Metode de diagnostic de laborator a infecției cu HIV. Liniile directoare pentru diagnosticul infecției cu HIV

Produs în mai multe moduri diferite. S-ar părea că nu este nimic mai ușor decât identificarea acestei boli prin prelevarea de probe de sânge. Dar nu este așa. Diagnosticul HIV poate fi într-adevăr detectat în acest fel, dar cercetări suplimentare sunt efectuate prin diferite metode. Depinde în mare măsură de ele ce tratament va fi prescris pacientului și ce măsuri vor fi luate ulterior. Printre cele mai comune și extrem de eficiente metode, se obișnuiește să se distingă analiza de screening și imunoterapia. Fiecare dintre ele ar trebui luate în considerare mai detaliat.

Diagnosticul SIDA: analiza screening-ului

Un test de screening sau o metodă de test ELISA este utilizată în etapa inițială a diagnosticării infecției cu HIV. La dezvoltarea acestei metode în laborator, proteinele virusului au fost create artificial. Reacționează într-un mod special la anticorpi. Acestea din urmă sunt produse în organism atunci când apar în el celule infectate cu o boală teribilă. În acest caz, diagnosticul de laborator al HIV se efectuează folosind enzime artificiale. Interacționând cu anticorpii, aceștia se colorează într-o anumită culoare. O bandă cu un indicator, după ce a primit sânge pe el, este plasată sub un aparat special, cu ajutorul căruia este posibil să se determine dacă o persoană are sau nu această boală. Metodele moderne de diagnosticare a HIV, inclusiv ELISA, fac posibilă determinarea faptului infecției sau a absenței acesteia cu o precizie ridicată. Dar, ca toate echipamentele, aparatul pentru analiza screeningului are o eroare. De aceea, dacă este necesar, analiza este repetată de pacient.

Este important să știm că testul ELISA este una dintre primele metode de determinare a prezenței unui virus al imunodeficienței în organism. Infecția cu HIV este un diagnostic care poate fi detectat doar la câteva săptămâni după infectare. Când celulele infectate intră în fluxul sanguin, sistemul imunitar al corpului începe să reziste activ. Se produc anticorpi, care sunt detectați prin cercetări de laborator după două sau trei săptămâni. Diagnosticul precoce al infecției cu HIV prin intermediul unui test ELISA permite detectarea anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței în sângele uman. Aceasta este principala sa diferență față de alte metode moderne.

Este demn de remarcat faptul că la unii oameni, anticorpii împotriva acestei boli încep să fie produși ulterior. De la momentul infecției până la începutul acestui proces, poate dura între trei și șase săptămâni. De aceea, experții medicali recomandă teste de screening la patru până la cinci săptămâni după sexul neprotejat sau alt motiv pentru a suspecta o infecție accidentală.

Metodele ELISA pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV au fost dezvoltate de mult timp. Astăzi există patru generații de teste. Cele mai exacte și mai eficiente dintre ele sunt cele care au fost dezvoltate ultima dată. Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV și SIDA utilizând testele ELISA din a treia și a patra generație se efectuează folosind proteine \u200b\u200bși peptide recombinate. Sensibilitatea acestor teste la anticorpii produși de organism este de 92 - 93%. Vorbim despre metodele de cercetare rusești. Europenii au învățat să facă astfel de teste cu o sensibilitate de 99%.

Metodele moderne de diagnosticare de laborator a infecției cu HIV bazate pe ELISA sunt utilizate nu numai pentru a detecta prezența unei boli. Cu ajutorul analizei de screening, este posibilă monitorizarea răspândirii virusului imunodeficienței, precum și colectarea materialului de testat înainte de a lua sânge de la donatori.

ELISA este o metodă standard pentru diagnosticarea infecției cu HIV: cum se efectuează, de ce dă un rezultat fals?

Diagnosticul HIV și SIDA de către ELISA este o procedură standard. Sângele pacientului este extras dintr-o venă. Cinci mililitri de material sunt suficiente pentru analiză. Clinic diagnosticul HIV de tip 2 și tip 1 se efectuează cel puțin opt ore după masă. Medicii recomandă să o faceți dimineața pe stomacul gol. Rezultatele unui studiu complet sunt cunoscute după două sau trei zile. Screeningul expres se face în mai puțin timp. Acest lucru durează de obicei doar câteva ore. Cu toate acestea, eroarea în acest caz crește. Un diagnostic expres al HIV este necesar în cazuri urgente, de exemplu, atunci când pacientul are nevoie de o intervenție chirurgicală urgentă. O astfel de analiză se efectuează în mod necesar înainte de intervenții chirurgicale neprogramate, deoarece dacă un pacient are un virus de imunodeficiență, medicii respectă măsuri de siguranță sporite. Diagnosticul clinic al infecției cu HIV într-o perioadă scurtă de timp este, de asemenea, necesar în cazul în care sângele donatorului trebuie luat rapid pentru a salva un alt pacient.

Există cazuri când o persoană a fost diagnosticată cu SIDA sau HIV, dar ca urmare nu a fost confirmată sau invers. De ce se întâmplă acest lucru în cazul testului ELISA? Un rezultat fals negativ se poate datora faptului că sângele nu a fost pregătit corespunzător pentru cercetare. Uneori, motivul pentru aceasta este execuția incorectă a gardului ei. Un rezultat fals negativ la verificarea diagnosticului de infecție cu HIV nu este confirmat nici în cazul în care materialele pentru cercetare au fost luate prea devreme. La urma urmei, după infecție, ar fi trebuit să treacă cel puțin trei săptămâni. Există cazuri în care rezultatul detectării virusului imunodeficienței este fals pozitiv. Acest lucru se datorează stării generale a sistemelor imune și hormonale ale corpului uman. În majoritatea cazurilor, pacientul are boli care sunt rezultatul unui rezultat fals pozitiv. Vorbim despre hepatita alcoolică, în care ficatul produce enzime speciale, ceea ce poate duce la un diagnostic incorect de HIV. Sarcina și anumite boli autoimune, împreună cu mielomul multiplu, pot provoca, de asemenea, falsuri pozitive. Această listă ar putea include pacienții dializați și cei care au fost vaccinați cu puțin timp înainte de diagnosticul diferențial al HIV.

Vorbind despre analiza screening-ului, este important să rețineți că această metodă de cercetare necesită confirmare. Medicii, înainte de a pune un diagnostic de HIV pe baza acestuia, trebuie să trimită pacientul pentru blot imunitar.

Principalele metode de diagnostic de laborator ale infecției cu HIV: blot imunitar

SIDA, al cărui diagnostic și tratament sunt strâns corelate, este detectat în mai multe moduri simultan. După cum s-a menționat mai sus, un test ELISA nu este suficient pentru a determina în cele din urmă diagnosticul. Diagnosticul diferențial al infecției cu HIV în acest caz este completat de blot imunitar. În medicina modernă, se numește metoda confirmativă finală pentru a pune un diagnostic. Pentru cercetarea în acest caz, se utilizează proteine \u200b\u200bconținute în sângele pacientului. Acestea sunt separate într-un gel special, după care lucrătorii de laborator au posibilitatea de a studia compoziția moleculară a sângelui.

Momentul diagnosticării HIV cu această metodă este de la una la trei zile. Pentru cercetare, sângele este preluat din vena subiectului, care este plasat pe un tester cu gel. Rezultatul, care este pus la îndoială, poate apărea în timpul sarcinii, prezența proceselor oncologice, a tuberculozei. O reacție fals negativă la test poate apărea dacă studiul este efectuat incorect și dacă a fost efectuat prea devreme. Din momentul infectării trebuie să treacă cel puțin trei săptămâni. La urma urmei, timpul după care HIV este diagnosticat depinde în mod direct de starea de imunitate.

Alte metode de diagnosticare a SIDA și HIV

Diagnosticul radiologic pentru SIDA este utilizat, de regulă, în stadiile terminale sau secundare. Cu ajutorul lor, este posibil să se stabilească modificări care apar în organism din cauza bolilor secundare sau a infecțiilor oportuniste.

Diagnosticul cu biorezonanță HIV, care se mai numește scanare neliniară, este utilizat în principal în clinicile private pentru a detecta virusul imunodeficienței. Medicina oficială consideră că această metodă este insuficient de precisă și eficientă. Poate că îmbunătățirea diagnosticului neliniar în viitor va face posibilă identificarea acestui diagnostic teribil deja în perioada de incubație.

