Corynebacterium difterie. Corinebacterii

23.06.2021

Difteria este considerată una dintre cele mai periculoase boli, agentul patogen se numește Corynebacterium species (spp), o bacterie care are o formă asemănătoare tijei.

Corpul unei persoane sănătoase conține o cantitate mică de corinebacterii în intestinul gros. Cu modificări patologice, infecție suplimentară, activitatea vitală a microorganismelor duce la boală.

Bacteria este împărțită în mai multe tipuri, fiecare dintre ele unică, având un caracter specific. Pe baza varietății, microorganismele afectează pielea, afectează activitatea organelor interne. Persoanele cu imunitate slabă sunt expuse riscului. Bacteremia va începe să se dezvolte atunci când bacteriile infectează cateterele abdominale, venoase.

Dacă bărbații sau femeile au corinebacterii, probabilitatea de artrită septică și pneumonie este mare.

Mobileuncus

Există boli infecțioase ascunse, inclusiv bacterii periculoase precum mobiluncus spp și corynebacterium spp prezente în ADN. Prezența bacteriilor periculoase în urină, sperma sau frotiu va duce la procese inflamatorii. La bărbați, se dezvoltă patologia tractului urogenital, ducând la orhiepididimita, non-gonococică și altele.

Adesea, un microorganism mobil se găsește în secrețiile vaginale feminine, atât bacteriene, cât și sănătoase. Odată cu acumulări de mobiluncus în zona rectală, poate apărea contaminarea vaginului, iar infecția va apărea în timpul sexului anal.

Pentru a diagnostica prezența bacteriilor sunt utilizate mai multe metode:

Reacția în lanț a polimerazei;
Examen bacterioscopic.
Metode serologice.

Te poți infecta cu boala doar prin contactul cu o persoană bolnavă. Persoanele care au suferit anterior de boala reprezinta un pericol si pentru ceilalti, avand in organism o bacterie patogena.

Bacteriile sunt transmise prin picături în aer sau se depun pe obiectele de uz casnic: acestea sunt atributele vaselor, așternutului, hainelor, lucrurilor aparținând categoriei de igiena personală și așa mai departe. Dacă o persoană infectată a avut contact cu alimente, acestea devin și cauzele infecției.

Persoanele care intră în contact cu pacienții cu difterie acută cresc riscul propriei infecții cu picăturile din aer.

Difteria este adesea asimptomatică pentru o lungă perioadă de timp, fără absența spitalizării, pacientul este capabil să infecteze mulți oameni sănătoși din jur. Un pacient recuperat este purtător pentru încă 3-8 săptămâni, iar uneori perioada crește la 3-5 luni.

Tratament

Pentru ca corinebacterii să nu provoace apariția unor boli ale organelor de reproducere, ale sistemului urinar, înainte de a planifica o sarcină, doi parteneri trebuie testați pentru prezența bacteriilor.

Dacă testele arată un rezultat pozitiv, medicii vor prescrie un curs de antibiotice. Este interzisă auto-medicația; este necesar un regim de tratament bine ales pentru fiecare pacient.

Bărbații care trăiesc în climat cald și uscat sunt predispuși la eritrasmă, o patologie legată de dermatita cutanată. Boala se manifestă în zona pliurilor corporale, cu semne similare cu dermatita sau afte (al doilea nume este).

Atunci când prezența corinebacteriilor la o femeie este diagnosticată, cuantificarea precisă este importantă. Cu moderată, un curs de medicamente este suficient. Dacă volumul depășește norma, se efectuează studii suplimentare pentru a identifica alte patologii infecțioase vaginale. Când sunt găsite, bolile concomitente se vindecă mai întâi.

Când prescrie un tratament, o femeie trebuie să amâne concepția. Când au trecut cel puțin 30 de zile după recuperarea completă, te poți gândi la sarcină.

Studiu microbiologic pentru identificarea agentului cauzal al difteriei (C. diphtheriae) în biomaterialul studiat.

Sinonime rusă

Semănat pe bacili Leffler, semănat pe BL, semănat pe un bacil difteric.

Sinonime în engleză

Cultura Corynebacterium diphtheriae, cultura Diphtheria.

Metodă de cercetare

Metoda microbiologică.

Ce biomaterial poate fi folosit pentru cercetare?

Tampon faringian și nazal.

Care este modalitatea corectă de cercetare?

Nu necesită pregătire.

Informații generale despre studiu

Corynebacterium diphtheriae (bacilii lui Leffler) sunt bacterii gram-pozitive din genul Corynebacterium care cauzează difterie și sunt capabile să producă toxină difterică. Boala se transmite prin picături în aer, sursa de infecție sunt persoanele bolnave sau purtătorii de bacterii.

Perioada de incubație este în medie de 2-5 zile. Inflamația fibrinoasă a membranelor mucoase ale orofaringelui și tractului respirator apare cu formarea de pseudomembrane și cu simptome de intoxicație generală.

În forma toxică a difteriei, pot fi afectate și inima și sistemul nervos. În unele cazuri, transportul asimptomatic este posibil.

Diagnosticul de difterie este clinic și cultura difteriei se face pentru confirmare.

La ce se folosește cercetarea?

Pentru a confirma diagnosticul de difterie.
Pentru diagnosticul diferențial al bolilor care apar cu simptome similare, cum ar fi amigdalita de diverse origini, abcesul paraamigdalian, mononucleoza infecțioasă, laringotraheita acută, epiglotita, astmul bronșic.
Pentru a evalua eficacitatea terapiei cu antibiotice.

Când este programat studiul?

Dacă bănuiți difterie.
Când se știe că pacientul a fost în contact cu pacienți cu difterie.
După terapia cu antibiotice - cel puțin 2 săptămâni după terminarea cursului de antibiotice.
În unele cazuri, înainte de internarea într-un spital (în scop profilactic).

Ce înseamnă rezultatele?

Valori de referinta: nicio creștere.

Identificarea agentului cauzal al difteriei confirmă diagnosticul de difterie sau, dacă nu există simptome ale bolii, indică purtătorul bacteriilor. Dacă cultura este negativă la un pacient cu suspiciune de difterie, diagnosticul poate fi confirmat atunci când persoana de contact are o cultură pozitivă, adică agentul cauzal al difteriei este eliberat.

Motive pentru un rezultat pozitiv

Difteria sau transportul asimptomatic al C. diphtheriae.

Motive pentru un rezultat negativ

Lipsa difteriei. Excepție fac cazurile în care tratamentul cu antibiotice a fost efectuat la momentul studiului.

Ce poate influența rezultatul?

Antibioterapie anterioară.

Notite importante

Diagnosticul de difterie se bazează pe tabloul clinic al bolii, astfel încât tratamentul trebuie început înainte de a obține confirmarea de laborator a bolii. Dacă cultura este pozitivă, este necesar să se examineze tulpina izolată de C. diphtheriae pentru toxicitate.

Semănat pentru floră cu determinarea sensibilității la antibiotice

Cine comandă studiul?

Infecționist, terapeut, medic generalist, pediatru, ORL.

Literatură

Macgregor R.R. Corynebacterium diphtheriae. În: Principii și practica bolilor infecțioase / G.L. Mandell, Bennett J.E., Dolin R (eds); a 6-a ed. - Churchill Livingstone, Philadelphia, PA 2005 .-- 2701 p.
Efstratiou A. Ghid de laborator pentru diagnosticul infectiilor cauzate de Corynebacterium diphtheriae si C. ulceran / A. Efstratiou, R.C. Georg // Bolile transmisibile și sănătatea publică. - 1999. - Vol. 2, nr 4. - P. 250–257.
Abordări actuale ale diagnosticului de laborator al difteriei / A. Efstratiou // J. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 181 (Supliment 1). - P. S138 – S145.

