 0 (1) grupas serums.

Dažās slimībās samazinās eritrocītu aglutinējamība, īpaši A (P) grupa.

Imūndeficīta stāvokļos vecāka gadagājuma cilvēkiem ir samazinājies grupas aglutinīnu līmenis.

Visos gadījumos, kad tiek iegūts apšaubāms rezultāts, asins grupas noteikšana jāatkārto ar krustenisko metodi, izmantojot augstākas aktivitātes serumus.

18. Rēzus antigēni. Rh sistēmas grupas. Klīniskā nozīme. Rēzus antigēnu un iespējamo kļūdu noteikšanas metodes.

Rēzus antigēni ir otrie nozīmīgākie transfūzijas praksē pēc ABO asins grupām. Aktīvas asins pārliešanas klīnikā periodā pēc transfūzijas komplikāciju skaits pēc atkārtotas ar antigēnu saderīgu ABO asiņu pārliešanas ir ievērojami pieaudzis. Rēzus sistēmā ietilpst seši antigēni, kurus paralēli apzīmē, izmantojot divas nomenklatūras: Vīners (Rh 0, rh ", rh", Hr 0, hr ", hr"); Fišers un Reiss (D, C, E, d, c, e).

Rh 0 - D, rh "- C, rh" - E, Hr 0 - d, hr "- c, hr" - e.

Tā kā Rho (D) antigēns ir visaktīvākais šajā sistēmā, to sauc par Rh faktoru. Tas ir atkarīgs no šī faktora klātbūtnes vai neesamības, cilvēki tiek iedalīti Rh pozitīvajos (Rh +) un Rh negatīvajos (Rh-). Šis sadalījums tiek pieņemts tikai attiecībā uz saņēmējiem. Rh "(C) un rh" (E) antigēni ir mazāk aktīvi nekā Rho (D), taču antivielas pret tiem var ražot arī cilvēkiem, kuri eritrocītos nesatur C un E antigēnus. Tāpēc prasības attiecībā uz Rh negatīvo donoru eritrocītiem ir stingrākas. Eritrocīti nedrīkst saturēt ne tikai D antigēnu, bet arī C un E. Antigēniem Hro (d), hr "(c), hr" (e) raksturīga zema aktivitāte, lai gan antivielas hr "(c) var izraisīt izoimunoloģiskus konfliktus. 1-3% Rh pozitīvu cilvēku eritrocītos ir vājš D - D antigēna variants ", kas nosaka nelielas, apšaubāmas aglutinācijas klātbūtni Rh faktora noteikšanā. Šajos gadījumos saņēmēja vai grūtnieces asiņu Rh piederība tiek norādīta kā Rh negatīva (Rh-) un donora asiņu Rh piederība kā Rh pozitīva (Rh +). Asins pārliešana ar Angen D u Rh-negatīviem recipientiem nav atļauta. Rēzus antigēni tiek veidoti embriogenēzes 8-10 nedēļās, un to antigēnitāte pat var pārsniegt antigēnu aktivitāti pieaugušajiem. Rh sistēmai, atšķirībā no ABO sistēmas, nav dabisku antivielu. Anti-Rēzus antivielas rodas tikai pēc Rh negatīvā organisma imunizācijas Rh pozitīvu asiņu pārliešanas vai grūtniecības ar Rh pozitīvu augli rezultātā. Sensibilizēto indivīdu ķermenī antivielas pret Rh antigēniem saglabājas vairākus gadus, dažreiz visu mūžu. Vairumā gadījumu anti-rēzus antivielu titrs pakāpeniski samazinās, bet atkal strauji palielinās, kad Rh pozitīvās asinis atkal nonāk organismā. Rh antivielas atšķiras pēc specifiskuma (anti-D, an-III C uc) un seroloģiskajām īpašībām (pilnīgas un nepilnīgas). Pilnīgas antivielas inducē sarkano asins šūnu aglutināciju fizioloģiskā vidē istabas temperatūrā. Aglutinācijas izpausmei nepilnīgu antivielu ietekmē ir nepieciešami īpaši apstākļi: paaugstināta temperatūra, koloidāla barotne (želatīns, sūkalu olbaltumviela). Imūnās atbildes sākumā tiek sintezētas pilnīgas antivielas (IgM), kas drīz pazūd no asinīm. Nepabeigtas antivielas (IgG, IgA) parādās vēlāk, ilgstoši tiek sintezētas un ir jaundzimušo hemolītiskās slimības attīstības cēlonis, jo tās iziet cauri placentai un bojā augļa šūnas.

Asins Rh piederības noteikšana

Rh faktora noteikšanas metode ir atkarīga no Rh antivielu formas standarta serumā un tā ražošanas metodes. Antireēzus serumam ir pievienota pievienotā instrukcija ar metodes aprakstu, kurai paredzēta šī sērija izdalītā seruma.

Katrā pētījumā, lai pārbaudītu anti-rēzus seruma specifiku un aktivitāti, ir jāiestata kontrole. Kontrolei izmanto 0 (1) grupas vai tās pašas grupas standarta Rh pozitīvos eritrocītus, kas ir testa asinis, un standarta Rh negatīvos eritrocītus, kas noteikti ir vienā grupā ar testa asinīm.

Nosakot Rh piederību pēc divām standarta serumu sērijām gadījumos, kad tos izmanto ar dažādām metodēm, rezultāts tiek ņemts vērā kā patiess, ja tas sakrīt abās pētījumu sērijās pēc kontroles paraugu pārbaudes, kas apstiprina katras antirezusa seruma sērijas specifiku un aktivitāti, t.i. aglutinācija ar tās pašas grupas standarta Rh-negatīvajiem eritrocītiem un aglutinācija ar tās pašas grupas vai 0 (1) grupas standarta Rh-pozitīvajiem eritrocītiem un kontrolparaugos bez seruma (reaģenta) antirēzus. Ja, nosakot Rh adhēziju, tiek novērota vāja vai apšaubāma reakcija, tad šīs personas asinis jāpārbauda ar to pašu un citu anti-Rh seruma sēriju, un ir vēlams iekļaut serumu, kas satur pilnīgas antivielas. Ja tajā pašā laikā visas serumu sērijas, kas satur nepilnīgas antivielas, arī rada vāju vai šaubīgu reakciju un reakcija ar pilnīgām antivielām ir negatīva, tas nozīmē, ka eritrocīti satur vāju rēzus antigēna veidu, tā saukto faktoru D u. Šajos gadījumos pacienta vai grūtnieces asiņu Rh piederība tiek norādīta kā Rh negatīva (Rh-), un donora asiņu Rh piederība ir Rh pozitīva (Rh +), tādējādi novēršot viņa asiņu pārliešanu Rh negatīvajiem recipientiem.

