Imūnās pārbaudes testa sistēmas "ds-ifa-hbeAg" un "ds-ifa-anti-hbe". Sifilisa analīze

Visaptverošam ķermeņa stāvokļa novērtējumam tiek izmantota ELISA diagnostikas metode. Fermenta imūnanalīze ir paredzēta infekcijas, hematoloģisko, primāro un sekundāro imūndeficītu diagnosticēšanai.

Kas ir ELISA analīze

Daudzi pacienti ir ieinteresēti ELISA metodē: kas tā ir, kāpēc tiek veikts pētījums. Ar fermentiem saistīto imūnsorbentu testu sāka izmantot salīdzinoši nesen. Sākotnēji ar tās palīdzību tika pētītas antigēnu struktūras, un tas tika veikts tikai zinātniskiem mērķiem. Tad zinātnieki nonāca pie secinājuma, ka ar enzīmu palīdzību ir iespējams identificēt specifiskas antivielas, kas rodas, reaģējot uz notiekošo slimību.

Sākotnēji šo paņēmienu izmantoja tikai šaura profila medicīnas iestādes, galvenokārt asins pārliešanas stacijās. ELISA metodei ir īpaša nozīme HIV infekcijas noteikšanā.

Mūsdienās šai metodei ir plašs pielietojums. Mūsdienu laboratorijas to izmanto, lai diagnosticētu:

• audzēji;
• hormonālie traucējumi;
• infekcijas;
• hroniski vai iepriekš pārnesti infekcijas procesi;
• helminti.

Ja organismā notiek infekcijas process, tad šāda veida diagnoze tiek uzskatīta par optimālāko slimības veida noteikšanai.

Metodes būtība un tās veidi

ELISA metode - kas tā ir, kāda ir šāda veida pētījumu būtība? Šis un daudzi citi jautājumi interesē pacientus. Šīs diagnostikas metodes pamatā ir ķermeņa imūno šūnu saistīšanās ar infekcijas izraisītāju antigēniem. Iegūto kompleksu nosaka, izmantojot īpašu fermentu.

Lai saprastu ELISA metodes principu, jums jāzina, kā notiek antigēna-antivielu reakcija. Antigēns ir organismam sveša olbaltumvielu atvasināta molekula, kas iekļūst kopā ar infekciju. Par antigēniem tiek uzskatītas arī kāda cita asiņu daļiņas, kas neatbilst grupai. Organismā tie izraisa imūnreakciju, kuras mērķis ir pasargāt no svešām vielām. Tāpēc cilvēka ķermenis ražo antivielas - imūnglobulīnus, kas var saistīties ar antigēniem, veidojot imūno kompleksu. Šādus savienojumus imūnās šūnas ir daudz vieglāk atpazīt un iznīcināt.

Reakcija uz šādu imūno kompleksu klātbūtni tiek veikta laboratorijas apstākļos, izmantojot gatavus savienojumus, lai noteiktu, vai asinīs ir līdzīgi.

ELISA metodes būtība ir diezgan vienkārša, tomēr, ņemot vērā faktu, ka tiek veikts asins tests, lai noteiktu daudzas infekcijas un slimības, ir vairākas tās šķirnes. Katrs no tiem atšķiras pēc izpildes shēmas un pielietojuma jomas. Var būt tieša vai netieša ELISA. Tiešā metode nozīmē, ka tiek izmantotas imobilizētas antivielas, kas reaģē ar antigēniem. Šīs metodes galvenā priekšrocība ir tā, ka visus procesus var automatizēt, kas nozīmē, ka diagnostikai nepieciešams maz laika.

Netiešā metode pieņem, ka tiek izmantotas sekundāras antivielas. Cietā fāzē antigēns tiek imobilizēts. Analīze ļauj noteikt antivielas pret dažādiem antigēniem. Tas palīdz sasniegt precīzāku rezultātu, taču metode ir sarežģīta.

Pētniecības priekšrocības

ELISA metodei ir daudz priekšrocību salīdzinājumā ar citām diagnostikas metodēm. Galvenie no tiem ir šādi:

• augsta jutība;
• sastāvdaļu uzglabāšanas stabilitāte;
• diagnostikas ātrums;
• var izmantot nelielu daudzumu testa materiāla;
• ir iespēja automatizēt visus procesus;
• infekciju var noteikt agrīnākajos posmos.

Šī diagnostikas metode ir universāla, tāpēc tā ir piemērota masveida izmeklēšanas veikšanai. Ar analīzes palīdzību ir iespējams izsekot infekcijas procesa norises dinamikai.

Indikācijas analīzei un paraugu ņemšanai

Pētījumu, izmantojot ELISA metodi, var izrakstīt, ja jums ir aizdomas par daudzām slimībām:

Venozās asinis pārbauda, \u200b\u200bvai nav antivielu. Pirms analīzes no tā tiek izolēti elementi, kas var sarežģīt pētījumu. Var savākt arī citus bioloģiskos šķidrumus.

Lai iegūtu visprecīzāko informāciju, asins paraugu ņemšana notiek tukšā dūšā. Ja procedūra tika noteikta, lai noteiktu latentu infekciju, tad dažas nedēļas pirms analīzes jums jāpārtrauc antibakteriālo un pretvīrusu zāļu lietošana. Atkarībā no laboratorijas aprīkojuma, kurā materiāls tika ņemts, rezultātu var iegūt 24 stundu laikā. Steidzamos gadījumos šis laiks tiek samazināts līdz vairākām stundām.