Corynebacterium diphtheriae a fost descoperit și apoi izolat în cultură pură acum 100 de ani. Semnificația sa etiologică finală în apariția difteriei a fost confirmată câțiva ani mai târziu, când s-a obținut o toxină specifică care provoacă moartea animalelor cu fenomene similare celor observate la pacienții cu difterie. Corynebacterium diphtheriae aparține genului Corynebacterium, un grup de bacterii corynefromice. Corynebacterium diphtheriae sunt tije drepte sau ușor curbate cu prelungiri sau capete ascuțite. Împărțirea în fractură și despicare oferă un aranjament caracteristic sub forma unui număr roman V sau degete răspândite, dar deseori se găsesc bastoane situate unic în lovituri. Grupuri mari de ele, care sunt în frotiuri preparate din mucusul faringelui, nasului, scurgerii rănilor, au un caracter de simțit. Lungimea medie a tijelor este de 1-8 microni, lățimea este de 0,3 / 0,8 microni. Sunt nemișcați, nu formează spori și capsule. Corynebacterium diphtheriae este un anaerob facultativ. Bastoanele de difterie sunt rezistente la uscare. La o temperatură de 60 ° C în culturi pure, acestea sunt distruse în 45-60 de minute. În produsele patologice, adică în prezența protecției proteice, acestea pot rămâne viabile timp de o oră la o temperatură de 90 ° C. Temperaturile scăzute nu au un efect dăunător asupra bacililor difteriei. În dezinfectanții de concentrație normală, aceștia mor rapid.

De remarcat polimorfismul extrem de mare al bastonașelor de difterie, manifestat prin modificarea grosimii și formei acestora (umflate, în formă de balon, segmentate, filiforme, ramificate).Boabele Babesha se găsesc în îngroșările terminale, iar uneori în partea centrală. , dupa 12 ore de crestere a culturii, cu o culoare deosebita Ernst, care sunt acumulari de volutina. Există dovezi că volutina este un polifosfat anorganic cu lanț lung. MA Peshkov își asumă natura metafosfatului. A. A. Imshanetsky crede că volutina este un produs secundar al proceselor metabolice. Se știe că fosforul este necesar pentru formarea boabelor. Există, de asemenea, presupuneri cu privire la nevoia de mangan și zinc pentru acest proces.

Boabele de volutină se găsesc în culturile zilnice, iar apoi numărul bacteriilor cu prezența boabelor scade.Citoplasma conține și o nucleotidă, membrane intracitoplasmatice - lizozomi, o vacuola.

Bacteriile sunt colorate cu toți coloranții de anilină. Când este colorat prin metoda Gram - pozitiv. Metoda Neisser este folosită pentru vopsirea boabelor de volutină. Când sunt colorate cu această metodă, boabele de volutină, care au o afinitate mare pentru albastrul de metilen, sunt colorate în mod persistent în albastru, iar albastrul de metilen este îndepărtat din corpul bacterian cu colorare suplimentară cu crisoidină sau bismarckbraun.

Agentul cauzal al difteriei este heterotrof, adică aparține grupului de bacterii care necesită materie organică pentru creșterea lor. Mediile folosite pentru cultivare trebuie să conțină aminoacizi ca sursă de carbon și azot - alanină, cistină, metionină, valină etc. În acest sens, mediile care conțin proteine animale: sânge, ser, lichid ascitic sunt mediile preferate pentru cultivare. Pe baza acesteia a fost creat mediul clasic al lui Leffler, apoi mediul lui Clauberg, Tyndall, mediul de acumulare.

Pe mediul lui Leffler, coloniile de bacil difteric au o suprafață strălucitoare, umedă, margini netede și o culoare gălbuie. După câteva zile de creștere, apar striații radiale ale coloniilor și linii concentrice slab exprimate. Diametrul coloniilor ajunge la 4 mm. Primele semne de creștere apar după 6 ore într-un termostat la 36-38 ° C. Creșterea este clar vizibilă la 18 ore după însămânțare. pH-ul optim pentru creșterea bacilului difteric este 7,6. Corynebacterium diphtheria este foarte adesea greu de distins de alte tipuri de corynebacterium. Pentru determinarea speciei se folosește un complex de caracteristici culturale și biochimice.

Tipul de corynebacterium diphtheria este, de asemenea, eterogen, este subdivizat în 3 tipuri culturale și biochimice gravis, mitis, intermedins, în două soiuri - toxigen și netoxigen, o serie de tipuri serologice și tipuri de fagi.

În prezent, în majoritatea teritoriilor circulă două tipuri culturale și biochimice - gravis și mitis. Tipul de intermedin, care înainte se distingea destul de larg, a fost întâlnit recent recent. Cea mai clară diferențiere a tipurilor poate fi realizată în funcție de forma coloniilor atunci când cultura este crescută pe agar sânge cu adaos de telurit. Coloniile de tip gravis în 48-72 ore ating un diametru de 1-2 mm, au margini ondulate, striații radiale și un centru plat. Aspectul lor este de obicei comparat cu o floare de margaretă. Coloniile sunt plictisitoare datorită capacității bacteriilor de a reduce teluritul, care apoi se combină cu hidrogenul sulfurat rezultat, care este de culoare gri-negru. Când cresc pe bulion, culturile de tip gravis formează o peliculă care se prăbușește la suprafață. Când sunt semănate pe mediul Giss cu adăugarea de ser, ele descompun polizaharidele - amidon, dextrină, glicogen pentru a forma acid.

Culturile de tip Mitis pe agar-sânge cu telurit se dezvoltă sub formă de colonii rotunde, ușor convexe, cu margini netede, negre mate. Creșterea pe bulion dă turbiditate și sedimente uniforme. Nu descompun amidonul, dextrina și glicogenul.

În frotiuri, tijele de tip gravis sunt adesea scurte, iar cele de tip mitis sunt mai subțiri și mai lungi.

Examinarea microscopică electronică comparativă a tijelor de difterie de diferite tipuri biochimice a arătat prezența unei membrane celulare cu trei straturi la tipurile gravis și mitis. Învelișul de tip intermedin este în două straturi și este de aproape 3 ori mai gros. Între citoplasmă și membrană, există spații umplute cu boabe, care pot fi legate de exotoxină. Este vizibilă striația oblică a bacteriilor, care este creată prin pereții de despărțire între celulele fiice. Aparatul cromozomial, la tipurile gravis si mitis, este reprezentat de boabe obisnuite cu vacuole, la tipul intermedine, este distribuit in toata citoplasma. Într-un microscop electronic, este vizibilă o înveliș multistrat, a cărei prezență explică de ce tijele de difterie sunt uneori gram-negative.

Coloniile de bacterii difterice vin în forme S-, R- și SR, acestea din urmă fiind considerate intermediare. N. Morton crede că coloniile de forme S sunt inerente tipului mitis, formele SR sunt de tip gravis. Pe lângă aceste forme de bază, există colonii mucoide - forme M, colonii pitice - forme D și colonii gonidiale - forme L. Toate sunt considerate forme de variabilitate disociativă.

Bacteriile difterice trebuie distinse de difteroizi și bacilul pseudodifteric.

Un număr mare de studii sunt dedicate problemelor de variabilitate a bacilului difteric. Posibilitatea apariției formelor atipice în condiții de laborator a fost confirmată de studii epidemiologice.

Variabilitatea biochimică, morfologică, fizico-chimică a bacteriei difteriei, recunoscută de un număr mare de cercetători, complică în mai multe cazuri diagnosticul bacteriologic și obligă la un studiu cuprinzător al culturilor.