Rh faktora noteikšanu var veikt arī ar šādām metodēm.

Rh faktora Rh 0 (D) noteikšana ar konglutinācijas reakciju, izmantojot želatīnu (mēģenē, kas uzkarsēta līdz 46-48 ° C).

Rh faktora Rho (D) noteikšana ar konglutinācijas reakciju seruma barotnē uz sakarsētas plaknes.

Rh faktora Rh 0 (D) noteikšana ar aglutinācijas reakciju sāls vidē mazās mēģenēs. Aglutinācijas reakcija sāls vidē ir piemērota darbam tikai ar serumu, kas satur pilnīgas Rh antivielas.

Rh faktora Rh 0 (D) noteikšana, izmantojot monoklonālas antivielas.

Rh faktora Rho (D) noteikšana, izmantojot netiešu Kumbsa testu.

19 Anēmija. Klasifikācija un īss apraksts. Anēmiju etioloģija un patoģenēze. Anēmija (no grieķu anēmijas - bez asinīm) ir liela slimību grupa, kurai raksturīga hemoglobīna vai hemoglobīna un eritrocītu daudzuma samazināšanās vienā asins tilpuma vienībā. Anēmijas ir atšķirīgas etioloģijā, attīstības mehānismos, klīniskajā un hematoloģiskajā attēlā, tāpēc ir daudz dažādu klasifikāciju, taču tās nav pietiekami perfektas. LI Idelsons ieteica klīnisko anēmiju klasifikāciju: 1) akūtas post-hemorāģiskas anēmijas; 2) dzelzs deficīta anēmija; 3) anēmijas, kas saistītas ar traucētu porfirīnu (sideroblastu) sintēzi vai izmantošanu; 4) anēmija, kas saistīta ar traucētu DNS, RNS (megaloblastu) sintēzi; 5) hemolītiskā anēmija; 6) anēmija, kas saistīta ar kaulu smadzeņu šūnu proliferācijas inhibēšanu (hipoplastiska, aplastiska); 7) anēmija, kas saistīta ar hematopoētisko kaulu smadzeņu aizstāšanu ar audzēja procesu (metaplastiska).

Anēmija var būt vai nu neatkarīga slimība, vai arī dažu iekšējo slimību, infekcijas un onkoloģisko slimību simptoms vai komplikācija. Ir daudzfaktoru anēmijas, t.i., jaukta ģenēze, piemēram: hemolītiskā anēmija ar dzelzs deficītu, aplastiskā anēmija ar hemolītisko komponentu utt.

Atkarībā no:

1) krāsu indikatora vērtības atšķir anemijas:

Normohromisks (krāsu indekss 0,9-1,1);

Hipohroma (krāsu indekss ir mazāks par 0,85);

Hiperhromisks (krāsu indekss ir lielāks par 1,15);

2) eritrocītu vidējā diametra vērtība:

Normocīts (vidējais eritrocītu diametrs 7,2-7,5 mikroni)

Mikrocīti (eritrocītu vidējais diametrs ir mazāks par 6,5 mikroniem),

Makrocitāras (eritrocītu vidējais diametrs ir lielāks par 8,0 mikroniem),

Megalocītisks (vidējais eritrocītu diametrs ir lielāks par 12 mikroniem);

3) vidējais eritrocītu tilpums femtolitros (fl, 1 fl ir 1 mikrona 3):

Normocīts (vidējais eritrocītu tilpums 87 ± 5 fl);

Mikrocitozes (vidējais eritrocītu tilpums ir mazāks par 80 fl);

Macrocytic (vidējais eritrocītu tilpums ir lielāks par 95 fl);

4) retikulocītu līmenis perifērajās asinīs.

Reģeneratīvi (retikulocītu skaits ir 0,5-5%);

Hiperregeneratīvs (retikulocītu skaits pārsniedz 5%);

Hipo- un arģeneratīvs (retikulocītu skaits ir samazināts vai to nav, neskatoties uz smagu anēmijas gaitu).

Retikulocītu skaits ir kaulu smadzeņu reģeneratīvās funkcijas rādītājs attiecībā pret eritropoēzi.

Normohromas anēmijas ir akūtas pēcnāves asiņošanas (pirmajās dienās pēc asins zuduma), hipo- un aplastiskas, nesferocitāras hemolītiskas, autoimūnas hemolītiskas, metaplastiskas (ar leikēmiju, mielomu utt.), Kā arī anēmijas, kas attīstās ar endokrīnām slimībām (hipofunkciju), virsnieru dziedzeriem nieru slimības, hroniskas infekcijas.

Hipohromiskās anēmijas ietver dzelzs deficītu, siroblastu, dažus mielotoksiskus, hemolītiskus (talasēmiju).

B12- (folijas) deficīts, dažas hemolītiskās anēmijas (iedzimta mikrosferocitoze, ja uztriepē starp eritrocītiem dominē mikrosferocīti) ir hiperhromas. Dažreiz B1 vitamīna deficīta anēmija ir normohroma.

Normocītiskās ir akūtas posthemorāģiskas, aplastiskas, autoimūnas hemolītiskas anēmijas utt.

Mikrocitārās anēmijas ietver dzelzs deficītu, sideroblastiskās anēmijas, makrocītiskās - vigamīna-B12 (folijas) deficīta anēmijas utt.

