Vrijednost krvnih grupa prema AVO sustavu. Antigeni krvni sustavi

13.08.2020

Analiza antitijela po ABO sustavu - opće kliničko istraživanje usmjereno na otkrivanje alfa- ili beta-izohemaglutinina u krvi - prirodna IgG antitijela na nedostajuće antigene A ili B. Određuje se u slučaju nespojivosti majke i ploda s antigenima ABO sustava. Otkrivanje antigrupnih protutijela u krvi trudnice neophodno je za dijagnozu međugrupnog sukoba i pravodobnu provedbu terapijskih mjera u cilju sprječavanja pobačaja, prijevremenog rođenja, hemolitičke bolesti fetusa (novorođenčeta). Krv se uzima iz vene. Metoda istraživanja - reakcija aglutinacije. Obično je rezultat (s malom vjerojatnošću međugrupnog sukoba) rezultat negativan. Spremnost rezultata analize jedan je radni dan.

Antitijela u ABO sustavu ili antigrupna antitijela su imunoglobulini koji se stvaraju kada se u krvi pojavi antigen koji je nepodudaran u grupnom odnosu. Krvna grupa ovisi o posebnim proteinima koji su prisutni na vanjskoj strani membrane eritrocita - aglutinogeni. U medicinskoj praksi određuju se aglutinogeni A, B i D. U ljudi s krvnom skupinom I, eritrociti bez proteina A i B, s grupom II - s proteinima tipa A, s III skupinom - s proteinima tipa B, s IV skupinom - s proteinima vrsta A i B. Prisutnost ili odsutnost aglutinogena D određuje pozitivan ili negativan Rh faktor. Protutijela protiv skupine stvaraju tijelo kada crvene krvne stanice s nepoznatim aglutinogenima A ili B. uđu u krvotok. Reakcija tih antitijela dovodi do uništenja stranih crvenih krvnih stanica.

Proizvodnja protutijela prema ABO sustavu moguća je transfuzijama krvi, kada se krv fetusa i majke miješa. Teoretski, grupna nespojivost krvi određuje se u sljedećim slučajevima: ako primatelj (majka) ima krvne grupe I ili III, a davalac (fetus) - II; ako primatelj (majka) ima krvnu skupinu I ili II, a davalac (fetus) ima III; ako primatelj (majka) ima krvnu grupu I, II ili III, a davalac (fetus) ima IV. U praksi se proizvodnja antigrupnih antitijela najčešće promatra kod žena s krvnom skupinom I, jer ne sadrži aglutinogene A i B, a ujedno je i najčešća. Imunokonflikt tijekom trudnoće može dovesti do eritroblastoze novorođenčeta, s transfuzijama krvi - do intravaskularne hemolize eritrocita. U riziku su primatelji nakon nekoliko transfuzija, kao i trudnice koje su podvrgnute transfuziji krvi, umjetnim i prirodnim prekidima, koje imaju djecu s hemolitičkom bolešću.

Za krvni test na antitijela koji koriste ABO sustav krv se uzima iz vene. Najčešća metoda istraživanja je reakcija aglutinacije korištenjem difuznog gela. Rezultati nalaze primjenu u akušerstvu i ginekologiji u planiranju i praćenju trudnoće, kao i u kirurgiji i medicini reanimacije tijekom transfuzije krvi.

indikacije

Krvni test na antitijela prema ABO sustavu indiciran je za žene tijekom trudnoće ako postoji vjerojatnost razvoja sukoba imunološke skupine. Pri određivanju rizika uzima se u obzir kombinacija roditeljskih krvnih grupa. Prisutnost antitijela u krvi najčešće se određuje u trudnica s grupom I, ako su se s oca na dijete prenijeli II, III ili IV. Također, kombinacije II majke + III ili IV očinske, III majke + II ili IV očinske su također vjerovatno sukobljene. Prilikom propisivanja analize uzimaju se u obzir i drugi faktori rizika: oštećenja propusnosti posteljice, trbušna trauma, invazivni dijagnostički postupci (na primjer, amniocenteza). U svim tim slučajevima moguće je da fetalni eritrociti uđu u majčinu krv, nakon čega slijedi proizvodnja antigrupnih protutijela. Klinički je nemoguće utvrditi prisutnost imunološkog sukoba ove vrste - žena ne osjeća nikakve promjene. Ali ako ne pratite titar antitijela, tada postoji rizik od razvoja hemolitičke bolesti kod djeteta, što se očituje edemom, žutom, anemijom, povećanom slezenom i jetrom, a u težim slučajevima, zastojem u razvoju.

Druga indikacija za ispitivanje krvi na antitijela prema ABO sustavu su komplikacije nakon transfuzije krvi. U grupnom sukobu često se razvija akutna intravaskularna hemoliza - reakcija uništenja crvenih krvnih stanica u ubrizganoj krvi. Manifestira se peckanjem na mjestu infuzije, groznicom, zimicom, bolovima u leđima i deblu i napadima panike. Prilikom praćenja trudnoće, odluku o provođenju analize donosi liječnik, uzimajući u obzir sveukupne rizične čimbenike za razvoj grupnih sukoba. Krvni test na antitijela koji koriste ABO sustav nije probirni test, za razliku od, primjerice, testa na antiteritrocitna antitijela. To je zbog činjenice da se imunološki sukob ove vrste razvija rijetko, a hemolitička bolest prolazi u blagom obliku i uglavnom se očituje žuticom novorođenčadi.

Priprema za analizu i uzorkovanje materijala

Materijal za ispitivanje antitijela po ABO sustavu je venska krv. Postupak prikupljanja obično se izvodi ujutro. Ne postoje posebni zahtjevi za pripremu, preporučljivo je darivati \u200b\u200bkrv 4-6 sati nakon jela. Posljednjih 30 minuta treba provesti u mirnom okruženju, bez fizičkog ili emocionalnog stresa. Krv se uzima iz kubitalne vene pomoću vakuumskog sustava bez antikoagulansa ili s koagulacijskim aktivatorom. Skladišteno na temperaturi od 2 do 8 ° C, u roku od 2-3 sata isporučuje se u laboratoriju.

Antitijela po ABO sustavu određuju se u krvi aglutinacijskom metodom. Postupak istraživanja sastoji se od nekoliko faza. Prvo se testni uzorak doda u mikroepruvete s filtracijskim gelom. Potom se nalaze neko vrijeme u inkubatoru, a zatim u centrifugi. Eritrociti koji su vezani za antigrupna antitijela veći su i stoga ne prolaze kroz gel, već ostaju na njegovoj površini. Kao rezultat centrifugiranja, slobodni eritrociti se talože na dno epruvete. Raspodjela eritrocita koristi se za procjenu prisutnosti antitijela u uzorku. Priprema rezultata istraživanja traje 1 dan.

Normalne vrijednosti

Antitijela na ABO sustav predstavljena su u dvije vrste - α i β. Prva se proizvode na aglutinogen A, a druga na aglutinogen B. Obje vrste protutijela mogu biti prirodne i imunološke, tj. Stečene kao rezultat senzibilizacije. Obično je titar prirodnih α-antitijela od 1: 8 do 1: 256, titar prirodnih β-antitijela je od 1: 8 do 1: 128. Imunska antigrupna antitijela se normalno ne detektiraju. Fiziološko smanjenje razine prirodnih antitijela može se otkriti kod djece i starijih osoba.

Povećanje vrijednosti

Razlog porasta vrijednosti analize protutijela prema ABO sustavu je osjetljivost organizma, uzrokovana unosom antigena koji je nespojiv na grupnoj osnovi. U tim slučajevima se povećavaju titri prirodnih protugrupnih protutijela, a ponekad se određuju i imunološka antigrupna antitijela punih i nepotpunih oblika. Najčešće se odstupanja ove prirode dijagnosticiraju u trudnica s krvnom skupinom I, budući da eritrociti nemaju aglutinogene ni tipa A ni tipa B, a učestalost skupine je 45%.