Am împărțit toate culturile, izolate în diferite condiții epidemiologice, în 8 grupe; au inclus toate variantele morfologice posibile ale reprezentanților corynebacterium care ne interesează:

Grupa 1 - tije scurte, de aproximativ 2 microni, fara boabe;

Grupa a 2-a - tije scurte, de aproximativ 2 microni, dar ocazional cu boabe;

Grupa a 3-a - bețișoare de mărime medie, lungime de 3-6 microni, lățime de 0,3-0,8 microni, fără granularitate caracteristică;

Grupa a 4-a - tije de dimensiuni medii, lungi de 3-7 microni, late de 0,3-0,8 microni, usor curbate, ocazional cu boabe;

Grupa a 5-a - bețișoare de mărime medie, lungime de 3-6 microni, lățime de 0,3-0,8 microni, ușor curbate, granulate;

Grupa a 6-a - tije lungi, 6-8 microni lungime, 0,3-0,6 microni latime, usor curbate, ocazional cu boabe;

Grupa a 7-a - tije lungi, 6-8 microni lungime, 0,3-0,8 microni latime, de obicei curbate, fara boabe;

Grupa a 8-a - tije scurte, grosiere, de aproximativ 2 µm lungime, aproximativ 1 µm lățime, fără boabe.

Dispunerea tijelor nu a fost luată în considerare în repartizarea pe grupe, dar de regulă aranjamentul caracteristic corespundea morfologiei.

În loturile 1, 2, 3 și 8, care au corespuns ca morfologie bastonașelor lui Hoffmann, aranjamentul a fost de grup, paralel sau sub formă de indivizi unici, în loturile 4, 5 și 6, care au corespuns practic ca morfologie cu adevăratele bacterii difterice. , tijele erau amplasate în unghi sau sub formă de indivizi singuri. În grupa a 7-a, tijele au fost mai des aranjate aleatoriu, împletindu-se între ele. În al 8-lea grup, tijele au fost localizate sub formă de indivizi singuri.

Din cele 428 de culturi studiate, 111 urmau să fie clasificate ca difterie adevărată în ceea ce privește totalitatea caracteristicilor, 209 erau culturi de bastonașe Hoffmann, iar 108 constituiau grupul culturilor atipice. În culturile apropiate de difterie, atipicitatea s-a manifestat prin scăderea activității biochimice, uneori în descompunerea ureei; în culturile care sunt apropiate morfologic de bastonașele lui Hoffmann, în menținerea unui test de cisteină pozitiv, capacitatea de a descompune unul dintre zaharuri.

Din 111 culturi de difterie, 81 de culturi (73%) au fost morfologic tipice, 28 de culturi (27%) au avut morfologia bastonașelor lui Hoffmann. Dintre cele 111 culturi de difterie, au existat 20 de culturi de tip gravis, iar dintre ele doar 9 au fost repartizate grupelor morfologice 1 și 2.

Culturile, care au fost atribuite prin totalitatea trăsăturilor culturilor de bacil Hoffmann, au avut morfologia culturilor tipice de difterie în 20% din cazuri.
25% dintre tulpinile studiate au fost clasificate ca culturi atipice; morfologia lor corespunde atât bacilului difteric, cât și bacilului Hoffmann.

Astfel, proprietățile biochimice și morfologice ale culturilor nu coincid întotdeauna, iar atipicitatea biochimică, precum și morfologică, se observă mai des în culturile izolate în perioada de scădere a morbidității și, prin urmare, de scădere a nivelului de transport.

Trebuie remarcată o scădere generală a activității biochimice a culturilor în ultimii 10-15 ani. Un indicator al acestui lucru este fermentarea tardivă a zaharurilor, care are loc uneori în ziua a 5-6-a, precum și activitatea biochimică diferită a coloniilor aceleiași culturi.

Identificarea biochimică a culturilor pure izolate în condiții de diferite condiții epidemiologice arată că, deși morfologia și proprietățile biochimice adesea nu coincid, principiul general de distribuție a culturii, stabilit din datele morfologice, nu se modifică. Atât cu repartizarea culturilor în funcție de datele morfologice și biochimice, cât și cu identificarea lor completă cu includerea reacțiilor serologice, principiul de distribuție rămâne același: culturile atipice sunt mai frecvente în perioada de bunăstare epidemică, bastoanele lui Hoffmann sunt mai frecvente. adesea găsite în perioada de probleme epidemice și sunt semănate mai mult decât difteria adevărată.

Studiul proprietăților toxigenice ale culturilor izolate pe medii nutritive solide a arătat că și în perioada de prosperitate epidemică se găsesc un număr suficient de purtători de bacili difterici toxigeni. Trebuie remarcat faptul că proprietățile toxigenice nu sunt întotdeauna posibil de captat chiar și în culturi izolate de la pacienți. Aceasta indică necesitatea îmbunătățirii metodelor utilizate pentru determinarea toxicității culturilor.

Rezultatele reacției de aglutinare a culturilor atipice izolate în condiții de diferite condiții epidemiologice au arătat prezența acelorași regularități pentru proprietățile serologice pe care le-am remarcat la studierea morfologiei și biochimiei culturilor. Atipicitatea culturilor izolate în zona prosperă, conform serologiei, a fost mai profundă decât în zonele defavorizate. Deci, într-o zonă prosperă, 26% din culturile atipice au dat o reacție de aglutinare pozitivă, în cele nereușite - 19%.

Una dintre principalele proprietăți ale bacilului difteric este capacitatea de a forma toxine. Toxinogeneza corynebacterium diphtheria este determinată de gena conținută în profag, prin urmare, principalul mijloc de agresiune - formarea de toxine nu este asociată cu cromozomul bacterian.

Toxina difterică este o proteină cu o greutate moleculară de 6.200 daltoni. Puterea toxinei este determinată prin stabilirea unor teste intradermice pentru prezența unui efect necrotic și pentru efectul asupra animalelor susceptibile (efect letal). Puterea toxinei se măsoară folosind doza letală minimă, care este cea mai mică cantitate de toxină care poate provoca moartea unui cobai care cântărește 250 g în zilele 4-5 când este injectată intraperitoneal. Toxina are proprietăți antigenice, care se păstrează atunci când este tratată cu formol, care îi îndepărtează proprietățile toxice. Acest lucru a făcut posibilă utilizarea acestuia pentru prepararea unui medicament profilactic.

Molecula de toxină este formată din două fragmente, dintre care unul este stabil termic și are activitate enzimatică, iar al doilea este termolabil și îndeplinește o funcție de protecție. S-a dovedit sinteza intracelulară a toxinei cu eliberarea acesteia prin tubulii peretelui celular. Sinteza toxinelor are loc atunci când un microbi este crescut într-un mediu lichid - bulion de carne-peptonă cu adaos de glucoză, maltoză și factori de creștere la un pH de 7,8-8,0.

Conform rapoartelor recente, toxina difterice este un produs de origine virală. Ca o confirmare, IV Chistyakova prezintă capacitatea corinebacteriilor netoxigenice de a se transforma în toxigene sub influența unui fag. Posibilitatea transformării culturilor netoxigenice în culturi toxice a fost confirmată în experimente pe culturi unicelulare. Fenomenul descris se numește conversie lizogenă. Cu ajutorul virusurilor usoare obtinute din tulpini toxigenice de gravis a fost posibila transformarea unei variante netoxigene a corynebacterium diphtheria gravis intr-una toxigena.

E.V. Bakulina, M.D. Krylova a sugerat că conversia focală poate fi importantă în procesul epidemiei. În acest sens, s-a început studiul rolului său în formarea tulpinilor toxice de corynebacteria difteriei în natură. Posibilitatea transformării toxicității a fost demonstrată nu numai în sistemele fago-bacteriene, ci și în condiții naturale. Dar, în rândul culturilor locale, acest proces, potrivit unui număr de cercetători, este departe de a fi efectuat des. Motivele pentru aceasta sunt probabil absența producătorilor de fagi temperați, sensibilitatea fagică a tulpinilor locale care este diferită de tulpinile de referință și, prin urmare, nu pot fi receptori de fagi de conversie cu un spectru de acțiune cunoscut.