Diagnosticul infecției cu HIV: metoda serologică și caracteristicile acesteia

Aceasta este o tehnică relativ nouă în care criteriile de laborator pentru diagnosticul infecției cu HIV se bazează pe principiul antigen-anticorp. În cazul virusului imunodeficienței, o căutare a anticorpilor împotriva virusului are loc în corpul uman. Pentru aceasta, se folosește un antigen derivat artificial, la care anticorpii trebuie să răspundă. Markerii serologici specifici ai infecției cu HIV determină modificări specifice ale compoziției sanguine. Trebuie remarcat faptul că această metodă de cercetare este cea mai eficientă în stadiul acut, care se termină prin seroconversie. Este urmată de o perioadă de latență asimptomatică, timp în care nu este ușor de găsit antigenul.

Diagnosticul de referință al infecției cu HIV: descriere și caracteristici

Valorile de referință HIV sunt considerate cele mai exacte în identificarea unui diagnostic. Această metodă de cercetare combină testul ELISA și imunoterapia. Laboratorul de referință pentru diagnosticul HIV permite colectarea testelor și prelucrarea ulterioară a acestora în două moduri simultan. Acest lucru vă permite să obțineți cel mai precis rezultat în 24 de ore. Revizuirea analizei obținute în laboratorul de referință este necesară numai dacă datele testului ELISA și imunoterapia se contrazic. Acesta este un eveniment destul de rar care apare cel mai adesea la persoanele cu bolile concomitente descrise mai sus.

Diagnosticul HIV este una dintre sarcinile principale cu care se confruntă angajații dispensarului dermatovenerologic, precum și angajații policlinicii.

Boala este caracterizată de medici ca fiind foarte insidioasă. Se caracterizează printr-un curs cronic și nu răspunde la tratamentul complet. Este important să îl detectați în timp util pentru a prelua controlul și a preveni răspândirea necontrolată. Care sunt caracteristicile virusului imunodeficienței umane și cum poate fi infectat, pacienții sunt deseori interesați.

Care sunt modalitățile de diagnosticare a bolii și ce semne sugerează infecția?

Astăzi puteți auzi de pretutindeni cât de periculoasă este infecția cu HIV. Cu toate acestea, puțini explică care este acest pericol. Ca urmare, pacienții au un set incomplet de informații și, ca urmare, nu iau în serios amenințarea. Dar HIV este extrem de periculos. Este clasificată ca o boală virală lent progresivă, predispusă la un curs cronic. În această patologie, sistemul imunitar este afectat în primul rând.

Medicii atrag atenția pacienților asupra faptului că moartea nu apare din cauza virusului imunodeficienței în sine, ca atare.

O persoană moare din cauza infecțiilor concomitente, de care organismul nu mai este capabil să ofere o protecție completă împotriva. De asemenea, cauza decesului sunt tumorile canceroase, care nu sunt capabile să combată imunitatea redusă.

De fapt, mecanismul prin care infecția cu HIV afectează sistemul imunitar este destul de complex. După cum observă medicii, pacienții nu trebuie să o înțeleagă bine. Este suficient să știm că boala poate reduce nivelul de imunitate la valorile critice. Drept urmare, corpul nu va putea să se apere împotriva diferitelor influențe externe, ceea ce va duce la moarte mai devreme sau mai târziu.

Cum apare infecția

Este important să înțelegem că infecția cu HIV astăzi este înconjurată de o mare varietate de mituri.

Pacienții sunt foarte puțin informați despre momentul în care se pot infecta și despre starea de sănătate în afara pericolului.

Primul lucru de reținut este că HIV este foarte fragil în mediul său. Aceasta înseamnă că microorganismul patogen este capabil să trăiască pe deplin și mult timp doar în corpul uman. Nu tolerează încălzirea peste 50 de grade (moare instantaneu). De asemenea, nu poate rezista proceselor de uscare. Nu toate fluidele corporale conțin suficient virus pentru ca infecția să poată apărea.

Cel mai mare pericol îl reprezintă:

• sânge;
• pre-ejaculare;
• spermă;
• evacuare din vaginul feminin;
• limfa;
• lapte matern.

Dacă oricare dintre aceste fluide intră în contact cu membranele mucoase, în care există microtraumatisme sau cu pielea rănită, apare infecția.

De asemenea, este posibil dacă fluidul străin pătrunde direct în fluxul sanguin. Saliva și lacrimile, contrar credinței populare, nu sunt o amenințare. Datorită naturii virusului și a ratei scăzute de supraviețuire, acesta este transmis în mai multe moduri:

• tractului genital adică cu relații sexuale neprotejate, care implică inevitabil contactul fluidelor biologice și a membranelor mucoase ale corpului susceptibile la agentul patogen;
• cale parenterală adică transmiterea virusului cu sânge în timpul transfuziei sau datorită utilizării instrumentelor nesterile în scopuri medicale;
• cale verticală adică de la mamă la copil (astăzi, dacă o femeie ia terapie antiretrovirală și refuză să alăpteze, probabilitatea de infectare a copilului în timpul nașterii este minimizată).

Este important să înțelegem că, dacă sunt necesare micro-traume sau răni deschise pentru infecția prin piele, atunci acest lucru nu este necesar pentru infecția prin membrana mucoasă. Diferența se explică prin faptul că membranele mucoase și pielea corpului uman au o structură complet diferită. Această diferență trebuie luată în considerare.

Care sunt semnele de a suspecta HIV

Mulți pacienți sunt interesați de întrebarea ce semne sunt suspectate de obicei de a fi infectate cu virusul imunodeficienței umane.

• o creștere nerezonabilă a temperaturii de tip sistemic, care nu poate fi explicată prin nicio altă infecție și care persistă mult timp, în ciuda măsurilor luate pentru tratament;
• o creștere puternică a ganglionilor limfatici în dimensiune (în primul rând, ganglionii din zona inghinală suferă, dar este posibilă și implicarea lor pe tot corpul);

• o scădere puternică a greutății corporale, care nu poate fi explicată prin diete, stres, perturbări hormonale și alte motive;
• plângeri legate de tulburări de scaun care au urmărit pacientul de mult timp și nu este posibil să se găsească motivul pentru care au apărut;
• o tendință pronunțată către tranziția oricăror boli infecțioase în forme cronice, iar natura agentului patogen nu contează prea mult, atât patologiile bacteriene, cât și cele virale sunt cronice;
• se dezvoltă boli care sunt provocate de microflora patogenă condiționată, ceea ce nu reprezintă o amenințare pentru o persoană a cărei imunitate este pe deplin funcțională (de exemplu, micoplasmoză, ureaplasmoză, candidoză etc.).

Clinica infecției cu HIV este foarte nespecifică, după cum spun medicii. Din această cauză, este adesea dificil să puneți un diagnostic. Mulți pacienți ignoră complet simptomele alarmante, preferând să nu solicite ajutor medical. Chiar dacă boala afectează puternic bunăstarea lor generală.

Este important să înțelegem că infecția cu HIV poate să nu se simtă deloc mult timp. Și atunci când apar primele semne, o persoană poate să nu le asocieze cu posibilitatea infecției sale și să facă încercări de a fi tratată acasă.

Metode de diagnostic

Diagnosticul de laborator al HIV a fost dezvoltat de mult timp și a fost folosit cu succes pentru a diagnostica această boală periculoasă.

Boala nu poate fi recunoscută doar prin simptome. Prin urmare, confirmarea diagnosticului pe baza tehnicilor de laborator joacă adesea un rol decisiv.

Există diferite metode pentru diagnosticarea HIV. În Rusia, în primul rând, se preferă ștergerea imunitară, precum și reacțiile ELISA. Aceste metode sunt adesea folosite ca metode de screening, de exemplu, la verificarea personalului medical.

Sisteme ELISA

Adesea, pacienții își întreabă medicii cu ce metodă pot începe o căutare diagnostică dacă suspectează infecția cu virusul imunodeficienței umane.

Orice medic competent va spune că trebuie preferată imunoanaliza enzimatică. Această tehnică este prima etapă de diagnostic din Rusia.

Principiul ELISA este simplu. În laborator, medicii au creat proteine \u200b\u200bspeciale. Sunt capabili să detecteze și să interacționeze cu anticorpii produși de organism ca răspuns la contactul cu HIV. Apoi, o enzimă indicator specială este adăugată la sistem, care își schimbă culoarea. În etapa finală, materialul este procesat folosind un aparat special, iar medicul primește rezultatul final.

ELISA este foarte popular.

În primul rând, datorită faptului că rezultatele pot fi obținute chiar dacă nu au trecut mai mult de câteva săptămâni de la introducerea agentului patogen în organism.

