منظور از اعداد 1 128 سیفلیس است. روش های اساسی برای تشخیص سیفلیس و رمزگشایی شاخص ها

سیفلیس به عنوان یک بیماری مقاربتی طبقه بندی می شود که "مقصر" اصلی آن ترپونما کم رنگ است. این باکتری می تواند پس از تماس جنسی یا از طریق وسایل خانگی وارد بدن شود.

اقدامات تشخیصی با هدف شناسایی این بیماری پیچیده است. نتایج آزمایش می تواند تحت تأثیر آنتی بیوتیک های مختلف، بارداری و سایر عواملی باشد که در مقاله توضیح داده خواهد شد.

هنگامی که تجزیه و تحلیل برای سیفلیس تجویز می شود - نشانه هایی برای تشخیص

برخی از بیماران وقتی برای معاینه نزد متخصص زنان یا آندرولوژیست مراجعه می کنند، اطلاعات عینی در مورد کیفیت زندگی جنسی خود ارائه نمی دهند.

شاید دلیل آن خجالت همیشگی باشد یا شاید دلیل این امر کمبود اطلاعات در زمینه بیماری های مقاربتی باشد.

حتی اگر سیفلیس به هیچ وجه خود را نشان ندهد، پزشک می تواند برای معاینه بفرستد و بیمار 100% مطمئن است که نمی تواند به این بیماری مبتلا شود. واقعیت این است که آسیب شناسی در نظر گرفته شده است از طریق تماس روزمره قابل انتقال استیا بدون علامت باشد

آزمایش سیفلیس در موارد زیر تجویز می شود:

• در دوران بارداری باید ثبت نام کنید.
• بیمار تمایل دارد به عنوان اهدا کننده خون اهدا کند.
• چشم انداز گرفتن یک موقعیت خاص (سرباز، کارمند بهداشت، آشپز و غیره) وجود دارد که مستلزم گذراندن یک کمیسیون پزشکی خاص است.
• فرد در زندان است.
• با یک بیمار مبتلا به سیفلیس رابطه جنسی انجام شد.
• مادر یک نوزاد تازه متولد شده مبتلا به سیفلیس است.
• بیمار علائم این بیماری را نشان داد. اغلب اینها بثورات در ناحیه تناسلی هستند.
• اولین تجزیه و تحلیل وجود بیماری مورد نظر را تایید کرد.

آزمایش خون منظم در صورت وجود سیفلیس انجام می شود. این برای کنترل کیفیت اقدامات درمانی ضروری است.

پس از درمان، بیمار نیز برای تحقیق خون می گیرد.

نحوه انجام آزمایش سیفلیس

برای تحقیقات دستکاری اغلب استفاده می شود خون از رگ. در شرایط خاص، دستیار آزمایشگاه می تواند نمونه مناسب را برای تشخیص بگیرد از انگشت، یا از نخاع.

فاصله زمانی از لحظه تحویل تا دریافت نتایج ممکن است متفاوت باشد: از یک روز تا دو هفته. همه چیز با نوع آزمایش مشخص خواهد شد.

در آماده سازی برای انجام آزمایش خون برای شناسایی بیماری مورد نظر، توصیه های زیر باید رعایت شود:

• غذاهای چرب یک روز قبل از آزمایش باید از رژیم غذایی حذف شوند.باعث ایجاد کدر شدن سرم خون می شود که نتایج به دست آمده را مخدوش می کند.
• حداقل به مدت 8 ساعت از خوردن غذا خودداری کنیدقبل از آزمایش سیفلیس
• الکل، نیکوتین ممکن است در ارزیابی واکنش اختلال ایجاد کند.کارشناسان توصیه می کنند 24 ساعت قبل از انجام آزمایش از نوشیدنی های حاوی الکل خودداری کنید و باید حداقل یک ساعت قبل از آزمایش با سیگار منتظر بمانید.
• اگر بیمار آنتی بیوتیک مصرف می کند، تجزیه و تحلیل مشخص شده باید حداقل یک هفته پس از پایان درمان انجام شود.

روش های ارسال مطالب برای تحقیق و رمزگشایی شاخص ها

امروزه هیچ یک از روش های تشخیص این بیماری قادر به تضمین صحت اطلاعات به دست آمده نیست. در هر صورت خطا وجود دارد و می تواند به 10٪ برسد.

در این راستا اقدام کنید مجموعه ای از روش های تحقیق

تجزیه و تحلیل سرولوژیکی - آزمایشات غیر اختصاصی و اختصاصی

این نوع تشخیص برای علائم محدود بیماری یا عدم وجود کامل آن اندیکاسیون دارد.

دو نوع تشخیص سروصدایی وجود دارد:

1. آزمایشات غیر اختصاصی

هنگامی که شما نیاز به آزمایش گروه بزرگی از افراد برای سیفلیس دارید، آنها مرتبط هستند، اما زمانی که نیاز به تأیید تشخیص دارید، این روش مناسب نیست.

آزمایش سخت نیست، اما ارزیابی نهایی باید توسط پزشک انجام شود.

این نوع تشخیص ها شامل آزمایش های زیر است:

الف) ریزواکنش بارشی (MR)

مطالعه مشابه بعد از یک ماه پس از عفونت نشان دهنده است. خون از انگشت قابل بررسی است، اما گاهی اوقات می توان از مایع مغزی نخاعی استفاده کرد.

نتیجه آزمایش مثبت ( تیتر آنتی بادی ها از 1:2 تا 1:320 متغیر است ) هنوز به این معنی نیست که بیمار مبتلا به سیفلیس است: می توان با گذراندن آزمایشات اضافی تشخیص را در نهایت تایید کرد.

یک واکنش منفی می تواند نتیجه دو گزینه باشد:

• بیمار سیفلیس ندارد.
• سیفلیس است، اما - در مرحله اولیه توسعه.

ب) واکنش واسرمن ( P.B. RW)

مواد مورد آزمایش در اینجا مانند تجزیه و تحلیل فوق است.

این روش معاینه قادر به ارائه اطلاعات عینی حداقل 6 هفته پس از عفونت است. اگر تیتر آنتی بادی 1:2 - 1:800 باشد، می توان در مورد وجود پاتولوژی جنسی مشخص شده صحبت کرد.

نتایج تجزیه و تحلیل در RV با علائم ریاضی زیر ارزیابی می شود:

• « — » بدون سیفلیس.
• « + "یا" ++ "- یک واکنش ضعیف مثبت بیان شده است.
• « +++ ' یک واکنش مثبت است.
• « ++++ » - بیمار به سیفلیس واکنش مثبت شدیدی دارد.

2. آزمون های خاص

سنجش های مختلفی برای این نوع معاینه وجود دارد که آنتی بادی های خاص را هدف قرار می دهد. آنها بلافاصله در خون ظاهر نمی شوند، اما حدود یک ماه پس از عفونت و می توانند چندین سال (در صورت عدم درمان) در خون باقی بمانند.

پزشک باید به طور منطقی یک نوع تجزیه و تحلیل را انتخاب کند، در مورد هر یک از آنها با جزئیات بداند، نتایج به دست آمده را پیمایش کند و پس از دریافت پاسخ بتواند تشخیص را متمایز کند.

رایج ترین انواع تست های خاص عبارتند از:

الف) واکنش ایمونوفلورسانس (RIF)

این در مراحل اولیه سیفلیس مرتبط است، اما دوره بهینه برای آزمایش 6-8 هفته پس از عفونت است.

برای مطالعه، خون مویرگی / وریدی مورد نیاز است.

• بارداری، نقایص بافت همبند می تواند باعث واکنش کاذب شود که با علامت " ارزیابی می شود. — «.
• نتایج مثبت به صورت مثبت بیان می شوند (" + ") از یک تا چهار.

ب) واکنش آگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA)

در طی این آزمایش، مقدار کمی خون از انگشت/رگ گرفته می‌شود که سپس با گلبول‌های قرمز قوچ/خروس مخلوط می‌شود. در صورت وجود عامل ایجاد کننده این بیماری در جریان خون، میکروبادی ها به هم می چسبند و به دنبال آن فروکش می کنند.

این نوع آزمایش بسیار حساس است: می تواند واکنش مثبت به سیفلیس را برای مدت طولانی پس از درمان تایید کند.

مونونوکلئوز و اشتباهات در ساختار بافت همبند نیز می تواند علت یک واکنش مثبت کاذب باشد.

حداکثر 1 ساعت طول می کشد تا پاسخ دریافت شود، و بیماران می توانند 4 هفته پس از عفونت خود را بررسی کنند: در زمان های اولیه، آنتی بادی ها در حجم کافی تولید نمی شوند.

شما می توانید مدت زمان عفونت در خون را بر اساس تیترها قضاوت کنید:

• اگر مقدار آنها از 1:320 تجاوز نکند، عفونت اخیرا رخ داده است.
• هرچه تیترها بیشتر باشد ترپونما طولانی تر در بدن است.

ج) ایمونواسی آنزیمی (ELISA)

یکی از مطمئن ترین روش ها برای تشخیص این بیماری است که در اواخر قرن گذشته مورد استفاده قرار گرفت.

در حال حاضر 21 روز پس از عفونت بسیار نشان دهنده است و یک نتیجه مثبت 98-99٪ نشان دهنده وجود سیفلیس است.

الایزا اغلب بعد از آزمایش‌های غیر اختصاصی یا در ترکیب با برخی آزمایش‌های خاص استفاده می‌شود.

آزمایش الایزا با تشخیص یک یا آن دسته از آنتی بادی ها در خون ( IgA، IgM، IgG) تعیین مرحله بیماری را امکان پذیر می کند:

• اگر نمونه خون حاویIgA اما وجود نداردIgM،IgG: از لحظه ورود ترپونما رنگ پریده به بدن بیش از 14 روز نگذشته است.
• در صورت شناساییIgA،IgM، اما نهIgG: عفونت حدود 28 روز پیش رخ داده است.
• وجود تمام آنتی بادی های فوق در خون نشان می دهد که بیش از یک ماه از عفونت گذشته است.
• اگر واکنش خون به حضورIgA منفی است وIgM،IgG مثبت: مدت زمان زیادی از لحظه ابتلا یا درمان موفقیت آمیز بیماری گذشته است.

د) واکنش بی حرکتی ترپونما پالیدوم (RIBT)

یکی از رایج ترین روش ها برای تشخیص سیفلیس.

استفاده از آن در مراحل اولیه عفونت معنی ندارد، اما پس از هفته دوازدهم، نتایج تست RIBT 99 درصد قابل اعتماد است.

این روش تشخیصی برای نوروسیفلیس مشکوک، سیفلیس اندام های داخلی یا در ترکیب با آزمایش های غیر اختصاصی استفاده می شود.

هنگام مصرف آنتی بیوتیک های مقاوم، بیمار باید حداقل 25 روز پس از پایان درمان صبر کند. آنتی بیوتیک های محلول در آب به زمان کمتری برای دفع از بدن نیاز دارند: 7-8 روز.

خون از ورید، با معده خالی گرفته می شود و نتایج به عنوان درصد بی حرکتی تفسیر می شود:

• اگر سطح بیحرکتی بیش از 20٪ نباشد، آزمایش سیفلیس منفی در نظر گرفته می شود.
• هنگامی که بیش از 50٪ باشد، واکنش به آسیب شناسی نشان داده شده مثبت است.

در موارد دیگر، مطالعه تکراری تجویز می شود.

د) ایمونوبلات

یکی از جدیدترین روش های تحقیق که وقتی تست های دیگر نتیجه مشکوک می دهند به آن روی می آورند.

با این دستکاری تشخیصی، می توان حتی حداقل مقدار آنتی بادی را در خون تشخیص داد: تقریباً 100٪ دقت دارد.

همه کلینیک ها چنین آزمایشی را انجام نمی دهند: ارزان نیست.

تجزیه و تحلیل آزمایشگاهی

هزینه آنالیز مورد بررسی بسیار کم است و شما می توانید در عرض 30 دقیقه از نتیجه آن مطلع شوید.

1. برای انجام چنین مطالعه ای، از یک بیمار دارای نقایص اولسراتیو / فرسایشی نمونه گرفته می شود. واقع در ناحیه تناسلی بررسی میکروسکوپی نمونه گرفته شده اغلب در آزمایشگاه انجام می شود.

نواحی آسیب دیده ابتدا با آب نمک پاک می شوند. این به محافظت از ناحیه آسیب دیده از ورود میکروارگانیسم های مضر کمک می کند.

2. سپس، با استفاده از یک حلقه مخصوص، سطح را تحریک کنید چند دقیقه تا زمانی که یک مایع سفید شفاف ظاهر شود. باید مراقب این دستکاری باشید: ورود ناخالصی های خون به نمونه گرفته شده غیرممکن است.

3. مایع استخراج شده به شیشه شفاف منتقل می شود. گاهی با نمک نمک مخلوط می شود.

هنگامی که ترپونماهای معمولی شناسایی می شوند، که حداقل 8 فر دارند، می توان یک واکنش مثبت گفت. اگر نتیجه منفی باشد، این روش (گاهی اوقات چندین بار) تکرار می شود.

سیفلیس trna یک آزمایش اختصاصی برای تشخیص آنتی ژن IgG است. معمولاً این مطالعه پس از نتیجه مثبت در RPR یا برای ارزیابی اثربخشی درمان انتخابی استفاده می شود. سیفلیس trna یک آزمایش بسیار حساس است که می تواند تا 20 سال پس از درمان موفقیت آمیز نتیجه مثبت را نشان دهد و در برخی موارد، آثار باقی مانده از بیماری می تواند تا پایان عمر باقی بماند.

تست سیفلیس tpha (واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال) توسط T. Rathlev در سال 1965 پیشنهاد شد. ماهیت روش واکنش چسباندن و رسوب گلبول های قرمز بود که سطح آن در سیفلیس حاوی آنتی ژن هایی به ترپونما کم رنگ است که فقط در صورت وجود آنتی بادی های ضد ترپونمال در خون مشاهده می شود.

آنالیز Trna توصیه می شود که یک ماه پس از تاریخ مورد انتظار عفونت انجام شود. قبل از خود مجموعه باید حداقل 8 ساعت از خوردن غذا خودداری کنید. اگر نتایج آزمایش ترانس نشان دهنده عدم وجود عفونت باشد، اما بیمار علائم، علائم اولیه عفونت یا آمیزش جنسی با فردی که در گذشته آلوده به اسپیروکت بوده است، داشته باشد، توصیه می شود آزمایش دیگری انجام شود. مطالعه کنترلی با فاصله 2 هفته. برخلاف نتیجه tpha منفی کاذب، هنگام استفاده از این روش برای تشخیص آنتی ژن IgG، که می‌تواند به دلیل مطالعه زودهنگام ایجاد شود، یک نتیجه مثبت کاذب برای ترپونما رنگ پریده را می‌توان در سه مورد مشاهده کرد:

• مونونوکلئوز عفونی؛
• بیماری لپر؛
• ضایعات سیستمیک بافت همبند.

تا به امروز، تست tpha به عنوان موثرترین تست سرولوژیکی اختصاصی برای تایید نتیجه مثبت سایر آزمایشات برای سیفلیس یا در صورت لزوم برای ارزیابی اثربخشی درمان استفاده شده است.

نتایج مطالعات وجود آنتی ژن IgG تنها به دو علامت "منفی" یا "مثبت" محدود نمی شود، نتایج مطالعه همچنین نشان دهنده تیتر آنتی بادی است که پزشک معالج در طول اقامت بیمار در بیمارستان بر روی آن تمرکز می کند. برای ارزیابی اثربخشی اثر درمانی. با مقدار تیترها می توان در مورد دوره فعلی عفونت و موفقیت اقدامات درمانی نتیجه گیری کرد. بنابراین، تیترهای مشخصه مرحله اول بیماری از 1:80 تا 1:320 متغیر است. با انتقال بیماری به مرحله ثانویه، تجزیه و تحلیل برای سیفلیس tpha افزایش قابل توجهی در تیترها به 1:5120 و به دنبال آن کاهش در دوره نهفته به 1:80 نشان می دهد. پس از درمان موفقیت آمیز، تیتر ممکن است به طور قابل توجهی کاهش یابد، اما تا سال ها پس از ترخیص مثبت باقی می ماند.

گاهی اوقات، با مطالعه مثبت tpha، تیترها به قدری ناچیز است که تشخیص سیفلیس باعث ایجاد تردیدهای جدی می شود. در این مورد، در مورد مشکوک بودن داده‌های به‌دست‌آمده یادداشت می‌شود و پس از 1-2 هفته توصیه می‌شود.

معمولاً آزمایش‌های سیفلیس trna در صبح برای مدت کوتاهی انجام می‌شود که با نیاز به مطالعه همراه است، که در این میان نیاز به تحویل نمونه‌های خون به آزمایشگاه حداکثر تا 2 ساعت پس از جمع‌آوری آن مشخص می‌شود. در این حالت، نمونه ها باید در دمای تا +8 درجه سانتیگراد حمل شوند.

ماده آزمایشی برای tpha سرم خونی است که توسط فرد با معده خالی اهدا می شود. اگر تمام شرایط لازم در هنگام خونگیری و تجزیه و تحلیل بعدی رعایت شود، در این صورت دقت داده های به دست آمده برای سیفیلوما اولیه 76 درصد، برای شکل ثانویه بیماری 100 درصد و برای مرحله آخر بیماری 94 خواهد بود. تشخیص ترپونما رنگ پریده در طول دوره های بدون علامت بیماری حدود 97٪ است. و سطح ویژگی، تا 99٪، امکان حذف تقریباً کامل انواع نتایج مثبت کاذب را فراهم می کند و تشخیص افتراقی بیماران را تسهیل می کند.

تست های ترپونمال برای سیفلیس. توضیحات کلی

به منظور تشخیص قابل اعتماد سیفلیس و شناسایی آنتی بادی های ضد سیفلیس در بدن بیمار (در سرم خون یا مایع مغزی نخاعی)، از فناوری های تحقیقاتی آزمایشگاهی ویژه - به اصطلاح روش های سرولوژیکی استفاده می شود.