Atjaunojošie ietver post-hemorāģiskas anēmijas; uz hiperregeneratīvām - hemolītiskām anēmijām, īpaši pēc hemolītiskās krīzes; uz hipo- un arereģeneratīvām - hipoplastiskām, aplastiskām anēmijām.

Kaulu smadzenes reaģē uz dzelzs deficīta, hemolītisko anēmiju attīstību kairinājuma dēļ, sarkanās asnas hiperplāziju. Ar hipoplastiskām anēmijām pakāpeniski samazinās eritropoēze līdz tās pilnīgai izsīkšanai.

20. Ar dzelzi piesātinātu un nepiesātinātu anēmiju laboratorijas diagnostika. Dzelzs deficīta anēmija. Dzelzs deficīta veidi. Laboratorijas testi, kas atspoguļo dzelzs deficītu organismā. Perifēro asiņu un kaulu smadzeņu attēls IDA. Sideroblastiskās anēmijas laboratoriskā diagnostika. Metabolisms un dzelzs loma organismā

Dzelzs organismam ir liela nozīme, tas ir daļa no hemoglobīna, mioglobīna un elpošanas enzīmiem. To sadala starp pamatlīdzekļiem.

Hemoglobīna fonds. Hemoglobīna dzelzs veido 60–65% no kopējā dzelzs daudzuma organismā.

Rezerves fonds. Tas ir feritīna un hemosiderīna dzelzs, kas nogulsnējas aknās, liesā, kaulu smadzenēs, muskuļos. Tas veido 30-40% no dzelzs līmeņa organismā. Feritīns ir ūdenī šķīstošs dzelzs dzelzs un apoferritīna proteīna komplekss, kas satur 20% dzelzs. Pārstāv labilu dzelzs rezerves krājuma daļu. Ja nepieciešams, to var viegli izmantot eritropoēzes vajadzībām. Hemosiderīns ir ūdenī nešķīstošs proteīns, kas pēc sastāva ir tuvu feritīnam, bet satur vairāk dzelzs - 25-30%. Tā ir stabila, stingri fiksēta ķermeņa dzelzs krājumu daļa.

Transporta fondu pārstāv dzelzs, kas saistīts ar transporta olbaltumvielu transferīnu. Satur 1% no dzelzs satura organismā.

Audu fondu pārstāv dzelzs, dzelzi saturoši enzīmi (citohromi, peroksidāze utt.), Mioglobīns. Tas veido 1% no dzelzs satura organismā.

Kopējais dzelzs saturs pieaugušo ķermenī ir vienāds ar 4-5 g. Tas nonāk organismā ar diētu. Satur dzīvnieku un augu izcelsmes produktos (gaļā, īpaši liellopu gaļā, aknās, olās, pākšaugos, ābolos, žāvētās aprikozēs utt.). Dzelzs daudz labāk uzsūcas no dzīvnieku izcelsmes produktiem nekā no augu pārtikas, jo tas satur tajos hēmu. Tātad 20–25% uzsūcas no gaļas, 11% no zivīm, 3–5% no augu produktos esošā dzelzs. Dzelzs uzsūkšanos veicina askorbīnskābe, organiskās skābes (citronskābe, ābolskābe uc), kavē tanīna uzsūkšanos, augstu tauku saturu uzturā. Dzelzs absorbcija no pārtikas ir ierobežota. Dienas laikā uzsūcas 2-2,5 mg dzelzs, īsu brīdi pēc smagas asiņošanas var absorbēt līdz 3 mg dzelzs. Galvenais dzelzs daudzums tiek absorbēts divpadsmitpirkstu zarnā un tukšās zarnas sākotnējā daļā. Nelielus dzelzs daudzumus var absorbēt visās tievās zarnas daļās.

Dzelzs absorbcija notiek divos posmos: 1) zarnu gļotāda uztver ar diētu piegādāto dzelzi; 2) dzelzs no zarnu gļotādas nonāk asinīs, ielādē transferīnā un nogādā lietošanas vietās un depo. Transferrīns arī pārnes dzelzi no saviem līdzekļiem un fagocītisko mononukleāru sistēmas šūnām, kurās notiek eritrocītu iznīcināšana, uz kaulu smadzenēm, kur to daļēji izmanto hemoglobīna sintēzei, un daļēji nogulsnē dzelzs krājumu veidā, kā arī uz citām dzelzs uzglabāšanas vietām. Parasti 1/3 transferīna saistās ar dzelzi. To sauc par saistītu transferīnu vai dzelzs serumu. Parasti dzelzs saturs serumā vīriešiem un sievietēm ir attiecīgi 13-30 un 12-25 μmol / l. Transferīna daļu, kas nav saistīta ar dzelzi, sauc par brīvo transferīnu vai nepiesātinātu, latentu seruma dzelzs saistīšanas spēju. Maksimālo dzelzs daudzumu, ko transferīns varētu piesaistīt pirms piesātinājuma, sauc par kopējo seruma dzelzs saistīšanas spēju (TIBC) (parasti 30–85 μmol / L). Atšķirība starp TIBS un seruma dzelzi atspoguļo latento dzelzs saistīšanās spēju, un seruma dzelzs attiecība pret TIBC, izteikta procentos, atspoguļo transferīna piesātinājuma ar dzelzi procentuālo daudzumu (norma 16-50%). Lai spriestu par dzelzs krājumu daudzumu un ķermeņa darbību:

Feritīna līmeņa serumā izpēte ar radioimūnām metodēm;

Desferāls tests. Desferal (desferoksamīns) ir helators, kas pēc ievadīšanas organismā selektīvi saistās ar dzelzs rezervēm, t.i., feritīna dzelzi, un izdalās ar urīnu. Vienu reizi intramuskulāri pacientam injicē 500 mg desferāla, ikdienas urīnu savāc un nosaka dzelzs saturu. Pēc desferāla ievadīšanas no urīna parasti izdalās no 0,8 līdz 1,2 mg dzelzs, savukārt pacientiem ar dzelzs deficīta anēmiju vai latenta dzelzs deficīta klātbūtnē krasi samazinās urīnā izdalītā dzelzs daudzums;

Skaitot kaulu smadzeņu punkcijā sideroblastu skaitu, bet perifērajās asinīs - siderocītus. Sideroblasti ir normoblasti, tas ir, sarkanās rindas kodolveida šūnas, kuru citoplazmā atklājas zilas dzelzs rezervju - feritīna - granulas. Parasti 20-40% normoblastu ir sideroblasti. Siderocīti ir eritrocīti, kuros atrodamas feritīna granulas. Parastās perifērās asinīs: līdz 1% siderocītu. Feritīna granulas sideroblastos un siderocītos tiek noteiktas ar īpašu krāsošanu ar Prūsijas zilo krāsu.