Este important să înțelegem că imunoanaliza enzimatică nu detectează virusul în sânge, ci anticorpii împotriva acestuia.

La mulți oameni, acestea pot începe să fie produse mai târziu de două săptămâni, ceea ce poate face ca rezultatul să fie eronat. Există mai multe generații de teste ELISA.

Cele mai moderne și extrem de precise sunt cele care aparțin generațiilor a 3-a și a 4-a. Medicii observă că este mai bine, dacă există o alegere, să se acorde preferință reactivilor europeni, deoarece acuratețea lor ajunge la 99%. Timpul pentru obținerea rezultatelor ELISA este în medie de 2 până la 10 zile.

De ce ELISA poate fi falsă

Este important să înțelegem că imunoanaliza enzimatică poate da atât rezultate fals pozitive, cât și false negative. Deși riscul unei asemenea dezvoltări de evenimente este extrem de mic.

Pacientul poate obține rezultate negative negative dacă analiza a fost prezentată prea devreme, iar anticorpii nu au avut încă timp să se formeze în organism.

Pentru a exclude o astfel de reacție, pacienților li se recomandă să fie testați de mai multe ori la intervale diferite.

Un test fals pozitiv apare la unele boli. De exemplu, pacienții cu:

• hepatită alcoolică;
• mieloame în număr mare;
• unele boli autoimune;
• femei în timpul sarcinii etc.

În astfel de boli, sângele uman este alimentat cu anticorpi. Aceștia pot semăna cu anticorpii HIV în structură, ceea ce confundă reactivii, provocând o reacție. Desigur, în ultimii ani, sistemele de testare au devenit din ce în ce mai sensibile. Cu toate acestea, problema rezultatelor false nu a fost încă complet rezolvată.

Imunoblotarea

În condițiile moderne, este imposibil să se facă un diagnostic pozitiv al HIV bazându-se doar pe ELISA. Este necesar să se confirme rezultatele obținute, care se realizează folosind o reacție de imunitate (imunoblotare, IB).

Pentru a efectua IB, laboratorul trebuie să aibă benzi de testare speciale. Proteinelor virale li se aplică. Înainte de analiză, sângele pacientului prelevat din venă este preparat într-un mod special.

Materialul biologic obținut este adăugat la gel, în care proteinele sunt separate de greutatea lor. Apoi, o bandă pregătită anterior este coborâtă în masa rezultată.

Banda devine umedă (apare ștergerea), dungi sunt detectate pe ea dacă există proteine \u200b\u200bHIV în material. Dacă proteinele sunt absente, umectarea nu schimbă aspectul benzii.

Există mai multe interpretări ale Western blot. Cu toate acestea, indiferent de metoda pe care un anumit spital sau laborator o folosește pentru a decoda, probabilitatea diagnosticului corect este de 99,9%.

Imunoblotarea poate da rezultate incorecte, se întreabă adesea pacienții? Da, acest lucru este posibil, de exemplu, dacă pacientul este bolnav de tuberculoză, este gravidă sau suferă de oncologie.

PCR pentru a ajuta

PCR este o altă metodă care poate diagnostica virusul imunodeficienței umane în sânge și alte fluide biologice, unde concentrația sa este destul de mare.

După cum observă medicii, reacția în lanț a polimerazei poate da un rezultat pozitiv în decurs de 10 zile de la primul contact al corpului cu infecția.

Este important să înțelegem că PCR în unele cazuri dă rezultate fals pozitive. Acest lucru se explică prin faptul că metoda are o sensibilitate foarte mare.

Ca urmare, reacționează adesea la anticorpi similari, indicând procese patologice complet diferite în corpul pacientului.

În ciuda sensibilității ridicate și a probabilității reduse de a obține rezultate false, PCR nu este utilizat pe scară largă. Acest lucru se explică prin mai mulți factori. În primul rând, pentru a efectua reacția în lanț a polimerazei este nevoie de echipamente speciale, al căror preț este destul de ridicat. În al doilea rând, personalul care lucrează cu echipamentul trebuie să fie înalt calificat, ceea ce poate provoca și dificultăți. Împreună, aceste caracteristici fac din PCR o metodă costisitoare de diagnostic și, ca rezultat, nu este disponibilă pentru toată lumea.

În ciuda faptului că PCR nu este o metodă de screening, este utilizată, de exemplu, pentru a verifica un nou-născut pentru infecția cu virusul imunodeficienței umane.

Sisteme Express pentru diagnosticare

Medicii și oamenii de știință s-au străduit să creeze teste rapide pentru a evalua infecția cu HIV. După cum observă medicii, atunci când utilizați aceste sisteme, este posibil să obțineți un rezultat în termen de 15 minute de la efectuarea testului.

Testele rapide ale HIV se bazează pe principiul imunocromatografiei. Sistemul include de obicei o bandă îmbibată în reactivi speciali.

Sarcina pacientului este de a aplica sânge, material seminal sau orice alt fluid biologic care poate conține anticorpi împotriva virusului.

Dacă sunt găsite, atunci două benzi colorate vor apărea pe bandă, dintre care una este controlul și cealaltă diagnosticare. Dacă nu, atunci doar banda de control va ieși la lumină.

Este important să înțelegem că testele rapide nu oferă o garanție de 100% că o persoană nu este infectată sau, dimpotrivă, infectată cu HIV. În orice caz, rezultatele obținute cu ajutorul lor trebuie confirmate în laborator folosind imunoblotarea.

Sistemele de testare expresă sunt convenabile pentru pacienții care doresc să se calmeze acasă. Totuși, după cum observă medicii, chiar dacă cu ajutorul lor o persoană a primit un rezultat negativ, dacă suspectați modificări negative în corp, ar trebui totuși să consultați un medic.

Cu ce \u200b\u200bmedic trebuie să contactați dacă suspectați o infecție

Mulți pacienți se întreabă la ce medic ar trebui să meargă dacă suspectează infecția cu HIV. În primul rând, este recomandat să vizitați un venerolog. Acest profesionist medical este specializat în boli care pot fi transmise de la persoană la persoană prin contact sexual.

Venereologul va putea să efectueze o examinare competentă, să colecteze anamneză și să decidă de ce examinări are nevoie pacientul pentru a face un diagnostic precis. La discreția sa, poate îndruma pacientul și la spitalul de boli infecțioase. Mai ales dacă încă suspectează că are HIV.

Virusul imunodeficienței umane este o boală obișnuită. Oricine este activ sexual se poate confrunta cu el.

Cunoașterea caracteristicilor răspândirii și diagnosticului acestei boli în realitățile moderne este vitală dacă pacientul dorește să-și mențină sănătatea și longevitatea. Doar o vizită la timp la medic vă va permite să luați infecția sub control și să vă protejați de ea!

Diagnosticul clinic și de laborator al infecției cu HIV are trei direcții:

1. Stabilirea faptului infecției cu HIV, diagnosticarea infecției cu HIV.
2. Determinarea stadiului evoluției clinice a bolii și identificarea bolilor secundare.
3. Predicția progresiei evoluției clinice a bolii, monitorizarea de laborator a eficacității tratamentului și efectele secundare ale medicamentelor antiretrovirale.

1. Stabilirea infecției cu HIV, diagnosticarea infecției cu HIV

Pentru a determina infecția cu HIV, se utilizează următorii indicatori specifici: anticorpi împotriva HIV, antigene HIV, ARN HIV și ADN provirus. Anticorpii împotriva HIV sunt determinați prin testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) sau imunoblotarea, care este în esență un tip de ELISA. Antigenele (proteinele) HIV sunt determinate de ELISA. Cu ajutorul metodelor genetice moleculare de reacție în lanț a polimerazei (PCR) și ADNb, se pot determina ARN HIV și ADN provirus. Utilizarea unei metode suplimentare de hibridizare a acizilor nucleici cu sonde ADN specifice face posibilă verificarea specificității secvențelor ADN obținute în timpul PCR. Sensibilitatea PCR este detectarea genelor virale la una din cinci mii de celule.

În infecția primară, se observă următoarele dinamici ale markerilor HIV în sângele persoanelor infectate. În prima lună, ca urmare a activării procesului replicativ, are loc o creștere bruscă a încărcăturii virale (conținutul de ARN HIV în plasmă), datorită diseminării virusului și infecției masive a celulelor țintă în sânge și ganglioni limfatici, devine posibilă determinarea ADN-ului proviral. Detectarea ADN-ului de virus integrat în genomul celulei țintă are o valoare diagnostică extrem de importantă.