Numai într-o parte a populației microbiene a fost posibilă transformarea proprietăților toxigene în bastonașe de difterie sub acțiunea fagilor stafilococici și streptococici. În lucrările din ultimii ani, problema conversiei fagilor în procesul epidemiei a primit o evaluare și mai restrânsă. Se crede că tox + corynephages nu joacă un rol independent în procesul epidemic al difteriei. Purtătorii de bastonașe netoxigenice pot fi infectați cu fagul tox + numai împreună cu o tulpină toxigenă, în timp ce fagii stafilococici nu sunt capabili să transforme corinebacteriile netoxigenice. Pentru a efectua conversia în direcția toxicității în corpul uman, este aparent necesar ca un purtător având un fag de conversie să aibă contact strâns cu un purtător care secretă o tulpină lizosensibilă la acest fag. În plus față de capacitatea de a forma toxine, bacteria difteriei are factori patogeni precum hialuronidază, neuraminidază, dezoxiribonuclează, catalază, esterază, peroxidază. Studiul produselor metabolice extracelulare nu a arătat nicio diferență între corinebacterii toxigenice și netoxigenice ale difteriei.

În prezent, pe lângă metoda biochimică descrisă mai sus, metodele serologice și fagice pot fi utilizate pentru tiparea intraspecifică a Corynebacterium diphtheria.

Prezența tipurilor serologice se datorează antigenelor specifice tipului, termostabile, de suprafață și termolabile.

Există o serie de scheme de tipizare serologică. În țara noastră se folosește schema propusă de V.S.Suslova și M.V.Pelevina, dar nu poate oferi clasificarea tuturor tulpinilor netoxice. Numărul de tipuri serologice este în creștere. I. Ewing a stabilit prezența a 4 tipuri serologice - A, B, C și D; D. Robinson și A. Peeney 5 tipuri - I, II, III, IV și V. LP Delyagina a identificat încă 2 tipuri serologice. Se crede că numărul de tipuri serologice este mult mai mare și, în principal, din cauza tipului de mitis. Dintre puținele date disponibile din literatură, nu au fost stabilite regularități în izolarea unui anumit serotip în diferite forme ale procesului infecțios și diferite condiții epidemiologice. Alături de datele privind agresivitatea diferită a culturilor aparținând diferitelor tipuri serologice, există rapoarte în care se respinge legătura dintre tipul serologic și patogenitatea culturilor.

Este caracteristic că diferite tipuri serologice se găsesc în diferite teritorii. Tiparea serologică poate fi utilizată pentru analiza epidemiologică.

În condiții de morbiditate sporadică, număr limitat de purtători, când căutarea sursei de infecție este mult mai dificilă, devine importantă metoda de tipărire a fagilor, ceea ce face posibilă subdivizarea corinebacteriilor în variante serologice și culturale. Marcarea poate fi efectuată în funcție de proprietățile fagilor izolați din cultură și în funcție de sensibilitatea culturii la bacteriofagi specifici. Schema cea mai utilizată este propusă de R. Saragea și A. Maximesco. Permite etichetarea tulpinilor toxigenice și netoxigenice ale tuturor variantelor culturale. Cu ajutorul a 22 de fagi tipici, culturile pot fi subîmpărțite în 3 grupe, în care sunt combinate 21 de fagovariante: grupa 1 - tulpini toxigenice și netoxigenice de tip mitis (fagovariante I, la, II, III); al 2-lea - tulpini toxigenice si netoxigenice de tip intermedin si gravis netoxigeni (fagovarianele IV, V, VI, VII); 13 fagovariante (de la VIII la XIX) au fost incluse în al treilea grup, care au combinat tulpini toxigenice gravis.

Schema a fost testată pe un număr mare de tulpini izolate în România și obținute din muzee din 14 țări. Tiparea fagilor a fost pozitivă în 62% dintre tulpini; tulpinile de tip gravis au fost marcate cu un succes deosebit. Dintre acestea din urmă, apartenența la una dintre fagovariante a fost stabilită în 93%. Reacţiile specifice cu fagi tipici la tulpinile toxigenice de tip gravis după schema acestor autori se bazează pe infectarea tulpinilor cu diverşi virusuri.

În țara noastră, cercetările în domeniul tipării fagilor au fost efectuate de M.D. Krylova. Autorul a dezvoltat o schemă de etichetare a fagilor bazată pe principiul propus de Williams și Rippon pentru tiparea stafilococilor care coagulează plasma: fagovariantul a fost desemnat cu numele tipului de fag care l-a lizat într-o diluție de testare. Fagii și fagovarianții din schema lui M. D. Krylova sunt desemnați prin litere ale alfabetului latin: majuscule - fagi care dau liză confluentă și semi-drenată, litere mici - liză sub formă de plăci. Pe baza acestui fapt, s-au dezvoltat o schemă de tipare a fagilor modificată pentru varianta netoxigenă de Corynebacterium gravis și o schemă de tipizare a fagilor pentru varianta de Corynebacterium gravis toxigenă.

Titlul complet:
Bacterii; Actinobacterii;Actinobacterii (clasa); Actinobacteridae; Actinomicetale; Corynebacterineae; Corynebacteriaceae; Corynebacterium; Corynebacterium diphtheriae.

Introducere

Difteria este o boală infecțioasă acută cauzată de corynebacterium difterie toxigenă (Corynebacterium diphtheriae), transmisă prin picături aeropurtate, caracterizată prin inflamarea fibrioasă locală în principal a membranelor mucoase ale gurii și nazofaringelui, precum și fenomene de intoxicație generală și afectare a organelor interne. . Mult mai rar, o boală similară ca simptome clinice poate fi cauzată de tulpinile toxigenice de Corynebacterium ulcerans. Introducerea imunizării în masă în practica sănătății publice în anii 40-50 a dus la o scădere semnificativă a incidenței și la eliminarea aproape completă a difteriei în Marea Britanie și în multe alte țări. Cu toate acestea, epidemia recentă de difterie din Rusia și alte țări sugerează că incidența epidemiei poate apărea acolo unde acoperirea vaccinării este în scădere. În Europa de Vest, difteria este rară, dar există o incidență sporadică. Mai mult, majoritatea cazurilor de infecție sunt asociate cu o ședere în zone endemice: în Hindustan, Asia de Sud-Est, America de Sud și în unele țări care au apărut din republicile URSS.