Ķermenim raksturīgi fizioloģiski dzelzs zudumi urīnā, izkārnījumos, žulti, atslāņotās zarnu gļotādas šūnās, ar sviedriem, griežot matus un nagus. Sievietes zaudē dzelzi līdz ar menstruāciju.

Pirms dzelzs deficīta anēmijas attīstības ir latents (latents) dzelzs deficīts. Pacientiem rodas sūdzības un klīniskās pazīmes, kas raksturīgas dzelzs deficīta piēmijai, bet mazāk izteiktas (vājums, mērens ādas un redzamo gļotādu bālums, galvassāpes, sirdsklauves, bieži garšas un smaržas sagrozīšana, sausa āda, trausli nagi utt.). Pārbaude vēl neatklāj izmaiņas hemoglobīna, eritrocītu un citu perifēro asiņu rādītāju saturā. Bet tiek atklāti dzelzs metabolisma traucējumi: samazinās dzelzs līmenis serumā, palielinās seruma kopējā un latentā dzelzs saistīšanās spēja, samazinās transferīna piesātinājuma procents un samazinās dzelzs rezervju līmenis. Tā ir sideropēnija bez anēmijas. Latents dzelzs deficīts var attīstīties jebkurā vecumā, īpaši sievietēm, pusaudžiem un bērniem. Ja latents dzelzs deficīts netiek kompensēts, bet padziļinās, tiek mīcīta dzelzs deficīta anēmija.

Vispārīga informācija par pētījumu

ABO asins grupa ir sistēma, kas atspoguļo antigēnu klātbūtni vai trūkumu uz eritrocītu virsmas un antivielas asins plazmā. ABO (lasa kā "a-ba-zero") ir visizplatītākā asins grupu sistēma Krievijā.

Eritrocīti uz to virsmas satur signālmolekulas - antigēnus - aglutinogēnus. Divi galvenie antigēni, kas iestrādāti eritrocītu molekulā, ir A un B. Asins grupas tiek noteiktas, pamatojoties uz šo antigēnu klātbūtni vai trūkumu. Cilvēku asinis, kuru eritrocītos ir antigēns A, pieder otrajai grupai - A (II), to cilvēku asinis, kuru eritrocītos ir antigēns B, pieder trešajai grupai - B (III). Ja eritrocītos ir gan A, gan B antigēni, šī ir ceturtā grupa - AB (IV). Gadās arī tā, ka asinīs uz eritrocītiem neviens no šiem antigēniem netiek atklāts - tad šī ir pirmā grupa - O (I).

Parasti organisms ražo antivielas pret tiem antigēniem (A vai B), kas neatrodas eritrocītos - tie ir aglutinīni asins plazmā. Tas ir, personām ar otro asins grupu - A (II) - antigēni A atrodas uz eritrocītiem, un antivielas pret B antigēniem būs plazmā - tiek apzīmēti kā anti-B (beta-aglutinīns). Tā kā tie paši antigēni (aglutinogēni) uz eritrocītu virsmas un aglutinīni plazmā (A un alfa, B un beta) reaģē viens ar otru un noved pie eritrocītu "pielipšanas", tos nevar saturēt vienas personas asinīs.

ABO grupas sistēmas atklāšana ļāva saprast, kāpēc asins pārliešana dažkārt bija veiksmīga un dažreiz izraisīja smagas komplikācijas. Tika formulēts asins grupu saderības jēdziens. Piemēram, ja persona ar otro asins grupu - A (II), kas satur antivielas pret B antigēnu, tiek pārlieta ar trešo asins grupu - B (III), notiks antigēnu un antivielu reakcija, kas novedīs pie sarkano asins šūnu saķeres un iznīcināšanas un var izraisīt nopietnas sekas līdz nāvei. Tādēļ asins grupām pārliešanas laikā jābūt saderīgām.

Asins grupu nosaka pēc eritrocītu adhēzijas esamības vai neesamības, izmantojot serumus, kas satur standarta antigēnus un antivielas.

Transfūzijas centros donoru asins somas vai asins komponenti tiek apzīmēti ar “O (I)”, “A (II)”, “B (III)” vai “AB (IV)”, lai palīdzētu ātri pareizās grupas asinis, kad tas ir nepieciešams.

Kāpēc tiek izmantoti pētījumi?

Lai uzzinātu, kuras asinis var droši dot pacientam. Ir ārkārtīgi svarīgi pārliecināties, vai ziedotās asinis ir saderīgas ar saņēmēja asinīm - tās personas, kurai tās tiks pārlietas. Ja donora asinis vai tā sastāvdaļas satur antivielas pret antigēniem, kas atrodas saņēmēja eritrocītos, tad var attīstīties smaga pārliešanas reakcija, ko izraisa eritrocītu iznīcināšana asinsvadu gultnē.

Kad tiek plānots pētījums?

• Pirms asins pārliešanas - gan tiem, kam tas nepieciešams, gan donoriem.

Asins un tā sastāvdaļu pārliešana visbiežāk ir nepieciešama šādās situācijās:

• • smaga anēmija
  • asiņošana, kas rodas operācijas laikā vai pēc tās
  • smagas traumas
  • jebkuras izcelsmes milzīgs asins zudums,
  • vēzis un ķīmijterapijas blakusparādības,
  • asins recēšanas traucējumi, īpaši hemofilija.
• Pirms operācijas.