هنگام انجام آزمایش های تشخیصی برای سیفلیس، واکنش های سرولوژیکی مختلفی استفاده می شود: آگلوتیناسیون، رسوب، ایمونوفلورسانس، تثبیت مکمل، ایمونواسی آنزیمی، و غیره. همه این واکنش های سرولوژیکی بر اساس تعامل آنتی ژن ها و آنتی بادی ها است.

آزمایش های سرولوژیکی خاص نامیده می شود ترپونمالزیرا در این آزمایشات از ترپونما پالیدوم یا آنتی ژن های آن، یعنی آنتی ژن هایی با منشاء ترپونمال استفاده می شود. هدف از تست های ترپونمال شناسایی آنتی بادی های خاص ساختارهای آنتی ژنی عامل ایجاد کننده سیفلیس است، یعنی آنتی بادی هایی که به طور خاص علیه خود باکتری T. Pallidum هدایت می شوند و نه در برابر بافت های بدن آسیب دیده توسط ترپونما. آنتی‌بادی‌های خاص ضد ترپونمال کلاس IgM را می‌توان در اوایل هفته دوم بیماری شناسایی کرد.

7. نتایج مثبت کاذب و منفی کاذب

مثبت بودن تست PB برای سیفلیس در افرادی که این بیماری را ندارند، مثبت کاذب نامیده می شود. فراوانی نتایج مثبت کاذب در افراد سالم 0.2-0.25 درصد است. اگر درصد نتایج مثبت کاذب غیراختصاصی RV در افراد سالم بسیار کم باشد، در برخی از بیماری ها می تواند زیاد باشد.

تمام نتایج غیر اختصاصی واکنش های سرولوژیکی را می توان به گروه های اصلی زیر تقسیم کرد:

1. بیماری های ناشی از حضور آنتی ژن های مشترک در پاتوژن های مشابه (اسپیروکت): تب عود کننده، یخ زدگی، بجل، پینت، ترپونما دهان، لپتوسپیرا.

2. واکنش های مثبت ناشی از تغییر در متابولیسم لیپیدها و تغییر در گلوبولین های سرم. اینها شامل نتایج مثبت در زنان باردار مبتلا به نقرس، اختلال در ترکیب چربی در نتیجه مسمومیت با سرب، فسفر، پس از مصرف سدیم سالیسیلات، دیژیتال و غیره است. این واکنش ها همچنین باید شامل واکنش های مثبت در برخی بیماری های عفونی (تیفوس، مالاریا، ذات الریه، جذام، اندوکاردیت، کلاژنوز، انفارکتوس میوکارد، ضربه مغزی، سرطان، سیروز کبدی و غیره)

3. خطاهای فنی رفتار. انتخاب نادرست دوز مکمل، عدم رعایت شرایط و شرایط نگهداری معرف ها، حذف نمونه های کنترل سرم خون از واکنش، استفاده از لوله های آزمایش و ابزار آلوده.

8. اصلاح واکنش واسرمن

تغییراتی در واکنش واسرمن در نسخه های کیفی و کمی، در سرما، با مایع مغزی نخاعی وجود دارد.

اصلاح RV در سرمابه نظر حساس تر بود یکی از ویژگی های روش برای راه اندازی واکنش واسرمن در سرما، رژیم های دمایی سه فازی است که در آن اتصال مکمل انجام می شود. این واکنش همچنین با کاردیولیپین و آنتی ژن ترپونمال قرار می گیرد.

علاوه بر ارزیابی کیفی RW، روشی برای آن وجود دارد تنظیم کمیبا رقت های مختلف سرم خون (1:10، 1:20، 1:80، 1:160، 1:320). تیتر reagin با حداکثر رقت تعیین می شود، که هنوز یک نتیجه به شدت مثبت می دهد (4+). فرمول کمی RV در تشخیص برخی از اشکال سیفلیس و در نظارت بر اثربخشی درمان مهم است.

9. دامنه

در روسیه، RSKt بخشی از مجموعه آزمایشات سرولوژیکی استاندارد برای سیفلیس (SSR) است.

از واکنش واسرمن با آنتی ژن ترپونمال و کاردیولیپین (RSKt) استفاده می شود

• تشخیص تمام اشکال سیفلیس،
• کنترل اثربخشی درمان،
• معاینه افرادی که با بیمار مبتلا به سیفلیس تماس جنسی داشته اند،
• معاینه افراد مشکوک بالینی و آنامنستیک به سیفلیس
• در معاینه پیشگیرانه برای سیفلیس بیماران در بیمارستان های روانپزشکی و اعصاب، اهداکنندگان و زنان باردار، از جمله افرادی که برای ختم مصنوعی بارداری مراجعه می کنند.

در حال حاضر، به دستور وزارت بهداشت فدراسیون روسیه، توصیه می شود RSKT را با روش های حساس تر ترپونمال (ELISA یا RPHA) جایگزین کنید.

در خارج از کشور، واکنش Wasserman با آنتی ژن ترپونمال برای مدت طولانی در عمل آزمایشگاهی بالینی مورد استفاده قرار نگرفته است و در لیست آزمایشات استاندارد توصیه شده توسط سازمان بهداشت جهانی گنجانده نشده است.

مجموعه واکنش های سرولوژیکی کلاسیک (CSR)

DAC- این مجتمع واکنشبرای تشخیص سرمی سیفلیس به عنوان یک روش استاندارد استفاده می شود. این مجموعه واکنش ها شامل واکنش واسرمن با آنتی ژن کاردیولیپین (عصاره ای از قلب یک گاو نر غنی شده با لسیتین و کلسترول) و آنتی ژن ترپونمال (تعلیق ترپونمای کم رنگ فرهنگی بیماری زا که با اولتراسوند درمان می شود) و همچنین واکنش ریز رسوبی (RMP) است. ) با پلاسما یا سرم غیر فعال که با آنتی ژن کاردیولیپین قرار می گیرد

CSR در اواسط دوره اولیه مثبت می شود (تقسیم آن به سرومنفی و سرم مثبت دقیقاً توسط CSR تعیین می شود)، در دوره ثانویه CSR در 98-100٪ بیماران مثبت است و در دوره سوم - فقط در 60-70 بیماران. ٪. یعنی با افزایش مدت بیماری، مثبت بودن CSR به تدریج کاهش می یابد.

مزایای KSR:

1) ارزانی، سادگی و سرعت تنظیم. این به ویژه برای واکنش ریز رسوب صادق است: RMP در حال حاضر روش اصلی غربالگری (غربالگری) است.

2) آزمایش های غیر ترپونمال برای نظارت بر درمان سیفلیس راحت است.

معایب CSR:

1) موضوع ارزیابی نتایج واکنش ها ("با چشم").

2) حساسیت کم در اشکال دیررس سیفلیس.

3) عدم اختصاصیت نسبت به تست های مدرن تر. هنگامی که آنها انجام می شوند، واکنش های مثبت کاذب (LPR) اغلب ذکر می شود.

LPR ممکن است به دلیل واکنش متقابل بین اسپیروکت کم رنگ و سایر میکروب ها، اختلالات متابولیسم لیپید و پروتئین، بی ثباتی غشای سلولی و تشکیل اتوآنتی بادی ها باشد. LPR در عفونت های حاد (مالاریا، مونونوکلئوز عفونی و غیره) و مزمن (سل، جذام، هپاتیت، بورلیوز و غیره)، انفارکتوس میوکارد، سیروز کبدی، کلاژنوزها (به ویژه در SLE)، انکوپاتولوژی، واکسیناسیون، مصرف دارو، سوء مصرف الکل و غذاهای چرب. مثبت کاذب ممکن است CSR در هفته های آخر بارداری، بعد از زایمان و در برخی از زنان در دوران قاعدگی باشد. نتایج منفی کاذب CSR ممکن است با عفونت HIV مرتبط باشد.

RIT، RIBT - واکنش بی حرکتی ترپونمای رنگ پریده

تست بی‌حرکتی ترپونما پالیدوم (TPI؛ تست بی‌حرکتی ترپونما پالیدوم، TPI) یک روش کلاسیک است که برای تشخیص آنتی‌بادی‌های خاص ترپونما می‌باشد. واکنش RIBT از ترپونما پالیدوم بیماری زا T. pallidum (سویه نیکولز) رشد یافته در بیضه خرگوش به عنوان آنتی ژن استفاده می کند. RIBT بر اساس از دست دادن تحرک ترپونماهای رنگ پریده زنده پس از قرار گرفتن در معرض آنتی بادی های سرم و مکمل خون بیمار است. نتایج با میکروسکوپ میدان تاریک ارزیابی می شود. علیرغم این واقعیت که تست RIBT به عنوان یک آزمایش خاص برای سیفلیس وارد عمل بالینی شد، استفاده از آن پر زحمت، از نظر فنی پیچیده، زمان بر و پرهزینه است.

1. تاریخچه روش RIBT

تست بی حرکتی ترپونما پالیدوم (TPRT) در واقع اولین آزمایش اختصاصی برای تشخیص سیفلیس است. این واکنش در سال 1949 توسط محققین آمریکایی R. W. Nelson و M. M. Mayer ارائه شد و در دهه های بعدی در مقالات علمی به تفصیل مورد بحث قرار گرفت. تلاش های ناموفق برای استفاده از ترپونماهای زنده در آزمایشات قبلاً انجام شده بود. با توجه به اینکه نلسون توانست محیطی ایجاد کند که ترپونماها تا 8 روز زنده بماند، تحقیقات او با موفقیت به پایان رسید.

2. اصل روش RIBT

این روش مبتنی بر پدیده از دست دادن تحرک توسط ترپونماهای رنگ پریده در حضور آنتی بادی های ضد ترپونمال بی حرکت کننده سرم خون و مکمل در شرایط بی هوازی است. آنتی ژن ترپونما رنگ پریده بیماری زا زنده است که از خرگوش های آلوده به سیفلیس مصنوعی بدست می آید.

3. راه اندازی تست RIBT

سرم آزمایش، مکمل و آنتی ژن در واکنش شرکت می کنند. سرم خون آزمودنی به ترپونم های زنده بدست آمده از بافت بیضه خرگوش پس از عفونت مصنوعی اضافه می شود. در صورت وجود آنتی بادی های ضد ترپونمال - بی حرکتی در سرم، ترپونماهای رنگ پریده از حرکت باز می ایستند (بی حرکت می شوند). آنتی بادی های ایموبیلیزین آنتی بادی های دیررس ضد ترپونمال هستند.

واکنش با سرم های غیرفعال شده با حرارت یا با نمونه های سرم خشک شده روی کاغذ موم شده (قطره های خشک) انجام می شود. غیرفعال سازی سرم با حرارت دادن به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتی گراد انجام می شود. قبل از گرفتن خون، آزمودنی نباید دارو، به ویژه داروهای پنی سیلین دریافت کند. دریافت داروها برای دوره تاخیر احتمالی آنها در بدن لغو می شود.

به عنوان یک آنتی ژن، از باکتری های سویه نیکولز، به دست آمده از ارکیت سیفلیسی خرگوش (التهاب بیضه) 7 تا 10 روزه استفاده می شود. دوره از لحظه تنظیم واکنش تا ثبت نتایج آن 18-20 ساعت طول می کشد، بنابراین، یک محیط بقا برای حفظ زنده ماندن و تحرک خوب میکروارگانیسم ها ضروری است.

RIBT از مکمل خوکچه هندی استفاده می کند. برای به دست آوردن مکمل، باید تحت شرایط استریل از چندین خوکچه هندی خون گرفته شود.

در صورت آلودگی باکتریایی، مکمل دور ریخته می شود. نمی توان در واکنش بی حرکتی کمرنگ ترپونما حفظ شده، tk استفاده کرد. برای میکروارگانیسم ها سمی است.

در واکنش بیحرکتی از مقدار اضافی مکمل استفاده می شود. مقدار آن تا حد زیادی به محیط بقای ترپونما کم رنگ بستگی دارد.

RIBT در جعبه های استریل قرار می گیرد که قبلاً با یک لامپ کوارتز باکتری کش به مدت 45-60 دقیقه تابش شده است. هر سرم خون در دو لوله آزمایش بررسی می شود: با تجربهو کنترل. در هر دو لوله آزمایش، سرم آزمایش و آنتی ژن به مقدار لازم اضافه می شود. مکمل فعال در لوله آزمایش ریخته می شود و به همان میزان سرم خون خوکچه هندی غیرفعال شده در لوله کنترل ریخته می شود. پس از پر شدن، محتویات لوله ها با تکان دادن ملایم مخلوط می شوند.

RIBT در شرایط بی‌هوازی کار می‌کند. لوله های آزمایش با مواد تشکیل دهنده در یک میکروآئروستات قرار می گیرند که از آن هوای اتمسفر توسط یک پمپ خلاء مکیده می شود و مخلوط گاز از یک سیلندر (95 قسمت نیتروژن و 5 قسمت دی اکسید کربن) تزریق می شود. میکروآناروستات با لوله های آزمایش در یک ترموستات (35 درجه سانتیگراد) به مدت 18-20 ساعت قرار می گیرد.

ارزیابی نتایج RIBT پس از خارج کردن لوله های آزمایش از ترموستات و میکروآنارواستات (یعنی پس از 18-20 ساعت تجربه) انجام می شود. با پیپت پاستور، یک قطره از محتویات لوله آزمایش به یک لام شیشه ای ریخته می شود که با یک لغزش پوششی پوشانده شده و در میدان تاریک میکروسکوپ بررسی می شود (هدف 40، چشمی 10X). چندین میدان دید در قسمت های مختلف آماده سازی مورد بررسی قرار می گیرد و تعداد ترپونماهای کم رنگ متحرک و غیر متحرک در هر کدام را می شمارند. شمارش با دارو از کنترل و سپس از لوله آزمایش شروع می شود.

هنگام تنظیم واکنش، از 5 مطالعه کنترلی استفاده می‌شود: با سرم خون مثبت و منفی آشکار، با مکمل فعال و غیرفعال و محیط بقا برای ترپونما کم رنگ. برای قضاوت در مورد میزان تحرک ترپونما کم رنگ در این آزمایش از سرم خون کنترل منفی استفاده می شود. کنترل سرم خون مثبت - برای ارزیابی میزان فعالیت بی حرکت تحت شرایط این آزمایش. مطالعه مکمل های فعال و غیرفعال و محیط برای تعیین تأثیر آنها بر تحرک ترپونما کم رنگ انجام می شود.

با کمبود مکمل در آزمایش، آنتی بادی های بی حرکت فعالیت خود را به درستی نشان نمی دهند و ترپونماها متحرک می مانند. بنابراین، پس از آزمایش، تعیین مکمل باقیمانده به منظور ارزیابی اینکه آیا تحرک ترپونماهای رنگ پریده در لوله‌های آزمایش به دلیل عدم وجود مکمل بوده است، انجام می‌شود. برای این کار از یک سیستم همولیتیک استفاده می شود - مخلوطی از سوسپانسیون گلبول های قرمز قوچ و سرم همولیتیک رقیق شده که در ترموستات نگهداری می شود.

مکمل باقیمانده با افزودن سیستم همولیتیک در حجم مورد نیاز به هر لوله تعیین می شود. لوله ها به مدت 45 دقیقه در ترموستات 37 درجه قرار می گیرند. در لوله های آزمایشی، همولیز گلبول های قرمز باید اتفاق بیفتد، در لوله های کنترل باید همولیز تاخیر داشته باشد. عدم وجود همولیز در لوله های آزمایش نشان دهنده مقدار ناکافی مکمل است، در این موارد مطالعه باید تکرار شود. معاینه مکرر سرم خون تنها در صورتی انجام نمی شود که 100% بی حرکتی ترپونماهای رنگ پریده مشاهده شود.

4. حسابداری برای نتایج RIBT

ترپونماهای بی حرکت با استفاده از میکروسکوپ میدان تاریک در زیر میکروسکوپ شمارش می شوند. محقق باید مهارت ارزیابی حرکت ترپونما را داشته باشد. او باید به شدت حرکات انجام شده توسط ترپونما کم رنگ توجه کند. در این باکتری مشاهده انقباضات موج مانند و حرکات خمشی همیشه امکان پذیر نیست، گاهی اوقات فقط انقباضات چرخشی. همچنین باید بتوانید حرکات فعال ترپونما را از حرکت با جریان سیال تشخیص دهید.

برای ارزیابی نتایج واکنش، درصد بی حرکتی ترپونماهای کم رنگ، یعنی نسبت ترپونماهای متحرک و بی حرکت در آزمایش (با مکمل فعال) و شاهد (با مکمل غیرفعال) طبق فرمول محاسبه می شود:

X \u003d (M - C) × 100 / M

که در آن M تعداد ترپونماهای متحرک در کنترل است. ج - تعداد ترپونماهای متحرک در آزمایش. X - درصد بی حرکتی. در کار عملی، درصد بیحرکتی طبق جدولی که از قبل تهیه شده است با استفاده از فرمول فوق تعیین می شود.

واکنش بی حرکتی ترپونما کم رنگ به صورت تخمین زده می شود

• مثبتدر طول بی حرکتی 51 - 100% ترپونم،
• ضعیف مثبت: 31 - 50% ترپونماهای بی حرکت،
• مشکوک: 21 - 30% ترپونماهای بی حرکت،
• منفی: 0 - 20% ترپونماهای بی حرکت

واکنش بی حرکتی ترپونما رنگ پریده در پایان دوره اولیه - شروع دوره ثانویه سیفلیس (از هفته 7-8 از لحظه عفونت و بیشتر) مثبت می شود. در عین حال، RIBT برای تشخیص مراحل اولیه سیفلیس کاربرد کمی دارد، زیرا آنتی بادی هایی که ترپونما کم رنگ را بی حرکت می کنند و در واکنش مشخص می شوند تنها 3-6 هفته پس از عفونت ظاهر می شوند. آنتی بادی-ایموبیلیسین ها متعلق به کلاس ایمونوگلوبولین های IgG هستند. آنها دیرتر از ریگین ها (آنتی بادی های ضد کاردیولیپین)، دیرتر از آنتی بادی های فلورسین (RIF و ELISA تشخیص داده می شوند) و رسوبیتین ها (RMP تشخیص داده می شوند) در خون ظاهر می شوند.