Sifilisa analīze

ELISA metodes izmantošana palīdz noteikt daudzu infekciju klātbūtni organismā, jo īpaši sifilisu. Pētījumam asinis tiek ņemtas no vēnas tukšā dūšā. Tad tiek veikts pētījums, kas palīdz noteikt ne tikai slimības klātbūtni organismā, bet arī precīzu tās rašanās laiku, jo slimības gaitā dažas antivielas tiek aizstātas ar citām stingri noteiktā secībā.

Akūtā fāzē, kas norāda uz ilgstošu slimības gaitu vai ar hroniskas infekcijas saasināšanos, asinīs tiks konstatēti M tipa imūnglobulīni. A tipa imūnglobulīnu klātbūtne norāda, ka infekcija organismā ir bijusi vairāk nekā 4 nedēļas. G grupas imūnglobulīni norāda uz slimības augstumu vai iepriekšējo terapiju.

Pēc urbumu krāsas pakāpes tiek vērtēta infekcijas procesa intensitāte, jo tā piesātinājums ir atkarīgs no izveidoto imūnkompleksu skaita.

HIV tests

Šajā gadījumā analīzes veikšanai izmanto arī ELISA metodi, kurai ir noteiktas pazīmes, kas saistītas ar slimības gaitu un progresēšanu. Šī pētījuma metode tiek uzskatīta par vispieņemamāko noteikšanai, taču tā jāveic ne agrāk kā mēnesi pēc riska faktoru iedarbības. Tas ir saistīts ar inkubācijas perioda klātbūtni, kas svārstās no 45 dienām līdz 6 mēnešiem. Tāpēc analīze jāatkārto sešus mēnešus vēlāk.

• askaridoze;
• giardiasis;
• toksoplazmoze utt.

Neskatoties uz visām priekšrocībām, ir arī ELISA metodes trūkumi. Galvenais trūkums ir tāds, ka, veicot pētījumu, ārstam iepriekš jābūt pieņēmumam par slimību.

Ja nav iespējams nejauši atrast patogēnu un noteikt tā imunoloģiskās īpašības. Pārbaude norāda tikai uz antivielu klātbūtni pacienta asinīs. Turklāt šī analīze ir diezgan dārga.

Dekodēšanas analīze

Augstas kvalitātes ELISA rezultāts būs vai nu antivielu klātbūtne, vai arī to trūkums asinīs. Ja tiek veikta kvantitatīva analīze, antivielu koncentrāciju var izteikt vai nu skaitliskā vērtībā, vai arī noteiktā + zīmju skaitā.

Turklāt tādi rādītāji kā:

IgM indikators norāda uz akūta infekcijas procesa gaitu organismā. Tās pilnīga neesamība var norādīt uz slimības izraisītāja neesamību vai tās pāreju uz hronisku stadiju.

IgA rādījums ar negatīvu IgM testu norāda uz hronisku vai latentu infekciju. Vienlaicīga IgM un IgA klātbūtne norāda, ka slimība ir akūtā stadijā. IgG klātbūtne norāda uz slimības pāreju uz hronisku stadiju vai par pilnīgu atveseļošanos un imunitātes veidošanos.

Tagad ir īpaši ELISA testi, kurus varat izdarīt pats.

RU 2515051 patenta īpašnieki:

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Imūnās pārbaudes sistēma, lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, cilvēka serumā (plazmā). Pārbaudes sistēma ietver imūnsorbentu, kura pamatā ir cilvēka imūndeficīta vīrusa 1. tipa antigēni (HIV-1 un HIV-1 O grupas env), parauga atšķaidīšanas šķīdums (PPC) un detektēšanas reaģenti (konjugāti, hromogēns / substrāts). Izgudrojums attiecas arī uz metodi cilvēka 1. seruma imūndeficīta vīrusa (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupas, iespējamā inficēšanās laika noteikšanai cilvēka serumā (plazmā), pārbaudot pacienta asins serumu, izmantojot aprakstīto ar enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu. Izgudrojums ļauj ātri un viegli noteikt iespējamo HIV infekcijas laiku. 2 n.p. f-kristāli, 4 tab., 2 piem.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Un to var izmantot, lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, cilvēka serumā (plazmā).

HIV infekcijas izplatība joprojām ir reāla problēma mūsdienu pasaulē. Tā kā savlaicīga un kvalitatīva diagnostika ir reāls veids, kā samazināt HIV infekcijas izplatīšanos, efektīvas testa sistēmas izstrāde, kas var noteikt iespējamo infekcijas periodu, ir svarīgs mūsdienu sabiedrības uzdevums.