VISPĀRĪGI NOTEIKUMI

ABO asins grupu sistēma sastāv no diviem grupas aglutinogēniem - A un B un diviem atbilstošiem aglutinīniem plazmā - alfa (anti-A) un beta (anti-B). Dažādas šo antigēnu un antivielu kombinācijas veido četras asins grupas: 0 grupa (1) - nav abu antigēnu; A grupa (II) - eritrocītos ir tikai antigēns A; B grupa (III) - uz eritrocītiem ir tikai antigēns B; AB (IV) grupa - antigēni A un B atrodas uz eritrocītiem.

ABO sistēmas unikalitāte slēpjas faktā, ka nemunizētu cilvēku plazmā ir dabiskas antivielas pret antigēnu, kas nav eritrocītos: 0 (1) grupas personām - antivielas pret A un B; A (II) grupas personām - anti-B antivielas; B (III) grupas personām - anti-A-antivielas; AB (IV) grupas indivīdiem nav antivielu pret ABO sistēmas antigēniem.

Nākamajā tekstā anti-A un anti-B antivielas tiks dēvētas par anti-A un anti-B.

ABO asins grupas noteikšana tiek veikta, identificējot specifiskus antigēnus un antivielas (dubultā vai krusteniskā reakcija). Anti-A un anti-B tiek konstatēti asins serumā, izmantojot standarta eritrocītus A (II) un B (III). Antigēnu A un B klātbūtne vai trūkums uz eritrocītiem tiek noteikts, izmantojot atbilstošas \u200b\u200bspecifikas monoklonālās vai poliklonālās antivielas (standarta hemaglutinējošos serumus).

Asins grupas noteikšana tiek veikta divas reizes: primārais pētījums - medicīnas nodaļā (asins savākšanas komanda); apstiprinošais pētījums - laboratorijas nodaļā. Imūnhematoloģisko laboratorisko pētījumu veikšanas algoritms asins pārliešanas laikā parādīts attēlā. 18.1.

Asinsgrupas noteikšanas rezultāts tiek ierakstīts slimības vēstures sejas lapas augšējā labajā stūrī vai donoru reģistrā (kartē) ar datumu un parakstīts ārsta, kurš veicis noteikšanu.

Krievijas ziemeļrietumos ABO sistēmas asins grupu sadalījums populācijā ir šāds: 0 (I) grupa - 35%; A (II) grupa - 35-40%; B (III) grupa - 15-20%; AB (IV) grupa - 5-10%.

Jāatzīmē, ka ir dažādi antigēna A (lielākā mērā) un antigēna B veidi (vāji varianti). Visizplatītākie antigēna A veidi - A 1 un A2. Antigēna A1 izplatība A (II) un AB (IV) grupas indivīdos ir 80%, bet antigēna A2 - aptuveni 20%. Asins paraugos ar A2 var būt anti-A1 antivielas, kas mijiedarbojas ar standarta A (II) grupas eritrocītiem. Anti-A 1 klātbūtne tiek noteikta, savstarpēji nosakot asins grupas un veicot individuālu savietojamību.

Lai diferencēti noteiktu antigēna A variantus (A1 un A2), ir jāizmanto specifiski reaģenti (fitohemaglutinīni vai monoklonālas antivielas anti-A1. A2 (II) un A2B (IV) grupas pacientus nepieciešams pārliet ar attiecīgi A grupas eritrocītus saturošiem asins komponentiem. 2 (II) un A2 B (IV). Var ieteikt arī mazgātu eritrocītu pārliešanu: 0 (I) - pacientiem ar A 2 (II) asins grupu; 0 (I) un B (III) - pacientiem ar A asins grupu 2 B (II).

18.4. Tabula. ABO asins grupas noteikšanas rezultāti
Pētījumu rezultāti						Pārbaudīto asiņu piederība grupai
eritrocīti ar reaģentu			serums (plazma) ar standarta eritrocītiem
anti-AB	anti-A	anti-B	0 (es)	A (II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (es)
+	+	-	-	-	+	A (II)
+	-	+	-	+	-	B (III)
+	+	+	-	-	-	AB (IV)
Apzīmējumi: + - aglutinācijas klātbūtne, - - aglutinācijas neesamība

ABO sistēmā ietilpstošās asins grupas noteikšana

Asins grupas nosaka ar standarta serumiem (vienkārša reakcija) un parastajiem eritrocītiem (dubultā vai krusteniskā reakcija).

Asins grupu nosaka, veicot vienkāršu reakciju ar divām standarta izohemaglutinējošām serumiem.

• Noteikšanas gaita [parādīt] .

  Asins grupas noteikšana tiek veikta labā apgaismojumā un temperatūrā no + 15 līdz + 25 ° C uz tabletēm. Tabletes kreisajā pusē ierakstiet 0 (1), vidū - A (II), labajā pusē - B (III). Tabletes augšējās malas vidū tiek atzīmēts donora uzvārds vai pārbaudāmo asiņu skaits. Izmantojiet trīs grupu (O, A, B) aktīvos standarta serumus ar divu sēriju titru vismaz 1:32. Serumi tiek ievietoti īpašās plauktiņās divās rindās. Katram serumam atbilst marķēta pipete. Papildu kontrolei tiek izmantots AB (IV) grupas serums.

  Vienu vai divus pilienus standarta serumu uzklāj uz plāksnes divās rindās: 0 (1) grupas serums - kreisajā pusē, A (II) grupas serums - vidū, B (III) grupas serums - labajā pusē.