در آینده، RIBT مثبت باقی می ماند. حساسیت بالایی از واکنش در اشکال دیررس سیفلیس وجود دارد. با سیفلیس ثانویه، دیررس، نوروسیفلیس، سیفلیس مادرزادی، یک نتیجه RIBT مثبت در 95-100٪ موارد ثبت می شود. با سیفلیس سوم، با ضایعات خاص اندام های داخلی، سیستم عصبی، زمانی که RV اغلب منفی است، RIBT در 98-100٪ موارد نتایج مثبت می دهد.

RIBT مدتهاست که به عنوان خاص ترین آزمایش برای سیفلیس شناخته شده است. با توجه به ادبیات، ویژگی RIBT 99٪ است، حساسیت بین 79 تا 94٪ است. با توجه به TsNIKVI، حساسیت RIBT (در مجموع، برای تمام مراحل سیفلیس) 87.7٪ است.

7. دامنه روش

دامنه RIBT به دلیل مدت زمان تنظیم، هزینه بالا و شدت کار به تدریج در حال محدود شدن است. RIBT یک تحلیل نسبتاً پیچیده و پرهزینه است که به پرسنل بسیار ماهر و حضور یک ویواریوم نیاز دارد. در این راستا استفاده از این روش در سال های اخیر به میزان قابل توجهی کاهش یافته است. در ایالات متحده، این آزمایش در حال حاضر فقط در آزمایشگاه های تحقیقاتی استفاده می شود.

بر اساس پیچیدگی و هزینه بالای RIF و RIBT، استفاده از آنها برای تشخیص اشکال دیررس و نهفته سیفلیس منطقی است. RIBT جایگاه خود را به عنوان یک "داوری واکنش" در تشخیص افتراقی اشکال نهفته اولیه سیفلیس و نتایج مثبت کاذب حفظ می کند. این واکنش ممکن است در تشخیص نوروسیفلیس و زمانی که سایر تست‌های سرولوژیک ناسازگار هستند مفید باشد.

RIBT خیلی دیرتر از RIF و RV مثبت می شود. بنابراین، برای تشخیص اشکال عفونی سیفلیس استفاده نمی شود.

RIBT، مانند RIF، در روند درمان ضد سیفلیس بسیار آهسته منفی است. در نتیجه، برای نظارت بر پیشرفت درمان آنتی سیفیلیتیک نامناسب است.

نتایج مثبت کاذب (FPR) در RIBT نادر است و عمدتاً در تعدادی از ترپونماتوزها (Yaws، pinta، bejel) که در روسیه یافت نمی شوند، و همچنین در جذام، سارکوئیدوز، SLE، سل، سیروز مشاهده شده است. کبد و برخی بیماری های نادر دیگر با ماهیت غیر سیفلیس. با افزایش سن بیماران، تعداد نتایج مثبت کاذب RIBT افزایش می یابد.

RIBT ممکن است مثبت کاذب باشد اگر سرم آزمایش حاوی مواد ترپونم کش (به عنوان مثال، پنی سیلین ها، تتراسایکلین ها، اریترومایسین) باشد که باعث بی حرکتی غیراختصاصی ترپونمای رنگ پریده می شود. این ممکن است به دلیل مصرف آنتی بیوتیک ترپونوموسیدال توسط بیمار باشد، بنابراین معاینه در افراد انجام نمی شود. که در یک ماه گذشته آنتی بیوتیک دریافت کرده اند. خون برای RIBT را می توان زودتر از 2 هفته پس از پایان آنتی بیوتیک ها و سایر داروهای ضد سیفلیس بررسی کرد.

9. تغییرات واکنش بی حرکتی ترپونماهای رنگ پریده

علاوه بر تکنیک میکروآناروستاتیک، یک تنظیم ملانژ RIBT مطابق N.M وجود دارد. اووچینیکوف. شرایط بی هوازی در طول فرمولاسیون واکنش با قرار دادن مخلوط واکنش دهنده در یک ملانجر (میکسر لکوسیتی) ایجاد می شود که هر دو انتهای آن با یک حلقه لاستیکی بسته می شود. تکنیک واکنش ملانژ امکان استفاده از پمپ خلاء، سیلندر با مخلوط نیتروژن و دی اکسید کربن و میکروآناروستات را فراهم می کند. در یک مطالعه مقایسه ای بر روی یک ماده بالینی بزرگ، نتایجی به دست آمد که کمتر از روش کلاسیک بی هواستا نیست.

10. ویژگی ها، مزایا و معایب RIBT

RIBT از نظر فنی یک روش تشخیصی پیچیده و پرهزینه است. این فناوری به بودجه قابل توجهی برای نگهداری و آزمایش خرگوش ها نیاز دارد. این آزمایش زمان‌بر در حال حاضر عمدتاً برای اهداف علمی استفاده می‌شود. در اکثر کشورهای خارجی، تقریباً 40 سال است که RIBT عملاً نه برای اهداف تشخیصی، بلکه فقط در کارهای تحقیقاتی استفاده می شود.

معایب واکنش:

• RIBT نیاز به کار با ترپونما پالیدوم زنده بیماری زا از سویه نیکولز دارد که علیرغم سازگاری با خرگوش ها برای انسان عفونی باقی می ماند.
• واکنش پیچیده، وقت گیر و پرهزینه است
• ویواریوم مورد نیاز است
• برای تنظیم واکنش، ثبت نتایج و حفظ ویواریوم به پرسنل بسیار ماهر نیاز است
• ذهنی بودن ارزیابی نتایج
• عدم وجود اتوماسیون
• هیچ راهی برای استاندارد کردن این روش سرولوژیکی وجود ندارد.
• واکنش در برابر پس‌زمینه درمان ضد سیفلیسی قابل استفاده نیست
• ناتوانی در استفاده برای کنترل درمان RIBT در بیماران مبتلا به سیفلیس می تواند برای سال ها (و حتی مادام العمر) مثبت بماند، علی رغم درمان کامل.
• این واکنش می تواند نتایج مثبت کاذب را در بیماران مبتلا به تومورهای بدخیم، دیابت، جذام، بیماری های خود ایمنی، ذات الریه، آسیب شناسی شدید قلبی عروقی بدهد.

مزایای RIBT عبارتند از:

1) حساسیت به اندازه کافی بالا؛

2) ویژگی بالا.

RIF (واکنش ایمونوفلورسانس)

واکنش ایمونوفلورسانس (RIF) یک روش تشخیصی سریع برای تشخیص آنتی ژن های میکروبی یا تشخیص آنتی بادی است. آزمایش‌های مبتنی بر تشخیص سیگنال فلورسنت از بهترین آزمایش‌ها برای سیفلیس در نظر گرفته می‌شوند.

1. تاریخچه روش

آنتی بادی ترپونمال فلورسنت (FTA) اولین بار در سال 1957 توسط دیکن و همکاران (دیکن، فالکون و هریس) ساخته شد.

2. اصل روش

روش RIF مبتنی بر این واقعیت است که آنتی ژن های بافتی یا میکروب های درمان شده با سرم های ایمنی با آنتی بادی های برچسب گذاری شده با فلوروکروم می توانند در اشعه UV یک میکروسکوپ فلورسنت بدرخشند. باکتری های موجود در اسمیر که با چنین سرم درخشانی درمان شده اند، در امتداد محیط سلول به شکل یک مرز سبز می درخشند.

به عنوان یک آنتی ژن در RIF، از یک سوسپانسیون از ترپونماهای رنگ پریده بیماری زا زنده سویه نیکولز از ارکیت خرگوش استفاده می شود که روی یک لام شیشه ای خشک شده و با استون ثابت می شود. سرم خون بیمار به ترپونماهای رنگ پریده خشک شده و با استون به شیشه تثبیت می شود.

پس از شستشو، آماده سازی با سرم حاوی آنتی بادی علیه ایمونوگلوبولین های انسانی که با فلورسین نشاندار شده اند، درمان می شود. یک بار دیگر، آماده سازی شسته شده و در زیر میکروسکوپ فلورسنت مشاهده می شود. اگر سرم آزمایش حاوی آنتی بادی های فلورسین ضد ترپونمال باشد، درخشش زرد مایل به سبز ترپونما مشاهده می شود.

3. روش انجام تحقیق به روش RIF

آنتی ژن تثبیت شده بر روی لام شیشه ای (ترپونما پالیدوم بیماری زا) توسط سرم آزمایش پردازش می شود. پس از شستشو، آماده سازی با سرم ایمونوگلوبولین ضد انسانی فلورسنت که با فلوروکروم برچسب گذاری شده است، درمان می شود. در این مورد، کمپلکس فلورسنت به دست آمده (ضد گلوبولین انسانی + فلورسین تیوئیزوسیانات) به گلوبولین انسانی روی سطح ترپونما کم رنگ متصل می شود و درخششی از ترپونما کم رنگ را در زیر میکروسکوپ فلورسنت ایجاد می کند.

برای تشخیص کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی، از سرم شب تاب استفاده می شود که نشان دهنده ایمونوگلوبولین های ضد گونه (ضد انسان) کونژوگه با FITC است. وجود آنتی بادی های ترپونما در سرم با درخشش ترپونما در هنگام بررسی زیر میکروسکوپ فلورسنت مشخص می شود. این آزمون در نسخه های کیفی و نیمه کمی انجام می شود.

4. حسابداری برای نتایج

تجسم نتایج RIF با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت انجام می شود. نتایج با درجه لومینسانس ترپونما در آماده سازی ارزیابی می شود. در صورت وجود آنتی بادی، درخشش ترپونما قابل مشاهده است، اما اگر آنتی بادی ضد ترپونما در سرم وجود نداشته باشد، ترپونما قابل مشاهده نیست. درجه لومینسانس ترپونما کم رنگ خشک شده ثابت شده روی شیشه با علامت "پلاس" نشان داده شده است (از "-" تا "++++"). نتیجه منفی - بدون درخشش یا سطح پس زمینه - 1+.

5. در چه دوره هایی از بیماری بهتر است استفاده شود

واکنش ایمونوفلورسانس (RIF) در تمام مراحل عفونت، از پایان دوره کمون تا سیفلیس اواخر، کاملاً حساس است. دوره اولیه سیفلیس در دوره کلاسیک 3-4 هفته پس از عفونت شروع می شود. RIF در روزهای اول دوره اولیه یا حتی در پایان دوره کمون، از هفته سوم پس از عفونت مثبت می شود. نتایج RIF در تمام دوره ها، از جمله در فرم های دیررس، مثبت باقی می ماند.

RIF کمی زودتر از RW مثبت می شود. بر اساس برخی گزارش ها، RIF مثبت در 80 درصد بیماران مبتلا به سیفلیس سرم منفی اولیه رخ می دهد. در دوره ثانویه، RIF تقریباً در 100٪ موارد مثبت است. در سیفلیس نهفته همیشه مثبت است و در اشکال دیررس بیماری و سیفلیس مادرزادی 95 تا 100 درصد نتایج مثبت می دهد.

6. حساسیت و ویژگی

واکنش ایمونوفلورسانس (RIF) گروهی از روش ها با حساسیت و ویژگی بالا است. RIF در تمام مراحل عفونت، از دوره انکوباسیون تا سیفلیس دیررس، حساس است. طبق WHO، حساسیت RIF در سیفلیس اولیه 70-100٪ است، در سیفلیس ثانویه و اواخر - 96-100٪، ویژگی - 94-100٪. با توجه به TsNIKVI، حساسیت RIF در تمام اشکال سیفلیس 99.1٪ است.

ويژگي RIF را مي توان با پيش درمان سرم آزمايشي با آنتي ژن ترپونمال جاذب - اولتراسونيف شده كه به آنتي بادي هاي گروه (RIF-abs) متصل مي شود، افزايش داد.

7. دامنه روش

RIF اعمال می شود:

• به عنوان یک واکنش تاییدی در سیفلیس اولیه و نهفته
• برای تشخیص گذشته نگر
• برای افتراق اشکال نهفته سیفلیس و نتایج مثبت کاذب تحقیقات در مورد سیفلیس.
• به عنوان یک آزمایش تاییدی برای نوروسیفلیس.

RIF به طور گسترده ای به عنوان یک تست تاییدی استفاده می شود، اما برای استفاده معمولی یا غربالگری در نظر گرفته نشده است زیرا از نظر فنی تنظیم آن دشوار است. برای انجام RIF، داشتن ویواریوم یا خرید سوسپانسیون ترپونماهای رنگ پریده بیماری زا ضروری است که امکان واکنش را محدود می کند. با این حال، در سال‌های اخیر، سیستم‌های آزمایشی در بازار داخلی ظاهر شده‌اند، که اجازه می‌دهند واکنش در غیاب ویواریوم و سویه آزمایشگاهی خود از ترپونما پالیدوم بیماری‌زا انجام شود.

8. منابع و علل خطاهای مرحله بندی، مثبت کاذب و منفی کاذب

LPR هنگام تنظیم RIF نادر است (با کلاژنوز، بورلیوز).

RIF هنوز هم یکی از بهترین آزمایش‌ها برای سیفلیس، «استاندارد طلایی» تشخیص سرمی در نظر گرفته می‌شود. راه اندازی RIF در مقایسه با RIBT آسان تر است.

علیرغم ارزش تشخیصی بالا، نیاز به استفاده از T. pallidum زنده، هزینه بالا و مدت زمان مطالعه مانع از معرفی گسترده RIF به تمرینات روزمره می شود. تنظیم واکنش کار دشواری است. علاوه بر این، ارزیابی نتایج RIF ذهنی است.

مزایای RIFو RIBT عبارتند از:

1) حساسیت بالا (به خصوص برای RIF)؛

2) ویژگی بالا (به ویژه برای RIBT).

معایب RIFو RIBT:

1) پیچیدگی فنی، هزینه بالای روش ها.

2) ارزیابی ذهنی نتایج، عدم اتوماسیون؛

3) RIF و RIBT در بیماران مبتلا به سیفلیس علیرغم درمان کامل دریافت شده، می توانند برای سالها (و حتی مادام العمر) مثبت باقی بمانند. بنابراین نمی توان از این واکنش ها برای کنترل درمان استفاده کرد.

10. اصلاح روش

در عمل، برای تشخیص سروزی سیفلیس، چندین اصلاح در واکنش ایمونوفلورسانس استفاده می شود و مورد استفاده قرار گرفته است:

• RIF-abs- حساس ترین روش تشخیص سرمی سیفلیس، زودتر از سایر واکنش ها مثبت می شود (از هفته سوم عفونت).
• RIF-200(سرم بیمار پس از مراجعه 200 بار رقیق می شود) یک روش بسیار اختصاصی برای تشخیص سروزی سیفلیس است.
• RIF-10(رقت 10 برابر سرم آزمایش) - روشی حساس تر از RIF-200.
• RIF-tsبا مشروب انجام می شود.
• RIF-abs-IgM- تشخیص آنتی بادی های اولیه ضد ترپونمال از کلاس IgM.

1. گسترده ترین اصلاح RIF-abs- واکنش ایمونوفلورسانس با جذب. قبل از تنظیم واکنش، سرم سوژه با مخلوطی از ترپونماهای غیر بیماری زا تخلیه می شود تا واکنش های متقاطع حذف شود. آنتی بادی های گروهی از سرم مورد مطالعه با استفاده از ترپونماهای فرهنگی تخریب شده توسط اولتراسوند حذف می شوند که به طور قابل توجهی ویژگی واکنش را افزایش می دهد. از آنجایی که سرم آزمایش در رقت 1:5 استفاده می شود، RIF-abs بسیار حساس است.

نشانه های اصلی برای استفاده از RIF-abs در عمل بالینی عبارتند از:

• تشخیص اشکال نهفته و دیررس سیفلیس،
• تشخیص نتایج مثبت کاذب CSR و RMP، به ویژه در بیماران باردار و بدنی مشکوک به سیفلیس،
• برای ایجاد یک تشخیص گذشته نگر بیماری.

RIF-abs در ارزیابی نتایج درمان بسیار آموزنده نیست: در 85٪ از بیمارانی که درمان آنتی سیفلیسی کافی دریافت کرده اند، نتایج مثبت RIF برای سال ها باقی می ماند.

این واکنش «استاندارد طلایی» برای تشخیص سرمی سیفلیس نامیده می شود. برای موارد داوری استفاده می شود، اما یک سوسپانسیون تازه غلیظ از سویه T. pallidum Nichols از ارکیت 7 روزه در خرگوش برای یک نتیجه قابل اعتماد لازم است، که نباید منجمد شود.

2. در اتحاد جماهیر شوروی در دو نسخه نصب شد - RIF-10و RIF-200یعنی با رقیق شدن سرم آزمایش به میزان 10 و 200 برابر. RIF-200 - سرم آزمایش 200 بار رقیق می شود تا تعداد نتایج مثبت کاذب کاهش یابد. این ویژگی ویژگی بالایی از واکنش را فراهم می کند، اما حساسیت آن تا حدودی کاهش می یابد. RIF-10 حساس تر است، اما اغلب نتایج مثبت غیر اختصاصی می دهد تا RIF-200، که با ویژگی بالا مشخص می شود. RIF-10 حساس تر است، RIF-200 و RIF-abs خاص تر هستند.

حساسیت RIF-200 و RIF-abs در 84-99٪ برآورد شده است، و ویژگی 97-99٪ است.