Smanjenje vrijednosti

Smanjenje vrijednosti analize protutijela prema ABO sustavu nema dijagnostičku vrijednost, neke patologije mogu postati njegovi uzroci, na primjer, agammaglobulinemija, Hodgkinova bolest, kronična limfocitna leukemija. U nedostatku izoimunizacije sa specifičnim čimbenicima, imunološka antigrupna antitijela su izostala, a prirodni titri su niski.

Liječenje odstupanja od norme

Krvni test na antitijela prema ABO sustavu ima najveću prognostičku vrijednost kod praćenja trudnoće kod žena s krvnom grupom I. Njeni rezultati omogućuju prepoznavanje stanja preosjetljivosti na grupne faktore i sprečavanje razvoja imunološkog sukoba koji vodi do eritroblastoze novorođenčeta. Ako se otkrije povišeni titar prirodnih antigrupnih antitijela, utvrde imunološka antitijela, tada je potrebno potražiti savjet kod opstetričara-ginekologa koji vodi trudnoću. Odluku o potrebi i taktikama terapije donosi specijalist pojedinačno.

Postupak određivanja krvnih grupa prema ABO sustavu sastoji se u otkrivanju antigena A i B u eritrocitima pomoću standardnih antitijela i upotrebom aglutinina u plazmi ili u serumu analizirane krvi sa standardnim eritrocitima. Tehnika je razvijena početkom 20. stoljeća i još uvijek se aktivno koristi u medicini. Određivanje antigena A i B provodi se zahvaljujući anti-A i anti-B toksiklonima.

Osnovni koncepti

Kod donatora se ne određuju samo antigeni u eritrocitima, već i aglutinini u serumu (plazmi) koristeći standardne eritrocite. Venska krv koristi se kao biomaterijal. Prije studije potrebno je odustati od masne hrane dan prije analize i ne pušiti pola sata prije uzimanja testa. Krvne grupe određuju se dva puta: najprije u medicinskom odjeljenju, gdje se materijal nabavlja, a zatim potvrđuju istraživanjima u laboratoriju.

Određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu glavni je test koji se koristi u transfuziologiji. Neke životinje također imaju sličan sustav krvnih grupa, poput čimpanza, gorila i bonoba.

Povijest otkrića

U znanosti postoji općeprihvaćeno mišljenje da je metodu određivanja krvnih grupa prema ABO sustavu prvi put otkrio Karl Landsteiner, austrijski znanstvenik, 1900. godine. Zatim je u svom radu opisao tri vrste antigena. Za to je trideset godina kasnije dobio Nobelovu nagradu za medicinu i fiziologiju. Zbog činjenice da ranije nisu postojale bliske veze između znanstvenika, kasnije je utvrđeno da je češki serolog Jan Jansky, bez obzira na istraživanja K. Landsteiner-a, prvo opisao četiri krvne grupe ljudi, ali njegovo istraživanje nije bilo poznato širokoj publici. Trenutno se radi o klasifikaciji koju je razvio Y. Yansky i koja se koristi u Rusiji i republikama bivšeg SSSR-a. W.L. Moss je u SAD-u stvorio slično djelo 1910. godine.

Metoda za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu pomoću taloklona

Krvna grupa treba biti određena u sobi s dobrim osvjetljenjem, poštujući temperaturni raspon od 15 do 25 stupnjeva Celzija, jer odstupanja od ove norme mogu utjecati na rezultate ispitivanja. Inicijali i prezime pacijenta napisani su na tanjuru ili tanjuru. S lijeva na desno ili u krug primjenjuju se standardne oznake skupina (O (I), A (II), B (III)). Ispod njih se kap po kap stavlja odgovarajući serum sa zasebnim pipetama za svaku vrstu. Tada im se dodaje pacijentova krv. Materijal za istraživanje uzima se iz ušne školjke ili prsta. To je potrebno tehnikom određivanja krvne grupe prema ABO sustavu.

Također je zakonito koristiti crvene krvne stanice u epruveti nakon što se formira ugrušak. Potrebno je da količina seruma bude deset puta veća od količine dodane krvi. Nakon toga, kapi se miješaju sa staklenim šipkama (zasebno za svaku). Za pet minuta, lagano protresući ploču, pazite na pojavu reakcije hemaglutinacije. Nalazi se u činjenici da se pojavljuju mali crveni kvržici, a zatim se spajaju u veće. U ovom trenutku, serum gotovo potpuno gubi boju.

Da biste eliminirali lažnu hemaglutinaciju jednostavnim lijepljenjem eritrocita, nakon tri minute morate dodati jednu kap fiziološke otopine i provjeriti postoji li aglutinacija. Ako je tako, onda je to istina. To je to, definicija krvnih grupa prema ABO sustavu sada je potpuna.

Tumačenje rezultata

Kao rezultat, mogu se primijetiti četiri reakcije:

ne dolazi do aglutinacije ni s jednim serumom - prva grupa je O (I);
reakcija se očitovala serumima I (ab) i III (a) - drugom skupinom A (II);
aglutinacija se događa sa serumima I (ab) i II (b) - trećom skupinom B (III);
ako se reakcija dogodi s tri seruma, potrebno je provesti dodatni postupak s reagentima grupe AB (IV), koji su standardni; ako u takvom padu nema aglutinacije, možemo pretpostaviti da je ovo četvrta krvna grupa AB (IV).

Brza metoda za Rh faktor

Metoda za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu uključuje istodobno otkrivanje Rh faktora (Rh).

Površina ploče prethodno je navlažena i na njoj su napisani "kontrolni serum" i "antirezusni serum". Potom se jedna ili dvije kapi potrebnih reagensa stave pod natpise i doda se analizirani materijal. Za to možete koristiti i krv iz prsta (u istoj količini kao i volumen seruma) ili eritrocite koji ostaju na dnu epruvete nakon pojave ugruška (polovica volumena seruma). Izbor materijala ne utječe na konačni rezultat. Potom se krv i serum miješaju sa suhom staklenom šipkom, nakon čega se očekuje reakcija pet minuta. Kako bi se uklonile pogrešne očitanja, izotonična otopina natrijevog klorida dodaje se nakon tri do četiri minute (samo nekoliko kapi). Određivanje krvne grupe prema ABO i Rh sustavu provodi se vrlo često.

Ako dođe do aglutinacije eritrocita u kapi u serumu, to ukazuje na pozitivnu Rh krv. Prema statistikama, Rh + se nalazi u 85% svjetske populacije. Njegova odsutnost omogućava nam da govorimo o Rh-negativnoj pripadnosti. Ako se aglutinacija pojavi u kontrolnom serumu, tada je postala neupotrebljiva. Nažalost, algoritam za određivanje krvne grupe ABO ne radi uvijek savršeno.

Koje se pogreške mogu učiniti ovom tehnikom?

Nepreciznosti u određivanju pripadnosti krvi određenoj skupini ovise o sljedećim razlozima:

Tehnička.
Biološka specifičnost proučavane krvi.
Neispravan karakter standardnih seruma i eritrocita.

Tehničke pogreške

Moguće pogreške u unakrsnom određivanju krvne grupe ABO sustava:

Specifične biološke pogreške

Pogreške povezane s biološkom specifičnošću analizirane krvi dijele se u dvije vrste.

Ovisno o karakteristikama eritrocita.
Pogreške zbog bioloških karakteristika seruma.

Razmotrimo svaku vrstu detaljnije.