  Asins pilienus no pirksta nūjas vai mēģenes uzklāj ar pipeti vai stikla nūju pie katra seruma piliena un sajauc ar nūju. Asins daudzumam jābūt 8-10 reizes mazākam nekā serumā. Pēc sajaukšanas plāksni vai tableti maigi sakrata ar rokām, lai veicinātu ātrāku un precīzāku sarkano asins šūnu aglutināciju. Sākoties aglutinācijai, bet ne agrāk kā pēc 3 minūtēm, seruma pilieniem ar eritrocītiem, kur ir notikusi aglutinācija, pievieno vienu pilienu 0,9% nātrija hlorīda šķīduma un novērošanu turpina, līdz ir pagājušas 5 minūtes. Pēc 5 minūtēm nolasiet reakciju caurlaidīgā gaismā.

  Ja aglutinācija nav skaidra, seruma un asiņu maisījumam papildus pievieno vienu pilienu 0,9% nātrija hlorīda šķīduma, pēc kura tiek izdarīts secinājums par piederību grupai (18.4. Tabula).

• Reakcijas rezultāti [parādīt] .
  1. Aglutinācijas neesamība visos trīs pilienos norāda, ka pētāmajās asinīs nav aglutinogēna, tas ir, asinis pieder 0 (I) grupai.
  2. Aglutinācijas sākums pilienos ar 0 (I) un B (III) serumu norāda, ka asinīs ir aglutinogēns A, tas ir, asinis pieder A (II) grupai.
  3. Aglutinācijas klātbūtne pilienos ar 0 (I) un A (II) grupas serumiem norāda, ka testa asinis satur aglutinogēnu B, tas ir, B (III) grupas asinis.
  4. Aglutinācija visos trīs pilienos norāda uz aglutinogēnu A un B klātbūtni pētāmajās asinīs, tas ir, asinis pieder AB (IV) grupai. Tomēr šajā gadījumā, ņemot vērā to, ka nespecifiskas reakcijas dēļ ir iespējama aglutinācija ar visiem serumiem, uz plāksnes vai plāksnes ir jāpieliek divi vai trīs pilieni AB (IV) grupas standarta seruma un tiem jāpievieno 1 piliens testa asiņu. Serums un asinis tiek sajaukti, un reakcijas rezultāts tiek novērots 5 minūtes.

     Ja aglutinācija nenotiek, tad pētāmās asinis tiek klasificētas kā AB (IV). Ja aglutinācija parādās ar AB (IV) grupas serumu, tad reakcija ir nespecifiska. Vājas aglutinācijas gadījumā un visos šaubīgos gadījumos asinis tiek atkārtoti pārbaudītas ar citu sēriju standarta serumiem.

ABO asins grupas dubultreakcijas noteikšana
(pēc standarta serumiem un standarta eritrocītiem)

Standarta eritrocīti ir 0 (I), A (II) un B (III) grupas svaigu vietējo eritrocītu (vai testa šūnu, kas mazgāti no konservanta) 10-20% suspensija 0,9% nātrija hlorīda šķīdumā vai citrāta-fizioloģiskā šķīdumā. Vietējos standarta eritrocītus var lietot 2-3 dienas, ja tos uzglabā izotoniskā fizioloģiskā šķīdumā + 4 ° C temperatūrā. Konservētus standarta eritrocītus 2 mēnešus uzglabā + 4 ° C temperatūrā un pirms lietošanas mazgā no konservanta šķīduma.

Ampulas vai flakoni ar standarta serumiem un standarta eritrocītiem tiek ievietoti īpašos statīvos ar atbilstošu marķējumu. Lai darbotos ar reaģentu tipēšanu, tiek izmantotas sausas, tīras pipetes, kas atdalītas katram reaģentam. Stikla (plastmasas) stieņu un pipešu mazgāšanai vārglāzes sagatavo ar 0,9% nātrija hlorīda šķīdumu.

Lai noteiktu grupu, mēģenē bez stabilizatora ņem 3-5 ml asiņu. Asinīm vajadzētu apmesties 1,5-2 stundas + 15-25 ° C temperatūrā.

• Noteikšanas gaita [parādīt] .

  Divus pilienus (0,1 ml) divu sēriju 0 (I), A (II), B (III) grupas standarta serumu uzklāj uz plāksnes. Attiecīgi katrai serumu grupai ir viens mazs piliens (0,01 ml) 0 (I), A (II), B (III) grupas standarta eritrocītu. Vienu pilienu testa asiņu pievieno standarta serumiem un divus pilienus testa seruma pievieno standarta eritrocītiem. Asins daudzumam jābūt 8-10 reizes mazākam nekā serumā. Pilienus sajauc ar stikla stieni, un, 5 minūtes kratot tableti rokās, tiek uzraudzīta aglutinācijas sākšanās. Ja aglutinācija nav skaidra, seruma un asiņu maisījumam papildus pievieno vienu pilienu 0,9% nātrija hlorīda šķīduma (0,1 ml), pēc kura tiek izdarīts secinājums par piederību grupai (18.4. Tabula).

• ABO sistēmas asins grupas noteikšanas rezultātu novērtējums [parādīt] .
  1. Aglutinācijas klātbūtne ar standarta eritrocītiem A un B un aglutinācijas trūkums divu sēriju trijos standarta serumos norāda, ka testa serums satur gan aglutinīnus, gan alfa, gan beta un testa eritrocīti nesatur aglutinogēnus, tas ir, asinis pieder pie 0 (I) grupas. ...
  2. Aglutinācijas klātbūtne ar 0 (I), B (III) grupas standarta serumiem un B (III) grupas standarta eritrocītiem norāda, ka pētītie eritrocīti satur aglutinogēnu A un testa serums satur beta aglutinīnu. Tāpēc asinis pieder A (II) grupai.
  3. Aglutinācijas klātbūtne ar 0 (I), A (II) grupas standarta serumiem un A (II) grupas standarta eritrocītiem norāda, ka pētītie eritrocīti satur aglutinogēnu B un testa serums satur alfa aglutinīnu. Līdz ar to asinis pieder B (III) grupai.
  4. Aglutinācijas klātbūtne ar visiem standarta serumiem un aglutinācijas neesamība ar visiem standarta eritrocītiem norāda, ka pētāmajos eritrocītos ir abi aglutinīni, tas ir, asinis pieder AB (IV) grupai.