Iepriekšējās tehnikas analīze parādīja, ka pastāv vairākas metodes un testi, ko ierosinājuši dažādi autori, lai noteiktu HIV infekcijas stadijas, izmantojot dažādas metodes. Zināms, piemēram, molekulārs ģenētiskais tests, kura pamatā ir perifēro asiņu vīrusu slodzes noteikšana ar polimerāzes ķēdes reakcijas (PĶR) metodi (Kravčenko A. V., Serebrovskaja L. V., Golokhvostova E. L. un citi. Timazīds kombinācijā ar Khivid un Invirase kompleksā terapijā pacientiem ar HIV infekciju. - Epidemioloģija un infekcijas slimības. - 1998. - Nr. 5 - 51.-52. Lpp.). Zināma metode HIV infekcijas stadiju novērtēšanai (klīniskā imunoloģija un alergoloģija G. Lawlor Jr. redakcijā - M.: Practice, 2000. - S. 585-587), kas sastāv no seruma β 2 -mikroglobulīna līmeņa noteikšanas. Aprakstīta metode HIV infekcijas stadiju diagnosticēšanai (VV Pokrovsky et al. "HIV infekcijas klīniskā diagnostika un ārstēšana. - M.: GOU VUNMC RF, 2001. - P.11), kas sastāv no CD4 + limfocītu absolūtā skaita noteikšanas. perifērās asinis. Ir arī zināma metode HIV infekcijas stadiju diagnosticēšanai, pamatojoties uz faktu, ka, pārbaudot pacienta asins serumu ar enzīmu imūnsorbcijas testa (ELISA) metodi, sākotnējā asins seruma parauga optiskais blīvums (OD), kas atspoguļo HIV specifisko antivielu līmeni, un sākotnējā inkubētā seruma parauga OD 10 minūtes ar 100 μl 3,5 M nātrija izotiocianāta šķīduma. Ar OP samazināšanos par 40% vai mazāk tiek diagnosticēta A pakāpe - ģeneralizēta limfadenopātija, ar OP samazināšanos 40-60% robežās - B pakāpe - bacilārā angiomatoze, orofaringeāla kandidoze utt., Un ar OP samazināšanos par 60% vai vairāk - stadija C - AIDS (RU 2251701).

Tādējādi iepriekšējās tehnikas analīze parādīja, ka neviens no esošajiem avotiem nevar kalpot par vistuvāko analogu apgalvotajam izgudrojumam, jo \u200b\u200bvisi šie dokumenti attiecas uz metodēm un testiem, kas nosaka HIV infekcijas pakāpi, un nevienā no aprakstītajiem avotiem nav tehnisku risinājumi, kuru mērķis ir noteikt iespējamo infekcijas laika intervālu. Apgalvotais izgudrojums attiecas uz testa sistēmu, kas nosaka iespējamo HIV infekcijas periodu. Iepriekšējās tehnikas analīze neatklāja līdzīgus risinājumus problēmas risināšanai.

Šis izgudrojums pieprasa reaģentu komplektu "DS-ELISA-HIV-AT-SROK", lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, cilvēka serumā (plazmā). Pārbaude ir paredzēta HIV pozitīvu paraugu papildu pārbaudei ar apstiprinātu pozitīvu rezultātu imūnblotā. Imūnblotā ir iespējams pētīt paraugus ar nenoteiktu vai negatīvu pētījuma rezultātu, kurā tiek apstiprināta HIV RNS un / vai HIV-1 p24 antigēna klātbūtne.

Šis izgudrojums arī deklarē metodi šī reaģentu komplekta "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" izmantošanai, lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, serumā (plazmā) ) cilvēka asinis.

Prasītā izgudrojuma tehniskais rezultāts ir noteikt iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, testa veikšanas vienkāršību, kas ļauj apgalvoto izgudrojumu izmantot HIV infekcijas izplatīšanās dinamikas epidemioloģiskai uzraudzībai, dinamikas dinamikai. serokonvertoru identificēšana noteiktā populācijā (vecuma dzimums, iedzīvotāju sociālās grupas), kā arī HIV infekcijas gadījumu un perēkļu epidemioloģiskās izmeklēšanas laikā.

Piedāvātā tehniskā risinājuma būtība slēpjas faktā, ka iespējamā HIV-1 infekcijas perioda noteikšana tiek veikta, izmantojot testa sistēmu, kas ietver imūnsorbentu, kura pamatā ir 1. tipa cilvēka imūndeficīta vīrusa antigēni (HIV-1 env un HIV-1 O grupa), atšķaidīšanas šķīdums. paraugi (PPC) un noteikšanas reaģenti (konjugāti, hromogēns / substrāts). Testa paraugus testē dabiski un atšķaida parauga atšķaidīšanas šķīdumā. Saskaņā ar testa rezultātiem paraugi tiek sadalīti "agri" un "vēlu". "Agrīnie" paraugi - iespējamais infekcijas periods līdz 9 mēnešiem no inficēšanās brīža, "vēlie" paraugi - iespējamais infekcijas periods 9 mēneši vai ilgāk no inficēšanās brīža. Parauga piederību "agrīnai" vai "vēlai" novērtē pēc atšķaidītā parauga optiskā blīvuma (OD) krituma procentiem attiecībā pret neatšķaidīto.

Šie piemēri kalpo, lai ilustrētu konkrētus izgudrojuma variantus, un to mērķis nav ierobežot pieteikuma iesniedzēja tiesības. Pieteikuma iesniedzēja tiesību darbības joma ietver visus iespējamos izgudrojuma variantus, ieskaitot tos, kas nav uzskaitīti šajā sadaļā.