Sarcina virală reflectă intensitatea procesului replicativ în celulele infectate. În perioada infecției primare, nivelul încărcăturii virale este diferit atunci când este infectat cu diferite subtipuri de HIV, dar dinamica modificărilor sale este aproximativ aceeași. Deci, atunci când este infectat cu subtipul B, de exemplu, dacă în prima lună după infecție încărcătura virală este de 700 de copii / ml, atunci în a doua lună există o scădere la 600, în a treia - la 100, în a 4-a - până la 50 de exemplare / ml. O astfel de dinamică este observată pe fondul unei creșteri a conținutului de anticorpi specifici împotriva HIV în sânge. Conținutul de ADN proviral din celulele mononucleare din sânge infectate cu HIV este caracterizat de o constantă relativă în primele 6 luni, cu fluctuații ușoare în unele subtipuri. Astfel, sarcinile de ARN și ADN nu sunt identice.

În timpul etapei de incubație, de ceva timp, nu există formarea de anticorpi specifici împotriva HIV într-o cantitate suficientă pentru determinarea prin metodele de laborator existente. Înainte de înregistrarea anticorpilor, apariția în sânge a proteinei Nef, care reprimă procesul de replicare, și proteina structurală p24 sunt observate pentru un timp foarte scurt. Antigenul p24 poate fi detectat în sânge prin metoda testului imunosorbent legat de enzime încă din 1-2 ped după infecție și poate fi determinat până la a 8-a săptămână, apoi conținutul său scade brusc. Mai mult, în cursul infecției cu HIV, există o a doua creștere a conținutului de proteine \u200b\u200bp24 din sânge. Cade asupra formării SIDA. Dispariția proteinelor de bază libere (nelegate de anticorpi) p24 din sânge și apariția anticorpilor specifici împotriva proteinelor HIV marchează debutul seroconversiei (Fig. 9.6).

Viremia și antigenemia determină formarea de anticorpi IgM specifici (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Anticorpii liberi din clasele IgM și IgG împotriva proteinei p24 pot apărea începând cu a doua săptămână, conținutul lor crește în 2-4 săptămâni, atingând un anumit nivel, la care rămâne luni (IgM) și ani (IgG) (Fig. 9.7).

Apariția seroconversiei complete, atunci când un nivel ridicat de anticorpi IgG specifici la proteinele structurale ale HIV p24, gp41, gp120, gp160 este înregistrat în sângele periferic, facilitează foarte mult diagnosticul infecției cu HIV. Anticorpii împotriva HIV apar la 90-95% dintre cei infectați în decurs de 3 luni de la infecție, în 5-9% - în perioada de la 3 la 6 luni de la momentul infecției și la 0,5-1% - la o dată ulterioară.

În ciuda faptului că anticorpii împotriva HIV apar ultimii, principalul indicator de diagnostic de laborator până în prezent este detectarea anticorpilor specifici prin ELISA și imunoblotare.

Date prezentate în tabelul 9.2 [spectacol] și 9.3 [spectacol] , demonstrează în mod clar sensibilitatea ridicată a sistemelor moderne de testare a imunosorbenților legate de enzime pentru determinarea anticorpilor împotriva HIV, care este superioară sensibilității imunoblotării. În unele cazuri, după primirea unui rezultat primar pozitiv în ELISA, acesta poate fi confirmat în imunoblotare numai după 2-3 săptămâni.

La examinarea pacienților infectați cu HIV (infectați cu HIV) folosind sisteme de testare imunoblotare de la companii de top din lume, anticorpii la gp160 și p24 / 25 sunt detectați în toate cazurile, anticorpii la alte proteine \u200b\u200bsunt detectați în 38,8-93,3% din cazuri (Tabelul 2). 9.4 [spectacol] ).

Dificultăți în detectarea anticorpilor la pacienții cu infecție HIV pot apărea în perioadele de viremie masivă și antigenemie, când anticorpii specifici existenți în sânge sunt asociați cu particule virale, iar procesul de replicare este înaintea producției de noi anticorpi antivirali. Această situație poate apărea și dispărea în timpul procesului infecțios.

La pacienții cu un sistem imunitar inițial slăbit, viremia și antigenemia apar mai devreme și rămân la un nivel ridicat până la rezultatul bolii. La astfel de pacienți, există un conținut scăzut de anticorpi liberi împotriva HIV, din două motive - producția insuficientă de anticorpi de către limfocitele B și legarea anticorpilor de către virioni și proteinele solubile HIV, prin urmare, pentru a determina infecția, testați sistemele cu sensibilitate crescută sau modificări ale metodelor de analiză care includ stadiul de eliberare a anticorpilor sunt necesare de la complexele imune.

Cel mai adesea, o scădere a conținutului de anticorpi împotriva HIV din motivele indicate are loc în stadiul terminal, când anticorpii împotriva HIV din ser nu pot fi capturați nici prin testul imunosorbent legat de enzime, nici prin metoda imunoblotării (Western blot) . Pe lângă apariția anticorpilor specifici împotriva HIV, răspunsul imun în primele 4 luni se caracterizează printr-o scădere a conținutului de celule CD4 + infectate din sânge și o creștere a celulelor CD8 +. Mai mult, conținutul celulelor care poartă receptorii CD4 și CD8 se stabilizează și rămâne neschimbat pentru o perioadă de timp. Creșterea conținutului de limfocite CD8 este o reacție de protecție, deoarece citotoxicitatea dependentă de celule este realizată de limfocitele CD8 +, care vizează distrugerea celulelor infectate cu HPV. Inițial, limfocitele citotoxice (CTL) răspund la proteina reglatoare Nef a virusului, care joacă un rol important în reducerea încărcăturii virale (ARN) din plasma unei persoane infectate cu HIV în primele luni. Apoi se formează un răspuns de la CTL către alții, incl. proteine \u200b\u200bstructurale, HIV, ca urmare a cărora, la 12 luni de la infecție, efectul citotoxic crește semnificativ.

Scheme pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV

Luând în considerare dinamica de mai sus a markerilor specifici ai infecției cu HIV în practică, este recomandabil să respectați următoarele scheme de diagnostic de laborator la adulți (Fig. 9.8-9.10).

Diagramele reflectă cele trei etape principale ale diagnosticului primar de laborator al infecției cu HIV:

1. Screening.
2. Referinţă.
3. Expert.

Necesitatea mai multor etape ale diagnosticului de laborator se datorează în primul rând considerentelor economice. De exemplu, costul realizării unui studiu expert cu ajutorul sistemelor de testare interne folosind metoda imunoblotării este de până la 40 USD, screening (folosind metoda ELISA) - aproximativ 0,2, adică raportul este 1: 200 .

În prima etapă (Fig. 9.8), subiecții sunt testați pentru anticorpi împotriva HIV folosind un test imunosorbent legat de enzime, conceput pentru a detecta anticorpi împotriva ambelor tipuri de virus - HIV-1 și HIV-2.

Producătorii sistemelor de testare propuse utilizează ca bază antigenică lizat viral, proteine \u200b\u200brecombinante, peptide sintetice. Fiecare dintre purtătorii enumerați ai determinanților antigenici HIV are propriile sale avantaje și dezavantaje. Prin urmare, atunci când alegeți kituri de testare de aproximativ costuri egale, ar trebui preferate kiturile cu cea mai mare sensibilitate (de preferință 100%). Printre sistemele de testare cu același cost și sensibilitate, este recomandabil să ne oprim asupra celor cu specificitate maximă.

Pe baza lizatului virusului, au fost create primele sisteme de testare pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV. În anii 1980, astfel de sisteme de testare au fost caracterizate printr-o sensibilitate mai mică de 100% și o specificitate scăzută, manifestată printr-un număr mare (până la 60%) de rezultate fals pozitive.

În timpul formării unui virion într-o cultură de limfocite, membrana sa este creată din membrana exterioară și, prin urmare, conține antigeni ai principalului complex de histocompatibilitate din clasele I și II. Această circumstanță provoacă reacții fals pozitive dacă anticorpi împotriva aloantigenelor de histocompatibilitate sunt prezenți în sângele pacienților.

Ulterior, pentru a obține un virus, s-a propus utilizarea unei culturi de macrofage, în care particulele virale se formează în principal intracelular prin înmugurirea nu din membrana exterioară a celulei, ci din membranele reticulului endoplasmatic. Această tehnologie a redus numărul falsurilor pozitive.