3. RIF-tsبا مشروب انجام می شود. واکنش با استفاده از مایع مغزی نخاعی برای شناسایی ضایعات خاص CNS تنظیم می شود.

4. واکنش RIF-abs-IgMبرای تشخیص آنتی بادی های اولیه ضد ترپونمال کلاس IgM پیشنهاد شده است. از این واکنش می توان برای تشخیص سیفلیس مادرزادی، اشکال اولیه سیفلیس و تمایز بین موارد عفونت مجدد و عود سرمی استفاده کرد.

دو تغییر این واکنش شناخته شده است:

- FTA-ABS-IgM، بر اساس استفاده از یک مزدوج ضد IgM (آنتی بادی های نشاندار شده با فلورسین برای IgM انسانی) در مرحله دوم واکنش به جای گلوبولین فلورسنت ضد انسانی.

- نسخه روسی RIF-abs-IgM که مشخصه آن این است که یک جاذب به سرم خون آزمایش اضافه می شود و آنتی بادی های IgG را حذف می کند و RIF-abs با آنتی بادی های IgM باقی مانده قرار می گیرد.

نشانه های اصلیبرای فرمولاسیون RIF-abs-IgM عبارتند از:

- تشخیص سرمی سیفلیس مادرزادی در صورت عدم وجود تظاهرات آشکار سیفلیس مادرزادی بر روی پوست و غشاهای مخاطی کودک.

- تشخیص افتراقی عفونت مجدد و عود بالینی-سرولوژیکی یا سرولوژیکی سیفلیس که در آن RIF-abs-IgM منفی و RIF-abs مثبت خواهد بود.

- ارزیابی اثربخشی درمان برای سیفلیس اکتسابی یا مادرزادی اولیه: پس از درمان کافی، RIF-abs-IgM در 3-6 ماه آینده منفی می شود.

از این واکنش می توان برای تشخیص سیفلیس مادرزادی استفاده کرد. مشخص است که مولکول های بزرگ IgM نمی توانند از جفت سالم عبور کنند. بنابراین، آنتی بادی های کلاس M علیه ترپونما پالیدوم ممکن است در بدن کودک به دلیل نقض عملکرد مانع جفت ظاهر شود یا توسط بدن کودک مبتلا به سیفلیس تولید شود. آنتی بادی های کلاس IgM در خون بیمار مبتلا به سیفلیس در هفته های اول بیماری ظاهر می شوند و آنتی بادی های کلاس IgG بعداً ظاهر می شوند. تعیین جداگانه آنتی بادی های هر دو کلاس در تشخیص سیفلیس مادرزادی در کودکان بسیار مفید است، زیرا وجود آنتی بادی های کلاس IgM در کودک در ماه اول زندگی نشان می دهد که آنها توسط بدن کودک مبتلا به سیفلیس تشکیل شده اند. در حالی که تشخیص تنها آنتی بادی های IgG منشأ مادری دومی را نشان می دهد.

بیانیه واکنش 19S (IgM) -RIF-absشامل جداسازی اولیه توسط ژل فیلتراسیون مولکولهای بزرگتر 19S IgM از

کسری از مولکول های کوچکتر 7S IgG. مطالعه بیشتر در واکنش RIF-abs سرم خون حاوی تنها بخش IgM 19S،

تمام منابع احتمالی خطا را از بین می برد. اما تکنیک راه اندازی این واکنش پیچیده و زمان بر است، نیاز به تجهیزات ویژه و آموزش متخصصان دارد.

واکنش چسبندگی ایمنی (RIP، TPIA - Treponema pallida immunoadherence).

این واکنش بر اساس استفاده از پدیده ای است که توسط ریکنبرگ در سال 1912 توصیف شده است. RIP بر این واقعیت استوار است که ترپونماهای بافت بدخیم که توسط سرم بیمار مبتلا به سیفلیس حساس شده اند، در حضور مکمل و گلبول های قرمز به سطح گلبول های قرمز می چسبند و در حین سانتریفیوژ با آنها به داخل رسوب منتقل می شوند و از بین می روند. مایع رویی

از مواد زیر برای تنظیم واکنش استفاده می شود: سرم آزمایش، آنتی ژن، مکمل، گلبول های قرمز اهداکننده، محلول ایزوتونیک کلرید سدیم. به عنوان یک آنتی ژن، سوسپانسیون ترپونما کم رنگ سویه نیکولز استفاده می شود.

به طور گسترده در رابطه با تشخیص سروزی سیفلیس، این آزمایش توسط نویسندگان داخلی و خارجی در دهه 50-60 مورد مطالعه قرار گرفت. داده های مربوط به ارزش RIP به عنوان یک تست تشخیصی متناقض بوده است. واکنش نیاز به حداکثر دقت داشت، زیرا با ریختن نادرست مواد، با بیش از حد یا کمبود مواد آزمایشی در آماده سازی، نتایج غیر قابل اعتمادی به دست آمد.

در روسیه، تحقیقات گسترده ای توسط L.V. Sazonova، که نتایج مشابهی را در RIP و RIT با استفاده از سوسپانسیون تازه تهیه شده از ترپونماهای رنگ پریده بیماری زا سویه نیکولز به دست آورد. با این حال، استفاده از یک آنتی ژن گرم شده یا حفظ شده با فنل به شدت نتایج واکنش را مخدوش کرد و آنتی ژن را ناپایدار کرد. این تست را برای جایگزینی RIT L.V توصیه کنید. سازونوا آن را غیرممکن می دانست.

G.P. Avdeeva با استفاده از سایر رژیم های دما و زمان در تهیه آنتی ژن، نتایج متفاوتی در مطالعه RIP به دست آورد. به گفته وی، حساسیت این واکنش بالاتر از حساسیت KCP و RIT است، اما تا حدودی کمتر از RIF است و ویژگی RIP، RIT و RIF نزدیک است.

با این حال، عدم تولید آنتی ژن برای RIP اجازه مطالعه گسترده تر این آزمایش و معرفی آن را در عمل نمی دهد.

واکنش RPHA هماگلوتیناسیون غیرفعال

واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA)یک آزمایش سرولوژیکی رایج است که ریشه محکمی در عمل آزمایشگاهی دارد. سطح کارایی نسبتا بالایی در مطالعه دارد.

1. تاریخچه روش RPHA

برای اولین بار، G.Blumental و W.Bachman (1932) در مورد استفاده از RPHA برای تشخیص سیفلیس گزارش دادند. در سال 1965، یک واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیر مستقیم برای تشخیص سیفلیس پیشنهاد شد. اصلاح واکنش با استفاده از آنتی ژن های مختلف توسط T. Ratlev در سال 1965 - 1967 گزارش شد. ریز اصلاح RPGA توسط Sokh R.M پیشنهاد شد. و در سال 1969 از نویسندگان مشترک. اولین سیستم تست تجاری توسط دانشمندان ژاپنی Tomisava و همکاران توسعه داده شد. al. در سال 1969

2. اصل روش RPGA

از سوسپانسیون همگن تهیه شده از گلبول های قرمز "بارگذاری شده" با آنتی ژن، هنگامی که سرم آزمایش حاوی آنتی بادی ها اضافه می شود، رسوبی به شکل تکه ها رسوب می کند. رسوب حاصل از گلبول های قرمز "چسبیده" توسط آنتی بادی ها تشکیل شده است و نامیده می شود "هماگلوتینات". سوسپانسیون گلبول های قرمز از قبل تهیه شده و به عنوان بخشی از سیستم های تست تشخیصی عرضه می شود.

فرآیند چسباندن گلبول های قرمز که در سطح آن آنتی ژن وجود دارد، «هماگلوتیناسیون» نامیده می شود. پیوند تحت اثر آنتی بادی های خاص (آگلوتینین ها) اتفاق می افتد. واکنش نامیده می شود "منفعل"، زیرا آنتی ژن های گلبول های قرمز خود واکنش نشان نمی دهند و گلبول های قرمز خود یک عملکرد شاخص کمکی انحصاری را انجام می دهند.

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم (غیر مستقیم) نوعی واکنش آگلوتیناسیون است که در آن از گلبول های قرمز (از یونانی háima - خون) به عنوان حامل آنتی ژن ها استفاده می شود و نه ذرات دیگر. به طور کلی، در واکنش آگلوتیناسیون تحت اثر آنتی بادی ها، میکروب ها یا سلول های دیگر به هم می چسبند و رسوب می کنند - نه لزوما گلبول های قرمز، بلکه، به عنوان مثال، ذرات لاتکس، باکتری ها یا سایر ذرات جسمی حاوی آنتی ژن.

در واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال برای تشخیص سیفلیس، از گلبول های قرمز قوچ یا پرنده پوشیده شده با آنتی ژن های ترپونما کم رنگ به عنوان آنتی ژن استفاده می شود. هنگامی که سرم حاوی آنتی بادی های خاص اضافه می شود، گلبول های قرمز به هم می چسبند (آگلوتیناسیون).

واکنش RPHA به عنوان روش های ایمونولوژیک شناخته می شود، زیرا. این بر اساس تعامل خاص آنتی ژن ترپونما پالیدوم بیماری زا با یک آنتی بادی است. مطابق با "نظریه شبکه" آگلوتیناسیون نتیجه "پیوند متقاطع" مولکول های آنتی ژن سطحی با مولکول های آنتی بادی (ایمونوگلوبولین ها) است.

3. بیان واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال

RPHA در قرص‌های پلاستیکی یا در لوله‌های آزمایش با رقت‌های سرم خون بیمار قرار داده می‌شود که یک تشخیص گلبول قرمز به آن اضافه می‌شود.

فرآیند ترکیب یک آنتی ژن با گلبول های قرمز را حساس سازی و آنتی ژن جسمی مصنوعی که از این طریق به دست می آید گلبول های قرمز حساس نامیده می شود. اریتروسیت‌های تشخیصی به گلبول‌های قرمز می‌گویند که توسط یک آنتی ژن حساس شده‌اند.

برای تهیه تشخیصی از گلبول های قرمز قوچ یا پرنده (معمولاً مرغ) که ابتدا با فرمالین و سپس با تانن تیمار شده اند استفاده می شود که با آنتی ژن اولتراسونیک ترپونما پالیدوم بیماری زا (سویه نیکولز) یا پروتئین های ترپونما پالیدوم نوترکیب (TpN15, TpN1) حساس می شوند. TpN47). گلبول های قرمز گوسفند حساس شده با آنتی ژن اولتراسونیف شده ترپونما پالیدوم کشت شده نیز می توانند مورد استفاده قرار گیرند.

فقط سرم (از پلاسما استفاده نکنید). نمونه های همولیز و کدر مناسب نیستند. گلبول های قرمز غیر حساس به عنوان یک کنترل منفی (برای جلوگیری از حضور آنتی بادی های ضد گلبول قرمز) عمل می کنند. در هر سری از تولیدات از کنترل های مثبت و منفی استفاده شود.

نمونه‌هایی از سرم خون مورد مطالعه و گلبول‌های قرمز آزمایش شده به چاهک (سلول‌های) قرص ایمونولوژیک وارد می‌شوند. اگر سرم خون بیمار حاوی آنتی بادی های ضد ترپونمال خاص باشد، در این صورت هنگامی که سرم آزمایشی با آنتی ژن به چاه اضافه می شود، کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی تشکیل می شود که با سطح ناقلین (گلبول های قرمز) مرتبط هستند. از نظر بصری، این با چسباندن گلبول های قرمز، یعنی هماگلوتیناسیون، که با چشم غیر مسلح قابل مشاهده است، آشکار می شود. کمپلکس های ایمنی "آنتی بادی - آنتی ژن - گلبول قرمز" که به تدریج تحت تأثیر گرانش فرو می روند، در کل سطح کف چاه توزیع می شوند و تصویر مشخصی از یک "چتر معکوس" را تشکیل می دهند.

بسته به مقدار آنتی بادی های موجود در نمونه آزمایشی، تصویر "چتر معکوس" از حداکثر متغیر است، که تمام سطح کف چاه را اشغال می کند، تا یک منطقه کوچک در مرکز، پایین ترین قسمت آن (با روشن شدن در مرکز و تشکیل یک حلقه شدیدتر از گلبول های قرمز مستقر در امتداد محیط).

اگر آنتی بادی خاصی در نمونه وجود نداشته باشد یا گلبول های قرمز (دست نخورده) شاهد به واکنش اضافه شوند، کمپلکس های ایمنی تشکیل نمی شوند. در همان زمان، گلبول های قرمز به تدریج در پایین ترین نقطه کف چاه جمع می شوند و شکلی را به شکل یک نقطه فشرده یا "دکمه" تشکیل می دهند، گاهی اوقات با روشن شدن جزئی در مرکز.

اگر سرم خون انسان حاوی آنتی بادی های ضد گلبول قرمز باشد، در هر صورت "چتر" تشکیل می شود - هم در واکنش با گلبول های قرمز آزمایش و هم با گلبول های قرمز کنترل. در این مورد، سایر فن آوری های پزشکی برای تشخیص آنتی بادی های ضد ترپونمال خاص توصیه می شود.

پدیده پروزون (عدم امکان واکنش به دلیل وجود آنتی بادی اضافی) امکان پذیر است که با رقیق شدن سرم از بین می رود.

4. حسابداری برای نتایج واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال

نتایج RPGA پس از 60 تا 120 دقیقه هنگام تنظیم میکرومتد و پس از 2 تا 4 ساعت یا روز بعد هنگام تنظیم ماکرو واریانت به صورت بصری در نظر گرفته می شود. هنگام استفاده از گلبول های قرمز پرنده بزرگتر (هسته دار)، تصویر واضح تری به دست می آید و نتایج در تاریخ قبلی ثبت می شوند.

امکان تعیین تیتر وجود دارد (تیتر بالا TPHA ≥ 1:2 560).

نتایج مطالعه بر اساس سیستم 4+ (از "-" تا "++++") با توجه به اندازه فیلم تشکیل شده ارزیابی می شود. هنگامی که آگلوتیناسیون اتفاق می افتد، گلبول های قرمز به شکل یک "چتر" در سطح سوراخ قرار می گیرند و با نتیجه منفی، گلبول های قرمز آزادانه به پایین می لغزند و در قسمت پایین در مرکز سوراخ به شکل یک "دکمه" جمع می شوند. ".

ارزیابی عمومی پذیرفته شده از نتایج RPGA:

4+ - RPHA مثبت. گلبول های قرمز آگلوتینه شده به شکل "چتر" به طور مساوی کل سطح سوراخ را می پوشانند.

3+ - RPHA مثبت. گلبول های قرمز تمام سطح سوراخ را می پوشانند، اما برخی از آنها به سمت مرکز "لغزش" می یابند. در همان زمان، یک حلقه قابل توجه در امتداد حاشیه رسوب تشکیل می شود.

2+ - RPHA ضعیف مثبت. گلبول های قرمز در قسمت کوچکی از قسمت پایین چاه یک فیلم تشکیل می دهند و یک حلقه متراکم از رسوب گلبول های قرمز را با روشنایی قابل توجه در مرکز تشکیل می دهند.

1+ - RPHA نامشخص، گلبول های قرمز یک رسوب شل در انتهای چاه با لبه های مبهم و یک لومن خفیف در مرکز تشکیل می دهند.

(–) - RPHA منفی، همه گلبول های قرمز به شکل یک رسوب فشرده ("دکمه ها" یا حلقه ها) در ته چاه در یک پس زمینه تمیز اطراف (بدون ته نشینی دانه ای اطراف) قرار دارند.

در عمل خارجی، نتایج RPGA نیز به عنوان واکنش پذیر (در مورد تشکیل آگلوتینات)، واکنش ضعیف (در صورت ناچیز بودن سازندها) و غیر واکنش (در صورت عدم مشاهده آگلوتیناسیون) ارزیابی می شود.

محاسبه نتایج واکنش را می توان به طور خودکار با استفاده از تحلیلگرهای ویژه انجام داد. علاوه بر یک مطالعه کیفی، تمام سیستم های آزمایشی برای تجزیه و تحلیل کمی با تعیین تیتر فراهم می کنند.

5. در چه دوره هایی از بیماری بهتر است از RPHA استفاده شود

RPHA در اواسط دوره اولیه (7-8 هفته از لحظه عفونت، 3-4 هفته پس از ظهور یک شانکر سخت) مثبت می شود و تا سال ها پس از درمان مثبت می ماند.

با سطح بسیار بالایی از آنتی بادی های ترپونما در سرم مورد مطالعه (که بیشتر مشخصه سیفلیس ثانویه است)، یک نتیجه منفی کاذب TPHA امکان پذیر است (به اصطلاح پدیده "پروزون").

آنتی بادی های خاص آگلوتینین در خون افرادی که برای مدت طولانی از سیفلیس بهبود یافته اند شناسایی می شود، بنابراین RPGA را نمی توان برای تشخیص افتراقی عفونت مجدد یا برای تعیین شدت فرآیند عفونی توصیه کرد.

RPGA برای کنترل درمان استفاده نمی شود، زیرا. ممکن است چندین سال پس از بهبودی مثبت باقی بماند. در عین حال، می توان از آن به عنوان یک روش اضافی (به RMP یا RPR) در نظارت بر اثربخشی درمان، بررسی پویایی کاهش تیتر آنتی بادی استفاده کرد. یک پیش نیاز برای این کار استفاده از همان سیستم تست RPHA در اولین معاینه (قبل از درمان) بیمار و همچنین مطالعه در همان آزمایشگاه است.

6. حساسیت و ویژگی RPHA

RPHA یک تست بسیار حساس و خاص در نظر گرفته می شود. این واکنش یک تست تشخیصی ارزشمند در تمام انواع سیفلیس است، اما به ویژه در انواع پیشرفته بیماری حساس است. حساسیت RPHA بسته به مرحله بیماری متفاوت است. با سیفلیس اولیه، حساسیت RPHA 76٪ (و بالاتر)، با سیفلیس ثانویه - تا 100٪ است. با نهفته زودرس - 97٪، با سیفلیس دیررس - 94٪، با ویژگی 98-100٪. حساسیت کمتر در اشکال تازه بیماری به دلیل تشکیل دیرتر آگلوتینین است.