Etiologie

Agentul cauzal al difteriei Corynebacterium diphtheriae a fost descoperit de Klebs în 1883 în secțiuni de filme de difterie, iar în 1884 Leffler l-a izolat în cultură pură. Conform clasificării moderne a bacteriilor, genul Corynebacterium include mai multe specii care provoacă boli la om. Specia C. diphtheriae este eterogenă în ceea ce privește proprietățile culturale, morfologice și enzimatice și, prin urmare, se disting trei biovari: gravis, mitis și intermedius. Biovarurile și-au primit numele din cauza presupusei conexiuni cu severitatea cursului clinic. Tipul gravis (tije polimorfe scurte care fermentează amidonul) a fost izolat mai ales în formele severe și complicate de difterie, însoțite de mortalitate ridicată. Tipul mitis (tije polimorfe lungi curbate care nu fermentează amidonul) a predominat în cazul formelor blânde, în timp ce intermedius a ocupat o poziţie intermediară. Această dependență a fost confirmată în timpul actualei epidemii de difterie din Rusia. Tijele de difterie sunt drepte sau ușor curbate, lungi de 1 - 8 microni, lățime de 0,3 - 0,8 microni, polimorfe. La microscop se poate observa că sunt mai bine colorate la poli, unde se observă prezența granulelor (incluziunilor). În frotiuri, corinebacteriile sunt situate în unghi, luând forma unor „degete răspândite”. Temperatura optimă de creștere pentru C. diphtheriae este de 37,0 ° C. Agenții cauzali ai difteriei sunt bine cultivați pe medii care conțin proteine. Sunt afectați negativ de lumina directă a soarelui și de temperaturile ridicate. Când sunt fierte, mor după 1 minut, dezinfectanții (înălbitor, soluție de cloramină 1%, lizol etc.) acționează asupra lor distructiv. În stare uscată, rămân până la 1 lună. Principalul factor de patogenitate a corynebacteriilor este exotoxina. Agenții patogeni producatori de exotoxine sunt definiți ca tulpini toxigenice. Există corinebacterii care nu produc exotoxină (tulpini netoxigenice) care nu provoacă boli. Toxina difterică a fost descoperită în 1888. Capacitatea de a produce toxina difteric (DT) este principalul factor de virulență al C.diphtheriae, agentul cauzal al difteriei. Compoziția moleculară a toxinei a fost descifrată în anii 60 - 70 ai secolului nostru. Toxina difterică este o proteină cu dig. cântărind 62 - 63 kD. Cu hidroliză ușoară, se descompune în două fragmente - A și B. Conform compoziției antigenice, fragmentul A este eterogen. Când a fost administrat la animale, nu a prezentat toxicitate, iar în cultura de țesut, nu a fost citotoxic. Fragmentul B este o proteină termostabilă care determină efectul toxic. O analiză efectuată folosind anticorpi monoclonali la fragmentele A și B ale toxinei a arătat că la om 80% dintre anticorpi se formează la fragmentul A și doar 20% la fragmentul B. Doar 3 reprezentanți ai genului Corynebacterium sunt potențial toxigeni: C.diphtheriae , C. ulcerans și C. pseudotuberculosis. Capacitatea acestor specii de a produce DT depinde de acţiunea a doi factori: 1) lizogenia de către fagul b sau alţi corinefagi, care conţin gena structurală (gena tox) a moleculei de toxină; 2) concentrație scăzută de fier extracelular. Cele mai multe dintre simptomele difteriei și mortalității din această infecție sunt asociate cu acțiunea DT. În ciuda faptului că difteria este o boală rară în Regatul Unit și în alte țări din Europa de Vest, frecvența izolării tulpinilor netoxice de C. diphtheriae a crescut semnificativ recent. În cele mai multe cazuri, ele sunt excretate la pacienții cu faringită. Cu toate acestea, există rapoarte de cazuri de endocardită și leziuni ale altor organe și sisteme în Europa și Australia. Ca rezultat, sunt necesare metode fiabile, specifice și precise pentru determinarea toxinei difterice pentru a diferenția tulpinile toxigenice sporadice de tulpinile netoxigenice circulante. Metode de determinare a toxinei difterice. Un test ideal pentru determinarea toxicității ar trebui să fie simplu, rapid, fiabil și sensibil și să se coreleze bine cu activitatea biologică a motorinei. Recent, au fost investigate o serie de metode genotipice, fenotipice și biologice pentru determinarea DT. Metodele moleculare bazate pe reacția în lanț a polimerazei (PCR) pentru determinarea genei toxinei prezintă anumite avantaje față de testele fenotipice. Ele oferă un răspuns mai rapid și mai ușor de interpretat. Utilizarea lor devine din ce în ce mai comună datorită disponibilității crescute a echipamentelor PCR. Cu toate acestea, principalul dezavantaj al metodelor bazate pe PCR este că nu oferă informații despre capacitatea unui microorganism de a exprima DT biologic activ. Sunt descrise tulpini netoxigenice, dar în același timp purtătoare de toxine (NTTB), care posedă o parte din gena DT completă, dar care nu sunt capabile să exprime forma biologic activă a toxinei. Ca urmare, utilizarea PCR singură nu dă un rezultat definitiv la determinarea toxicității. Prin urmare, PCR este recomandată doar ca metodă suplimentară la testele fenotipice. Testul de imunoprecipitare Elec este cea mai utilizată metodă fenotipică pentru determinarea toxicității de către laboratoarele microbiologice din întreaga lume. Problema interpretării greșite a liniilor de precipitații nespecifice, mai ales acolo unde testul Elec nu este efectuat în mod obișnuit, a dus la scăderea numărului de laboratoare care îl folosesc în activitatea lor, în special în regiunile neendemice. Sunt descrise diferite metode fenotipice de determinare a DP, care, totuși, fie nu și-au găsit aplicare largă, fie nu au avut avantaje semnificative față de testul Elek pentru diagnosticul microbiologic al difteriei. Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) și testele imunocromatografice (ICS) au fost utilizate pe scară largă pentru a detecta antigenele și markerii microbieni. Având în vedere acest lucru, am dezvoltat, standardizat și realizat studii ale testului ELISA și ICS amplificat pentru determinarea TD. Pe lângă toxină, bacilul are o serie de antigeni de perete celular. Principalele sunt polizaharidele, peptidopolizaharidele, proteinele și lipidele. Antigenii de suprafață ai peretelui celular provoacă un răspuns de tip anticorp specific, iar antigenele profunde - unul specific speciei. În straturile de suprafață ale peretelui celular al agentului patogen, s-a găsit un factor de cordon care favorizează aderența corinebacteriilor. Prezența anticorpilor antitoxici în serul sanguin al pacienților cu difterie a fost stabilită la sfârșitul secolului trecut.

Epidemiologie

Difteria este o boală antropică. Sursa de infecție este un pacient cu difterie sau un purtător de tulpini toxice de corinebacterii. De la pacienții cu forme severe de boală, agentul patogen este excretat în cantități mai mari decât de la persoanele care au suferit boala cu ușurință. Totuși, din punct de vedere epidemiologic, pacienții cu forme ușoare și șterse de difterie sunt mai periculoși dacă nu este recunoscută adevărata natură a bolii și pacienții nu sunt izolați în timp util. Purtătorii de bacterii joacă un rol deosebit în răspândirea bolii, deși emit patogenul cantitativ mult mai puțin intens decât pacienții cu forme manifeste. Cei mai periculoși sunt purtătorii de bacterii care emit microbi pentru o perioadă lungă de timp (până la 1 lună sau mai mult), ceea ce se observă mai des la pacienții cu boli concomitente ale tractului respirator superior și orofaringe. Mecanismul de transmitere al agentului patogen este aerian (când vorbesc, strănut, tuse). Principala cale de transmitere a agentului patogen este prin aer, precum și contact-casnic - prin vase, prosoape, jucării etc. Sunt cunoscute focare de difterie „lapte” asociate cu infecția prin produse lactate infectate. Agentul cauzal al difteriei este stabil în mediul extern. Într-un film de difterie, rămâne 3 - 5 luni, în praf - până la 2 luni, pe alimente - până la 12 - 18 zile, în picături de salivă rămase pe pereții paharului, pe mânerele ușilor, pe jucăriile pentru copii. , bacteriile difterice pot persista 15 zile. Rata de supraviețuire a corynebacteriilor pe obiectele de mediu în perioada toamnă-primăvară poate ajunge la 5,5 luni, iar în tot acest timp proprietățile patogene ale agentului patogen rămân. Indicele de contagiositate în difterie este de 15 - 20%, adică. când agentul patogen circulă în rândul populației neimunizate, 15 - 20% se îmbolnăvesc de difterie. Cel mai frecvent rezultat al infecției este purtătorul de bacterii. În timpul unei epidemii de gripă, circulația corinebacteriilor toxice crește de 7-15 ori. Incidența difteriei este influențată de o serie de factori, inclusiv de starea naturală și artificială, de exemplu. vaccinare, imunitate. Infecția este învinsă dacă 70% dintre copiii sub 2 ani și 70% dintre adulți sunt vaccinați. Factorii socio-ecologici ocupă și ei un anumit loc.