Una dintre cele mai bune din punct de vedere al celor mai importante caracteristici - sensibilitate și specificitate - sunt testele imunosorbente recunoscute enzimatic, care utilizează o combinație de lizat viral purificat cu peptide sintetice, care sunt porțiunile cele mai semnificative din punct de vedere antigenic ale proteinelor virusului, sau recombinante proteine.

Sensibilitatea sistemului de testare depinde și de caracteristicile celorlalte componente ale kiturilor. Astfel, sistemele de testare în care se utilizează conjugate care recunosc anticorpi nu numai din clasa IgG, ci și IgM și IgA, fac posibilă detectarea unei faze anterioare de seroconversie. Utilizarea sistemelor de testare pare a fi promițătoare, cu ajutorul căreia este posibil să se determine simultan atât anticorpii antivirali, cât și antigenul p24, ceea ce face diagnosticul de laborator al infecției cu HIV și mai devreme.

Rezultatul pozitiv primar trebuie verificat din nou prin reexaminarea probei în același sistem de testare, dar de preferință într-un lot diferit și de către un asistent de laborator diferit. Dacă se obține un rezultat negativ în timpul celui de-al doilea studiu, studiul se efectuează a treia oară.

După confirmarea unui rezultat pozitiv, se recomandă extragerea din nou a sângelui și testarea anticorpilor împotriva HIV ca primar. Eșantionarea repetată a sângelui ajută la prevenirea erorilor cauzate de etichetarea inexactă a tuburilor și completarea formularelor de trimitere.

Serul seric pozitiv în etapa de screening este trimis pentru studii de referință efectuate utilizând două sau trei sisteme de test ELISA foarte specifice. În cazul a două rezultate pozitive, se efectuează un studiu expert folosind metoda imunoblotării.

Utilizarea testelor imunosorbente legate de enzime în diagnosticul de referință, care pot fi utilizate pentru diferențierea anticorpilor specifici împotriva HIV-1 și HIV-2, facilitează lucrările ulterioare și vă permite să studiați un eșantion pozitiv în stadiul de experți imediat folosind imunoblotarea adecvată ( HIV-1 sau HIV-2) ...

O opinie a experților de laborator cu privire la infecția cu HIV se face numai pe baza unui rezultat Western blot pozitiv. La efectuarea diagnosticelor de specialitate, este necesar să se utilizeze nomenclatura genelor HIV și a produselor genetice propuse în 1990 de un grup de experți OMS (Tabelul 9.5 [spectacol] ).

Specificitatea benzilor de pe imunoblot trebuie evaluată foarte atent și cu atenție, folosind rezultatele studiilor serurilor de control (pozitive și negative), care sunt efectuate în paralel cu studiul probelor experimentale, și o probă a imunoblotului cu desemnarea proteinelor HIV (atașate de producător la sistemul de testare). Interpretarea rezultatelor obținute trebuie efectuată în conformitate cu instrucțiunile atașate sistemului de testare. De regulă, criteriul pozitivității este prezența obligatorie a anticorpilor la două proteine \u200b\u200b(precursor, exterior sau transmembranar) codificate de gena env și posibila prezență a anticorpilor la produsele altor două gene structurale ale HIV - gag și pol ( Tabelul 9.6 [spectacol] ).

În cazul obținerii unui rezultat îndoielnic, este necesară utilizarea listei de recomandări pentru clarificarea finală a rezultatelor imunoblotării (Tabelul 9.7 [spectacol] ).

Conform recomandărilor Centrului științific și metodologic rus pentru prevenirea și controlul SIDA, se ia în considerare un rezultat pozitiv dacă există anticorpi la cel puțin una dintre proteinele gp41, gp120, gp160 în combinație cu sau fără anticorpi împotriva altor HIV specifici -1 proteine. Aceste recomandări sunt făcute pe baza experienței cu serurile copiilor din focare nosocomiale, în care anticorpii au fost adesea determinați doar la una dintre proteinele din învelișul virusului.

Cea mai mare parte a pacienților care au fost examinați inițial seropozitiv în ELISA aparțin fazei limfadenopatiei generalizate persistente (PGL) sau fazei asimptomatice. Prin urmare, pe un imunoblot (o bandă de nitroceluloză pe care sunt imobilizate proteinele HIV), de regulă, se determină următoarea combinație de anticorpi împotriva HIV-1: anticorpi împotriva proteinelor de înveliș gp160, gp120 și gp41, codificate de gena env, în combinație cu anticorpi împotriva proteinelor de bază p24 (nucleocapsidă proteică, codificată de gena gag) și p31 / 34 (endonuclează codificată de gena pol).

Reacțiile pozitive cu numai proteine \u200b\u200bgag și / sau po pot apărea în faza incipientă a seroconversiei și indică, de asemenea, o infecție cu HIV-2 sau o reacție nespecifică.

În cazul obținerii unui rezultat dubios, este posibil să se utilizeze diverse tehnici metodologice pentru a clarifica faptul infecției cu HIV.

În funcție de capacitățile tehnice (disponibilitatea kiturilor și reactivilor de diagnosticare, echipamentelor cu echipamente speciale și pregătirea personalului), laboratorul expert efectuează studii de diagnosticare suplimentare (Figura 9.10).

În unele cazuri, se recomandă utilizarea metodelor genetice moleculare pentru determinarea secvențelor genetice ale HIV în ser, limfocite din sânge sau puncții ale ganglionilor limfatici. Verificarea specificității secvențelor de ADN obținute ca rezultat al PCR poate fi efectuată prin metoda de hibridizare a acizilor nucleici cu sonde ADN specifice.

Metodele de radioimunoprecipitare (RIP) și imunofluorescența indirectă (IFL) pot fi de asemenea utilizate pentru verificarea finală a serurilor cu rezultate discutabile în imunoblotare.

Detectarea ARN-ului HIV în plasma sanguină prin metode calitative sau cantitative nu este semnificativă pentru diagnosticul infecției cu HIV. Acest rezultat ar trebui confirmat prin metode standard, cum ar fi imunoblotarea, la 2-4 luni după primirea răspunsului primar discutabil sau negativ.

Izolarea HIV în cultura celulară este adevărul suprem. Cu toate acestea, metoda este complicată, costisitoare și se realizează numai în laboratoare de cercetare special echipate.

Conținutul de celule CD4 + din sânge este un indicator nespecific, dar în cazuri discutabile (ELISA "+", imunoblot "-", prezența semnelor clinice ale infecției cu HIV / SIDA), poate fi folosit ca ghid pentru luând o decizie de expert. Dacă în laborator este posibil să se efectueze doar imunoblotarea, atunci ar trebui să respectați recomandările prezentate în tabel. 9.7 și Fig. 9.9.

Persoanele a căror examinare serică de către experți a dat rezultate dubioase (incerte), cu excepția cazurilor de detectare a anticorpilor numai la p17 (HIV-1) sau p16 (HIV-2), trebuie retestate în termen de 6 luni (după 3 luni). În cazul adevăratei infecții cu HIV, după 3-6 luni, se observă o tendință „pozitivă” în spectrul anticorpilor - formarea suplimentară de anticorpi împotriva altor proteine \u200b\u200bale virusului. O reacție falsă se caracterizează prin persistența unui model dubios de imunitate pentru o lungă perioadă de timp sau dispariția benzilor suspecte. Dacă după perioada specificată rezultatele imunoblotării repetate sunt negative sau rămân îndoielnice, atunci în absența factorilor de risc, a simptomelor clinice sau a altor factori asociați cu infecția cu HIV, persoana poate fi considerată seronegativă pentru anticorpii împotriva HIV-1 și HIV-2 .

Rezultate fals pozitive datorită conținutului în sânge al pacienților de anticorpi împotriva aloantigenelor histocompatibilității, care fac parte din învelișul HIV, apar pe imunoblot sub formă de benzi la nivelurile gp41 și gp31. Motivele pentru alte reacții nespecifice (de exemplu, la p24, care este comună la indivizii cu procese autoimune) nu au fost încă clarificate.

Îmbunătățirea tehnologiei de producție a sistemelor de testare imunosorbente legate de enzime a făcut posibilă atingerea unei sensibilități ridicate - până la 99,99%, în timp ce sensibilitatea metodei imunoblotante este de 97%. Prin urmare, un rezultat negativ în imunoblotarea cu rezultate pozitive în ELISA poate indica perioada inițială de seroconversie, caracterizată printr-un nivel scăzut de anticorpi specifici. Prin urmare, este necesar să se repete studiul după 1,5-2 luni, adică perioada de timp necesară pentru finalizarea seroconversiei, pentru atingerea concentrației de anticorpi specifici din sânge, suficientă pentru detectarea prin imunoblotare.