با توجه به موسسه دولتی "TsNIKVI Roszdrav"، حساسیت RPHA در تشخیص اشکال مختلف سیفلیس 99.4٪ بود. اکثر محققان به ویژگی RPHA 98-99% اشاره می کنند.

از نظر حساسیت و ویژگی RPHA کمتر نیست و در اشکال دیررس و سیفلیس مادرزادی حتی از RIF و RIBT نیز پیشی می گیرد.

7. دامنه کاربرد روش RPGA

TPHA می تواند هم به عنوان یک آزمایش غربالگری و هم به عنوان آزمایش تاییدی استفاده شود. می تواند در یک نوع نیمه کمی با محاسبه تیتر آنتی بادی استفاده شود. یک روش کمی برای تنظیم RPHA، یک روش میکرو و همچنین یک واکنش میکروهماگلوتیناسیون خودکار ایجاد شده است.

8. ویژگی ها، مزایا و معایب RPGA

با توجه به ادبیات، RPGA به طور مداوم در بسیاری از کشورهای جهان موقعیت پیشرو در عمل بالینی را به خود اختصاص داده است. TPHA پرکاربردترین تست در کلینیک های STI خارج از کشور است.

انجام تکنیک RPGA آسان است، به تجهیزات خاصی نیاز ندارد: برای تنظیم آن فقط به یک صفحه هماگلوتیناسیون نیاز است. مطالعه زمان زیادی نمی برد. واکنش بسیار حساس و اختصاصی است. تایید این روش در عمل بالینی نشان داده است که بسیار ساده، ارزان و حساس است. مانند ELISA، RPHA برای انجام ساده است، نیازی به پرسنل بسیار ماهر و تجهیزات ویژه ندارد و اتوماسیون آن امکان پذیر است.

مزایای تست RPGA:

• تنظیم و تفسیر آسان،
• به تجهیزات خاصی نیاز ندارد،
• زمان برای به دست آوردن نتیجه - 45 دقیقه،
• مناسب برای غربالگری انبوه (فقط 25 میکرولیتر سرم در رقت 1:20 مورد نیاز است)
• درجه بالایی از استانداردسازی،
• وجود کنترل های داخلی،
• ماندگاری طولانی
• قیمت قابل قبول
• امکان خودکارسازی حسابداری

همچنین باید به معایب RPGA اشاره کرد:

• امکان واکنش های غیر اختصاصی در حضور آنتی بادی های ضد گلبول قرمز،
• عدم همبستگی تیتر و مرحله سیفلیس،
• واکنش مثبت بعدی در مراحل اولیه سیفلیس،
• احتمال واکنش های مثبت کاذب در افرادی که الکل مصرف کرده اند، معتادان به مواد مخدر،
• حساسیت به لرزش و دما در آزمایشگاه

مزایای RPGA در مقایسه با RIBT و RIF عبارتند از:

• استفاده از سیستم های تست صنعتی،
• امکان خودکارسازی واکنش،
• نیازی به کار با ترپونمای رنگ پریده زنده نیست،
• نیاز به ویواریوم را از بین می برد.

9. منابع و علل خطاها در تنظیم RPHA، نتایج مثبت کاذب و منفی کاذب

واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال یک مطالعه نسبتا ساده است. هنگام انجام آن، لازم است تمام توصیه های تولید کنندگان تشخیص و قوانین کار در آزمایشگاه تشخیص بالینی را رعایت کنید. اشتباهات انجام شده می تواند منجر به ظهور و ثبت نتایج منفی کاذب و مثبت کاذب واکنش شود. نتایج مثبت کاذب RPGA ممکن است به دلیل تأثیر عامل انسانی و عوامل بیولوژیکی باشد.

نتایج مثبت کاذب را می توان به دست آورد

• در مطالعه سرم خون بیماران مبتلا به ترپونماتوزهای غیر مقاربتی،
• به دلیل فاکتور روماتوئید
• به دلیل واکنش متقابل آنتی بادی ها با آنتی ژن ترپونمال، که در طی اختلالات متابولیکی سیستمیک یا ناشی از دارو و ناشی از دارو ایجاد می شوند.
• به دلیل سطوح غیر طبیعی ایمونوگلوبولین ها؛
• در نوزادان - به دلیل تشکیل آنتی بادی های IgM در بدن جنین یا کودک نسبت به IgG مادر، که تفسیر نتایج و تشخیص سیفلیس مادرزادی را پیچیده می کند.

خطاهای ناشی از تأثیر عامل مشارکت انسانی در مطالعه:

• میکروپلیت های آلوده
• لوله گذاری نادرست
• ارتعاش در آزمایشگاه
• دمای هوا در آزمایشگاه خارج از محدوده دمایی است: 18-25 درجه

معمول ترین خطاهای فنی در تنظیم RPGA که منجر به نتایج غیر قابل اعتماد می شود، عبارتند از:

• رقت نادرست مواد،
• نقض دما،
• نقض زمان انکوباسیون معرف ها،
• نقض شرایط استفاده از معرف ها در تبلت،
• عدم تطابق pH محلول ها با محلول های مورد نیاز،
• آلودگی ظروف شیشه ای آزمایشگاهی

نکات فنی زیر نیز می تواند منبع خطا در هنگام راه اندازی RPGA باشد:

• حذف از فرمول واکنش سرم خون کنترل؛
• غلظت ناهموار گلبول های قرمز در تشخیص به دلیل اختلاط ناکافی قبل از استفاده.
• نقض شرایط و ضوابط ذخیره سازی گلبول های قرمز تشخیصی و کنترل؛ استفاده از کیت های تاریخ مصرف گذشته؛
• استفاده از لوله های آزمایش آلوده، نوک پیپت ها، پیپت ها، صفحات ایمونولوژیک، محلول ها هنگام تنظیم واکنش ها.
• عدم دقت در رقت اولیه نمونه سرم خون؛
• عدم دقت کافی در انجام رقت‌های مضاعف متوالی؛
• عدم رعایت رژیم دما و زمان جوجه کشی؛
• وجود ارتعاشات خارجی و تکان دادن صفحه ایمونولوژیک در طول انکوباسیون.
• نقض روش تنظیم RPGA، که در امتناع از انجام مطالعه با گلبول های قرمز کنترل بیان شده است.

استفاده از پلاسمای خون حاوی داروهای ضد انعقاد که قادر به ایجاد آگلوتیناسیون غیراختصاصی گلبول قرمز (RPHA) هستند ممکن است به نتایجی منجر شود که قابل تفسیر نیستند.

تعداد نتایج مثبت کاذب و منفی کاذب کمتر از سایر آزمایشات سرولوژیکی است. LPR در تنظیم RPHA نادر است و با ترپونماتوز (Yaws، bejel، pint) ممکن است. همچنین نتایج مثبت کاذب (در کل کمتر از 1 درصد) در معتادان به مواد مخدر، در بیماران مبتلا به مونونوکلئوز عفونی، بورلیوز، جذام، کلاژنوز، سیروز کبدی، لنفوسارکوم و همچنین در زنان باردار ثبت شد.

نتایج منفی کاذب واکنش ممکن است به دلیل رقابت بین آنتی بادی های IgM و IgG باشد. نتایج منفی کاذب در بیماران مبتلا به HIV نیز ممکن است.

10. اصلاحات روش RPHA

تغییرات میکرو و کلان در تنظیمات RPGA وجود دارد، اولین مورد به دلیل اقتصادی بودن، سرعت تنظیم و در نظر گرفتن نتایج بیشتر مورد استفاده قرار می گیرد.

علاوه بر این، یک مجتمع تشخیصی خودکار برای تجزیه و تحلیل تصویر ایجاد شد که امکان انجام یک ارزیابی خودکار کمی از نتایج و حذف ذهنیت در تفسیر داده های به دست آمده را فراهم کرد. مجموعه سخت افزاری-نرم افزاری تصویر را تشخیص می دهد، داده ها را پردازش می کند و پاسخ را در واحدهای نسبی می دهد.

از خوانندگان و آنالایزرهای خودکار نیز برای ضبط خودکار نتایج RPGA استفاده می شود.

TPPA (آگلوتیناسیون ذرات ترپونما پالیدوم) - آزمایش آگلوتیناسیون ذرات مصنوعی برای تشخیص آنتی بادی های ترپونما پالیدوم

شرح مختصری از تست TPPA

در حال حاضر، اصلاح روش هماگلوتیناسیون غیرفعال - TPRA (آگلوتیناسیون ذرات ترپونما پالیدوم) نیز برای تشخیص سیفلیس استفاده می شود که در آن آنتی ژن ترپونما کم رنگ بر روی ذرات ژلاتین ثابت می شود. از آنجایی که ذرات پلیمری مصنوعی آنتی‌ژن‌های خاص خود را ندارند که فعالیت بیولوژیکی را تعیین می‌کنند، بنابراین کیت‌های تشخیص سرمی سیفلیس بر اساس آنها دلایلی دارند که پیشرفته‌تر در نظر گرفته شوند. استفاده از ذرات مصنوعی بیولوژیکی خنثی، آگلوتیناسیون غیراختصاصی را که معمولاً در سایر حامل ها مشاهده می شود، به حداقل می رساند.

TPPA برای تشخیص سرولوژیک آنتی بادی ها به انواع مختلف و زیرگونه های ترپونمای بیماری زا استفاده می شود. از این آزمایش می توان برای تشخیص آنتی بادی های عامل ایجاد کننده سیفلیس، پینت، بجل و یاوس استفاده کرد.

روش مطالعه بسیار ساده است و به تجهیزات خاصی نیاز ندارد - از میکروپلیت های استاندارد "U" شکل استفاده می شود. این آزمایش بر اساس آگلوتیناسیون ذرات ژلاتین حساس شده با آنتی ژن های T. pallidum، آنتی بادی های موجود در سرم خون بیمار است.

TPPA یک تست ترپونمال تاییدی است که می تواند به راحتی برای تعداد کم نمونه و غربالگری انبوه استفاده شود. TPPA در خارج از کشور به عنوان یک آزمایش تاییدی و برای جایگزینی تست میکروهماگلوتیناسیون MHA-TP (آزمایش میکروهماگلوتیناسیون برای آنتی بادی های T. pallidum) استفاده می شود.

حساسیت تست TPPA بین 85 تا 100 درصد است در حالی که ویژگی آن بین 98 تا 100 درصد است. حساسیت TPPA برای سیفلیس اولیه 88 درصد، برای سیفلیس ثانویه و نهفته دیررس 98٪ -100٪ است.

اگر از TPPA برای تشخیص سیفلیس استفاده شود، آنتی بادی های دیگر انواع ترپونما (مانند T. pallidum endemicum، pertenue یا carateum) ممکن است باعث نتایج مثبت کاذب شوند. روش های مختلفی برای حذف این آنتی بادی ها از نمونه های سرم قبل از شروع آزمایش وجود دارد.

اصل تست TPPA

TPPA یک روش آگلوتیناسیون غیرفعال برای ذرات ژلاتین در سرم یا پلاسمای انسان است. سرم حاوی آنتی بادی در برابر ترپونما بیماری زا با ذرات ژلاتین حساس شده با آنتی ژن ترپونما کم رنگ سویه نیکولز واکنش نشان می دهد و تحت سونوگرافی قرار می گیرد. در نتیجه واکنش، یک فیلم صاف از ذرات ژلاتین آگلوتینه شده در چاه صفحه میکروتیتر تشکیل می شود.

اگر آنتی بادی وجود نداشته باشد، ذرات در ته چاه صفحه می نشینند و یک "دکمه" فشرده از ذرات غیر آگلوتینه تشکیل می دهند. چاه های کنترل با ذرات ژلاتین حساس نشده نیز باید برای هر سرم چنین "دکمه" فشرده ای را نشان دهند، یعنی بدون آگلوتیناسیون.

کاربرد آزمون TPPA

TPPA یک آزمایش جهانی است که می تواند هم در معاینه پیشگیرانه اجباری گروه های جمعیتی برای سیفلیس (غربالگری) و هم در موسسات تخصصی درماتوونرولوژیک با موفقیت استفاده شود. مزیت تست TPPA حساسیت بالای آن است که از تست های کلاسیک که تا همین اواخر "استاندارد طلایی" برای تشخیص سرمی سیفلیس بودند، کم نیست. از دیگر مزایای آزمایش می توان به تکرارپذیری بالا و همچنین سادگی و سرعت تنظیم واکنش اشاره کرد.

تست TPPA برای تایید نتایج مثبت تست‌های غربالگری غیرترپونمال برای سیفلیس، مانند تست VDRL، و برای ارزیابی بیمارانی که تست‌های غیر ترپونمال منفی دارند، اما دارای علائم و نشانه‌هایی هستند که نشان دهنده سیفلیس دیررس هستند، استفاده می‌شود. استفاده از TPPA به عنوان تنها آزمایش غربالگری سیفلیس توصیه نمی شود.

علاوه بر این، از تست آگلوتیناسیون TPPA می توان برای بررسی نمونه های مایع مغزی نخاعی در تشخیص نوروسیفلیس استفاده کرد. در این مورد، مانند سایر آزمایشات سرولوژیکی، تفسیر نتایج باید با ترکیب اجباری با سایر شاخص ها و علائم بیماری انجام شود.

نتایج تست TPPA

نتیجه با توجه به سیستم "پلاس" - از (-) تا (2+) ارزیابی می شود. نتایج آزمایش با چشم غیر مسلح قابل مشاهده است و به شرح زیر تفسیر می شود:

درجه آگلوتیناسیون	نمره آزمون	تفسیر
ذرات آگلوتینه شده به طور مساوی کف صفحه را به خوبی می پوشانند	2+	مثبت
حلقه بزرگ قابل توجه با حاشیه های بیرونی ناهموار و آگلوتیناسیون محیطی	1+	مثبت
ذرات یک حلقه فشرده با شکاف در مرکز و صاف و صاف تشکیل می دهند مرزهای خارجی	±	ضعیف مثبت
این ذرات یک حلقه فشرده در مرکز چاه با شکاف جزئی در مرکز و یک مرز بیرونی صاف تشکیل می دهند.	–	منفی
ذرات یک "دکمه" در مرکز سوراخ با یک مرز بیرونی صاف تشکیل می دهند	–	منفی

نتایج برای تعیین انطباق با توضیحات بالا ثبت می شود. نمونه هایی که نتیجه نامشخص (±) را نشان می دهند باید مجددا آزمایش شوند. در صورتی که نمونه ای در چندین آزمایش TPPA نتیجه نامشخصی را نشان دهد، انجام مطالعه با روش های دیگر توصیه می شود.

نتایج تجزیه و تحلیل را نباید به صورت مجزا در نظر گرفت. به عنوان مثال، در مراحل اولیه عفونت، تعداد آنتی بادی ها هنوز خیلی کم است، در نتیجه TPPA و بسیاری از روش های دیگر حساسیت ندارند. بنابراین در صورت مشکوک بودن به سیفلیس، حتی اگر جواب آزمایش منفی باشد، باید نمونه ها مجددا مورد بررسی قرار گیرند. برای تشخیص، باید علائم بالینی بیمار، سابقه بالینی و سایر داده ها را در نظر گرفت.

همانطور که در تست TPHA، اگر نمونه سرم حاوی تیتر آنتی بادی بیش از حد باشد، پدیده پروزون و یک نتیجه منفی کاذب برای TPPA قابل مشاهده است.

الایزا - الایزا

ایمونواسی آنزیمی (ELISA؛ سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم، ELISA) یکی از روش‌های متعدد برای تشخیص سرولوژیک بیماری‌های عفونی است. ایمونواسی آنزیمی (ELISA) در تشخیص سرمی سیفلیس، آزمایشی برای آنتی بادی های کلاس های M، G و A (IgM، IgG، IgA) علیه آنتی ژن های ترپونما کم رنگ است. انجام الایزا با مایع مغزی نخاعی امکان پذیر است.

معرفی روش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA) در عمل به جای واکنش واسرمن و سایر آزمایشات کاردیولیپین، کیفیت تشخیص آزمایشگاهی سیفلیس را به طور قابل توجهی بهبود بخشیده است. مزیت قابل توجه این روش امکان خودکارسازی فرآیند تحقیق است که تأثیر عامل انسانی را کاهش می دهد.

1. تاریخچه روش الایزا

اصول اولیه ایمونواسی آنزیمی بر روی سطح حامل فاز جامد توسط E. Engvar و همکاران توسعه داده شد. (1971)، B.Van Weeman and A.Schuurs (1971). ایمونواسی آنزیمی که آنها توسعه دادند اولین بار برای تشخیص سیفلیس در سال 1975 توسط J. Veldkamp و A. Visser پیشنهاد شد که از پتانسیل این آزمایش خودکار قدردانی کردند. استفاده گسترده از الایزا در تشخیص سیفلیس در دهه 1980 آغاز شد، زمانی که تست‌های تشخیصی توسعه یافتند و تایید شدند و روش‌های تست استاندارد شدند. در اتحاد جماهیر شوروی، تکنیک ELISA برای تشخیص سیفلیس توسط V.N. Bednova، A.V. Babiy و A.V. Kotrovsky (1982، 1983) توسعه یافت.

2. اصل روش الایزا

سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) با توجه به مکانیسم واکنش نزدیک به RIF است (همان آنتی بادی ها شناسایی می شوند). واکنش ایمونواسی آنزیمی به عنوان یک واکنش ایمونولوژیک بر اساس برهمکنش بسیار خاص آنتی ژن های ترپونما پالیدوم با آنتی بادی های بیمار مبتلا به سیفلیس طبقه بندی می شود.

در عمل سیفیلیدولوژیک، یک نوع غیر مستقیم الایزا عمدتا استفاده می شود. اصل متداول ترین نوع واکنش غیرمستقیم به شرح زیر است. بر روی سطح چاه های یک صفحه پلی استایرن، مجتمع های ایمنی ثابت می شوند که در طول تعامل آنتی بادی های بیمار مبتلا به سیفلیس با آنتی ژن های ترپونما کم رنگ تشکیل می شوند. پس از آن، آنها در یک واکنش رنگی با استفاده از مزدوجات خاص و مواد افزودنی مناسب بستر - کروموژن شناسایی می شوند.