Patogeneza

Porțile de intrare sunt de obicei membrane mucoase ale orofaringelui (microbii folosesc mucusul ca habitat), nas, laringe, mai rar ochii, organele genitale și pielea. Agentul patogen este fixat la locul introducerii și se înmulțește acolo, eliberând exotoxină. În procesul de activitate vitală, corinebacteriile produc și alte substanțe biologic active: hialuronidază, neuraminidază - factori necrozanți și de difuzie. Modificările patologice din organismul pacientului - intoxicație, proces inflamator local, complicații precoce și tardive - sunt cauzate de efectul dăunător al toxinei, care constă în blocarea sintezei proteinelor de către celulă. Sub influența toxinei, permeabilitatea membranelor crește. În aceasta el este asistat de o altă floră bacteriană prezentă în orofaringe. Severitatea evoluției difteriei și rezultatul bolii sunt influențate semnificativ de nivelul de imunitate antitoxică a pacientului, de gradul de toxicitate al tulpinii de corinebacterii și de doza de agent patogen.
Surse de :

În principal în copilărie, care se manifestă prin intoxicație profundă a corpului cu toxină difteric și inflamație fibrinoasă caracteristică la locul de localizare a agentului patogen. Numele bolii provine de la cuvântul grecesc diftera - piele, film, deoarece la locul de reproducere al agentului patogen se formează o peliculă densă, alb-cenușie.

Agentul cauzal al difteriei - Corynebacterium diphtheriae - a fost descoperit pentru prima dată în 1883 de E. Klebs în secțiuni de film, obținut în cultură pură în 1884 de F. Leffler. În 1888, E. Roux și A. Iersen au descoperit capacitatea sa de a produce exotoxină, care joacă un rol major în etiologia și patogeneza difteriei. Primirea serului antitoxic de către E. Bering în 1892 și utilizarea acestuia din 1894 pentru tratamentul difteriei au făcut posibilă reducerea semnificativă a letalității. Un atac de succes asupra acestei boli a început după 1923 în legătură cu dezvoltarea de către G. District a unei metode de obținere a anatoxinei difterice.

Agentul cauzal al difteriei aparține genului Corynebacterium (clasa Actinobacteria). Din punct de vedere morfologic, se caracterizează prin faptul că celulele sunt în formă de maciucă îngroșate la capete (grec sogupe - buzdugan), formează ramificații, mai ales în culturile vechi, și conțin incluziuni granulare.

Morfologia Corynebacterium

C. diphtheriae - tije fixe drepte sau usor curbate de 1,0-8,0 microni lungime si 0,3-0,8 microni diametru, nu formeaza spori si capsule. Foarte des au umflături la unul sau ambele capete, conțin adesea granule metacromatice - boabe de volutină (polimetafosfați), care, atunci când sunt colorate cu albastru de metilen, capătă o culoare albăstruie-violet. Pentru detectarea lor, a fost propusă o metodă specială de colorare Neisser. În acest caz, bețișoarele sunt colorate în galben pai, iar boabele de volutină sunt maro închis și sunt de obicei situate la poli. Corynebacterium diphtheriae se colorează bine cu coloranți cu anilină, este gram-pozitiv, dar în culturile vechi devine adesea decolorat și are o colorare Gram negativă. Se caracterizează prin polimorfism pronunțat, mai ales în culturile vechi și sub influența antibioticelor. Conținutul de G + C în ADN este de aproximativ 60%.

Proprietățile biochimice ale corynebacteriilor

Bacilul difteric este un aerob sau anaerob facultativ, temperatura optimă pentru creștere este de 35-37 ° C (limite de creștere 15-40 ° C), pH-ul optim este de 7,6-7,8. Nu este foarte solicitant pe medii nutritive, dar crește mai bine pe medii care conțin ser sau sânge. Selective pentru bacteriile difteriei sunt rulate medii serice Ru sau Leffler, creșterea pe ele apare după 8-12 ore sub formă de colonii convexe, de dimensiunea capului de ac, de culoare alb-cenușiu sau gălbui-crem. Suprafața lor este netedă sau ușor granulară, la periferia coloniilor sunt ceva mai transparente decât în centru. Coloniile nu se contopesc, drept urmare cultura capătă aspectul pielii pietricele. În bulion, creșterea se manifestă sub formă de turbiditate uniformă, sau bulionul rămâne transparent, iar pe suprafața sa se formează o peliculă delicată, care se îngroașă treptat, se sfărâmă și se depune în fulgi pe fund.

O caracteristică a bacteriilor difteriei este creșterea lor bună pe medii de sânge și ser care conțin astfel de concentrații de telurit de potasiu care inhibă creșterea altor tipuri de bacterii. Acest lucru se datorează faptului că C. diphtheriae reduce teluritul de potasiu la teluriu metalic, care, depus în celulele microbiene, conferă coloniilor o culoare caracteristică gri închis sau negru. Utilizarea unor astfel de medii crește procentul de inoculare a bacteriilor difterice.

Corynebacterium diphtheriae fermentează glucoza, maltoza, galactoza pentru a forma acid fără gaz, dar nu fermentează (de regulă) zaharoza, au cistinază, nu au urează și nu formează indol. După aceste caracteristici, ele diferă de acele bacterii corineforme (difteroizi), care se găsesc mai des pe membrana mucoasă a ochiului (Corynebacterium xerosus) și nazofaringe (Corynebacterium pseiidodiphtheriticum) și de alte difteroizi.

În natură, există trei variante principale (biotipuri) ale bacilului difteric: gravis, intermedins și mitis. Ele diferă prin proprietăți morfologice, culturale, biochimice și alte proprietăți.

Împărțirea bacteriilor difteriei în biotipuri a fost efectuată ținând cont de formele evoluției difteriei la pacienții cu cea mai mare frecvență. Tipul gravis este mai des excretat de la pacienții cu difterie severă și provoacă focare de grup. Tipul mitis provoacă cazuri mai ușoare și sporadice de boală, în timp ce tipul intermedius este intermediar între cele două. Corynebacterium belfanti, referit anterior la biotipul mitis, a fost distins într-un al patrulea biotip independent. Principala sa diferență față de biotipurile gravis și mitis este capacitatea de a reduce nitrații la nitriți. Tulpinile de Corynebacterium belfanti au proprietăți adezive pronunțate, iar printre ele se găsesc atât variante toxigenice, cât și netoxigenice.

Structura antigenică a corinebacteriilor

Corynebacterium este foarte eterogen și mozaic. În agenții cauzali ai difteriei din toate cele trei tipuri, au fost găsite câteva zeci de antigene somatice, conform cărora sunt împărțiți în serotipuri. În Rusia, a fost adoptată o clasificare serologică, conform căreia se disting 11 serotipuri de bacterii difterice, dintre care 7 sunt principale (1-7) și 4 suplimentare, rar întâlnite (8-11). Șase serotipuri (1, 2, 3, 4, 5, 7) sunt de tip gravis, iar cinci (6,8,9,10,11) sunt de tip mitis. Dezavantajul metodei de serotipizare este că multe tulpini, în special cele netoxigenice, prezintă aglutinare spontană sau poliaglutinabilitate.

Tiparea fagică a Corynebacterium diphtheriae

Pentru diferențierea bacteriilor difterice au fost propuse diverse scheme de tipare a fagilor. Conform schemei lui M.D. Krylova, folosind un set de 9 fagi (A, B, C, D, F, G, H, I, K) este posibil să tipați majoritatea tulpinilor de tip gravis toxigenice și netoxigenice. Luând în considerare sensibilitatea la acești fagi, precum și proprietățile culturale, antigenice și capacitatea de a sintetiza scorțișoară (proteine bactericide), MD Krylova a identificat 3 grupuri independente de corinebacterii de tip gravis (I-III). Fiecare dintre ele are subgrupuri de toxigeni și analogii lor netoxigeni ai agenților patogeni difterici.