Kā imūnsorbentu tiek izmantoti rekombinantie antigēni, kas satur HIV-1 un HIV-1 grupas O env imūndominantos reģionus. Konjugāts-1 ir rekombinanto HIV-1 gp41 un HIV-1 gp41 O grupas antigēnu maisījums, kas konjugēts ar biotīnu. Pirmajā posmā testa paraugus, kontrolparaugus un to atšķaidījumus 1: 101, kā arī PPC inkubē ar konjugātu-1. Specifiskās antivielas, kas atrodas pārbaudītajos un kontrolpozitīvajos paraugos, saistās ar antigēniem, kas adsorbēti mikroplāksnes urbumos, un antigēniem, kas konjugēti ar biotīnu, un veido stabilus kompleksus. Pārmērīgus paraugus un konjugātu-1 noņem mazgājot. Nākamajā stadijā iedobēs pievieno streptavidīnu, kas konjugēts ar mārrutku peroksidāzi (konjugāts-2). Konjugāts-2 saistās ar urbumā esošo antigēna-antivielu-antigēna kompleksu. Konjugāta-2 pārpalikumu noņem, mazgājot, un pēc tam hromogēnu / substrātu pievieno urbumiem. Akas ar saistītu konjugātu-2 attīstās zilā krāsā, kas, pievienojot pieturas šķīdumu, mainās uz dzeltenu. Rezultātus reģistrē, izmantojot spektrofotometru.

Kā imūnsorbentu tiek izmantoti rekombinantie antigēni, kas satur HIV-1 un HIV-1 grupas O. imūndominantos reģionus env. Tiek izmantots viens konjugāts - rekombinanto antigēnu gp41 HIV-1 un gp41 HIV-1 O maisījums, konjugēts ar mārrutku peroksidāzi. Analīzes laikā paraugus, kontrolierīces un to atšķaidījumus, kā arī PPC inkubē ar konjugātu plāksnītes antigēnu pārklātās iedobēs. Iegūtais stabils komplekss pēc liekā parauga un konjugāta noņemšanas izpaužas, pievienojot hromogēnu / substrātu. Šajā gadījumā attīstās zila krāsa, kas, pievienojot pieturas šķīdumu, mainās uz dzeltenu. Rezultātus reģistrē, izmantojot spektrofotometru.

Izpētīto paraugu piederību "agrīnai" vai "vēlai" novērtē pēc OD procentuālā krituma, atšķaidot paraugu, ko aprēķina pēc formulas:

% D e n i e O P \u003d 100% - PAR P rov e d. Paraugs - O P s r. R R S O P vesels apmēram g o paraugs × 100%,

kur Opsr. RRS - vidējā RRP vērtība (aprēķināta pēc vairākām RRP RR vērtībām).

Pētītie paraugi jāuzskata par "agrīniem": ja OP kritums ir\u003e 40%.

Izpētītie paraugi jāuzskata par "novēlotiem": ja OD kritums ir ≤40%.

OD samazināšanās% aprēķināšanas piemērs, atšķaidot paraugu, parādīts 1. tabulā.

Rezultātu uzskaitei un apstrādei ir ērti izmantot programmu Excel. Šīs lietojumprogrammas izmantošana ļaus automātiski veikt aprēķinus. Pārbaudes rezultātu apstrādes programma atrodas komplektā pievienotajā diskā, vai arī to var atrast uzņēmuma vietnē.

Testa izstrādē un novērtēšanā tika izmantoti serokonversijas paneļu (BBI, Inc., Zeptometrix, ASV) un HIV pozitīvu asins seruma (plazmas) paraugu paraugi ar noteiktiem iespējamiem infekcijas datumiem. Serokonversijas paneļu noteiktā varbūtība pareizi noteikt inficēšanās ilgumu ar 1. tipa cilvēka imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, ir 100% (dati sniegti 2. tabulā), pamatojoties uz seruma paraugiem no personām ar nosacīti noteiktu infekcijas periodu (n \u003d 129) ir 94% (3., 4. tabula; dati sniegti daļēji).

Tests "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" novērtēja iespēju pētīt asins seruma (plazmas) paraugus, kas satur dažādu apakštipu antivielas pret HIV-1, tostarp pret HIV-1 O grupas antivielām: atsauces panelis QCS 42-28-327 -03R (GISK) (A, B, C apakštips) (izņemot paraugu Nr. 24, kas satur antivielas pret HIV-2), 1. starptautiskais anti-HIV atsauces panelis (NIBSC kods: 02/210) (A, B apakštips, C, E) (izņemot paraugu Nr. 5, kas satur antivielas pret HIV-2), asins seruma (plazmas) paraugus, kas satur antivielas pret HIV-1 O grupu (Nr. 1342, K00175, K00259; BioMex). Rezultāti norāda uz iespēju pārbaudīt asins seruma (plazmas) paraugus, kas satur antivielas pret HIV-1, kas pieder dažādiem apakštipiem, tostarp tiem, kas saistīti ar HIV-1 O grupu, "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" testā.

Reaģentu komplekta “DS-ELISA-HIV-AT-SROK” specifika tika noteikta, pārbaudot donoru asins seruma paraugus (n \u003d 352), kas ELISA rezultātā uzrādīja negatīvu rezultātu. Konkrētība bija 100%. Turklāt tika pārbaudīti 255 asins seruma paraugi (negatīvi ELISA):

■ 167 asins seruma paraugi no grūtniecēm un pacientiem ar infekcijas slimībām;

■ 128 asins seruma paraugi no pacientiem ar dažādām neinfekcijas slimībām.

Konkrētība bija 100%.

Iegūtie dati parāda izstrādātās testa sistēmas "DS-ELISA-HIV-AT-DROK" augsto efektivitāti, nosakot iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, serumā (plazmā). cilvēka asinis.