Ovisno o karakteristikama eritrocita

Kasna aglutinacija zbog "slabih" oblika eritrocita i antigena. Da bi se izbjegle pogreške, potrebno je utvrditi krvnu skupinu davatelja i primatelja pomoću standardnih eritrocita. Agglutinogen A2 treba identificirati ponovnim testiranjem s drugim vrstama reagensa i ostatkom staklenog posuđa, povećavajući vrijeme registracije reakcije.
"Panaglutinacija" ("autoaglutinacija") - sposobnost krvi da pokaže istu reakciju nespecifične prirode sa svim serumima, uključujući i svoj vlastiti. Nakon pet minuta, ozbiljnost takve aglutinacije slabi, iako bi se trebala povećati. Slični slučajevi zabilježeni su kod bolesnika s rakom, opeklina i sl. Kao kontrola potrebno je procijeniti manifestaciju aglutinacije analiziranih eritrocita u standardnom serumu četvrte skupine i fiziološkoj otopini. Kada se utvrdi "panaglutinacija", krvna grupa rezultat trostrukog pranja eritrocita. Ako ne daje željeni rezultat, vrijedno je ponovno izvaditi uzorak krvi u epruvetu zagrijanu prije postupka i staviti uzorak u termo-spremnik kako bi se održala temperatura od 37 stupnjeva Celzijevih i više. Potom ga treba odvesti u laboratorij, gdje se održava gornja temperatura i zagrijavati fiziološku otopinu, ploču i reagense.

Ponekad su eritrociti krvi koji se analiziraju raspoređeni poput "stupova kovanica" i mogu se pogrešno smatrati aglutinate. Ako dodate dvije kapi izotonične otopine i nježno protresite tabletu, crvena krvna zrnca su u ispravnom položaju.
Nepotpuna ili mješovita aglutinacija koja se javlja kod bolesnika s drugom, trećom i četvrtom skupinom kao rezultat transplantacije koštane srži ili u prva tri mjeseca nakon transfuzije krvi 0 (I).

Biološki serum

Pogreške povezane s uporabom neispravnih standardnih eritrocita i seruma

Slabi serumi s prošlim trajanjem ili s titrom manjim od 1:32 mogu stvoriti slabu i kasnu aglutinaciju. Uporaba takvih reagensa je neprihvatljiva.

Primjena neupotrebljivih standardnih eritrocita ili seruma, pripremljenih u nesterilnim uvjetima i nedovoljno očuvana, dovodi do pojave "bakterijske" aglutinacije nespecifične prirode.

Postoje brojne popularne pretpostavke o krvnim skupinama ABO sustava, koje su se pojavile odmah nakon njegovog otkrića u raznim svjetskim kulturama. Tako je, na primjer, u 30-im godinama prošlog stoljeća u Japanu i nekim drugim zemljama popularnost stekla teorija koja povezuje krvne grupe s određenom vrstom ličnosti. Slične su teorije popularne i danas.

Također postoji mišljenje da je osoba s grupom A osjetljiva na teške mamurluke, O je povezan s dobrim zubima, a skupina A2 s najvišom razinom IQ-a. Ali takve tvrdnje nisu znanstveno dokazane.

Ispitali smo određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu pomoću standardnih seruma.

Taj je sustav glavni koji određuje kompatibilnost ili nekompatibilnost transfuzirane krvi. Sadrži dva genetski određena važna antigena: A i B - i dvije vrste protutijela na njih, aglutinine a i b. Kombinacije aglutinogena i aglutinina definiraju 4 skupine ABO sustava. Ovaj je sustav jedini u kojem plazma neimunskih ljudi ima prirodna antitijela na antigen koji nedostaje. Aglutinogen A je kod većine ljudi dobro izražen (ima veliku antigenu snagu): s anti-A (a) protutijelima daje izraženu reakciju aglutinacije eritrocita. U približno 12% pojedinaca u skupinama A (11) i AB (IV), antigen ima slaba antigena svojstva, označen je kao A2 antigen. Dakle, postoji skupina antigena A: A1 (jak) i slabiji A2, A3, A4, itd. Postojanje slabog antigena A treba imati na umu prilikom određivanja krvnih grupa, jer eritrociti s takvim antigenima mogu proizvesti samo kasnu i slabu aglutinaciju, što mogu dovesti do pogreške. Slabe vrste B antigena vrlo su rijetke. Antitijela na ABO sustav a (anti-A) i b (anti-B) normalno su svojstvo krvne plazme koja se ne mijenja kvalitativno tijekom života osobe, a b su protutijela koja su hladna. U većini slučajeva se ne nalaze u novorođenčadi i pojavljuju se tijekom prva tri mjeseca života ili čak godinu dana. Grupni aglutinini dostižu puni razvoj do 18. godine života, a u starosti im se titar (razina) smanjuje, što se također opaža u stanjima imunodeficijencije. Pored normalnih (prirodnih) skupina angitsl, a u nekim slučajevima postoje imunološka antitijela anti-A i anti-B. Najčešći razlog za to je trudnoća, u kojoj majka i fetus imaju različite krvne grupe, češće ako je majka skupine 1 (0), fetus 11 (A) ili W (B). Određivanje krvne grupe potrebno je za kompatibilnu transfuziju krvi. U ovom se slučaju potrebno pridržavati pravila: eritrociti davatelja ne bi trebali sadržavati antigen koji odgovara primaočevim antitijelima, tj. A i a, B i b, u protivnom će doći do masovnog uništavanja ubrizganih eritrocita pacijentovim antitijelima - hemolize koja može dovesti do smrti primatelja. Grupna antitijela davatelja mogu se zanemariti, jer su razrijeđena primateljevom plazmom. Stoga se krv skupine O (I), koja ne sadrži aglutinogene, može preliti osobama s bilo kojom krvnom skupinom. Pojedinci s krvnom grupom 0 (1) smatraju se „univerzalnim darivateljima“. Krv grupe A (P) može se preliti u primatelje skupine A (P) i grupe AB (IV) koji u plazmi nemaju aglutinine. Krvna skupina H (W) može se preliti u osobe sa skupinom H (W) i AB (IV).

Određivanje krvnih grupa ABO sustava provodi se sljedećim metodama.

I. Određivanje krvne grupe pomoću standardnih izohemaglutinirajućih seruma. Ovom metodom utvrđuje se prisutnost ili odsutnost aglutinogena u krvi i na temelju toga se donosi zaključak o pripadnosti grupi ispitivanoj krvi.

2. Križno određivanje krvne grupe, tj. Istodobnim korištenjem standardnih izohemaglutinirajućih seruma i standardnih eritrocita. U ovoj se metodi, kao i u prvoj, utvrđuje prisutnost ili odsutnost aglutinogena, a uz to se utvrđuje prisutnost ili odsutnost grupnih aglutinina koristeći standardne eritrocite.

3. Određivanje krvne grupe pomoću monoklonskih antitijela (COLICLONS).

GREŠKE U ODREĐIVANJU KRVNIH GRUPA

Tehničke pogreške. Kršenje navedenih pravila za određivanje krvnih grupa može dovesti do netočne procjene rezultata reakcije. Odstupanje od pravila može biti:

Upotreba podstandardnih standardnih seruma ili eritrocita (istekli, kontaminirani suhim serumima);

Miješanje uzoraka krvi;

Nepravilno postavljanje standardnih seruma ili fotocita u stalke;

Pogrešan redoslijed primjene standardnih reagensa na ploču;

Pogrešan omjer seruma i crvenih krvnih zrnaca (ne 10: 1);

Istraživanje na temperaturama nižim od 15 ° C (javlja se hladna aglutinacija) ili više od 25 ° C (aglutinacija usporava);

Nepridržavanje vremena potrebnog za reakciju (5 minuta);

Nemojte dodavati fiziološku otopinu, nakon čega slijedi ljuljanje ploče;

Ne koristiti kontrolnu reakciju sa serumom ABo (IV) skupinom;

Uporaba kontaminiranih ili mokrih pipeta, palica, tanjura.

U svim slučajevima nejasnog ili sumnjivog rezultata potrebno je ponovno odrediti krvnu skupinu unakrsnom metodom, koristeći standardne serume drugih serija.