Un rezultat pozitiv (rezultate) al unui studiu la etapa de referință sau doar screening-ul diagnosticului de laborator al infecției cu HIV, adică un rezultat pozitiv în orice test imunosorbent legat de enzime, care nu a fost confirmat în cele din urmă prin metode de expertiză, este interpretat ca prezența anticorpilor cu reacție încrucișată în sângele anticorpilor testați. Reacția încrucișată se referă la legarea situsurilor nespecifice de către anticorpi pe proteinele HIV sau peptidele utilizate ca bază antigenică în sistemul de testare în care se obține un rezultat pozitiv.

În absența imunodeficienței și a semnelor clinice ale infecției cu HIV, astfel de indivizi sunt considerați seronegativi pentru anticorpii HIV și trebuie eliminați din registru.

Diagnosticul final al infecției cu HIV se stabilește numai pe baza tuturor datelor clinice, epidemiologice și de laborator. Numai medicul curant are dreptul să informeze pacientul cu privire la diagnosticul infecției cu HIV.

Principala metodă de diagnostic confirmator (expert) de laborator a infecției cu HIV este imunoblotarea. Cu toate acestea, având în vedere sensibilitatea sa mai mică în comparație cu ELISA, un număr de cercetători au sugerat utilizarea unei combinații a mai multor sisteme de testare pentru determinarea finală a prezenței anticorpilor specifici împotriva HIV. De exemplu, G. van der Groen și colab. a propus o alternativă la metoda imunoblotării pentru verificarea rezultatelor pozitive ale etapei de screening a diagnosticului de laborator al infecției cu HIV. Acesta implică studiul materialului în paralel în trei sisteme de testare, care se bazează pe diferite metode de detectare a anticorpilor specifici împotriva HIV (mai multe variante ELISA, test de aglutinare) folosind antigeni de natură diferită. Autorii au reușit să găsească astfel de combinații de sisteme de testare, a căror utilizare oferă 100% sensibilitate și specificitate în comparație cu rezultatele obținute în imunoblotare.

Costul ieftin al acestei metode de diagnostic expert este un avantaj incontestabil, cu toate acestea, lipsa informațiilor despre proteinele specifice ale virusului care au anticorpi în sângele pacientului nu permite evaluarea specificității reacției în fiecare caz individual, precum și urmărirea modificări ale spectrului anticorpilor într-un stadiu incipient de seroconversie.

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți de mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Din momentul nașterii pentru o lungă perioadă de timp (până la 15 luni), anticorpii materni împotriva HIV pot circula în sângele acestor copii. Doar imunoglobulinele din clasa IgG pătrund în bariera placentară, prin urmare, detectarea nmmupoglobulinelor specifice HPV din clasele IgM și IgA la un copil permite confirmarea infecției, dar un rezultat negativ nu poate indica absența HIV.

Copiii cu vârsta sub 1 lună nu au încă replicare HPV, iar singura metodă de verificare este PCR. Determinarea antigenului p24 la copii cu vârsta peste 1 lună este, de asemenea, o metodă de confirmare.

Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a pătruns în bariera placentară. În orice caz, copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării și observării diagnostice de laborator în termen de 36 de luni de la naștere.

Rezultatele testelor de laborator pentru markerii infecției cu HIV necesită o interpretare atentă și ar trebui luate în considerare numai împreună cu datele din examinările epidemiologice și clinice. Pe de altă parte, trebuie remarcat faptul că, în ciuda sensibilității ridicate a metodelor moderne, rezultatele negative ale cercetării nu pot exclude complet prezența infecției cu HIV. Prin urmare, un rezultat negativ al testului, de exemplu, prin imunoblotare, poate fi formulat doar ca absența anticorpilor specifici împotriva HIV-1 și HIV-2.

Diagnosticul infecției cu HIV la pacienții seronegativi

Calitatea sistemelor de testare utilizate în diagnosticul de laborator al infecției cu HIV se îmbunătățește în fiecare an, sensibilitatea acestora crește. Cu toate acestea, variabilitatea ridicată a HIV poate duce la apariția de noi tipuri, anticorpi la care s-ar putea să nu fie recunoscuți de sistemele de testare existente. În plus, există cazuri de răspuns umoral atipic al sistemului imunitar al gazdei la virus. Astfel, L. Montagnier a raportat în 1996 doi pacienți cu SIDA la care nu s-au detectat anticorpi specifici în sângele lor în ultimii câțiva ani; diagnosticul a fost făcut pe baza datelor clinice și a fost confirmat de laborator doar prin izolarea HPV-1 în cultură de celule. În astfel de cazuri, este necesar să se utilizeze recomandările OMS, conform cărora diagnosticul clinic al infecției cu HIV la adulți și copii este posibil în prezența uneia dintre cele 12 boli cu indicatori de SIDA:

1. candidoză a esofagului, traheei, bronhiilor, plămânilor;
2. criptococoză extrapulmonară;
3. criptosporidioză cu diaree mai mult de o lună;
4. leziuni de citomegalovirus ale oricărui organ (cu excepția ficatului, splinei și ganglionilor limfatici și în plus față de un pacient cu vârsta mai mare de 1 lună):
5. o infecție cauzată de virusul herpes simplex care persistă mai mult de 1 lună la un pacient cu vârsta mai mare de 1 lună;
6. limfomul creierului la un pacient mai mic de 60 de ani;
7. pneumonie interstițială limfocitară la un copil sub 13 ani;
8. infecție diseminată cauzată de bacterii din grupul Micobacterium avium intracellulare sau M. Kansassii;
9. pneumocystis pneumonie;
10. leucoencefalopatie multifocală progresivă;
11. toxoplasmoza sistemului nervos central la pacienții cu vârsta peste 1 lună.

Prezența uneia dintre aceste boli face posibilă diagnosticarea infecției cu HIV în absența posibilității de a efectua un test de sânge de laborator pentru prezența anticorpilor la HIV sau chiar dacă se obține un rezultat seronegativ.

O sursă: Diagnostic de laborator medical, programe și algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Petersburg, Intermedica, 2001

Doar testele speciale pot dezvălui SIDA. Procesul de testare în sine constă în detectarea anticorpilor produși de organism ca răspuns la apariția unui virus. Testele de laborator pentru SIDA includ patru teste care sunt utilizate pentru a detecta boala.

Primul - ELISA (test imunosorbent legat de enzime) este cea mai comună metodă de diagnostic. Această analiză poate determina cantitatea de anticorpi care s-au acumulat în organism. Acest lucru este de obicei posibil numai dacă un virus a intrat în fluxul sanguin și au trecut trei luni de la acel moment. După cum arată practica, un procent din rezultate dau un rezultat fals negativ sau fals pozitiv.

Un rezultat fals negativ este posibil dacă anticorpii nu s-au dezvoltat încă împotriva virusului sau dacă SIDA se află în stadiul terminal, adică virusul este prezent în sânge, dar există atât de mult din acesta încât anticorpii și celulele CD-4 sunt practic absente. Pentru a verifica un rezultat negativ, puteți retransmite ELISA, dar numai după 3 luni.

În majoritatea cazurilor, un rezultat fals pozitiv este dat de examinarea pacienților care suferă de boli cronice autoimune, infecțioase, oncologice și de altă natură. Un rezultat fals pozitiv poate fi găsit și la femeile însărcinate. Prin urmare, fiecare rezultat pozitiv este în mod necesar verificat din nou, dar numai pe imunoblot - acesta este un test mai sensibil.

Dacă rezultatul imunoblotului este pozitiv, mai ales după rezultatul ELISA, atunci fiabilitatea este de 99,9% și aceasta este precizia maximă pentru un test medical (în plus, orice).

Al doilea este imunoblot (imunoterapie completă). Acest test detectează prezența anticorpilor specifici împotriva HIV. În acest caz, rezultatul este negativ, pozitiv, dubios (se mai numește și nedefinit).

Un rezultat dubios poate indica faptul că HIV este prezent în fluxul sanguin, pentru care organismul nu a dezvoltat încă întregul spectru de anticorpi. În acest caz, anticorpii împotriva HIV în ser apar în 1-3-6 luni. unul după altul, din momentul în care a fost primit primul rezultat discutabil. Dacă rezultatele sunt confirmate, atunci aceasta indică infecția cu HIV în stadiul inițial.