1. Ar enzīmiem saistīta imūnsorbējošā sistēma cilvēka asins serumā (plazmā), lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, raksturīga ar to, ka tā ietver imūnsorbentu, kura pamatā ir vīrusa antigēni cilvēka 1. tipa imūndeficīts (HIV-1 un HIV-1 O grupas env), parauga atšķaidīšanas šķīdums (PPC) un noteikšanas reaģenti, kas ir konjugāti, hromogēns / substrāts.

2. Metode, lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar 1. tipa cilvēka imūndeficīta vīrusu (HIV-1), ieskaitot HIV-1 O grupu, cilvēka asiņu serumā (plazmā), pamatojoties uz atšķirīgu antivielu saturu atkarībā no infekcijas ilguma, ieskaitot testa parauga atdalīšanu. divās daļās un vienas no tām atšķaidīšana; pacienta asins seruma parauga abu (dabisko un atšķaidīto) daļu izpēte, izmantojot enzīma imūnanalīzes sistēmu, kas aprakstīta 1. pretenzijā; vietējo un atšķaidīto paraugu un PPC optiskā blīvuma (OD) noteikšana; OD RRS vidējās vērtības aprēķins; atšķaidītā parauga OD krituma procentuālās daļas aprēķināšana attiecībā pret neatšķaidīto ar formulu
% D e n i e O P \u003d 100% - PAR P rov e d. Paraugs - O P s r. R R S O P vesels apmēram g o paraugs × 100%,
tajā pašā laikā iespējamais infekcijas periods tiek uzskatīts par "agru", ja OP kritums ir\u003e 40%, un par "vēlu" - ja OP kritums ir ≤40%.

Līdzīgi patenti:

Izgudrojums attiecas uz datora metodi, izmantojot bioķīmiskās datu bāzes jaunu proteīnu savienojumu izstrādē. Projektēšanu veic operators, izmantojot īpaši uzrakstītu PROTCOM programmu, kuras pamatā ir olbaltumvielu pentafragmentu datu bāzes izmantošana.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas jomu un attiecas uz metodi O-glikozilēto olbaltumvielu noteikšanai šūnu homogenātu sastāvā, kas sagatavota proteomiskai un fosfoproteomiskai analīzei.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un imunoloģijas jomu. Tiek ierosināta monoklonāla antiviela un tās antigēnu saistošās daļas, kas specifiski saista makrofāgu migrācijas inhibīcijas faktora (MIF) C-termināli vai centrālo reģionu.

Izgudrojums attiecas uz molekulārās bioloģijas un medicīniskās diagnostikas jomu. Tiek piedāvāta metode olbaltumvielu noteikšanai amiloidālā stāvoklī, kurā tiek iegūts rauga kultūras vai zīdītāju audu lizāta paraugs, paraugam tiek pievienots jonu mazgāšanas līdzeklis, olbaltumvielas amiloidā veidā tiek koncentrētas uz celulozes acetāta membrānas un tās tiek noteiktas, izmantojot aptamerus, to konjugātus vai olbaltumvielu amiloido formai specifiskās antivielas. ...

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģiju, jo īpaši ar enzīmu saistītu imūnsorbentu testiem, un tā ir metode, kā iegūt iebūvētus kontroles paraugus ar enzīmu saistītajiem imūnsorbcijas testiem, lai noteiktu TORCH grupas infekcijas.

Izgudrojums attiecas uz medicīnu, proti, uz ginekoloģiju, un to var izmantot individuālai zāļu izvēlei, kas satur laktobacillu probiotiskos celmus efektīvai intravaginālajai terapijai.

VIELA: izgudrojumu grupa attiecas uz reaģenta sensora-analizatora sastāvu, kas pielāgots, lai palīdzētu noteikt analizējamās vielas koncentrāciju šķidrā paraugā, ar metodēm analīta koncentrācijas noteikšanai šķidrā paraugā un uz metodi analizatora sensora reaģenta sastāva uzklāšanai uz pamatnes ar sietspiedi.

Izgudrojumu grupa attiecas uz veterinārmedicīnu un attiecas uz palīgkompozīcijām, kas satur Quil A vai tā attīrītas frakcijas, holesterīna, dimetildioktadecilamonija bromīda (DDA), poliakrilskābes (CARBOPOL) un CpG un / vai N- (2-deoksi-2-L-leicilamino) kombināciju. β-D-glikopiranozil) -N-oktadecildodekanamīda acetāts; metodes šādu adjuvantu kompozīciju pagatavošanai un šādu palīgvielu kompozīciju izmantošana imunogēnās un vakcīnu kompozīcijās ar dažādiem antigēniem.

Šis izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. 1. Antivielu un to funkcionālo fragmentu, kas vērsti pret audzēja virsmu, kas izteikts uz audzēja virsmas, izturīgs vismaz pret vienu pretaudzēju savienojumu, izveidošanas metode, kuras pamatā ir zemes homogenāta un / vai suspensijas un / vai šūnu lizāta, kas atvasināts no šāda veida, imunizācija. audzēji. Tiek apsvērta arī izgudrojuma metodes piemērošana monoklonālo antivielu un to funkcionālo fragmentu, ar šo metodi iegūto monoklonālo antivielu, to kodējošo nukleīnskābju, ekspresijas vektora, saimnieka šūnas un antivielu ražošanas metodes, izmantojot tās, kā arī hibridomu, kas spēj izdalīt šīs antivielas, ražošanai, antivielu un to funkcionālo fragmentu izmantošana zāļu, pretaudzēju sastāva ražošanai un lietošana kā zāles. Šis izgudrojums var turpināt izmantot rezistentu audzēju terapijā. 16 n. un 26 lpp. f-kristāli, 7 dwg, 4 ex, 6 tbl.