Pogreške povezane s biološkim karakteristikama analizirane krvi.

Pogrešno određivanje skupine A2 i A2 B. Eritrociti sa slabim antigenom A s antiserumom stvaraju male, aglutinate koji polako izlaze. Reakcija se može uzeti u obzir kao negativna, to jest, skupina A2 je pogrešno registrirana kao O (1), a A2B - kao B (W). Rizik od takve pogreške posebno je visok u prisustvu tehničkih grešaka (omjer seruma i eritrocita je 10: 1, temperatura je iznad 25 ° C, rezultati se uzimaju u obzir prije 5 minuta).

Pogreške povezane s prisutnošću nespecifične aglutinbilnosti ispitivanih eritrocita. Taj se fenomen opaža kod bolesnika sa zloćudnim tumorima, leukemijom, sepsom, opeklinama, cirozom jetre, autoimunom hemolitičkom anemijom i uzrokovan je disproteinemijom. Kontrola s serumskom skupinom ABo (IV) otkriva prisutnost nespecifične aglutinacije. U tim je slučajevima potrebno ponovno odrediti pripadnost grupi pomoću metode cross. U kapljicama, gdje se opaža aglutinacija, može se dodati fiziološka fiziološka otopina zagrijana na 37 °. Ako je potrebno, eritrocite možete isprati toplom (37 °) fiziološkom otopinom i ponovno odrediti krvnu skupinu.

Pogreške povezane s prisutnošću ekstraaglutinina. U krvnom serumu osoba skupine A2 (P) i A2B (IV) otprilike u 1% slučajeva detektiraju se antitijela na antigen A1 - A1. To komplicira određivanje krvne grupe unakrsnom metodom, budući da serum takvih pojedinaca aglutinira standardne eritrocite A (P) skupine, tj. Manifestuje se serumom 0 (1) skupine.

Kod nekih bolesti dolazi do smanjenja aglutinabilnosti eritrocita, posebno skupine A (P).

U imunodeficijencijskim stanjima starije osobe imaju pad razine grupnih aglutinina.

U svim slučajevima dobivanja sumnjivog rezultata, određivanje krvne grupe treba ponoviti unakrsnom metodom primjenom seruma veće aktivnosti.

18.Rhesus antigeni. Grupe Rh sustava. Klinički značaj. Metode za određivanje rezusnih antigena i moguće pogreške.

Rh antigeni su drugi najvažniji u transfuzijskoj praksi nakon krvnih grupa ABO. Tijekom razdoblja aktivnog uvođenja transfuzije krvi u kliniku, broj post-transfuzijskih komplikacija nakon ponovljene transfuzije antigenom kompatibilne ABO krvi značajno se povećao. Rhesusov sustav uključuje šest antigena za označavanje koje se dvije nomenklature paralelno koriste: Wiener (Rh 0, rh ", rh", Hr 0, hr ", hr"); Fisher i Reis (D, C, E, d, c, e).

Rh 0 - D, rh "- C, rh" - E, Hr 0 - d, hr "- c, hr" - e.

Budući da je Rho (D) antigen najaktivniji u ovom sustavu, naziva se Rh faktorom. Ovisno o prisutnosti ili odsutnosti ovog faktora, ljudi se dijele na Rh-pozitivne (Rh +) i Rh-negativne (Rh-). Ova podjela prihvaćena je samo u odnosu na primatelje. Rh "(C) i rh" (E) antigeni su manje aktivni od Rho (D), ali protutijela se mogu stvoriti i kod ljudi koji ne sadrže C i E antigene u eritrocitima. Stoga su zahtjevi za eritrocitima Rh negativnih davatelja strožiji. Eritrociti ne bi trebali sadržavati samo D antigen, već i C i E. Antigene Hro (d), hr "(c), hr" (e) karakteriziraju slaba aktivnost, iako antitijela hr "(c) mogu uzrokovati izoimunološke sukobe. U 1-3% Rh-pozitivnih osoba u eritrocitima postoji slaba varijanta D-D antigena ", što određuje prisustvo male, upitne aglutinacije u određivanju Rh faktora. U tim je slučajevima Rh-pripadnost krvi primatelja ili trudnice označena kao Rh-negativna (Rh-), a Rh-pripadnost davaočeve krvi kao Rh-pozitivna (Rh +). Transfuzija krvi s Angen D u na Rh-negativne primatelje nije dopuštena. Rezusni antigeni nastaju u 8-10 tjedana embriogeneze, a njihova antigenost može čak premašiti aktivnost antigena u odraslih. Rh sustav, za razliku od ABO sustava, nema prirodna antitijela. Anti-Rhesus protutijela nastaju tek nakon imunizacije Rh-negativnog organizma kao rezultat transfuzije Rh-pozitivne krvi ili trudnoće s Rh-pozitivnim fetusom. U tijelu osjetljivih pojedinaca antitijela na Rh antigene postoje nekoliko godina, ponekad i tijekom života. U većini slučajeva, titar protu-rezusnih antitijela postupno opada, ali se opet naglo povećava kada Rh-pozitivna krv ponovno uđe u tijelo. Rh antitijela se razlikuju po specifičnosti (anti-D, an-III C, itd.) I serološkim svojstvima (potpuna i nepotpuna). Kompletna antitijela uzrokuju aglutinaciju eritrocita u fiziološkom mediju na sobnoj temperaturi. Za manifestaciju aglutinacije pod utjecajem nepotpunih antitijela potrebni su posebni uvjeti: povišena temperatura, koloidni medij (želatina, protein sirutke). Kompletna antitijela (IgM) sintetiziraju se na početku imunološkog odgovora i ubrzo nestaju iz krvi. Nepotpuna antitijela (IgG, IgA) pojavljuju se kasnije, sintetiziraju se dulje vrijeme i uzrokuju razvoj hemolitičke bolesti u novorođenčadi, jer prolaze kroz placentu i oštećuju stanice fetusa.

Određivanje Rh-pripadnosti krvi

Metoda za određivanje Rh faktora ovisi o obliku Rh antitijela u standardnom serumu i načinu njegove proizvodnje. Uz anti-rezusni serum nalazi se popratna uputa koja opisuje metodu kojoj je namijenjen ovaj niz dispenziranog seruma.

U svakoj studiji, radi provjere specifičnosti i aktivnosti antirezusnog seruma, potrebno je postaviti kontrolu. Za kontrolu se koriste standardni Rh-pozitivni eritrociti skupine 0 (1) ili iste skupine kao i testna krv te standardni Rh-negativni eritrociti nužno iste skupine kao i krv za ispitivanje.

Pri određivanju pripadnosti Rh dvjema serijama standardnih seruma u slučajevima kada se koriste različitim metodama, rezultat se uzima u obzir kao istinit ako se poklapa u obje serije ispitivanja nakon provjere kontrolnih uzoraka koji potvrđuju specifičnost i aktivnost svake serije anti-Rh seruma, tj. U nedostatku aglutinacija sa standardnim Rh-negativnim eritrocitima iste skupine i prisutnost aglutinacije sa standardnim Rh-pozitivnim eritrocitima iste skupine ili grupe 0 (1) i u kontrolnim uzorcima bez seruma (reagensa) anti-rezusa. Ako se opazi slaba ili sumnjiva reakcija prilikom određivanja Rh-adherencije, tada se krv ove osobe treba preispitati istim i drugim nizom anti-Rh seruma, pa je poželjno uključiti serum koji sadrži kompletna antitijela. Ako istovremeno svi nizovi seruma koji sadrže nepotpuna antitijela također daju slabu ili sumnjivu reakciju, a s potpunim antitijelima reakcija je negativna, to znači da eritrociti sadrže slabu vrstu rezusnog antigena, takozvani D u faktor. U tim je slučajevima Rh-pripadnost krvi pacijenta ili trudnice označena kao Rh-negativna (Rh-), a Rh-pripadnost davaočeve krvi kao Rh-pozitivna (Rh +), čime se sprječava transfuzija njegove krvi u Rh-negativne primatelje.