Rezultatul incert al acestui test poate indica opusul. Nu există infecție cu HIV în sine, dar corpul uman are anticorpi similari anticorpilor împotriva HIV. De regulă, un rezultat îndoielnic apare la femeile însărcinate, la pacienții cu tuberculoză, la pacienții cu cancer, la pacienții cu cancer, precum și la cei care au primit transfuzii multiple de sânge (adică transfuzii de sânge). Un pacient al cărui rezultat al acestui test a arătat incertitudine este observat de un medic cu boli infecțioase timp de șase luni și este testat în 1-3-6 luni.

Al treilea este PCR (reacția în lanț a polimerazei). Acest diagnostic SIDA vă permite să determinați ADN-ul și ARN-ul virusului. Aceasta este o reacție destul de sensibilă și eficientă, care vă permite să studiați ADN-ul pentru a obține un rezultat. În acest caz, ADN-ul este preluat dintr-o celulă și examinat prin înmulțirea secvențelor caracteristice de ADN

Acest test se aplică:

• pentru a determina ce virus este în organism (există HIV 1 și HIV-2);
• pentru a determina prezența sau absența HIV;
• pentru a determina și controla încărcătura virală;
• pentru a determina starea HIV a unui nou-născut care sa născut dintr-o mamă infectată cu HIV.

Acest test are o sensibilitate ridicată: poate detecta un virus chiar dacă au trecut aproximativ zece zile de la momentul presupus al infecției. O astfel de sensibilitate ridicată a testului reacționează la alte infecții, prin urmare, dă adesea rezultate fals pozitive. Rezultatele acestui test nu reprezintă o bază pentru un diagnostic definitiv.

Acest test necesită personal medical înalt calificat și echipamente de laborator sofisticate. Acesta este un test costisitor și, prin urmare, nu este utilizat în testarea gratuită a HIV.

Al patrulea este un test expres. Acest test este utilizat în principal în cazuri de urgență - în timpul nașterii, din motive de sănătate în timpul intervenției chirurgicale. Rezultatele testelor rapide sunt de obicei confirmate prin testarea de rutină a HIV.

/ 16
Cel mai rău Cel mai bun

Testarea infecției cu HIV este supusă:

2. Persoane cu diagnostic suspectat sau confirmat: infecție bacteriană la copii cu vârsta sub 13 ani, multiplă și recurentă; candidoză a esofagului, traheei, bronhiilor sau plămânilor; cancer invaziv de col uterin; coccidioidomicoză diseminată sau extrapulmonară; criptococoză extrapulmonară; criptosporidioză cu diaree timp de 1 lună sau mai mult; leziuni ale citomegalovirusului altor organe, cu excepția ficatului, splinei, ganglionilor limfatici la pacienții cu vârsta mai mare de 1 lună; retinită cu citomegalovirus cu pierderea vederii; infecție cu herpes care provoacă ulcere multifocale care nu se vindecă în decurs de o lună sau bronșită, pneumonie, esofagită; histoplasmoza diseminată sau extrapulmonară; izosporoză cu diaree mai mult de 1 lună; tuberculoza răspândită sau extrapulmonară; tuberculoza pulmonară la adulți sau adolescenți cu vârsta peste 13 ani; tuberculoza extrapulmonara; alte boli cauzate de micobacterii, altele decât M. tuberculosis diseminate sau extrapulmonare; pneumonie cauzată de pneumociste; leucoencefalopatie multifocală progresivă; salmonella (cu excepția Salmonella typhi) septicemie, recurentă; toxoylază-mozaic al creierului la copii cu vârsta peste 1 lună; Sarcoamele lui Kaposi; pneumonie interstițială limfoidă la copii sub 13 ani; Limfoamele lui Burkitt; limfom imunoblastic; limfom primar cerebral; sindromul irosirii, hepatita B, transportul HBsAg; mononucleoza infectioasa; herpes zoster recurent la persoanele cu vârsta peste 60 de ani; boli cu transmitere sexuala.

Laboratorul extrem de specializat efectuează:

a) determinarea anticorpilor, antigenelor și complexelor imune care circulă în sânge; cultivarea virusului, identificarea materialului său genomic și a enzimelor;

b) evaluarea funcțiilor legăturii celulare a sistemului imunitar. Rolul principal aparține metodelor de diagnosticare serologică, care vizează determinarea anticorpilor, precum și a antigenelor agentului patogen din sânge și a altor fluide biologice ale corpului.

Testarea anticorpilor HIV se efectuează pentru:

a) siguranța transfuziei și transplantului de sânge;

b) supravegherea, testarea pentru a monitoriza prevalența infecției cu HIV și a studia dinamica prevalenței acesteia într-o anumită populație;

c) diagnosticarea infecției cu HIV, adică testarea voluntară a serului sanguin la persoane practic sănătoase sau la pacienți cu diferite semne clinice și simptome similare infecției cu HIV sau SIDA.

Sistemul pentru diagnosticarea de laborator a infecției cu HIV se bazează pe un principiu în trei etape. Prima etapă este screeningul, conceput pentru a efectua teste de sânge primare pentru prezența anticorpilor la proteinele HIV. A doua etapă este cea de referință - permite utilizarea unor tehnici metodologice speciale pentru a clarifica (confirma) rezultatul pozitiv primar obținut în etapa de screening. Al treilea expert în etan este destinat verificării finale a prezenței și specificității markerilor infecției cu HIV identificate în etapele anterioare ale diagnosticului de laborator. Necesitatea mai multor etape ale diagnosticului de laborator se datorează în primul rând considerentelor economice.

În practică, sunt utilizate mai multe teste pentru a detecta infectarea cu HIV cu un grad suficient de fiabilitate:

Detectarea testului ELISA (ELISA) (test imunosorbent legat de enzime) de primul nivel se caracterizează prin sensibilitate ridicată, deși mai puțin specifică decât următoarele;

Blot imun (Western-blot), un test foarte specific și cel mai utilizat pentru a face diferența între HIV-1 și HIV-2;

Testul antigenemiei P25, eficient în stadiile inițiale ale infecției;

Reacția în lanț a polimerazei (PCR).

În cazurile de screening în masă a probelor de sânge, se recomandă testarea amestecurilor de seruri de la un grup de subiecți, compilate astfel încât diluarea finală a fiecărei probe să nu depășească 1: 100. Dacă amestecul ser-curent este pozitiv, se testează fiecare amestec ser-pozitiv. Această metodă nu duce la pierderea sensibilității atât în \u200b\u200bELISA cât și în imunoblot, dar reduce costurile forței de muncă și costul examinării inițiale cu 60-80%.

În timpul serodiagnosticului primar al infecției cu HIV, anticorpii totali sunt determinați folosind teste de screening screening - ELISA și reacții de aglutinare. În cea de-a doua etapă (arbitraj), se folosește un test mai complex - un imunoblot, care permite nu numai confirmarea sau respingerea concluziei inițiale, ci și realizarea acestui lucru la nivelul determinării anticorpilor la proteinele individuale ale virusului.

Test imunosorbent legat (ELISA) este principala și cea mai utilizată metodă de determinare a anticorpilor împotriva HIV. Dar dezavantajele utilizării ELISA în serodiagnosticul infecției cu HIV includ rezultate fals pozitive frecvente. În acest sens, rezultatul din ELISA nu este o bază pentru concluzia despre seropozitivitatea HIV a subiectului. Acest lucru se datorează purificării insuficiente a imunosorbantului din proteinele de balast; legarea spontană a anticorpilor serici de plastic, dacă zonele sale neocupate de imunosorbent sunt insuficient blocate sau nu sunt blocate de o proteină neutră complet specială; interacțiunea încrucișată cu proteinele HIV ale imunosorbentului diferitelor proteine \u200b\u200bprezente în sângele indivizilor cu anumite procese patologice, mai adesea autoimune, cum ar fi scleroza multiplă, LES, tuberculoză; cu donații frecvente, boli infecțioase și oncologice, arsuri, sarcină, transfuzii repetate de sânge, transplanturi de organe și țesuturi, precum și persoane care fac hemodializă; cu prezența factorului reumatoid în sânge, provocând adesea reacții fals pozitive HIV; prezența în sânge a persoanelor examinate a anticorpilor la proteinele gag HIV și, în primul rând, la proteina p24 (evident, se formează anticorpi împotriva retrovirusurilor exo sau endogene, neidentificate încă). Deoarece anti-p24 este sintetizat fără eșec în stadiile incipiente ale seroconversiei HIV, se efectuează o observare imunologică suplimentară a persoanelor cu anticorpi împotriva proteinelor gag HIV, precum și îndepărtarea lor din donație.