Rezistența la Corynebacter

Corynebacterium diphtheriae prezintă o rezistență mare la temperaturi scăzute, dar moare rapid la temperaturi ridicate: la 60 ° C - în 15-20 de minute, în timpul fierberii - după 2-3 minute. Toți dezinfectanții (lizol, fenol, cloramină etc.) în concentrația utilizată de obicei îl distrug în 5-10 minute. Cu toate acestea, agentul cauzal al difteriei tolerează bine uscarea și poate rămâne viabil pentru o lungă perioadă de timp în mucusul uscat, saliva, în particulele de praf. Într-un aerosol fin, bacteriile difteriei rămân viabile timp de 24-48 de ore.

Factori de patogenitate Corynebacteri

Patogenitatea Corynebacterium diphtheriae este determinată de o serie de factori.

Factori de aderență, colonizare și invazie

Structurile responsabile de aderență nu au fost identificate, dar fără ele, bacilul difteric nu ar putea coloniza celulele. Rolul lor este jucat de unele componente ale peretelui celular al agentului patogen. Proprietățile invazive ale agentului patogen sunt asociate cu hialuronidază, neuraminidază și protează.

Glicolipid toxic conținut în peretele celular al agentului patogen. Este un diester de 6,6 ″ de trehaloză care conține acid corinemicolic (C32H6403) și acid corinemicolic (Cs2H62O3) în rapoarte echimolare (trehaloză-6,6 ″ dicorinemicolat). Glicolipidul are un efect distructiv asupra celulelor țesuturilor de la locul de reproducere al agentului patogen.

Exotoxina, care determină patogenitatea agentului patogen și natura patogenezei bolii. Variantele netoxice ale C. diphtheriae nu provoacă difterie.

Exotoxina este sintetizată sub forma unui precursor inactiv - un singur lanț polipeptidic cu m.m. 61 kD. Activarea sa este efectuată de propria sa protează bacteriană, care taie polipeptida în două peptide legate prin legături disulfurice: A (mm 21 kD) și B (mm 39 kD). Peptida B îndeplinește o funcție acceptor - recunoaște receptorul, se leagă de acesta și formează un canal intramembranar prin care peptida A pătrunde în celulă și implementează activitatea biologică a toxinei. Peptida A este o enzimă ADP-ribosiltransferază, care asigură transferul adenozin difosfat ribozei de la NAD la unul dintre resturile de aminoacizi (histidină) ale factorului de alungire a proteinei EF-2. Ca urmare a modificării, EF-2 își pierde activitatea și aceasta duce la suprimarea sintezei proteinelor de către ribozomi în stadiul de translocare. Toxina este sintetizată numai de astfel de C. diphtheriae care poartă gene ale unui profag cu conversie moderată în cromozomul lor. Operonul care codifică sinteza toxinelor este monocistronic, este format din 1,9 mii de perechi de baze și are un promotor toxP și 3 regiuni: toxS, toxA și toxB. Regiunea toxS codifică 25 de resturi de aminoacizi ale peptidei semnal (asigură eliberarea toxinei prin membrană în spațiul periplasmatic al celulei bacteriene), toxA - 193 de resturi de aminoacizi ale peptidei A și toxB - 342 de aminoacizi. reziduuri ale toxinei peptidei B. Pierderea unui profage de către o celulă sau mutațiile în operonul tox fac ca celula să aibă o toxicitate scăzută. În schimb, lizogenizarea C. diphtheriae netoxigenă de către un fag de conversie le transformă în bacterii toxigenice. Acest lucru a fost dovedit fără echivoc: toxigenitatea bacteriilor difteriei depinde de lizogenizarea lor prin conversia tox-corynefage. Corinefagii se integrează în cromozomul corinebacteriilor folosind un mecanism de recombinare specifică locului, iar tulpinile bacteriilor difteriei pot conține 2 situsuri de recombinare (attB) în cromozomii lor, iar corinefagii se integrează în fiecare dintre ele cu aceeași frecvență.

Analiza genetică a unui număr de tulpini netoxice de bacterii difterice, efectuată folosind sonde ADN marcate care poartă fragmente ale operonului corynephage tox, a arătat că cromozomii lor conțin secvențe ADN omoloage cu operonul corynephage tox, dar fie codifică polipeptide inactive, fie sunt localizate. în stare „tăcută”, adică inactiv. În acest sens, se ridică o întrebare epidemiologic foarte importantă: bacteriile difteriei netoxigene pot fi convertite în bacterii toxice în condiții naturale (în corpul uman), așa cum se întâmplă și in vitro? Posibilitatea unei astfel de transformări a culturilor netoxigenice de corinebacterii în culturi toxice folosind conversia fagilor a fost demonstrată în experimente pe cobai, embrioni de pui și șoareci albi. Cu toate acestea, nu a fost încă stabilit dacă acest lucru are loc în timpul unui proces epidemic natural (și dacă se întâmplă, atunci cât de des).

Datorită faptului că toxina difterice din organismul pacienților are un efect selectiv și specific asupra anumitor sisteme (în principal sunt afectate sistemul simpatico-suprarenal, inima, vasele și nervii periferici), este evident că nu numai că inhibă biosinteza proteinelor în celulelor, dar provoacă și alte tulburări ale metabolismului lor.

Pentru a detecta toxicitatea bacteriilor difteriei, puteți utiliza următoarele metode:

Teste biologice pe animale. Infecția intradermică a cobai cu un filtrat de cultură în bulion de bacterii difterice provoacă necroză la locul injectării. O doză letală minimă de toxină (20-30 ng) ucide un cobai care cântărește 250 g atunci când este injectată subcutanat în a 4-a-5-a zi. Cea mai caracteristică manifestare a acțiunii toxinei este afectarea glandelor suprarenale, acestea sunt mărite și puternic hiperemice.
Infecția embrionilor de pui. Toxina difterică le provoacă moartea.
Infecția culturilor celulare. Toxina difterice are un efect citopatic distinct.
Test imunosorbent legat de enzime folosind antitoxine marcate cu peroxidază.
Utilizarea unei sonde ADN pentru detectarea directă a operonului tox în cromozomul bacteriilor difteriei.

Cu toate acestea, cea mai simplă și comună metodă de determinare a toxicității bacteriilor difteriei este serologică - metoda de precipitare într-un gel. Esența sa este următoarea. O fâșie de hârtie de filtru sterilă cu dimensiunea de 1,5 x 8 cm este umezită cu ser antitoxic antidifteric care conține 500 AU în 1 ml și se aplică pe suprafața mediului nutritiv într-o cutie Petri. Cupa se usucă într-un termostat timp de 15-20 de minute. Culturile de testat sunt inoculate cu plăci de fiecare parte a hârtiei. Pe o placă sunt inoculate mai multe tulpini, dintre care una, evident toxigenă, servește drept control. Plăcile cu inoculări sunt incubate la 37 ° C, rezultatele sunt luate în considerare după 24-48 de ore.Datorită contra-difuziei în gel de antitoxină și toxină, se formează o linie de precipitare clară la locul interacțiunii lor, care fuzionează. cu linia de precipitare a tulpinii toxigene martor. Benzile de precipitare nespecifică (se formează dacă alți anticorpi antimicrobieni sunt prezenți în cantități mici în ser pe lângă antitoxină) apar târziu, sunt slabe și nu se contopesc niciodată cu banda de precipitare a tulpinii martor.

Imunitatea post-infecțioasă

Cazurile de boală puternice, persistente, practic de-a lungul vieții, repetate, sunt rare - la 5-7% dintre cei care și-au revenit. Imunitatea este în principal antitoxică în natură, anticorpii antimicrobieni au o importanță mai mică.