Određivanje Rh faktora također se može provesti sljedećim metodama.

Određivanje Rh faktora Rh 0 (D) reakcijom kolutinacije pomoću želatine (u epruveti zagrijanoj na 46-48 ° C).

Određivanje Rh faktora Rho (D) reakcijom kolutinacije u serumu u zagrijanoj ravnini.

Određivanje Rh faktora Rh 0 (D) aglutinacijom u fiziološkom mediju u malim epruvetama. Reakcija aglutinacije u fiziološkom mediju pogodna je za rad samo s serumom koji sadrži kompletna Rh antitijela.

Određivanje Rh faktora Rh 0 (D) pomoću monoklonskih antitijela.

Određivanje Rh faktora Rho (D) pomoću neizravnog Coombsova testa.

19 Anemija. Klasifikacija i kratak opis. Etiologija i patogeneza anemija. Anemija (od grč. Anemija - krvnost) je velika skupina bolesti koju karakterizira smanjenje količine hemoglobina ili hemoglobina i eritrocita po jedinici volumena krvi. Anemije su različite u etiologiji, razvojnim mehanizmima, kliničkoj i hematološkoj slici, stoga postoji mnogo različitih klasifikacija, ali nisu dovoljno savršeni. LI Idelson je predložio radnu klasifikaciju anemija za kliničare: 1) akutne posthemoragijske anemije; 2) anemija nedostatka željeza; 3) anemije povezane s poremećenom sintezom ili iskorištavanjem porfirina (sideroblastični); 4) anemije povezane s poremećenom sintezom DNA, RNA (megaloblastična); 5) hemolitična anemija; 6) anemija povezana s inhibicijom proliferacije stanica koštane srži (hipoplastična, aplastična); 7) anemije povezane s nadomještanjem hematopoetske koštane srži tumorskim postupkom (metaplastično).

Anemija može biti ili neovisna bolest ili popratni simptom ili komplikacija nekih unutarnjih bolesti, zaraznih i onkoloških bolesti. Postoje multifaktorijalne anemije, tj. Mješovite geneze, na primjer: hemolitička anemija s nedostatkom željeza, aplastična anemija s hemolitičkom komponentom itd.

Ovisno o:

1) vrijednosti pokazatelja boje razlikuju anemije:

Normokromno (indeks boja 0,9-1,1);

Hipokromni (indeks boja manji od 0,85);

Hiperkromni (indeks boja veći od 1,15);

2) vrijednost prosječnog promjera eritrocita:

Normocitna kiselina (prosječni promjer eritrocita 7,2-7,5 mikrona)

Mikrocitna (prosječni promjer eritrocita je manji od 6,5 mikrona),

Makrocitni (prosječni promjer eritrocita je veći od 8,0 mikrona),

Megalocitna (prosječni promjer eritrocita je veći od 12 mikrona);

3) prosječni volumen eritrocita u femtolitrima (fl, 1 fl je 1 mikrona 3):

Normocitni (prosječni volumen eritrocita 87 ± 5 fl);

Mikrocitna (prosječni volumen eritrocita je manji od 80 fl);

Makrocitni (prosječni volumen eritrocita je veći od 95 fl);

4) nivo retikulocita u perifernoj krvi.

Regenerativni (broj retikulocita je 0,5-5%);

Hiper-regenerativni (broj retikulocita je više od 5%);

Hipo- i aregenerativni (broj retikulocita je smanjen ili ih nema, usprkos teškom tijeku anemije).

Broj retikulocita pokazatelj je regenerativne funkcije koštane srži u odnosu na eritropoezu.

Normokromne anemije uključuju akutne posthemoragične (u prvim danima nakon gubitka krvi), hipo- i aplastične, nesferocitne hemolitičke, autoimune hemolitičke, metaplastične (s leukemijom, mijelomom itd.), Kao i anemiju koja se razvija s endokrinim poremećajima (hipofunkcija), nadbubrežnu bolest bubrega, kronične infekcije.

Hipokromne anemije uključuju nedostatak željeza, syroblastične, neke mijelotoksične, hemolitičke (talasemija).

B12- (folna) -defekcijska, neke hemolitičke anemije (nasljedna mikrosferocitoza, ako mikrosferociti prevladavaju među eritrocitima u razmazu) hiperkromne su. Ponekad je anemija s manjkom vitamina B1 2 normokromna.

Normocitne uključuju akutne posthemoragične, aplastične, autoimune hemolitičke anemije itd.

Mikrocitne anemije uključuju nedostatak željeza, sideroblastične anemije, makrocitne - vigamin-B12- (folna) -denemična anemija itd.

Regenerativne uključuju posthemoragijske anemije; do hiperregenerativnih - hemolitičkih anemija, posebno nakon hemolitičke krize; do hipo- i areregenerativne - hipoplastične, aplastične anemije.

Koštana srž reagira na razvoj nedostatka željeza, hemolitičke anemije iritacijom, hiperplazijom crvenog klica. S hipoplastičnim anemijama primjećuje se progresivni pad eritropoeze do potpune iscrpljenosti.

20.Laboratorijska dijagnostika anemija zasićenih željezom i nezasićenih željezom. Anemija s nedostatkom željeza. Vrste nedostatka željeza. Laboratorijski testovi koji odražavaju nedostatak željeza u tijelu. Slika periferne krvi i koštane srži u IDA-i. Laboratorijska dijagnostika sideroblastične anemije. Metabolizam i uloga željeza u tijelu

Željezo je od velike važnosti za tijelo, ono je dio enzima hemoglobina, mioglobina i dišnog sustava. Distribuira se između osnovnih sredstava.

Hemoglobinski fond. Željezo hemoglobina čini 60-65% ukupnog željeza u tijelu.

Rezervni fond. Ovo je željezo feritina i hemosiderina koji se talože u jetri, slezini, koštanoj srži, mišićima. Ono čini 30-40% razine željeza u tijelu. Ferritin je u vodi topljiv kompleks obogaćenog željeza i apoferritinskog proteina, koji sadrži 20% željeza. Predstavlja labilni udio rezervnog zaliha željeza. Ako je potrebno, lako se koristi za potrebe eritropoeze. Hemosiderin je protein netopljiv u vodi, koji je po sastavu blizu feritina, ali sadrži više željeza - 25-30%. To je stabilan, čvrsto fiksiran udio tjelesnih zaliha željeza.

Transportni fond predstavljen je željezom vezanom za transportni protein transferrin. Sadrži 1% sadržaja željeza u tijelu.

Fond tkiva predstavljen je enzimima koji sadrže željezo (citohromi, peroksidaza itd.), Mioglobinom. Ono čini 1% sadržaja željeza u tijelu.

Ukupni sadržaj željeza u tijelu odraslih je 4-5 g. Unosi se u tijelo prehranom. Sadrži se u proizvodima životinjskog i biljnog podrijetla (meso, posebno govedina, jetra, jaja, mahunarke, jabuke, suhe marelice itd.). Željezo se puno bolje apsorbira iz životinjskih proizvoda, nego iz biljne hrane, jer se ono nalazi u njima u obliku hema. Dakle, 20-25% apsorbira se iz mesa, 11% iz ribe, 3-5% željeza koje se nalazi u biljnim proizvodima. Apsorbinska kiselina, organske kiseline (limunska, jabučna, itd.) Potiče apsorpciju željeza, inhibira apsorpciju tanina i visoki udio masti u prehrani. Apsorpcija željeza iz hrane je ograničena. Tijekom dana se apsorbira 2-2,5 mg željeza, za kratko vrijeme nakon jakog krvarenja može se apsorbirati do 3 mg željeza. Glavna količina željeza apsorbira se u dvanaesniku i u početnom dijelu jejunuma. Male količine željeza mogu se apsorbirati u svim dijelovima tankog crijeva.