Izgudrojums attiecas uz biotehnoloģijas un medicīnas jomu. Imūnās pārbaudes sistēma, lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu, ieskaitot HIV-1 O grupu, cilvēka serumā. Pārbaudes sistēmā ietilpst imūnsorbents, kura pamatā ir 1. tipa cilvēka imūndeficīta vīrusa antigēni, šķīdums paraugu atšķaidīšanai un reaģentu noteikšanai. Izgudrojums attiecas arī uz metodi, lai noteiktu iespējamo inficēšanās laiku ar cilvēka 1. tipa imūndeficīta vīrusu, ieskaitot HIV-1 O grupu, cilvēka serumā, pārbaudot pacienta asins serumu, izmantojot aprakstīto ar enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu. Izgudrojums ļauj ātri un viegli noteikt iespējamo HIV infekcijas laiku. 2 n.p. f-kristāli, 4 tab., 2 eks.

Cena: pēc pieprasījuma

Norādot daudzumu, jūs varat pievienot produktu grozam

A.P. Rbyadin, T.I. ULANOVA
SIA "Pētniecības un ražošanas asociācija" Diagnostic Systems ",

Ņižņijnovgoroda
Imunofermenta TESTA SISTĒMAS "DS-ELISA-HBeAg" un "DS-ELISA-anti-HBe" SPECIFISKAI DIAGNOSTIKAI UN AKŪTĀS UN Hroniskā B HEPATĪTA IZPLATĪŠANAS PAREDZĒŠANAI
B hepatīts ir vīrusu infekcijas slimība, kurai raksturīga smaga

iekaisuma aknu bojājumi. Apmēram 1% nāves gadījumu tiek novēroti

akūts slimības periods, 4-10% gadījumu notiek transformācija hroniskā formā

process ar iespējamu turpmākas aknu cirozes veidošanos un primāro

hepatokarcinoma.

Neskatoties uz akūta B hepatīta sastopamības samazināšanos, turpina veidoties epidemioloģiski bīstama pacientu grupa, kurai pirmo reizi diagnosticēts hronisks vīrusu hepatīts, kā arī patogēna nesēju grupa. Paliek nelabvēlīga prognoze, kas saistīta ar augstu B hepatīta sastopamību reproduktīvā vecuma iedzīvotāju vidū, kā arī pusaudžu vidū.

Tāpēc tagad īpaši aktuāli ir B hepatīta ārstēšanas, profilakses un diagnostikas jautājumi.Šobrīd šīs infekcijas marķieru noteikšanai tiek plaši izmantotas enzīmu imūnanalīzes metodes. Svarīgākie HBV seroloģiskie marķieri ir e-antigēns (HBeAg) un antivielas pret e-antigēnu (anti-HBe). HBeAg ir saistīts ar augstu asins infekciju, kas norāda uz B hepatīta vīrusa (HBV) aktīvu replikāciju. Tika konstatēts, ka augsti HBeAg titri atbilst augstai DNS polimerāzes aktivitātei un vienmēr tiek kombinēti ar pilnīgu dāņu daļiņu noteikšanu. Kad serums, kas satur HBeAg, nonāk veselīga cilvēka asinīs, infekcijas risks ir par daudzām pakāpēm lielāks nekā pēc serokonversijas sākuma.

Akūtā B hepatīta gadījumā HBeAg asinīs tiek konstatēts infekcijas procesa agrīnajā stadijā jau pie pirmajām slimības klīniskajām izpausmēm, par nedēļu atpaliekot no HBsAg parādīšanās. Akūtam B hepatītam (HBV) cikliskā kursā raksturīga īslaicīga HBeAg cirkulācija. Drīz, ikteriskā perioda 2-3 nedēļās, parādās anti-HBe, kas ļauj prognozēt labvēlīgu slimības iznākumu.

Anti-HBe asinīs cirkulē 2-5 gadus, retāk vairākus mēnešus.

HBeAg-anti-HBe serokonversijas sākums iezīmē dramatisku aktivitātes samazināšanos

infekcijas process. HBeAg noteikšana pacientu asinīs pēc 2 mēnešu slimības norāda uz patoloģiskā procesa hroniskumu. Šajā gadījumā anti-HBe var veidoties daudzus gadus pēc HBcAg antivielu parādīšanās vai to vispār nevar atklāt.

Anti-HBe parādīšanās var būt nelabvēlīga prognostiskā vērtība

akūts HBV periods smagās formās, kas atbilst mutācijai pirmskodolu zonā ar

hBV "e-" celma veidošanās.

Nolūks šis darbs bija ļoti jutīga un specifiska izstrāde

ar fermentiem saistītās imūnsorbcijas analīzes sistēmas HBeAg un anti-HBe noteikšanai un to galveno īpašību novērtēšanai.

Materiāli un metodes.

1. Imūnanalīzes testa sistēma "DS-ELISA-HBeAg". Pašreizējā testa sākums

ir poliklonālas kazas antivielas pret rekombinanto HBeAg, ko ražo NPO Diagnostic Systems, Ņižņijnovgoroda, sorbētas uz cietās fāzes, un konjugāts, kas ir poliklonālas kazas antivielas pret rekombinantās HBeAg, marķētas ar mārrutku peroksidāzi, ko ražo NPO Diagnostic Systems, Nizhnygor. Analīzes shēma ir vienas pakāpes "sviestmaize", kopējais reakcijas laiks ir 1,5 stundas. Seruma paraugu analizē neatšķaidītā veidā.