روش انجام آزمایش به شرح زیر است: سرم بیمار بر روی یک حامل فاز جامد با آنتی ژن متصل به آن قرار می گیرد. در صورت وجود آنتی بادی در آن، یک مجموعه آنتی ژن-آنتی بادی در سطح حامل تشکیل می شود. برای "تجلی" نتایج واکنش، آنتی بادی های ضد گونه ای به Ig انسانی کونژوگه با نشانگرهای آنزیمی استفاده می شود. در صورت واکنش مثبت، آنزیم متصل به کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی، بستر اضافه شده به سیستم را تجزیه می کند و در نتیجه رنگ آمیزی رنگ با شدت های مختلف ایجاد می شود.

در واکنش، تعیین کمپلکس AG و AT جذب شده روی فاز جامد با استفاده از آنتی‌بادی‌های آنتی‌گلوبولین نشان‌دار شده با آنزیم، با توجه به واکنش رنگ آنزیم با سوبسترا انجام می‌شود.

در واکنش، تعیین مجموعه آنتی ژن ها و آنتی بادی های جذب شده روی فاز جامد با استفاده از آنتی بادی های آنتی گلوبولین نشاندار شده با آنزیم انجام می شود.

ELISA امکان تشخیص Ig سرم کلاس های مختلف را ارائه می دهد. سیستم هایی در بازار وجود دارد که به شما امکان می دهد IgM و IgG و کل آنتی بادی ها را به طور جداگانه تعیین کنید.

آنتی ژن های خاص مورد استفاده برای الایزا ممکن است منشا متفاوتی داشته باشند:

فوق العاده صدا- آنها در نتیجه تخریب سلول باکتریایی T.pallidum با سونوگرافی یا روش های دیگر به دست می آیند.

نوترکیب- آنها توسط فن آوری های مهندسی ژنتیک با وارد کردن ژنوم یک سلول باکتریایی (به عنوان مثال، اشرشیاکلی E.Coli) ژن مسئول سنتز یک آنتی ژن T.pallidum و به دنبال آن رشد توده باکتریایی به دست می آیند. میکروارگانیسم تولید کننده، تخریب این سلول ها، جداسازی و خالص سازی آنتی ژن.

پپتید- در نتیجه سنتز شیمیایی متوالی اپی توپ های آنتی ژنی پروتئین های T.pallidum به دست آمده است.

بدن قادر است تقریباً برای هر بخشی از مولکول آنتی ژن آنتی بادی ایجاد کند. در یک پاسخ ایمنی طبیعی، معمولاً این اتفاق نمی افتد. یک یا چند پپتید ایمنی زا جدا شده از یک آنتی ژن پروتئینی دارای خاصیت آنتی ژنی خاص هستند و بیشتر آنتی بادی ها به طور اختصاصی برای آنها تشکیل می شوند. آنها شدیدترین پاسخ ایمنی را ایجاد می کنند. آموزنده ترین در ELISA مناطق ایمنی غالب پروتئین ترپونما کم رنگ با وزن مولکولی 15 کیلو دالتون، 17 کیلو دالتون و 47 کیلو دالتون را نشان داد. عصاره شوینده یا سونیکات ترپونمای بیماری زا سویه نیکولز به عنوان آنتی ژن استفاده شد.

3. روش انجام تحقیق به روش

اصل روش این است که یک کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی خاص جذب شده روی فاز جامد (سطح چاهک های یک صفحه پلاستیکی) با آنتی بادی های آنتی گلوبولین برچسب گذاری شده با آنزیم (پراکسیداز) با استفاده از واکنش رنگی با یک بستر، که اندازه گیری اسپکتروفتومتری

آنتی ژن های مورد استفاده برای حساس کردن چاه های صفحه پلی استایرن می توانند عبارتند از:

• لیز- به دست آمده در نتیجه از بین بردن ترپونما کم رنگ توسط سونوگرافی.
• پپتید- به دست آمده در نتیجه سنتز شیمیایی قطعات پروتئین ترپونما کم رنگ و دارای واکنش آنتی ژنی مشابه پروتئین های اصلی پاتوژن.
• نوترکیب- به دست آمده با استفاده از روش های مهندسی ژنتیک، حامل عوامل تعیین کننده آنتی ژنی مشابه ترپونما کم رنگ است.

در عمل سیفیلیدولوژیک معمولاً از یک نوع غیر مستقیم الایزا استفاده می شود.

4. حسابداری برای نتایج

در الایزا برای تجسم واکنش آنتی ژن-آنتی بادی از واکنش آنزیمی (آلکالین فسفاتاز یا پراکسیداز ترب کوهی) با سوبسترا استفاده می شود که رنگ آن تغییر می کند. شدت رنگ، مثبت بودن واکنش را تعیین می کند (از «-» تا «++++»). نتایج الایزا را می توان به صورت بصری بر روی یک سیستم 4 نقطه ای یا به صورت ابزاری به شکل نشانگرهای دیجیتالی چگالی نوری که بر روی خواننده های ویژه (مانند Multiscan) در طول موج 492 نانومتر به دست می آید، ارزیابی کرد. زیرا ارزیابی نتایج به روش اسپکتروفتومتری انجام می شود، این امر تفسیر ذهنی را حذف می کند.

5. در چه دوره هایی از بیماری بهتر است استفاده شود

شرایط مثبت الایزا - از هفته چهارم پس از عفونت. نتایج ELISA (و همچنین RIF) در روزهای اول دوره اولیه یا در پایان دوره جوجه کشی مثبت می شود و در تمام دوره ها مثبت می ماند. ELISA به ویژه در تشخیص اولیه سیفلیس ارزشمند است - نتایج آنتی بادی مثبت را می توان در پایان دوره کمون بیماری (یعنی 4-6 هفته پس از عفونت) به دست آورد.

6. حساسیت و ویژگی

الایزا یک آزمایش بسیار حساس و اختصاصی است که مزیت آن است. ELISA از نظر مکانیسم واکنش، حساسیت و ویژگی نزدیک به RIF، tk است. آنتی بادی های مشابه در هر دو واکنش شرکت می کنند. اکثر محققان به ویژگی و حساسیت بالا در تمام مراحل بیماری اشاره می کنند. حساسیت انواع مختلف ELISA، طبق گفته G. A. Dmitriev، به 98-100٪ می رسد و ویژگی 96-100٪ است. با توجه به TsNIKVI، حساسیت ELISA برای سیفلیس 99.1٪ است (سفارش شماره 87 M3 فدراسیون روسیه).

نوع ELISA فاز جامد (روش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم، ELISA) یکی از حساس ترین تست های سرولوژیکی است که امکان تشخیص 0.0005 میکروگرم بر میلی لیتر آنتی بادی و 0.000005 میکروگرم در میلی لیتر آنتی ژن را فراهم می کند.

7. دامنه روش

این روش توصیه می شود هنگام معاینه زنان باردار، افراد تماس، اهداکنندگان و نمایندگان گروه های در معرض خطر استفاده شود. الایزا را می توان هم به عنوان آزمایش غربالگری و هم به عنوان آزمایش تاییدی استفاده کرد. در مدت زمان نسبتاً کوتاهی از تاریخچه خود، ELISA از یک آزمایش شاخص به یک آزمایش تأییدی تبدیل شده است. در تشخیص سیفلیس، این آزمایش همچنین به عنوان یک آزمایش تاییدی برای نمونه هایی که نتایج مثبت را نشان می دهند با استفاده از تست های مختلف غیر ترپونمال و TPHA استفاده می شود.

روش الایزا را می توان به صورت کمی با محاسبه شاخص مثبت یا واکنش پذیری استفاده کرد که به شما امکان می دهد سطح آنتی بادی ها را در نمونه ارزیابی کنید.

در حال حاضر، در روسیه، استفاده از ایمونواسی آنزیمی برای تشخیص سیفلیس توسط دستور وزارت بهداشت فدراسیون روسیه به شماره 87 مورخ 26 مارس 2001 "در مورد بهبود تشخیص سرولوژیکی سیفلیس" تنظیم می شود (ضمیمه شماره 87). 1 "تنظیم تست های غربالگری و تشخیصی برای سیفلیس"). به این ترتیب، برنامه ریزی شده است که RSK در مجموعه واکنش های سرمی (SSR) با ELISA و RPHA جایگزین شود.

8. منابع و علل خطاهای مرحله بندی، مثبت کاذب و منفی کاذب

ایمونواسی آنزیمی یک مطالعه چند مرحله ای پیچیده است که در آن لازم است تمام توصیه های تولید کنندگان کیت های تشخیصی، قوانین تنظیم و پیکربندی تجهیزات مورد استفاده در مطالعه را به شدت دنبال کنید.

نکات زیر می تواند منشأ خطا در هنگام راه اندازی ELISA باشد:

مطالعه در واکنش هیپرلیپیدمیک، سرم خون همولیز شده یا نمونه هایی با علائم رشد باکتری.

از انجماد دوبار یا بیشتر نمونه ای از مواد بیولوژیکی خودداری کنید، در صورت لزوم، از سرم یک لوله تکراری استفاده کنید.

نقض شرایط و ضوابط ذخیره سازی ایمونوسوربنت و محلول شستشو؛ استفاده از کیت های تست منقضی شده؛

استفاده از اجزای واکنش از سایر کیت های تشخیصی.

نقض زمان مراحل واکنش؛

خشک کردن چاه های صفحه ایمونولوژیک در طی مراحل واکنش.

استفاده مجدد از ظروف پلاستیکی (سینی های پلاستیکی) برای تهیه مخلوطی از کروموژن و بستر.

عدم انطباق با فرکانس کنترل مترولوژیکی پارامترهای عملکرد دستگاه های مورد استفاده (واشر و اسپکتروفتومتر).

استفاده از ظروف شیشه ای آلوده آزمایشگاهی هنگام تنظیم واکنش ها: فلاسک ها، سیلندرهای اندازه گیری، لوله های آزمایش، پیپت ها، نوک پیپت ها.

عدم دقت کافی در انجام رقت‌سازی نمونه‌های مواد بیولوژیکی؛

خطاها هنگام وارد کردن نمونه ای از مواد بیولوژیکی به چاه مربوطه قرص؛

خطا در هنگام انتقال نتایج مطالعه به گزارش ثبت نام، پروتکل مطالعه یا فرم پاسخ.

اجرای دقیق توصیه‌های دستورالعمل استفاده از کیت‌های تست تشخیصی، تأیید منظم صحت دستگاه‌های پیپت و دستگاه‌های خودکار، استفاده از کنترل‌های مثبت و منفی داخلی، به دست آوردن نتایج ELISA بسیار تکرارپذیر امکان‌پذیر است.

9. ویژگی ها، مزایا و معایب

ELISA به دلیل سادگی، تکرارپذیری و در دسترس بودن، به روش‌های نوین و امیدوارکننده‌ای برای تشخیص سرمی سیفلیس اشاره دارد. تشخیص آنتی بادی توسط ELISA یک روش تشخیصی ایده آل است که برای معاینه همزمان تعداد زیادی نمونه مناسب است. به دلیل مزایایی که دارد در همه کشورها محبوبیت پیدا کرده است.

فناوری تحقیق ELISA انطباق با تمام توصیه‌های تولیدکنندگان کیت‌های تست تشخیصی تجاری و کامل بودن روش تحقیق را فراهم می‌کند. برای انجام تحقیقات در ELISA، خرید تجهیزات ویژه اضافی ضروری است. تکنیک تنظیم در مقایسه با RMP، RPR و RPGA زمان بیشتری می برد.

وجود اتوماسیون تعدادی از مراحل یا کل فرآیند به شما امکان می دهد همزمان تعداد زیادی نمونه از مواد بیولوژیکی را با درجه بالایی از استانداردسازی مطالعه بررسی کنید و عنصر ذهنی در ارزیابی نتایج را به حداقل برسانید. امکان ذخیره پروتکل های مطالعاتی ثابت که امکان آرشیو داده های مطالعه و ارجاع مجدد به آنها برای تحلیل گذشته نگر را فراهم می کند.

مزایای:

• تعیین تمایز و کل آنتی بادی های IgM و IgG را در برابر عامل ایجاد کننده سیفلیس امکان پذیر می کند.
• حساسیت و ویژگی بالا نزدیک به 100٪
• تکرارپذیری
• امکانات اتوماسیون

مزایای ELISA شامل ویژگی بالا (96-100٪) و حساسیت (98-100٪) است که توسط اکثر محققان ذکر شده است.

وجود اتوماسیون تعدادی از مراحل یا کل فرآیند به طور کلی امکان بررسی همزمان یک جریان با تعداد زیادی نمونه از مواد بیولوژیکی با درجه بالایی از استانداردسازی مطالعه را فراهم می کند و عنصر ذهنی در ارزیابی را به حداقل می رساند. از نتایج، امکان ذخیره پروتکل‌های مطالعه ثابت است که امکان آرشیو داده‌های مطالعه و دسترسی مجدد به آن‌ها را برای تحلیل گذشته‌نگر فراهم می‌کند.

معایب قابل توجه روش های دستی، از جمله تعیین آنتی بادی های آنتی ژن های T. pallidum توسط ELISA، عبارتند از:

~ اشتباهات احتمالی پرسنل در طول مطالعه (نظارت، سهل انگاری، نقض فناوری).

~ عدم امکان استانداردسازی کامل فرآیند تحقیق با نسخه دستی ELISA.

~ افزایش خطر عفونت پرسنل.

10. اصلاح روش

همراه با ELISA غیر مستقیم کلاسیک، این روش نیز شناخته شده است. به دام انداختن الایزا. در سال 1989 توسط O. E. Ijsselmudien و همکاران پیشنهاد شد. برای شناسایی آنتی بادی های کلاس IgM به آنتی ژن های Tr. پالیدوم این روش از ویژگی و حساسیت بالایی برخوردار است.

آنتی بادی های خالص شده به ایمونوگلوبولین های انسانی کلاس M روی سطح چاهک های قرص جذب می شوند و پس از انکوباسیون سرم آزمایش، همه IgM به حامل متصل می شوند. حضور در میان IgM مرتبط اختصاصی برای آنتی ژن Tr. پالیدوم با استفاده از آنتی ژن های Tr شناسایی می شود. پالیدوم با یک آنزیم کونژوگه شده است.

این روش به شما امکان می دهد تا نه تنها آنتی بادی های کلاس IgM، بلکه همچنین از کلاس های IgG، IgA را شناسایی کنید. برای انجام این کار، چاه های صفحات با آنتی بادی های خالص شده با میل ترکیبی از یک کلاس خاص در برابر ایمونوگلوبولین های انسانی حساس می شوند. در همان زمان، آنتی بادی های این کلاس از سرم گرفته می شود و تشخیص آنتی بادی های اختصاصی ترپونمال با ترکیب آنها با یک مزدوج که ترکیبی از آنتی ژن ترپونمال با یک آنزیم است، انجام می شود.

استفاده از ELISA به دام افتاده، خطر واکنش های مثبت کاذب ناشی از فاکتور خون روماتوئید، واکنش های متقاطع بین ایمونوگلوبولین های کلاس M و G را کاهش می دهد. هنگام معاینه نوزادان، در این مورد، نتایج آزمایش مثبت کاذب مرتبط با تشخیص IgM علیه IgG ضد ترپونمال مادر نیز مستثنی هستند.

همانطور که انواع ELISA در خارج از کشور به طور گسترده استفاده می شود سنجش ایمنی آنزیمی (EIA)و سیستم سیفلیس ICE. در دومی، مخلوطی از آنتی بادی های IgM و IgG، و همچنین سه پروتئین نوترکیب T. pallidum، در چاهک های صفحه جذب شد. نتایج مثبت در یک سیستم آزمایشی در دو تکرار آزمایش می شود تا نتیجه نهایی به دست آید.

در روسیه، تعدادی از سیستم‌های آزمایشی برای تشخیص سرمی سیفلیس توسط ELISA با معرف‌های داخلی ایجاد شده است. این سیستم ها دارای ویژگی و حساسیت بالایی هستند.

علاوه بر موارد فوق، گزینه‌های الایزا دیگری نیز وجود دارد، از جمله مواردی که امکان تشخیص مستقیم پاتوژن در خون را فراهم می‌کنند (الایزا مستقیم)، الایزا نقطه‌ای با واکنش روی نوارهای نیتروسلولز، الایزا با خون مویرگی، و همچنین بلات ایمنی. یا وسترن بلات، با تشخیص همزمان آنتی بادی های اجزای مختلف پاتوژن.

یک اصلاح مدرن بهبود یافته ELISA ایمونوبلات است.

ICA (تجزیه و تحلیل immunochemiluminescent)، ICL (immunochemiluminescence)

با توسعه تشخیص آزمایشگاهی در زمینه نوسازی مراقبت های بهداشتی در فدراسیون روسیه، اتوماسیون تحقیقات آزمایشگاهی وارد عمل آزمایشگاه ها شده است که استانداردسازی مراحل تحلیلی تحقیق را امکان پذیر می کند. این امر کیفیت تشخیص را بهبود می بخشد. با معرفی اتوماسیون، روش‌های جدید با فناوری پیشرفته با حساسیت و ویژگی بالا، مانند ایمونواسی شیمی‌لومینسانس (CLIA) آغاز به کار کرد.

لومینسانس شیمیایی فرآیند گسیل فوتون در طی انتقال محصولات برانگیخته الکترونیکی واکنش های شیمیایی اکسیداتیو به حالت انرژی اولیه است. در طی واکنش نورتابی شیمیایی، مقدار قابل توجهی انرژی آزاد می شود و بازده کوانتومی نور ساطع شده بسیار زیاد است. در بین تمام روش‌های غیر ایزوتوپی، نورتابی شیمیایی بالاترین حساسیت را ایجاد می‌کند. برای روش‌های ایمونومتری، حساسیت نورتابی شیمیایی مرتبه‌ای بالاتر از سنجش رادیوایمونوسیری است.