Apsorpcija željeza događa se u dva stupnja: 1) crijevna sluznica zahvaća željezo opskrbljeno prehranom; 2) željezo iz crijevne sluznice prelazi u krv, nanosi se na transferrin i dostavlja na mjesta uporabe i u odlagalište. Transferrin također prenosi željezo iz svojih sredstava i stanica sustava fagocitnih mononuklera u kojima dolazi do uništavanja eritrocita, do koštane srži, gdje se djelomično koristi za sintezu hemoglobina, a dijelom se taloži u obliku zaliha željeza, kao i na druga mjesta gdje se željezo skladišti. Obično se 1/3 transferina veže na željezo. Naziva se vezanim transferinom ili serumskim željezom. Sadržaj željeza u serumu kod muškaraca i žena normalno je 13-30 i 12-25 µmol / l. Dio transferrina koji nije vezan za željezo naziva se slobodnim transferrinom ili nezasićenim, latentnim kapacitetom vezivanja željeza u serumu. Maksimalna količina željeza koju transferrin može spojiti prije zasićenja naziva se ukupnim kapacitetom vezivanja željeza u serumu (obično 30-85 µmol / L). Razlika između TIBC-a i serumskog željeza odražava latentnu sposobnost vezanja željeza, a omjer željeza u serumu i TIBC-a, izražen kao postotak, odražava postotak zasićenosti transferina željezom (norma 16-50%). Da biste prosudili količinu željeza i količinu organizma:

Ispitivanje razine feritina u serumu radioimunim metodama;

Desferal test. Desferal (desferoksamin) je kelator koji se nakon unošenja u tijelo selektivno veže na rezerve željeza, tj. Feritinsko željezo i izlučuje ga mokraćom. Pacijentu se jedanput intramuskularno ubrizga 500 mg desferala, dnevno se skuplja urin i određuje sadržaj željeza. Nakon primjene desferala, od 0,8 do 1,2 mg željeza normalno se izlučuje u urinu, dok se u bolesnika s anemijom nedostatka željeza ili u prisutnosti latentnog nedostatka željeza količina željeza izlučivog urinom naglo smanjuje;

Računajući u punktatu koštane srži broj sideroblasta, a u perifernoj krvi - siderocite. Sideroblasti su normoblasti, tj. Nukleirane stanice crvenog niza, u citoplazmi kojih su otkrivene plave granule željeznih rezervi - feritina. Normalno, 20-40% normoblasta su sideroblasti. Siderociti su eritrociti u kojima se nalaze granit feritina. U normalnoj perifernoj krvi: do 1% siderocita. Feritinske granule u sideroblastima i siderocitima otkrivaju se posebnim bojenjem pruskom plavom bojom.

Tijelo karakteriziraju fiziološki gubici željeza s urinom, izmetom, žuči, eksfoliranim stanicama crijevne sluznice, znojem, prilikom rezanja kose i noktiju. Žene gube željezo s mjesečnicom.

Razvoju anemije nedostatka željeza prethodi latentni (latentni) nedostatak željeza. Pacijenti razvijaju pritužbe i kliničke znakove karakteristične za piemiju nedostatka željeza, ali manje izraženu (slabost, umjerena blijeda koža i vidljive sluznice, glavobolja, palpitacije, često perverzija okusa i mirisa, suha koža, lomljivi nokti itd.). Ispitivanjem se još ne otkrivaju promjene u sadržaju hemoglobina, eritrocita i drugih pokazatelja periferne krvi. No otkriveni su poremećaji u metabolizmu željeza: smanjuje se serumsko željezo, povećava se ukupni i latentni kapacitet vezanja željeza u serumu, smanjuje se postotak zasićenja transferinom i smanjuje se razina rezervi željeza. Ovo je sideropenija bez anemije. Latentni nedostatak željeza može se razviti u bilo kojoj dobi, posebno kod žena, adolescenata i djece. Ako se latentni nedostatak željeza ne nadoknađuje, već produbljuje, anemija sa nedostatkom željeza se miješa.

Opće informacije o studiji

Krvna grupa ABO je sustav koji odražava prisutnost ili odsutnost antigena na površini eritrocita i antitijela u krvnoj plazmi. ABO (čita se kao "a-ba-zero") najčešći je sistem krvnih grupa u Rusiji.

Eritrociti na svojoj površini nose signalne molekule - antigene - aglutinogene. Dva glavna antigena ugrađena u molekulu eritrocita su A i B. Krvne grupe određuju se na osnovu prisutnosti ili odsutnosti tih antigena. Krv ljudi koji imaju antigen A na svojim eritrocitima pripada drugoj skupini - A (II), krv onih koji imaju antigen B na svojim eritrocitima pripada trećoj skupini - B (III). Ako su i antigeni A i B prisutni na eritrocitima, to je četvrta skupina - AB (IV). Također se događa da nijedan od ovih antigena nije otkriven u krvi na eritrocitima - tada je ovo prva grupa - O (I).

Tijelo obično proizvodi antitijela protiv onih antigena (A ili B) koji nisu na eritrocitima - to su aglutinini u krvnoj plazmi. To jest, kod osoba s drugom krvnom skupinom - A (II) - antigeni A su prisutni na eritrocitima, a antitijela na antigene B sadržavat će se u plazmi - označena su kao anti-B (beta-aglutinin). Budući da isti antigeni (aglutinogeni) na površini eritrocita i aglutinina u plazmi (A i alfa, B i beta) reagiraju jedni s drugima i dovode do "lijepljenja" eritrocita, oni se ne mogu sadržavati u krvi jedne osobe.

Otkriće sustava grupe ABO omogućilo je razumijevanje zašto su transfuzije krvi ponekad uspješne, a ponekad i teške komplikacije. Formuliran je koncept kompatibilnosti krvnih grupa. Na primjer, ako se osobi s drugom krvnom grupom - A (II), koja sadrži antitijela na antigen B, prelije treća krvna grupa - B (III), doći će do reakcije između antigena i antitijela, što će dovesti do adhezije i uništenja crvenih krvnih zrnaca i može imati ozbiljne posljedice do smrti. Stoga krvne grupe tijekom transfuzije moraju biti kompatibilne.

Krvna grupa određena je prisutnošću ili odsutnošću adhezije eritrocita pomoću seruma koji sadrže standardne antigene i antitijela.

U transfuzijskim centrima vreće krvi ili komponente krvi od davatelja imaju oznaku "O (I)", "A (II)", "B (III)" ili "AB (IV)" kako bi vam pomogli da brzo pronađete krv prave skupine kad je potrebna.

Za što se koristi istraživanje?

Da biste saznali koja se krv može sigurno dati pacijentu. Izuzetno je važno osigurati da li je darovana krv kompatibilna s krvlju primatelja - osobe kojoj će se preliti. Ako krv davatelja ili njegove komponente sadrže antitijela na antigene sadržane u primateljevim eritrocitima, tada se može razviti teška reakcija transfuzije, uzrokovana uništavanjem eritrocita u vaskularnom dnu.

Kada se planira studija?

Prije transfuzije krvi - i onima kojima je potrebna i davaocima.

Transfuzija krvi i njezinih komponenti najčešće se traži u sljedećim situacijama:

- teška anemija
- krvarenje koje se javlja tijekom ili nakon operacije
- teške ozljede
- ogroman gubitak krvi bilo kojeg podrijetla,
- karcinom i nuspojave kemoterapije,
- poremećaji zgrušavanja krvi, posebno hemofilija.
Prije operacije.