Sensibilitatea și specificitatea testului imunosorbent legat de enzime este în continuă creștere. Ca rezultat, a patra generație ELISA nu este inferioară în ceea ce privește capacitățile sale de diagnostic față de blot imunitar și poate fi utilizată nu numai la screening, ci și la etapa de confirmare a diagnosticării infecției cu HIV [Smolskaya T. T., 1997].

Imunoblotarea este metoda finală de diagnostic serologic, care face posibilă concluzia finală cu privire la HIV-pozitivitatea sau negativitatea subiectului.

Există o corelație clară între rezultatele studiului serurilor în imunoblot și ELISA - de două ori pozitive în ELISA cu sisteme de testare diferite, serurile în 97-98% din cazuri s-au dovedit a fi HIV-pozitive în imunoblotare. Dacă serurile au fost pozitive în ELISA doar într-unul din cele două sisteme de test utilizate, în imunoblot sunt pozitive în doar 4% din cazuri. În 5% din cazuri, atunci când se efectuează studii de confirmare la persoane cu date pozitive, imunoblotul ELISA poate da rezultate „nedeterminate”, iar printre acestea, în aproximativ 20% din cazuri, rezultatele „nedeterminate” determină anticorpi împotriva proteinelor gag HIV-1 ( p55, p25, p18). Prezența anticorpilor numai împotriva proteinelor gag ale HIV-1 este motivul examinării suplimentare a serului sanguin pentru infecția cu HIV-2.

Evaluarea rezultatelor imunoblotării se efectuează strict în conformitate cu instrucțiunile atașate sistemului de testare. În absența instrucțiunilor privind interpretarea rezultatelor în instrucțiuni, ar trebui utilizate criteriile OMS.

După primirea rezultatelor pozitive ale studiilor în stadiul de referință al diagnosticului de laborator al infecției cu HIV și a unui rezultat negativ al studiului prin metoda imunotransformării, se efectuează un diagnostic obligatoriu repetat de expert la 6 luni de la prima examinare.

Dacă rezultatele imunoblotării la 12 luni după studiul primei probe rămân negative sau incerte, atunci în absența factorilor de risc, a simptomelor clinice sau a altor factori asociați cu infecția cu HIV, subiectul este eliminat din observația dispensarului.

Dintre metodele serologice, în caz de rezultate incerte, imunoblotul este utilizat ca diagnostic expert radioimunoprecipitare (RIP). Se bazează pe utilizarea proteinelor virale marcate cu iod radioactiv, iar precipitatele sunt detectate folosind contoare beta. Dezavantajele metodei includ costul ridicat al echipamentului, necesitatea de echipamente pentru aceste scopuri în camere speciale.

Persoanele cărora li s-a diagnosticat infecția cu HIV sunt supuse unei observări dinamice constante, cu examinare obligatorie de laborator la fiecare 6 luni.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) detectează secvențe de nucleotide pre-multiplicate specifice genomului unui agent patogen dat. Multiplicarea izolată a unei gene sau a fragmentului acesteia, numită amplificare, PCR face posibilă efectuarea într-o eprubetă folosind enzima ADN polimerază termostabilă. În 2-3 ore, PCR vă permite să obțineți milioane de copii ale unei anumite părți a virusului. În infecția cu HIV, din ARN-ul celular, inclusiv ARN-ul virusului, dacă a fost reprodus în celulă sau a fost integrat în genomul său, se obține o cantitate suficientă de ADN proviral prin transcriere inversă și hibridizare cu sonde "oligonucleotidice marcate" „pentru analiză, care este detectată și cuantificată, precum și în raport cu apartenența la genomul HIV, prin etichetă radioactivă sau de altă natură a sondei, stabilind omologia ADN-ului și secvențelor de aminoacizi specifice virusului. Sensibilitatea PCR este detectarea genelor virale la una din cinci mii de celule.

PCR, inclusiv cantitativ, poate fi utilizat numai pentru a determina încărcătura virală pe plasmă pentru a rezolva problema inițierii tratamentului medicamentos pentru un pacient sau a schimbării medicamentelor antiretrovirale. PCR nu poate fi recomandat pentru diagnosticul infecției cu HIV, deoarece chiar și cele mai moderne metode ale declarației și reactivilor acesteia permit determinarea încărcăturii virale nu mai mică de un anumit nivel - 50 de copii / ml. Iar complexitatea testării PCR și costul ridicat (aproximativ 200 de dolari) anulează utilizarea pe scară largă a acesteia ca metodă de diagnostic zilnic de laborator a infecției cu HIV. Astfel, PCR rămâne indispensabilă numai pentru evaluarea încărcăturii virale pe plasmă la pacienții cu un diagnostic deja stabilit de infecție cu HIV, pentru a rezolva problema terapiei pacientului.

Etapele diagnosticului de laborator al infecției cu HIV sunt prezentate schematic în Fig. unu.

Figura: 1. Etapele diagnosticului de laborator al infecției cu HIV

În timpul infecției cu HIV, există o perioadă de „fereastră întunecată de laborator” când cantitatea de anticorpi împotriva HIV este insuficientă pentru sensibilitatea sistemelor de testare. Această perioadă variază de la o săptămână la trei luni de la momentul infecției cu HIV, în funcție de nivelul de sensibilitate al sistemului de testare. Având în vedere acest fenomen, apar dificultăți la examinarea sângelui donat de la persoane care se află în perioada menționată de infecție cu HIV. Prin urmare, în majoritatea țărilor lumii, un sistem de utilizare a sângelui a fost introdus numai după ce a fost stocat timp de 3-6 luni, pentru a efectua o reexaminare obligatorie pentru infecția cu HIV a donatorilor acestor doze de sânge și a componentelor sale .

Etapa manifestărilor primare se caracterizează prin activitatea procesului replicativ. Viremia și antigenemia rezultate determină formarea anticorpilor IgM specifici: anti-p24, anti-gp41, anti-gp120. Antigenul p24 din unii dintre cei infectați poate fi detectat în sânge prin ELISA deja la 2 săptămâni după infecție și determinat până la 8 săptămâni. Mai mult, în cursul clinic al infecției cu HIV, există o a doua creștere a conținutului de proteină p24 din sânge, care are loc în timpul formării stadiului SIDA.

Apariția seroconversiei complete, atunci când un nivel ridicat de anticorpi specifici din clasa IgG la proteinele structurale ale HIV gp41, p24, gpl20 este înregistrat în sângele periferic, facilitează foarte mult diagnosticul infecției cu HIV. Cele mai multe truse comerciale sunt concepute pentru a indica doar astfel de anticorpi.

Dificultăți în detectarea anticorpilor la pacienții cu infecție cu HIV pot apărea în perioadele de viremie masivă și antigenemie, când anticorpii specifici disponibili din sânge sunt cheltuiți pentru legarea particulelor virale, iar procesul de replicare depășește producția de noi anticorpi antivirali.

La persoanele cu un sistem imunitar inițial slăbit, viremia și antigenemia apar mai devreme și rămân la un nivel ridicat până la rezultatul bolii. În același timp, acești pacienți au un conținut scăzut de anticorpi liberi împotriva HIV, din două motive - producția insuficientă de anticorpi de către limfocitele B și legarea virionilor și proteinelor solubile HIV de către anticorpi, prin urmare, pentru a determina infecția, testați sistemele sunt necesare sensibilitate crescută sau modificări ale metodelor de analiză.tapa de eliberare a anticorpilor din complexele imune.

În ciuda abundenței markerilor specifici ai infecției cu HIV, cel mai frecvent detectat este prezența anticorpilor totali la proteinele HIV. Termenul "total" înseamnă prezența a două clase de anticorpi (IgG și IgM) și o gamă largă de anticorpi împotriva diferiților, în primul rând a proteinelor structurale ale HIV.

Determinarea celulelor CD4. Principalul indicator clinic și de laborator pentru diagnosticarea stadiului infecției cu HIV, gradul de distrugere a sistemului imunitar la pacienții din viața de zi cu zi a fost determinarea conținutului de limfocite CD4 +: o scădere a nivelului sub 200 celule / mm3 este principal criteriu pentru diagnosticarea SIDA. Se crede că toți indivizii infectați cu HIV cu un număr de limfocite CD4 + de 200 celule / mm3 și mai mici au nevoie atât de terapie antivirală, cât și de prevenire a pneumoniei cu Pneumocystis. Și, deși 1/3 din numărul de limfocite С04 + infectate cu HIV mai puțin de 200 de celule / mm3 nu au manifestări clinice, experiența a arătat că acestea dezvoltă simptome în următoarele 2 luni, deci toți sunt considerați ca pacienți cu SIDA .