Pentru a evalua nivelul de imunitate anti-difterie, testul Schick a fost utilizat anterior pe scară largă. În acest scop copiilor li s-a injectat intradermic 1/40 Dim de toxină pentru cobai în volum de 0,2 ml. În absența imunității antitoxice, roșeața și umflarea cu un diametru mai mare de 1 cm apar la locul injectării după 24-48 de ore.O astfel de reacție Schick pozitivă indică fie absența completă a antitoxinei, fie că conținutul său este mai mic de 0,001. AU / ml de sânge. O reacție Schick negativă se observă atunci când conținutul de antitoxine din sânge este mai mare de 0,03 UA / ml. Când conținutul de antitoxină este sub 0,03 AU/ml, dar peste 0,001 AU/ml, reacția Schick poate fi fie pozitivă, fie, uneori, negativă. În plus, toxina în sine are o proprietate alergenică pronunțată. Prin urmare, pentru a determina nivelul imunității anti-difterice (conținutul cantitativ de antitoxină), este mai bine să utilizați RPHA cu diagnosticul eritrocitar sensibilizat cu toxoid difteric.

Epidemiologia difteriei

Singura sursă de infecție este o persoană - un purtător de bacterii bolnav, convalescent sau sănătos. Infecția se produce prin picături din aer, praf din aer, precum și prin diverse articole folosite de purtătorii de bacterii bolnave sau sănătoase: vase, cărți, lenjerie, jucării etc. În caz de infecție alimentară (lapte, creme etc.) este posibilă infecția alimentară. . Cea mai masivă izolare a agentului patogen are loc în forma acută a bolii. Cu toate acestea, cea mai mare semnificație epidemiologică este atribuită persoanelor cu forme șterse, atipice ale bolii, deoarece adesea nu sunt spitalizate și nu sunt detectate imediat. Un pacient cu difterie este contagios pe întreaga perioadă a bolii și o parte a perioadei de recuperare. Perioada medie de transport a bacteriilor la convalescenți variază de la 2 la 7 săptămâni, dar poate dura până la 3 luni.

Purtătorii de bacterii sănătoase joacă un rol deosebit în epidemiologia difteriei. În condiții de morbiditate sporadică, ei sunt principalii distribuitori ai difteriei, contribuind la conservarea agentului patogen în natură. Durata medie de transport a tulpinilor toxice este ceva mai scurtă (aproximativ 2 luni) decât a tulpinilor netoxice (aproximativ 2-3 luni).

Motivul formării unui purtător sănătos de bacterii difterice toxigenice și netoxigenice nu a fost dezvăluit pe deplin, deoarece chiar și un nivel ridicat de imunitate antitoxică nu asigură întotdeauna eliberarea completă a organismului de agentul patogen. Poate că nivelul imunității antibacteriene este de o oarecare importanță. Transportul tulpinilor toxice de bacterii difterice este de o importanță epidemiologică primordială.

Simptome de difterie

Oamenii de orice vârstă sunt susceptibili la difterie. Agentul patogen poate pătrunde în corpul uman prin mucoasele diferitelor organe sau prin pielea deteriorată. În funcție de localizarea procesului, se disting difteria faringelui, nasului, laringelui, urechii, ochilor, organelor genitale și a pielii. Sunt posibile forme mixte, de exemplu, difteria faringiană și cutanată etc. Perioada de incubație este de 2-10 zile. Cu o formă pronunțată clinic de difterie, la locul de localizare a agentului patogen se dezvoltă o inflamație fibrinoasă caracteristică a membranei mucoase. Toxina produsă de agentul patogen afectează mai întâi celulele epiteliale, iar apoi vasele de sânge din apropiere, crescându-le permeabilitatea. Exudatul care iese conține fibrinogen, a cărui coagulare duce la formarea unei culori alb-cenușii pe suprafața membranei mucoase Culoarea depozitelor membranoase, care sunt strâns lipite de țesutul subiacent și, atunci când sunt separate de acesta, provoacă sângerare. Dezvoltarea edemului local poate fi o consecință a deteriorării vaselor de sânge. Difteria faringiană este deosebit de periculoasă, deoarece poate provoca crup de difterie din cauza edemului membranei mucoase a laringelui și a corzilor vocale, din care 50-60% dintre copiii cu difterie au murit anterior ca urmare a asfixiei. Toxina difterice, care intră în sânge, provoacă intoxicație generală profundă. Afectează în principal sistemele cardiovasculare, simpatico-suprarenale și nervii periferici. Astfel, simptomele difteriei constau dintr-o combinație de semne locale, în funcție de locația porții de intrare, și simptome generale cauzate de otrăvirea cu toxine și manifestate sub formă de adinamie, letargie, paloare a pielii, scăderea tensiunii arteriale, miocardită. , paralizia nervilor periferici și alte tulburări. Difteria la copiii vaccinați, dacă este observată, decurge, de regulă, într-o formă ușoară și fără complicații. Mortalitatea în perioada anterioară utilizării seroterapiei și antibioticelor a fost de 50-60%, acum - 3-6%.

Materialul pentru studiu este mucusul din gât și nas, un film din amigdale sau alte membrane mucoase, care sunt locul porții de intrare a agentului patogen. Culturile se desfășoară pe ser telurit sau medii de sânge și simultan pe medii serice rulate Ru (ser coagulat de cal) sau Leffler (3 părți ser bovin + 1 parte bulion de zahăr), pe care apare creșterea corinebacteriilor după 8-12 ore. cultura izolată este identificată printr-un set de proprietăți morfologice, culturale și biochimice, dacă este posibil, se utilizează metodele de tipizare sero- și fagică. În toate cazurile, este obligatoriu testarea toxicității folosind una dintre metodele de mai sus. Caracteristicile morfologice ale corynebacteriilor sunt cel mai bine studiate folosind trei metode de colorare a preparatului frotiului: conform Gram, Neisser și albastru de metilen (sau albastru de toluidină).

Prevenirea specifică a difteriei

Principala metodă de combatere a difteriei este vaccinarea de rutină în masă a populației. În acest scop, se folosesc diverse variante de vaccinuri, inclusiv cele combinate, adică cele care vizează crearea simultană a imunitații împotriva mai multor agenți patogeni. Cel mai răspândit în Rusia este vaccinul DPT. Este o suspensie de bacterii pertussis adsorbită pe hidroxid de aluminiu, distrusă de formol sau mertiolat (20 miliarde la 1 ml), și conține toxoid difteric în doză de 30 de unități floculante și 10 unități de toxoid tetanic de legare în 1 ml. Copiii sunt vaccinați de la vârsta de 3 luni, iar apoi se efectuează revaccinări: prima după 1,5-2 ani, următoarele la vârsta de 9 și 16 ani, iar apoi la fiecare 10 ani.

Datorită vaccinării în masă începută în URSS în 1959, incidența difteriei în țară până în 1966 față de 1958 a fost redusă de 45 de ori, iar rata sa în 1969 a fost de 0,7 la 100.000 de locuitori. Ce a urmat în anii 80. secolul XX scăderea vaccinării a dus la consecințe grave. În 1993-1996. Rusia a fost cuprinsă de o epidemie de difterie. Bolnavii erau adulți, majoritatea nevaccinați, și copii. În 1994 au fost înregistrați aproape 40 de mii de pacienți. În acest sens, vaccinarea în masă a fost reluată. În această perioadă, 132 de milioane de persoane au fost vaccinate, inclusiv 92 de milioane de adulți. În 2000-2001. acoperirea copiilor cu vaccinări în perioada prescrisă a fost de 96%, iar cu revaccinare - 94%. Din acest motiv, rata de incidență a difteriei în 2001 a scăzut de 15 ori în comparație cu 1996. Totuși, pentru a aduce rata de incidență la cazurile unice, este necesar să se acopere cel puțin 97-98% dintre copiii din primul an de viață cu vaccinare și să se asigure revaccinarea în masă în anii următori. Cu greu este posibil să se obțină eliminarea completă a difteriei în următorii ani din cauza transportului pe scară largă a bacteriilor difteriei toxigenice și netoxigenice. De asemenea, va dura ceva timp pentru a rezolva această problemă.