OPĆE ODREDBE

Sustav krvne grupe ABO sastoji se od dva agglutinogena skupine, A i B, i dva odgovarajuća aglutinina u plazmi, alfa (anti-A) i beta (anti-B). Različite kombinacije ovih antigena i antitijela tvore četiri krvne grupe: grupa 0 (1) - oba antigena su odsutna; grupa A (II) - na eritrocitima je prisutan samo antigen A; grupa B (III) - na eritrocitima je prisutan samo antigen B; skupina AB (IV) - antigeni A i B prisutni su na eritrocitima.

Jedinstvenost ABO sustava leži u činjenici da u plazmi neimuniziranih ljudi postoje prirodna antitijela na antigen koji nije prisutan na eritrocitima: kod osoba iz skupine 0 (1) - antitijela na A i B; u osoba skupine A (II) - antitijela protiv B; kod osoba iz skupine B (III) - anti-A-antitijela; osobe iz skupine AB (IV) nemaju antitijela na antigene ABO sustava.

U sljedećem tekstu anti-A i anti-B protutijela će se nazvati anti-A i anti-B.

Određivanje krvne grupe ABO provodi se identificiranjem specifičnih antigena i antitijela (dvostruka ili unakrsna reakcija). Anti-A i anti-B otkrivaju se u krvnom serumu primjenom standardnih eritrocita A (II) i B (III). Prisutnost ili odsutnost antigena A i B na eritrocitima se utvrđuje primjenom monoklonskih ili poliklonalnih antitijela (standardni hemaglutinirajući serum) odgovarajuće specifičnosti.

Određivanje krvne grupe provodi se dva puta: primarno istraživanje - u medicinskom odjelu (tim za prikupljanje krvi); potvrdno istraživanje - u laboratorijskom odjelu. Algoritam za provođenje imunohematoloških laboratorijskih ispitivanja tijekom transfuzije krvi prikazan je na Sl. 18.1.

Rezultat određivanja krvne skupine bilježi se u gornjem desnom kutu lica lista medicinske anamneze ili u evidenciji darivatelja (karticu) s datumom i potpisuje liječnik koji je odredio.

Na sjeverozapadu Rusije raspodjela krvnih grupa ABO sustava u populaciji je sljedeća: skupina 0 (I) - 35%; skupina A (II) - 35-40%; grupa B (III) - 15-20%; grupa AB (IV) - 5-10%.

Treba napomenuti da postoje različite vrste (slabe varijante) i antigena A (u većoj mjeri) i antigena B. Najčešći su tipovi antigena A - A 1 i A2. Prevalencija antigena A 1 kod pojedinaca iz skupina A (II) i AB (IV) je 80%, a antigena A2 - oko 20%. Uzorci krvi s A2 mogu sadržavati antitijela protiv A-1 koja djeluju u interakciji sa standardnim eritrocitima grupe A (II). Prisutnost anti-A1 otkriva se unakrsnim određivanjem krvnih skupina i testiranjem na pojedinačnu kompatibilnost.

Za diferencirano određivanje varijanti antigena A (A1 i A2) potrebno je koristiti specifične reagense (fitohemaglutinine ili monoklonska antitijela anti-A1. Bolesnike skupine A2 (II) i A2B (IV) treba preliti s krvnim komponentama skupine A, koje sadrže eritrocite 2 (II) i A 2 B (IV) Transfuzije ispranih eritrocita također se mogu preporučiti: 0 (I) - za bolesnike s krvnom skupinom A 2 (II); 0 (I) i B (III) - za bolesnike s krvnom skupinom A 2 B (II).

Tablica 18.4. Rezultati određivanja ABO krvne grupe
Rezultati istraživanja						Grupna pripadnost ispitivanoj krvi
eritrociti s reagensom			serum (plazma) sa standardnim eritrocitima
anti-AB	anti-A	anti-B	0 (I)	A (II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (I)
+	+	-	-	-	+	A (II)
+	-	+	-	+	-	B (III)
+	+	+	-	-	-	AB (IV)
oznake: + - prisutnost aglutinacije, - - odsutnost aglutinacije

Određivanje pripadnosti krvnoj grupi prema ABO sustavu

Krvne grupe su određene standardnim serumima (jednostavna reakcija) i standardnim eritrocitima (dvostruka ili unakrsna reakcija).

Krvna grupa jednostavnom reakcijom određuje se nužno pomoću dvije serije standardnih izohemaglutinirajućih seruma.

Napredak u određivanju [pokazati] .
Određivanje krvne skupine vrši se pri dobroj rasvjeti i temperaturi od + 15 do + 25 ° C na tabletama. Na lijevoj strani tableta napišite 0 (1), na sredini - A (II), na desnoj - B (III). Na sredini gornjeg ruba tablete bilježi se prezime darivatelja ili broj krvi koja se ispituje. Koristite aktivne standardne serume triju skupina (O, A, B) sa titrom od najmanje 1:32, dvije serije. Serumi se stavljaju u posebne police u dva reda. Obilježena pipeta odgovara svakom serumu. Za dodatnu kontrolu koristi se serum grupe AB (IV).
Jedna - dvije kapi standardnog seruma nanose se na ploču u dva reda: serum grupe 0 (1) - lijevo, serum grupe A (II) - u sredini, serum grupe B (III) - s desne strane.
Kapi krvi iz prsta ili epruvete nanose se pipetom ili staklenom šipkom blizu svake kapi seruma i pomiješaju se sa šipkom. Količina krvi trebala bi biti 8-10 puta manja od količine seruma. Nakon miješanja ploču ili tabletu lagano protresete ručno kako bi se olakšala brža i preciznija aglutinacija crvenih krvnih stanica. Kako započne aglutinacija, ali ne ranije od 3 minute kasnije, kapljicama seruma s eritrocitima dodaje se jedna kap 0,9% -tne otopine natrijevog klorida, gdje je došlo do aglutinacije, i promatranje je nastavljeno dok ne prođe 5 minuta. Nakon 5 minuta, pročitajte reakciju u svjetlu.
Ako je aglutinacija nejasna, doda se jedna kap 0,9% -tne otopine natrijevog klorida u smjesu seruma i krvi, nakon čega se donosi zaključak o pripadnosti grupi (tablica 18.4).
Rezultati reakcije [pokazati] .
1. Odsutnost aglutinacije u sve tri kapi ukazuje da u ispitivanoj krvi nema aglutinogena, odnosno da krv pripada skupini 0 (I).
2. Početak aglutinacije u kapi sa serumom 0 (I) i B (III) ukazuje da u krvi postoji aglutinogen A, odnosno da krv pripada skupini A (II).
3. Prisutnost aglutinacije u kapi s serumima skupina 0 (I) i A (II) ukazuje da ispitna krv sadrži aglutinogen B, odnosno krv grupe B (III).
4. Aglutinacija u sve tri kapi ukazuje na prisutnost aglutinogena A i B u ispitivanoj krvi, odnosno krv pripada skupini AB (IV). Međutim, u ovom slučaju, s obzirom da je aglutinacija sa svim serumima moguća zbog nespecifične reakcije, potrebno je na ploču ili tanjur nanijeti dvije ili tri kapi standardnog seruma grupe AB (IV) i dodati im jednu kap ispitne krvi. Serum i krv se miješaju i rezultat reakcije promatra se 5 minuta.
  Ako aglutinacija nije nastupila, tada se ispitivana krv odnosi u skupinu AB (IV). Ako se aglutinacija pojavi u serumu grupe AB (IV), tada reakcija nije nespecifična. U slučaju slabe aglutinacije i u svim sumnjivim slučajevima, krv se ponovno provjerava standardnim serumima drugih serija.

Određivanje dvostruke reakcije krvne grupe ABO
(prema standardnim serumima i standardnim eritrocitima)

Standardni eritrociti su 10-20% suspenzija svježih prirodnih eritrocita (ili ispitnih stanica ispranih iz konzervansa) skupine 0 (I), A (II) i B (III) u 0,9% -tnoj otopini natrijevog klorida ili u otopini citrat-fiziološke otopine. Nativni standardni eritrociti mogu se koristiti 2-3 dana ako se čuvaju u izotoničnoj fiziološkoj otopini na + 4 ° C. Konzervirani standardni eritrociti se čuvaju na + 4 ° C 2 mjeseca i isperu iz otopine konzervansa prije upotrebe.