روش ایمونوشیمی لومینسانس (ICL) اکنون کاربرد خود را در تشخیص تومور مارکرها، بیماری های خودایمنی، دیابت، نشانگرهای قلبی، هورمون ها (تیروئید، آدرنال، هورمون های جنسی زنانه و مردانه)، عفونت های مشعل، هپاتیت ویروسی، ویروس های گروه تبخال پیدا کرده است.

بر اساس روش ایمونوشیمی لومینسانس، تعدادی سیستم تست بسیار حساس و اختصاصی (98-100٪) برای تشخیص سیفلیس ایجاد شده است که عمدتاً در خارج از کشور استفاده می شود.

در روش از لیپوپروتئین های نوترکیب به دست آمده با روش های مهندسی ژنتیک به عنوان آنتی ژن استفاده می شود که آنالوگ کامل آنتی ژن های T.pallidum می باشد.

بر اساس نتایج یک مطالعه بالینی، روش ICA به رسمیت شناخته شده و برای استفاده در تشخیص آزمایشگاهی سیفلیس در فدراسیون روسیه به عنوان یک آزمایش غربالگری و تاییدی در صورتی که آزمایشگاه ها دارای تجهیزات مناسب باشند، توصیه شده است. در سال 2012، ICA به عنوان یک آزمایش غربالگری و تاییدی برای تشخیص سیفلیس در دستورالعمل های بالینی برای مدیریت بیماران مبتلا به عفونت های مقاربتی و عفونت های دستگاه تناسلی گنجانده شد.

بنابراین، استفاده از ICA با فناوری پیشرفته که با معرفی اتوماسیون وارد عمل تشخیص آزمایشگاهی جهانی و داخلی شده است، مزایای زیر را به همراه دارد:

• حذف تأثیر عوامل ذهنی در مرحله تحلیلی مطالعه
• ایمنی پرسنل هنگام انجام مطالعات مواد بیولوژیکی بالقوه آلوده
• افزایش سرعت به دست آوردن نتایج توسط بیمار
• استانداردسازی تحقیق و کنترل کیفیت تحقیق
• ارائه نتایج قابل اعتماد قابل اعتماد به بیماران
• تحقیقات آزمایشگاهی بالینی با کیفیت بالا

روش ICA از نظر حساسیت قابل مقایسه با روش رادیو ایمونواسی است و از نظر سهولت اجرا، ایمنی برای پرسنل و بسیاری پارامترهای دیگر از آن پیشی می گیرد.

روش ICA که حساسیت و ویژگی بالایی دارد (98 تا 100%)، تعیین کمیت سطح آنتی بادی ها در برابر عامل ایجاد کننده سیفلیس را ممکن می سازد و می تواند برای تایید عفونت سیفلیس و غربالگری مورد استفاده قرار گیرد. محدودیت های استفاده: نمی توان از آن برای نظارت بر اثربخشی درمان استفاده کرد، ممکن است نتیجه مثبت کاذب بدهد.

ایمونوکروماتوگرافی (ICH).

روش های نسبتاً جدیدی برای استفاده در فدراسیون روسیه برای تشخیص آنتی بادی های اختصاصی ترپونما بر اساس روش های ایمونوکروماتوگرافی (ICH) هستند. همانند روش ICA، لیپوپروتئین های نوترکیب به دست آمده با روش های مهندسی ژنتیک (به عنوان مثال: آنتی ژن های Tp15، Tp17، Tp47) و پپتید بیوسنتزی TmpA به عنوان آنتی ژن استفاده می شوند. آنتی ژن های ذکر شده نیز در ترکیبات مختلف به عنوان بخشی از جاذب ایمنی در ELISA و ایمونوبلات استفاده می شوند.

روش ICG به شما امکان می دهد تا به سرعت محتوای آنتی بادی های اختصاصی ترپونما را برای عامل ایجاد کننده سیفلیس در نمونه های سرم و خون کامل بدون استفاده از تجهیزات آزمایشگاهی خاص تعیین کنید و در ارائه مراقبت های اولیه بهداشتی از جمله نشانه های اپیدمیولوژیک استفاده می شود.

محدودیت های استفاده: نمی توان از آن برای نظارت بر اثربخشی درمان استفاده کرد، ممکن است نتیجه مثبت کاذب بدهد.

PBT (تست های سریع ساده در کنار تخت)

نسبتاً اخیراً، در تشخیص سرمی سیفلیس، جهتی برای توسعه به اصطلاح آزمایش‌های سریع ساده (PBT) یا آزمایش‌هایی در بالین بیمار (نقطه مراقبت - ROC) شروع شد. آزمایش‌های ساده و سریع کنار تخت، یا آزمایش‌های ایمونوکروماتوگرافی، تعیین سریع محتوای آنتی‌بادی‌های اختصاصی ترپونما برای عامل سفلیس در نمونه‌های سرم و خون کامل را بدون استفاده از تجهیزات آزمایشگاهی خاص ممکن می‌سازد و در مراقبت‌های بهداشتی اولیه از جمله استفاده می‌شود. برای نشانه های اپیدمیولوژیک محدودیت های استفاده: نمی توان از آن برای نظارت بر اثربخشی درمان استفاده کرد، ممکن است نتیجه مثبت کاذب بدهد.

این آزمایش ها بر اساس تشخیص ایمونوکروماتوگرافی آنتی بادی های آنتی ژن های ترپونمال ترپونما کم رنگ بوده و بر روی نوارها انجام می شوند. در این مورد، هم از خون کامل و هم از سرم می توان استفاده کرد (Herring A., Ballard R. et al, 2006). فرمت آزمایش ها به شما امکان می دهد در غیاب تجهیزات خاص و بدون استفاده از برق تحقیق کنید. با این حال، به دلیل حساسیت و ویژگی نسبتاً پایین، این تست ها هنوز کاربرد گسترده خود را در عمل پیدا نکرده اند.

بلات ایمنی (Western Blot)

در سال های اخیر، روش های تحقیقاتی با هدف شناسایی و تجزیه و تحلیل محتوای آنتی بادی ها ظاهر شده است. برای هر آنتی ژنترپونما رنگ پریده به طور جداگانه. یکی از این روش ها روش ایمون بلات (یا بلات، ایمونوبلات، وسترن بلات) است که برای تعیین آنتی بادی های IgG یا IgM به ترپونما کم رنگ استفاده می شود. روش ایمونوبلات اصلاحی در روش ایمونواسی آنزیمی است - گونه ای از ELISA.

ایمونوبلات یکی از مدرن ترین روش های تشخیص سرود سیفلیس است و به طور فعال در خارج از کشور استفاده می شود. نام خود را ("Western blotting") به عنوان پاسخی طنز آمیز به نام تکنیک های تشخیص DNA ("Southern Blotting") و RNA ("Northern Blotting") گرفت.

1. تاریخچه روش

ایمونوبلات (Western blot) برای تعیین آنتی بادی های IgG یا IgM در برابر آنتی ژن های ترپونما کم رنگ استفاده می شود (Herremans M. et al., 2007).

2. ایمونوبلات کلاسیک

ایمونوبلات کلاسیک(Western Blot Analysis) روش ایمونواسی آنزیمی و استفاده از روش الکتروفورتیک را ترکیب می کند. آنتی ژن های پروتئینی عامل ایجاد کننده سیفلیس ابتدا با الکتروفورز جدا شده و به یک حامل - یک غشای نیتروسلولز (نوار) ​​منتقل می شود. به این انتقال blotting می گویند. سپس این حامل با نقاط جدا (بلات) با سرم آزمایش و آنتی بادی های IgG یا IgM که با آنزیم ها یا مواد رادیواکتیو نشاندار شده اند، درمان می شود. این روش شامل استفاده از پروتئین ترپونما طبیعی یا نوترکیب است.

الکتروفورزجداسازی ترکیبات باردار بر اساس تحرک آنها در میدان الکتروفورتیک است. وقتی اختلاف پتانسیل در محیطی اعمال می شود، مولکول های دارای بار مثبت به سمت الکترود با بار منفی و مولکول های دارای بار منفی به سمت الکترود مثبت حرکت می کنند.

اکثر پروتئین های کروی به گونه ای جمع شده اند که اکثر گروه های باردار، یعنی گروه های آبدوست، روی سطح پروتئین قرار دارند، در حالی که باقی مانده های بدون بار و آبگریز در داخل کروی غوطه ور می شوند. در یک میدان الکتریکی، پروتئین ها مطابق با بار خود به سمت یک الکترود با بار مخالف مهاجرت می کنند.

جداسازی الکتروفورتیک پروتئین ها در یک محیط ژل مصنوعی مبتنی بر پلی آکریل آمید انجام می شود. برای جداسازی پروتئین ها بر اساس وزن مولکولی آنها، قبل از الکتروفورز، مخلوط پروتئین در حضور سدیم دودسیل سولفات (SDS) پیش انکوبه می شود.

مطالعات دقیق دانشمندان خارجی وبر و آزبورن (1969) نشان داد که پس از چنین درمانی، تنها عاملی که می تواند بر تحرک پروتئین ها در ژل پلی آکریل آمید (PAAG) تأثیر بگذارد، اندازه پروتئین یا وزن مولکولی آن است. این امکان استفاده از روش الکتروفورز در SDS-PAGE را در حضور SDS برای تعیین نسبتاً دقیق وزن مولکولی پروتئین ها و پپتیدها فراهم کرد. در ادبیات خارجی این روش SDS-PAGE (سدیم دودسیل سولفات-پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز) نامیده می شد.

مشخصات واکنش پذیری در تست کلاسیک WB با آنتی ژن های طبیعی (روش الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید با سدیم دودسیل سولفات). (1) - نتیجه مثبت کنترل، (2) - نتیجه منفی کنترل، (3-6) - نمونه های بالینی.

در آزمایش‌های سیفلیس با استفاده از این روش، که قبلاً خالص شده و تا اجزای تشکیل‌دهنده آن تخریب شده بود، ترپونما کم رنگ در یک ژل پلی آکریل آمید یا آگارز تحت الکتروفورز قرار می‌گیرد. در همان زمان، آنتی ژن های موجود در ترکیب آن با وزن مولکولی جدا می شوند.

سپس با الکتروفورز عمودی، آنتی ژن ها به نواری از نیتروسلولز منتقل می شوند که اکنون حاوی طیف نامرئی از نوارهای آنتی ژنی مشخصه ترپونما کم رنگ است.

در طول تجزیه و تحلیل، مواد آزمایش (سرم، پلاسمای خون بیمار، و غیره) به یک نوار نیتروسلولز (نوار) ​​اعمال می شود. اگر آنتی بادی های خاصی در نمونه وجود داشته باشد، در فرآیند جوجه کشی آنها به شدت به باندهای آنتی ژنی که به شدت با آنها مطابقت دارند (مکمل) متصل می شوند و یک مجموعه "آنتی ژن-آنتی بادی" را تشکیل می دهند.

پس از حذف ایمونوگلوبولین‌های غیر متصل در طول شستشوی نوار، انکوباسیون با آنتی‌بادی‌های مزدوج برچسب‌گذاری شده با آنزیم به ایمونوگلوبولین‌های انسانی (آنتی بادی‌های IgG یا IgM انسانی) دنبال می‌شود که طی آن آنتی‌بادی‌های نشان‌دار شده با آنزیم به آنتی‌ژن-آنتی‌بادی موجود متصل می‌شوند. کمپلکس های روی سطح غشاء

پس از حذف مزدوج متصل نشده در طی انکوباسیون با محلول سوبسترا، آنزیم با سوبسترا تعامل می کند و در نتیجه یک واکنش رنگی ایجاد می شود - رنگ آمیزی بخش های غشایی (به شکل نوارها) که در آن آنتی ژن های منفرد ترپونما کم رنگ قرار دارند، آنتی بادی ها که در سرم آزمایش بودند. شدت رنگ آمیزی به مقدار آنتی بادی های متصل شده از سرم بستگی دارد. نتیجه واکنش به صورت بصری ارزیابی می شود.

وجود نوارها در نواحی خاصی از صفحه نیتروسلولز وجود آنتی بادی‌های آنتی‌ژن‌های کاملاً مشخص ترپونما کم رنگ را در سرم مورد مطالعه تأیید می‌کند.

تعیین کننده های ایمنی 15، 5، 17، 44.5، 47 کیلو دالتون تعیین شده با استفاده از این روش دارای اهمیت تشخیصی در سیفلیس هستند. ایمونوبلات Ig G از نظر حساسیت و ویژگی مشابه RIF با جذب (RIF abs) است. Ig M-immunoblotting می تواند به عنوان یک آزمایش تشخیصی برای سیفلیس مادرزادی عمل کند.

3. ایمونوبلات در قالب ایمونواسی خطی

ایمونواسی خطی (ایمونواسی خطی، LIA) به شما امکان می دهد همزمان آنتی بادی های آنتی ژن های ترپونما کم رنگ را در سرم یا پلاسمای انسانی تعیین کنید. آنتی ژن ها از قبل روی نوارهای تست (نوارها)، که به عنوان بخشی از کیت های تشخیصی تجاری عرضه می شوند، اعمال می شوند.

نوارها از غشای نیتروسلولز، غشای پلی آمید با پشتی پلاستیکی یا غشای نایلونی با پشتی پلاستیکی ساخته شده اند. در طول ساخت، چندین آنتی ژن مجزا به عنوان خطوط آنتی ژنی جداگانه روی نوار تست قرار می گیرند. علاوه بر این آنتی ژن های سیفلیس، چهار خط کنترل دیگر به هر خط اعمال می شود: استرپتاویدین و کنترل ها (خط برش 3+، 1+ و ±).

برای نوارها، آنتی ژن های مصنوعی به دست آمده توسط مهندسی ژنتیک استفاده می شود - پروتئین های نوترکیب یا ساختارهای پلی پپتیدی مصنوعی. اینها آنالوگ های آنتی ژن های سطحی ترپونما کم رنگ هستند - TpN15، TpN17، TpN47 و TmpA با وزن مولکولی 15، 17، 47 کیلو دالتون و 44.5 (TmpA)، که در آن kDa = کیلو دالتون است. با کمک آنها، آنتی بادی های سرم به اجزای مختلف ایمنی غالب پاتوژن تعیین می شود.

انکوباسیون نمونه آزمایشی در یک کووت انجام می شود که نوار نشانگر نیز در آن قرار می گیرد. آنتی بادی های T. pallidum با اتصال به آنتی ژن های چاپ شده بر روی نوارهای آزمایش تعیین می شوند. اگر آنتی بادی های اختصاصی T.pallidum در نمونه وجود داشته باشد، آنها با خطوط آنتی ژن منفرد پیوند ایجاد می کنند. هنگامی که آنتی‌بادی‌های موجود در سرم آزمایش با آنتی‌ژن‌های مجزای T. pallidum که روی نوار تست قرار می‌گیرند، تعامل می‌کنند، یک کمپلکس آنتی‌ژن-آنتی‌بادی به شکل نوارهای رنگی قابل تشخیص بصری تشکیل می‌شود.

هنگام در نظر گرفتن نتایج ایمونوبلات، واکنش سرم به هر یک از آنتی ژن ها به طور جداگانه ارزیابی می شود. پاسخ مثبت کلی زمانی صادر می شود که نتیجه ای به طور همزمان با دو یا سه آنتی ژن ارائه شده به دست آید.

روش های تحقیقاتی به صورت دستی یا بر روی یک آنالایزر خاص با تفسیر نتایج با استفاده از یک برنامه کامپیوتری تخصصی برای بیماری های عفونی انجام می شود.

با توجه به درجه بالایی از خالص سازی آنتی ژن های نوترکیب و تشخیص همزمان آنتی بادی ها در برابر ایمونوژن ترین عوامل تعیین کننده عامل سیفلیس، این روش از حساسیت و ویژگی بالایی برخوردار است.

4. حسابداری برای نتایج

برای خواندن شدت رنگ آمیزی باندهای آنتی ژنی روی نوارها، فتومترهایی ساخته شده اند که عملکرد آنها بر اساس بازتاب سیگنال است که ارزیابی ذهنی را حذف می کند و فرصت بالقوه ای را برای اتوماسیون فراهم می کند.

5. در چه دوره هایی از بیماری بهتر است استفاده شود

آزمایش‌هایی که از روش وسترن بلات استفاده می‌کنند می‌توانند آنتی‌بادی‌های خاص آنتی‌ژن‌های ترپونما پالیدوم را در مراحل اولیه بیماری شناسایی کنند. مهمترین آنها در تشخیص سیفلیس آنتی بادی های آنتی ژن های ترپونما کم رنگ TpN15، TpN17، TmpA و TpN47 هستند. این آنتی ژن ها پروتئین های غشایی با وزن مولکولی به ترتیب 15، 17، 44.5 و 47 کیلو دالتون هستند.

هنگامی که ترپونما پالیدوم به بدن انسان وارد می شود، آنتی بادی های ضد سیفلیس به این ترتیب ظاهر می شوند: ابتدا یک پاسخ ایمنی به آنتی ژن های TpN17 ایجاد می شود، سپس به TpN47، پس از TpN15 و بعد از همه TmpA. هنگام در نظر گرفتن نتایج آزمایش، واکنش سرم به هر یک از آنها به طور جداگانه ارزیابی می شود. به عنوان مثال، هنگامی که در یک بلات خطی واکنش تنها به خط آنتی ژنی TpN17 و TpN47 وجود دارد، به این معنی است که بیماری در مراحل اولیه است. هرچه خطوط آنتی ژنی بیشتر واکنش نشان دهند، عفونت بیشتر پیشرفت می کند. در درمان سیفلیس، الگوی واکنش پذیری در این آزمایش تغییر می کند.