2. Imūnanalīzes testa sistēma "DS-ELISA-anti-HBe". Pārbaudes pamatā ir

rekombinants HBeAg (AHBV 102), ko ražo NPO Diagnostic Systems,

Ņižņijnovgoroda, sorbēta uz cietās fāzes un anti-IgG konjugāta ar mārrutku peroksidāzi, ražots Sorbent Service, Maskava. Reakcija notiek divos posmos. Testa serumu ar atšķaidījumu 1/10 pievieno imobilizētam antigēnam, un pēc inkubācijas un nesaistīto komponentu noņemšanas, izmantojot peles monoklonālās antivielas pret cilvēka IgG, kas marķētas ar mārrutku peroksidāzi, tiek identificēti specifiski imūnkompleksi.

3. Izstrādāto testa sistēmu novērtēšanai tika izmantoti 2178 seruma paraugi

asinis. No tiem 480 serumu paraugi no veseliem donoriem. 1680 paraugi pārstāv

ir asins seruma paraugi, kas satur dažādus B hepatīta vīrusa marķierus.

Laika gaitā no pacientiem ar akūta vīrusu B hepatīta klīnisko diagnozi tika iegūti astoņpadsmit paraugi. Visus paraugus provizoriski pārbaudīja HBsAg, HBeAg, anti-HBe un anti-HBc klātbūtnei, izmantojot pārbaudes sistēmas, kuras ražoja NPO Diagnostic Systems, Nižnij Novgorod: ELISA-HBsAg / m, DS-ELISA-HBeAg, DS-ELISA-anti-HBe ”,“ ELISA-anti-HBs ”.

4. Izstrādāto testa sistēmu salīdzinošais novērtējums tika veikts, izmantojot

komerciālas zāles "Monolisa HBe", ko ražo BIO-RAD, Francija;

Rezultāti un diskusija.NPO “Diagnostic Systems” ir izstrādājusi 2 jaunus diagnostikas komplektus: “DS-ELISA-HBeAg” un “DS-ELISA-anti-HBe”. Pārbaudes sistēma "DS-ELISA-HBeAg" ir paredzēta B hepatīta vīrusa e-antigēna noteikšanai cilvēka asiņu serumā (plazmā), izmantojot enzīmu imūnsorbcijas testu, un to var izmantot specifiskai diagnostikai, nosakot infekcijas procesa aktivitāti, paredzot B hepatīta smagumu un iznākumu.

Pārbaudes sistēma "DS-ELISA-anti-HBe" ir paredzēta, lai noteiktu IgG antivielas pret B hepatīta vīrusa e-antigēnu cilvēka asiņu serumā (plazmā), un to var

izmanto, lai prognozētu infekcijas procesa gaitu un kontrolētu B hepatīta terapiju.

Lai izpētītu jauno testu specifiku, tika novērtēts sadalījums

asins seruma paraugu optiskais blīvums (OD), kas satur un nesatur

HBeAg vai anti-HBe. Mēs izmantojām asins seruma paraugus no veseliem donoriem un asins seruma paraugus, kas savākti dažādiem B hepatīta vīrusa marķieriem

asins pārliešanas stacijas. Pētījuma rezultāti parādīja ievērojamu abu populāciju nodalīšanu. Seruma paraugu bez HBeAg OD vērtības svārstījās no 0,011 līdz 0,111, un galvenā seruma paraugu virsotne, kas satur HBeAg, svārstījās no 2,186 līdz 3,186 (1.a attēls).

1.a att. Seruma paraugu OD sadalījums ar un bezHBeAg testa sistēmā "DS-IFA-HBeAg»
Maksimumu, kas atbilst serumu grupai ar zemu OD (0,3–0,6), iespējams, veido serumu paraugi, kas ņemti infekcijas procesa agrīnajos posmos.

Jau pacientu inkubācijas periodā HBsAg un HBeAg tiek regulāri reģistrēti asinīs, kas apstiprina viņu iespējamo epidemioloģisko bīstamību.

Seruma paraugu optiskā blīvuma diapazons, kas nesatur anti-HBe

bija diapazonā no 0,002 līdz 0,122, un seruma paraugu, kas satur anti-HBe, galvenā pīķa OD bija no 2,431 līdz 3,231 (1.b attēls).

Attēls: 1.b Seruma paraugu OD sadalījums ar anti-H un bez tāEsi, testa sistēmā "DS-ELISA-anti-HBeAg»
Tika pētītas anti-HBe pozitīvu paraugu OD izplatības pazīmes

serumi, kas satur ( n\u003d 78) un nesatur HBsAg ( n=56).


Attēls: 2.a HBe- pozitīvi seruma paraugi, kas saturHBsAg testa sistēmā "DS-ELISA-anti-HBe».