Asins grupas piederības noteikšana
izmantojot anti-A un anti-B tsoliclones

Tsoliklones anti-A un anti-B (monoklonālas antivielas pret A un B antigēniem) ir paredzēti, lai noteiktu cilvēka ABO sistēmas asins grupu, nevis standarta izohemaglutinējošus serumus. Katrai asins grupas noteikšanai izmantojiet vienu anti-A un anti-B reaģenta partiju.

• Noteikšanas gaita [parādīt] .

  Vienu lielu pilienu anti-A un anti-B tsoliklonu (0,1 ml) uzklāj uz plāksnes (plāksnes) ar atbilstošiem uzrakstiem: "Anti-A" vai "Anti-B". Liek blakus vienam nelielam testa asiņu pilienam (asins reaģenta attiecība ir 1:10), pēc tam reaģents un asinis tiek sajaukti un reakcijas norisi uzrauga, viegli sakratot tableti vai plāksni.

  Aglutinācija ar anti-A un anti-B tsolikloniem parasti notiek pirmajās 5-10 sekundēs. Novērošana jāveic 2,5 minūtes, ņemot vērā iespēju vēlāk sākt aglutināciju ar eritrocītiem, kas satur vāja veida A vai B antigēnus.

• Aglutinācijas reakcijas ar anti-A un anti-B tsolikloniem rezultātu novērtējums sniegts tabulā. 18.4, kurā iekļauti arī aglutinīnu noteikšanas rezultāti donoru serumā, izmantojot standarta eritrocītus.

Ja ir aizdomas par spontānu aglutināciju personām ar AB (IV) asins grupu, tiek veikts kontroles pētījums ar 0,9% nātrija hlorīda šķīdumu. Reakcijai jābūt negatīvai.

Anti-A (sārts) un anti-B (zils) cikloni tiek ražoti gan dabiskā, gan liofilizētā veidā ampulās pa 20, 50, 100 un 200 devām ar šķīdinātāju, kas pievienots katrai ampulai, 2, 5, 10 , Attiecīgi 20 ml.

Papildu ABO asins grupas noteikšanas pareizības kontrole ar anti-A un anti-B reaģentiem ir anti-AB monoklonālais reaģents ("Hematolog", Maskava). Anti-AB reaģentu ieteicams lietot paralēli gan imūno poliklonālajiem serumiem, gan monoklonālajiem reaģentiem. Reakcijas ar anti-AB reaģentu rezultātā attīstās A (II), B (III) un AB (IV) grupas eritrocītu aglutinācija; 0 (I) grupas eritrocītiem nav aglutinācijas.

Kļūdas, nosakot grupas piederumus

Kļūdas asins grupu noteikšanā var būt trīs iemeslu dēļ:

1. tehnisks;
2. standarta serumu un standarta eritrocītu mazvērtība;
3. pētāmo asiņu bioloģiskās īpašības.

Kļūdas tehnisku iemeslu dēļ ir šādas:

• a) nepareizs serumu izvietojums uz plāksnes;
• b) nepareiza serumu un eritrocītu kvantitatīvā attiecība;
• c) nepietiekami tīru tablešu un citu priekšmetu lietošana, kas nonāk saskarē ar asinīm. Katram serumam jābūt atsevišķai pipetei; pipešu skalošanai jāizmanto tikai 0,9% nātrija hlorīda šķīdums;
• d) nepareiza testa asiņu reģistrēšana;
• e) aglutinācijas reakcijai noteiktā laika neievērošana; ar steigu, ja reakcija tiek ņemta vērā pirms 5 minūšu beigām, aglutinācija var nenotikt, ja pētāmajās asinīs ir vāji aglutinogēni; ja reakcija ir pāreksponēta ilgāk par 5 minūtēm, pilieni var nožūt no malām, imitējot aglutināciju, kas arī novedīs pie kļūdaina secinājuma;
• f) aglutinācijas trūkums augstas (virs 25 ° C) apkārtējās temperatūras dēļ. Lai izvairītos no šīs kļūdas, darbam karstā klimatā ieteicams izmantot īpaši sagatavotas sūkalas; noteikt asins grupas uz šķīvja vai plastmasas paplātes, kuras dibena ārējā virsma ir iegremdēta aukstā ūdenī.
• g) nepareiza centrifugēšana: nepietiekama centrifugēšana var izraisīt kļūdaini negatīvu rezultātu, un pārmērīga centrifugēšana var izraisīt kļūdaini pozitīvu rezultātu.

Kļūdas defektu standarta serumu un standarta eritrocītu lietošanas dēļ:

• a) vāji standarta serumi, kuru titrs ir mazāks par 1:32 vai kuriem ir beidzies datums, var izraisīt novēlotu un vāju aglutināciju;
• b) nelietojamu standarta serumu vai eritrocītu, kas tika sagatavoti nesterili un nepietiekami konservēti, izmantošana izraisa nespecifiskas "baktēriju" aglutinācijas parādīšanos.

Kļūdas atkarībā no analizēto asiņu bioloģiskajām īpašībām:

Kļūdas atkarībā no pētīto eritrocītu bioloģiskajām īpašībām:

• a) novēlotu un vāju aglutināciju izskaidro ar "vājām" antigēnu formām, eritrocītiem, biežāk - ar vāju aglutinogēna A 2 klātbūtni A un AB grupās. Tajā pašā laikā asins grupas noteikšanas gadījumā, nepārbaudot seruma aglutinīnu klātbūtni (vienkārša reakcija), var rasties kļūdas, kā rezultātā A 2 B grupas asinis tiek definētas kā B grupas grupas (III), bet asinis A2 - kā grupas 0 (I). Tāpēc, lai izvairītos no kļūdām, gan donoru, gan recipientu asins grupas noteikšana jāveic, izmantojot standarta eritrocītus (dubultā vai krusteniskā reakcija). Lai identificētu aglutinogēnu A 2, ieteicams pētījumu atkārtot ar citiem reaģentu veidiem (partijām), izmantojot dažādus laboratorijas stikla traukus, palielinot reakcijas reģistrācijas laiku.