تعیین IgM به پروتئین هایی با وزن مولکولی 15.17، 41، 47 کیلو دالتون، شناسایی 29.2 درصد از بیماران مبتلا به سیفلیس ثانویه، 12.5 درصد با سیفلیس نهفته زودرس و 8.0 درصد مبتلا به سرم مقاوم را ممکن می سازد. جستجو برای IgG برای همان مولکول ها با حساسیت 61.6 درصد برای سفلیس مقاوم به سرم و 100 درصد برای سیفلیس نهفته ثانویه و اولیه مشخص می شود.

6. حساسیت و ویژگی

با توجه به ادبیات، حساسیت و ویژگی آزمون بسیار بالا است - به ترتیب 99.6-100٪ و 99.3-99.5٪. در روش کلاسیک، این امر از طریق جداسازی الکتروفورتیک پروتئین ها، گلیکو- و لیپوپروتئین ها و حداکثر ویژگی تشخیص سرم ایمنی یا آنتی بادی های مونوکلونال به دست می آید. تحت شرایط بهینه، ایمونوبلات می تواند آنتی ژن را در مقادیر کمتر از 1 نانوگرم در حجم آزمایش تشخیص دهد.

حساسیت بلات خطی نیز 99.6 درصد و ویژگی بین 99.3 درصد تا 99.5 درصد است.

به گفته کارشناسان، ایمونوبلات با آنتی ژن های بسیار اختصاصی نوترکیب از نظر حساسیت و ویژگی مشابه RIF-abs است.

بر اساس داده های ادبیات خارجی و نتایج یک مطالعه در TsNIKVI، روش ایمونوبلات حساسیت بالایی (98.8-100٪) و ویژگی (97.1-100٪) در تشخیص سیفلیس دارد.

7. دامنه روش

ایمونوبلات (immunoblot) یک روش مرجع بسیار خاص و بسیار حساس است. حساسیت و ویژگی بالا باعث می شود که این روش به عنوان یک آزمایش تاییدی برای سیفلیس در نظر گرفته شود. از این روش می توان برای تایید تشخیص استفاده کرد و همچنین اگر سایر آزمایشات ترپونمال نتایج مشکوک و متناقضی ارائه دهند. وسترن بلات می تواند تشخیص را در بیمارانی که نتایج آزمایشات مثبت یا نامشخص دارند، از جمله مواردی که با استفاده از TPHA یا ELISA به دست آمده اند، تأیید کند.

8. منابع و علل خطاهای مرحله بندی، مثبت کاذب و منفی کاذب

نتایج مثبت کاذب بسیار نادر است. نتایج منفی کاذب نیز بسیار نادر است و در بیماران مبتلا به نقص ایمنی مشاهده می شود - اغلب در افراد آلوده به HIV و با اثر یک "پنجره" تشخیصی به دلیل تاخیر در سنتز آنتی بادی و همچنین خطا در مرحله مرحله.

استفاده از سیستم های آزمایشی مدرن، رعایت دقیق تمام الزامات را برای مواد و عملکرد واکنش دیکته می کند. اساساً منبع خطاها نقض نظم و فناوری مطالعه (به ویژه برای وسترن بلات کلاسیک) ، عدم رعایت توصیه های تولید کنندگان کیت تست است. . همچنین می توان در جمع آوری، تحویل، نگهداری نمونه های سرم خون و همچنین در انجام آزمایش ها خطا کرد. علاوه بر نمونه های آلوده، سایر علل احتمالی شامل استفاده از کیت های آزمایش منقضی شده و خطا در تجزیه و تحلیل نتایج آزمایش است.

9. ویژگی ها، مزایا و معایب

منحصر به فرد بودن immunoblot در محتوای بالای اطلاعات و قابلیت اطمینان نتایج آن نهفته است.

این آزمایش به آنتی ژن های بسیار خالص، سرم های مرجع و کنترل نیاز ندارد. شناسایی یک هدف آنتی بادی بر اساس وزن مولکولی پروتئینی است که آنتی بادی های سرم بیمار با آن واکنش نشان می دهند. در یک واکنش، اتصال آنتی بادی ها به چندین آنتی ژن قابل تشخیص است، که هر کدام را می توان با دقت مشخص کرد. به همین دلیل، ایمونوبلات نسبت به روش های دیگر برای تشخیص آنتی بادی ها دارای مزایای متعددی است که نتایج آن به استانداردسازی، حساسیت، کیفیت سوبسترا، ناپایداری یا نامحلول بودن آنتی ژن های خاص بستگی دارد.

این روش به راحتی قابل تکرار است، انجام و تفسیر نتایج نسبتاً آسان است، امکان تعیین طیف آنتی‌بادی‌ها به چندین آنتی‌ژن T. pallidum را به طور همزمان و ارزیابی سهم آنتی‌بادی‌هایی با ویژگی‌های متفاوت در واکنش کلی فراهم می‌کند.

استفاده از آنتی ژن های نوترکیب و پپتیدی بسیار خالص شده، واکنش غیر اختصاصی سرم ها را به حداقل می رساند. استفاده از روش این امکان را به وجود می آورد که از روش های کار فشرده و ذهنی که برای محقق خطرناک هستند اجتناب شود (پیوند سویه های G. pallidum، کار با T. pallidum بیماری زا هنگام تنظیم واکنش). این امر ترجیح روش ایمونوبلات را نسبت به سایر آزمایشات ترپونمال (RIF و به ویژه RIBT) برای تشخیص سیفلیس تعیین می کند.

10. اصلاح روش

چندین سیستم تست تجاری بر اساس این روش وجود دارد. برخی از آنها در قالب هستند وسترن بلاتاز نوارهایی تشکیل شده است که اجزای پروتئینی T. pallidum روی آنها منتقل می شود، که قبلاً توسط الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید جدا شده اند.

بقیه در قالب هستند لکه خطی، شامل نوارهایی است که پلی پپتیدهای نوترکیب و مصنوعی به شکل خطوط مجزا جذب می شوند - آنالوگ آنتی ژن های سطحی T. pallidum، TpN15، TpN17، TpN47 و TmpA.

تفسیر نتایج وسترن بلات دشوارتر است زیرا نوارها طیف گسترده ای از آنتی بادی ها را نشان می دهند که بسیاری از آنها مختص گروه هستند. در مقابل، تفسیر نتایج خطی بلات ساده است. علاوه بر این، خطوط کنترل اضافی چاپ شده بر روی نوار امکان ارزیابی نیمه کمی سطح آنتی بادی های چهار آنتی ژن T. pallidum را فراهم می کند.

تکنولوژی xMAP

xMAP یک فناوری پیشرفته است که انجام مطالعات چند پارامتری را با شناسایی همزمان چندین آنالیت در یک نمونه بیولوژیکی ممکن می‌سازد. میکروسفرهای رنگی پوشیده شده با معرف های جذب (الیگونوکلئوتیدها، آنتی بادی ها، آنتی ژن ها) به عنوان فاز جامد استفاده می شوند.

نمونه آزمایشی به محلول حاوی میکروسفرها اضافه می شود. آنالیت های شناسایی شده در نمونه به میکروسفر مربوطه متصل می شوند و پس از آن یک عامل آشکارساز (تشخیص آنتی بادی ها، برچسب فلورسنت) به محلول اضافه می شود. برای تشخیص آنالیت تجزیه و تحلیل شده، از یک سیستم دو لیزری استفاده می شود که امکان ارزیابی کیفی حضور آنالیت در نمونه را فراهم می کند (برای این کار، از یک لیزر قرمز استفاده می شود که میکروکره ها را بر اساس رنگ طبقه بندی می کند) و ارزیابی کمی محتوای آنالیت در یک نمونه (برای این کار از لیزر سبز رنگ استفاده می شود).

این مطالعه به طور خودکار بر روی آنالایزرهایی مانند Bio-Plex 200 (bio-rad)، Bio-Plex2200 (bio-rad)، Luminex100 (luminex)، Luminex200 (luminex) مجهز به نرم افزار انجام می شود.

عملکرد فناوری xMAP به طور قابل توجهی از عملکرد روش کلاسیک ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) با مقدار قابل توجهی کمتری از مواد زیستی فراتر می رود.

فناوری xMAP که دارای حساسیت تحلیلی بالایی است، در حال حاضر برای حل طیف وسیعی از مشکلات بالینی استفاده می شود. با کمک آن، در یک نمونه از مواد بیولوژیکی، شناسایی همزمان انکومارکرهای شناخته شده، نشانگرهای قلبی، نشانگرهای فاز حاد و دیابت شیرین، طیف وسیعی از سیتوکین ها، کموکاین ها و فاکتورهای رشد انجام می شود. تشخیص همزمان چندین آنالیت در یک نمونه بیولوژیکی می تواند زمان معاینه بیمار را به میزان قابل توجهی کاهش دهد. تا به امروز، تعدادی از سیستم های آزمایشی برای تشخیص آنتی بادی های پاتوژن های STI، به ویژه عفونت سیفلیس، با استفاده از روش xMAP ایجاد شده است.

مرکز پزشکی"در Samotechnaya"

پذیرایی با تعیین وقت قبلی شنبه یکشنبه.

سیفلیس یک بیماری عفونی است که از طریق تماس جنسی قابل انتقال است. عامل بیماری یک باکتری مانند ترپونما رنگ پریده (اسپیروکت) است که اندام های داخلی، غشاهای مخاطی و پوست را درگیر می کند.

برای تشخیص این بیماری از آزمایش خون و در برخی موارد از مایع مغزی نخاعی استفاده می شود. نتایج با علامت مثبت یا ضربدرها به مقدار 1 تا 4 نشان داده شده است.

سیفلیس چهار ضربدر خطرناک ترین مرحله برای یک فرد در نظر گرفته می شود. تفسیر آزمایشات و تشخیص فقط توسط پزشک تعیین می شود.

چهار مرحله بیماری و ویژگی های آنها

تعریف بیماری مقاربتی با مطالعه خون برای وجود ترپونما انجام می شود.

این روش برای تشخیص سیفلیس با استفاده از یک واکنش سرولوژیکی رایج‌ترین روش در بین بسیاری از آزمایش‌ها است.

ایمونولوژیست یک سیستم ویژه برای توصیف بیماری ایجاد کرد که در آن ضربدرها میزان آنتی بادی ها را نشان می دهد. مهم است بدانید که آنها در خود بیماری نیستند، اما ترپونما، زخم و بثورات سیفلیسی وجود دارد.

افزایش تیتر آنتی بادی نشان دهنده تولید مثل فعال پاتوژن است و در هر تجزیه و تحلیل با ارزیابی مثبت از حضور آنتی بادی ها، تلاقی ها وجود دارد. مراحل بیماری و ویژگی های آنها را در نظر بگیرید.

سیفلیس یک ضربدری

اگر تلاقی وجود داشته باشد، سیفلیس مثبت است، اما حتی در هنگام مشاهده آنتی بادی در خون برای مبارزه با بیماری، تردید وجود دارد.

بنابراین، پزشکان چنین نتیجه آزمایشی را مشکوک می نامند. اغلب نتیجه آزمایش می تواند به معنای بیماری دیگری باشد.

نتیجه 1+ به این معنی است که زمان کمی از مرحله عفونت گذشته است. بعلاوه ممکن است پس از درمان کامل، زمانی که آنتی بادی ها زنده مانده اند، وجود داشته باشد.

سیفلیس دو صلیب

دو ضربدر به معنای نتیجه مثبت است که نشان دهنده وجود ترپونما در خون است.

افزایش تیتر نشان دهنده غلظت کم در خون است. بنابراین، قبل از شروع درمان، باید باکتری را بررسی کنید تا نتیجه 2 به علاوه تایید شود.

سیفلیس سه صلیب

آزمایش خون با نمره سه ضربدر نشان دهنده نتیجه مثبت است و قابل رد نیست. مطالعه مکرر خون تنها تشخیص صلیب 3 را تأیید می کند، که برای بیماری در مرحله دوم رشد معمول است.

سیفلیس چهار صلیب

نامطلوب ترین نتیجه، نتیجه 4 تلاقی است. اما این به هیچ وجه به این معنی نیست که این بیماری قابل درمان نیست.

این مرحله با بثورات قابل توجه، ریزش مو، تب مشخص می شود. تعداد آنتی بادی ها در سطح بالایی است، بنابراین نتیجه گیری بدون شک است.

معاینه چگونه انجام می شود؟

تشخیص سیفلیس در دو مرحله انجام می شود که با معاینه بیمار شروع می شود و با مطالعه خون برای آنتی بادی ها پایان می یابد.

پزشک بیمار را معاینه می کند، در حالی که از قبل احتمال وجود بیماری را تعیین می کند:

• تشخیص زخم در اندام تناسلی یا در حفره دهان؛
• بثورات پوستی، مهر و موم؛
• طاسی در سر

پزشک بر اساس سؤالاتی در مورد وجود آمیزش جنسی مشکوک یا درمان یک بیماری مقاربتی، اطلاعات بیمار را روشن می کند.

معاینات در آزمایشگاه

امروزه مطالعه ای در مورد تشخیص سیفلیس 4 متقاطع می تواند به طرق مختلف انجام شود که معروف ترین آنها در زیر ارائه شده است:

• RPR آزمایشی است که آنتی بادی های موجود در خون را در برابر فسفولیپیدهای غشای سیتوپلاسمی تعیین می کند.
• RIF (واکنش ایمونوفلورسانس) واکنش حساس تری است، زیرا در 80٪ بیماران در مرحله اول یک نتیجه مثبت را نشان می دهد.
• RW (روش ایمونولوژیست آلمانی Wassermann) یک روش تحقیقاتی سریع و قابل اعتماد است که به شما امکان می دهد معاینه انجام دهید و داروهای مؤثر دارویی را تجویز کنید.
• آنزیم ایمونواسی خون؛
• این واکنش مبتنی بر پدیده بی حرکتی باکتری ها توسط آنتی بادی هایی مانند ایموبلیسین است.
• هماگلوتیناسیون غیرفعال وجود و مقدار آنتی بادی ها را نشان می دهد.

تا به امروز، سیفلیس در هر مرحله قابل درمان است. اما تحمل درمان در اولین تظاهرات بیماری، زمانی که عفونت کل بدن را تحت تاثیر قرار نداده است، بسیار ساده تر است.

مدت درمان و داروها بر اساس ویژگی های فردی بدن انسان و مرحله ضایعه توسط متخصص عصب کشی تجویز می شود.

فراموش نکنید که بهترین پیشگیری از سیفلیس ارتباط نزدیک با یک شریک معمولی است که از سلامتی او کاملاً مطمئن هستید.

آنالیز RPHA تکنیکی است که در بین سایر آزمایشات خون یکی از مهم ترین آنها است. با کمک آن می توانید پیشرفت بیماری های ناخوشایند ماهیت روده ای عفونی را تعیین کنید. اما اغلب این تجزیه و تحلیل برای تشخیص سیفلیس استفاده می شود. مطالعه از دقت و پایایی بالایی برخوردار است.

RPHA مخفف واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال است.

RPHA بر اساس پدیده آگلوتیناسیون گلبول های قرمز است که در آن آنتی ژن ها - معرف های RPHA - هنگامی که سرم خون بیمار مبتلا به سیفلیس به آنها اضافه می شود، روی سطح جذب می شوند.

پس از ترکیب سرم یک فرد مبتلا به سیفلیس با معرف RPHA، آگلوتیناسیون (اتصال یا چسباندن) گلبول های قرمز اتفاق می افتد و رسوب می کنند. میزان چسبندگی به طور مستقیم به تجمع و تراکم آنتی بادی ها در سرم خون بستگی دارد، به همین دلیل، RPGA نه تنها به تشخیص وجود آنتی بادی ها، بلکه به شناسایی تعداد آنها نیز کمک می کند.

نتیجه به عفونت اولیه و ثانویه تقسیم می شود که در تظاهرات آنتی بادی های مختلف بیان می شود. در اولیه، IgM فعال می شود، در ثانویه، IgG. دقت مطالعه به مرحله دوم حتی بیشتر مشخص می شود. اگر در مرحله اول حدود 96٪ باشد، در مرحله دوم می تواند تا 99٪ برسد.

تجزیه و تحلیل به عنوان یک مطالعه مستقل خوب است، اما بهتر است از آن به عنوان یک روش تاییدی پس از یک مطالعه غیر اختصاصی مثبت استفاده شود.

به دلیل دقت بالای آن، این تجزیه و تحلیل به طور فزاینده ای برای تایید یا رد شروع ضایعه سیفلیس در بیمار مورد استفاده قرار می گیرد.

همچنین، برای اطمینان بیشتر، پس از RPHA، آزمایش تاییدی دیگری می توان انجام داد، به عنوان مثال، ایمونواسی آنزیمی "ترپونمال".

به طور کلی، تشخیص همیشه به صورت پیچیده انجام می شود، نه تنها با استفاده از 1 نوع معاینه، بلکه با ترکیب روش های مختلف مکمل.

سوال خود را از دکتر تشخیص آزمایشگاهی بالینی بپرسید

آنا پونیواوا. او از آکادمی پزشکی نیژنی نووگورود (2007-2014) و رزیدنتی در تشخیص بالینی و آزمایشگاهی (2014-2016) فارغ التحصیل شد.

یک نکته منفی کوچک یا بهتر بگوییم یکی از ویژگی های تجزیه و تحلیل حساسیت آن حتی پس از درمان بیماری است. نتیجه در طول زندگی فردی که سیفلیس داشته است مثبت نگه داشته می شود. به همین دلیل، RPHA برای تشخیص زودهنگام یا دیررس بیماری استفاده نمی شود. همچنین استفاده از این تجزیه و تحلیل برای تعیین اثربخشی درمان غیرممکن است.

با هر نتیجه مثبت، سوء ظن عفونت وجود دارد. اما گاهی اوقات یک واکنش مثبت کاذب ممکن است رخ دهد. درست است، حضور کمی آن معمولاً از 3٪ تجاوز نمی کند و به دلایل غیر عفونی ایجاد می شود.