2.b att. OP anti izplatīšanas iezīmesHBe- pozitīvi seruma paraugi, kas nesatur HBsAg testa sistēmā "DS-ELISA-anti-HBe».
87% anti-HBe-pozitīvu seruma paraugu bez HBsAg optiskais blīvums svārstījās no 0,41 līdz 0,81 (2.b attēls). Tomēr tikai 14% anti-HBe pozitīvu seruma paraugu, kas satur HBsAg, bija OD šajā diapazonā (2.a attēls). Ir zināms, ka vēlīnā atveseļošanās fāzē ar negatīvu reaktivitāti pret HBsAg pakāpeniski notiek antivielu titru samazināšanās pret HBeAg (2.b attēls). Tāpēc ir iespējams, ka dominējošā anti-HBe-pozitīvo paraugu koncentrācija OD bija mazāka par 0,8.

Iegūtie dati norāda pozitīvo un

negatīvi seruma paraugi neatkarīgi no slimības stadijas. Testa sistēmu "DS-ELISA-HBeAg" un "DS-ELISA-antiHBe" jutīguma un specifiskuma pētījums tika veikts salīdzinājumā ar testu "Monolisa HBe" ("BIORAD", Francija) (1. tabula).

1. tabula
Jutīguma un specifiskuma salīdzinošās īpašības

testa sistēmas DS-ELISA-HBeAg un DS-ELISA-antiHB

Dati, kas parādīti 1. tabulā, parāda rezultātu 100% piekrišanu.

Ir zināms, ka kombinētai HBeAg un anti-HBe indikācijai, it īpaši to kvantitatīvajam novērtējumam, ir papildu prognostiskā vērtība. Anti-HBe titra straujais pieaugums raksturo aktīvo humorālo imūnreakciju un praktiski novērš hroniskas attīstības draudus. Mēs esam analizējuši HBeAg / anti-HBe satura izmaiņas asins seruma paraugos no pacientiem ar akūta vīrusu B hepatīta klīnisko diagnozi (2. tabula).

2. tabula
HBeAg / anti-HBe serokonversijas dinamika pacientiem ar HBV

* no uzņemšanas slimnīcā
Visus seruma paraugus pārbaudīja attiecībā uz seroloģiskajiem marķieriem

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Novērošanas periods svārstījās no 13 līdz 38 dienām. Pacientiem Nr. 1, Nr. 2 un Nr. 6 anti-HBe tika konstatēti jau uz HBeAg titra samazināšanās fona. Pacientiem Nr. 3 un Nr. 4 anti-HBe parādījās pēc HBeAg izzušanas no asins seruma attiecīgi 21. un 8. dienā. HBeAg noteikšanas analīze pacienta Nr. 5 asins serumā pēc uzņemšanas slimnīcā parādīja negatīvu rezultātu. Tajā pašā laikā pārbaudes pirmajā dienā tika reģistrēta pāreja uz anti-HBe.

Visiem subjektiem bija tendence palielināties antivielu titram pret HBeAg

serums, kas ļauj prognozēt labvēlīgu klīnisko dinamiku

oGV izpausmes un ātra atveseļošanās.

Jaunu testa sistēmu izpēte ir parādījusi to augsto diagnostisko ticamību. DS-ELISA-HBeAg un DS-ELISA-anti-HBe salīdzināšanas rezultāti parādīja 100% saderību ar Monolisa HBe testu.

Pētot pacientu ar B hepatītu seruma paraugus dinamikā, testos

apstiprināta augsta jutība un specifiskums.

Pārbaudes paraugu un konjugāta īsais inkubācijas laiks (1 stunda) ļauj noteikt pareizo taktiku terapeitisko pasākumu veikšanai pēc iespējas īsākā laikā. Izveidotās testa sistēmas ir viegli uzstādītas, ekonomiskas (HBeAg noteikšanai nepieciešami 50 µl seruma un anti-HBe noteikšanai 10 µl seruma). Testu augstās kvalitātes īpašības ļauj tos veiksmīgi izmantot, lai prognozētu infekciozā procesa gaitu un uzraudzītu B hepatīta terapiju.
LITERATŪRA

1.Maijers K.P. Hepatīts un hepatīta sekas / K.P. Maijers - M., GEOTAR, Medicīna, 1999.- C.720

2.Oniščenko G.G. Vīrusu hepatīta izplatība kā drauds valsts drošībai / G.G. Oniščenko, L.A. Dementjeva // Mikrobioloģijas žurnāls. –2003.-№ 4.- С.93-99.

3.Sorinson S.N. Vīrusu hepatīts / S. N. Sorinsons. - Sanktpēterburga, Teza, 1997. - 306 lpp.

4. Baumeister M. B hepatīta vīruss un antigēniem specifiski epitopi un komerciālo anti-HBe imūnpārbaužu ierobežojumi / M. Baumeisters // Medicīniskās virusoloģijas žurnāls - 2000.-N 60. - P.256-263.

5.Kane M Globālā programma B hepatīta infekcijas kontrolei / M. Kane // Vakcīna. 1995. N131 (1. pieg.) P.47-6. Šuniči sēdējapar. B hepatīta vīrusa celmi ar mutācijām pamatprincipā pacientiem ar nomācošu hepatītu / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Iekšējās medicīnas žurnāli. - 1995.- N122.- P.241-248.

7. Ou J.-H. B hepatīta vīrusa e antigēna molekulārā bioloģija. / J.-H. Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997. - Nr. 12 (Suppl.1) - 178.-187.lpp.

8.Tiollais P. B hepatīta vīruss. / P. Tiollais, C. Sourcel, A. Dejean // Daba. - 1985. - P.317, 489.-495
Publicēts: J. "Klīniskā laboratoriskā diagnostika" - 2005.-№6-С-34-37