  Specifiski reaģenti asins grupas noskaidrošanai A antigēna A (A1, A2, A3) vāju variantu klātbūtnē ar tiešas aglutinācijas reakcijas metodi ir anti-A sl tsoliclon un anti-A reaģents).

• b) "panaglutinācija" vai "autoaglutinācija", tas ir, asiņu spēja dot tādu pašu nespecifisko aglutināciju ar visiem serumiem un pat ar tiem. Šādas reakcijas intensitāte pēc 5 minūtēm vājinās, savukārt patiesā aglutinācija palielinās. Visbiežāk to konstatē hematoloģiskiem, onkoloģiskiem pacientiem, sadedzinātiem pacientiem utt. Kontrolei ieteicams novērtēt, vai pārbaudīto eritrocītu aglutinācija notiek AB (IV) grupas standarta serumā un fizioloģiskā šķīdumā.

  Asins grupu "panaglutinācijā" var noteikt pēc eritrocītu trīs reizes mazgāšanas. Lai novērstu nespecifisko aglutināciju, plāksni 5 minūtes ievieto termostatā + 37 ° C temperatūrā, pēc tam nespecifiskā aglutinācija pazūd, bet patiesā paliek. Ieteicams atkārtot noteikšanu, izmantojot monoklonālas antivielas, uzstādot Kumbsa testu.

  Gadījumā, ja eritrocītu mazgāšana nedod vēlamo rezultātu, ir nepieciešams atkārtoti ņemt asins paraugu iepriekš sasildītā mēģenē, ievietot paraugu termiskajā traukā, lai uzturētu + 37 ° C temperatūru, un nogādāt laboratorijā pētniecībai. Asins grupas noteikšana jāveic + 37 ° C temperatūrā, kurai izmanto iepriekš sasildītus reaģentus, fizioloģisko šķīdumu un tableti.

• c) pārbaudīto asiņu eritrocīti tiek salocīti "monētu kolonnās", kuras makroskopijas laikā var sajaukt ar aglutinātiem. 1-2 pilienu izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma pievienošana, kam seko maiga tabletes šūpošana, parasti iznīcina "monētas".
• d) jaukta vai nepilnīga aglutinācija: daži no eritrocītiem aglutinējas, bet citi paliek brīvi. To novēro A (II), B (III) un AB (IV) grupas pacientiem pēc kaulu smadzeņu transplantācijas vai pirmajos trīs mēnešos pēc 0 (I) grupas asins pārliešanas. DiaMed gēla testā skaidri pārbauda perifēro eritrocītu neviendabīgumu.

Kļūdas atkarībā no pētītā seruma bioloģiskajām īpašībām:

• a) atšķirīgas specifikas antivielu noteikšana ikdienas testēšanas laikā ir iepriekšējas sensibilizācijas rezultāts. Ieteicams noteikt antivielu specifiskumu un atlasīt tipizētus eritrocītus bez antigēna, pret kuru tika konstatēta imunizācija. Imunizētajam saņēmējam ir individuāli jāizvēlas saderīgas donora asinis;
• b) nosakot standarta eritrocītu "monētu kolonnu" veidošanos pārbaudītā seruma klātbūtnē, ir ieteicams apstiprināt nenormālo rezultātu, izmantojot 0 (I) grupas standarta eritrocītus. Lai atšķirtu "monētu kolonnas" un patiesos aglutinātus, pievienojiet 1-2 pilienus izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma un sakratiet plāksni, kamēr "monētu kolonnas" tiek iznīcinātas;
• c) anti-A - vai anti-B antivielu trūkums. Varbūt jaundzimušajiem un pacientiem ar humorālas imunitātes nomākšanu;
kopējais lapu skaits:10

LITERATŪRA [parādīt] .

1. Donora un recipienta imunoloģiskā izvēle asins, tā sastāvdaļu un kaulu smadzeņu transplantācijas pārliešanai / Sast. Šabalins V.N., Serova L.D., Bušmarina T.D. un citi - Ļeņingrada, 1979. - 29 lpp.
2. Kaleko SP, Serebryanaya NB, Ignatovich GP et al. Alosensitizācija hemokomponentu terapijā un histosaderīgu donoru un saņēmēju pāru atlases optimizēšana militārajās slimnīcās / Metodiskā. ieteikumi. - Sanktpēterburga, 1994.- 16 lpp.
3. Praktiskā transfuzioloģija / Red. Kozinets G.I., Birjukova L.S., Gorbunova N.A. et al. - Maskava: Triada-T, 1996. - 435 lpp.
4. Militārās transfuzioloģijas rokasgrāmata / Red. E. A. Ņečajevs. - Maskava, 1991. - 280. lpp.
5. Transfūzijas medicīnas ceļvedis / Red. E. P. Svēdentsova. - Kirovs, 1999.- 716. gadi.
6. Rumjancevs A.G., Agranenko V.A. Klīniskā transfusioloģija. - M.: GEOTAR MEDICINA, 1997. - 575 lpp.
7. Ševčenko Yu.L., Zhiburt E.B., Droša asins pārliešana: ceļvedis ārstiem. - SPb.: Peter, 2000. - 320 lpp.
8. Ševčenko Yu.L., Zhiburt E.B., Serebryanaya N.B. Hemokomponentu terapijas imunoloģiskā un infekciozā drošība. - SPb.: Nauka, 1998. - 232 lpp.
9. Šifmans F.J. Asins patofizioloģija / Tulk. no angļu valodas - M. - SPb.: Izdevniecība BINOM - Ņevska dialekts, 2000. - 448 lpp.
10. Asins pārliešana klīniskajā medicīnā / Red. P. L. Mollisons, C. P. Engelfriet, M. Contreras. Oksforda 1988 1233 lpp.

Avots: Medicīniskās laboratorijas diagnostika, programmas un algoritmi. Red. prof. Karpiščenko A.I., Sanktpēterburga, Intermedica, 2001