Ampule ili bočice sa standardnim serumima i standardnim eritrocitima postavljaju se u posebne police s odgovarajućim oznakama. Za rad s tipičnim reagensima koriste se suhe čiste pipete, odvojene za svaki reagens. Za pranje staklenih (plastičnih) šipki i pipeta pripremaju se čaše s 0,9% otopinom natrijevog klorida.

Da biste odredili grupu, uzmite 3-5 ml krvi u epruvetu bez stabilizatora. Krv bi se trebala taložiti 1,5-2 sata pri temperaturi od + 15-25 ° C.

Napredak u određivanju [pokazati] .
Na ploču se nanose dvije kapi (0,1 ml) standardnih seruma grupe 0 (I), A (II), B (III) iz dvije serije. Prema tome, svaka skupina seruma ima po jedan mali kap (0,01 ml) standardnih eritrocita skupine 0 (I), A (II), B (III). Jednoj kapi testne krvi dodaje se standardnom serumu, a dvije kapi testnog seruma dodaju se standardnim eritrocitima. Količina krvi trebala bi biti 8-10 puta manja od količine seruma. Kapi se pomiješaju sa staklenom šipkom i, pritiskajući tabletu u rukama tijekom 5 minuta, prati se napad aglutinacije. Ako je aglutinacija nejasna, doda se jedna kap 0,9% -tne otopine natrijevog klorida (0,1 ml) mješavini seruma i krvi, nakon čega se donosi zaključak o pripadnosti grupi (tablica 18.4).
Procjena rezultata određivanja krvne grupe ABO sustava [pokazati] .
1. Prisutnost aglutinacije sa standardnim eritrocitima A i B te odsutnost aglutinacije u tri standardna seruma iz dvije serije ukazuje da testni serum sadrži i aglutinine, alfa i beta, a test eritrociti ne sadrže aglutinogene, odnosno da krv pripada skupini 0 (I) ...
2. Prisutnost aglutinacije sa standardnim serumima grupe 0 (I), B (III) i sa standardnim eritrocitima grupe B (III) ukazuje da ispitivani eritrociti sadrže aglutinogen A, a testni serum sadrži aglutinin beta. Stoga krv pripada skupini A (II).
3. Prisutnost aglutinacije sa standardnim serumima skupina 0 (I), A (II) i sa standardnim eritrocitima grupe A (II) ukazuje da ispitivani eritrociti sadrže aglutinogen B, a testni serum sadrži aglutinin alfa. Prema tome, krv pripada skupini B (III).
4. Prisutnost aglutinacije sa svim standardnim serumima i odsutnost aglutinacije sa svim standardnim eritrocitima ukazuje da su oba aglutinina prisutna u ispitivanim eritrocitima, odnosno da krv pripada skupini AB (IV).

Određivanje pripadnosti krvnoj grupi
primjenom anti-A i anti-B toksiklona

Anti-A i anti-B tsolikloni (monoklonska antitijela na antigene A i B) dizajnirani su za određivanje krvne grupe ljudskog ABO sustava umjesto standardnih izohemaglutinirajućih seruma. Za svako određivanje krvne grupe koristi se jedna serija anti-A i B-reagensa.

Napredak u određivanju [pokazati] .
Jedna velika kap anti-A i anti-B toksiklona (0,1 ml) nanosi se na ploču (ploču) pod odgovarajućim natpisima: "Anti-A" ili "Anti-B". Stavite pored jedne male kapi testne krvi (omjer reagensa u krvi - 1:10), zatim se reagens i krv pomiješaju i tijek reakcije prati se laganim tresenjem tablete ili pločice.
Aglutinacija s anti-A i anti-B toksiklonima obično se javlja u prvih 5-10 s. Promatranje treba provesti 2,5 minute, zbog mogućnosti kasnijeg početka aglutinacije eritrocitima koji sadrže slabe sorte antigena A ili B.
Procjena rezultata reakcije aglutinacije anti-A i anti-B toksiklonima prikazana je u tablici. 18.4, koji također uključuje rezultate određivanja aglutinina u serumu davalaca pomoću standardnih eritrocita.

Ako postoji sumnja na spontanu aglutinaciju kod osoba s krvnom skupinom AB (IV), provodi se kontrolna studija s 0,9% -tnom otopinom natrijevog klorida. Reakcija bi trebala biti negativna.

Anti-A (ružičasti) i anti-B (plavi) cikloni dostupni su i u nativnom i u liofiliziranom obliku u ampulama od 20, 50, 100 i 200 doza s otapalom pričvršćenim na svaku ampulu, 2, 5, 10 , 20 ml, respektivno.

Dodatna kontrola ispravnosti određivanja ABO krvne grupe s anti-A i anti-B reagentima je anti-AB monoklonski reagens ("Hematolog", Moskva). Preporučljivo je koristiti anti-AB reagens paralelno s imunološkim poliklonskim serumima i monoklonskim reagensima. Kao rezultat reakcije sa anti-AB reagentom razvija se aglutinacija eritrocita skupina A (II), B (III) i AB (IV); eritrociti grupe 0 (I) nemaju aglutinaciju.

GREŠKE U ODREĐIVANJU GRUPNIH PRIBORA

Pogreške u određivanju krvnih grupa mogu ovisiti o tri razloga:

tehnički;
inferiornost standardnih seruma i standardnih eritrocita;
biološke karakteristike proučavane krvi.

Pogreške iz tehničkih razloga uključuju:

a) pogrešan raspored seruma na tanjuru;
b) pogrešni kvantitativni omjeri seruma i eritrocita;
c) upotrebu nedovoljno čistih tableta i drugih predmeta koji dolaze u kontakt s krvlju. Za svaki serum mora postojati posebna pipeta; za ispiranje pipeta treba koristiti samo 0,9% otopine natrijevog klorida;
d) neispravno snimanje testne krvi;
e) nepoštivanje vremena određenog za reakciju aglutinacije; žurno, kad se reakcija uzme u obzir prije isteka 5 minuta, aglutinacija se ne može dogoditi ako u krvi koja se proučava postoji slab aglutinogen; ako je reakcija prekomjerno izložena duže od 5 minuta, kapljice se mogu osušiti s rubova, simulirajući aglutinaciju, što će također dovesti do pogrešnog zaključka;
f) odsutnost aglutinacije zbog visoke (iznad 25 ° C) temperature okoline. Da biste izbjegli ovu pogrešku, za rad u vrućim klimama preporučljivo je koristiti posebno pripremljenu sirutku; za određivanje krvnih grupa na tanjuru ili plastičnoj ladici čija je vanjska površina uronjena u hladnu vodu.
g) nepravilna centrifugacija: nedovoljno centrifugiranje može dovesti do lažno negativnog rezultata, a prekomjerno centrifugiranje može dovesti do lažno pozitivnog rezultata.

Pogreške zbog uporabe neispravnih standardnih seruma i standardnih eritrocita:

a) slabi standardni serumi s titrom manjim od 1:32 ili s istekom roka mogu uzrokovati kasnu i slabu aglutinaciju;
b) upotreba neupotrebljivih standardnih seruma ili eritrocita, koji su pripremljeni nesterilni i nedovoljno konzervirani, dovodi do pojave nespecifične "bakterijske" aglutinacije.

Pogreške ovisno o biološkim karakteristikama analizirane krvi:

Pogreške ovisno o biološkim karakteristikama ispitivanih eritrocita:

a) kasna i slaba aglutinacija objašnjava se "slabim" oblicima antigena, eritrocita, češće - prisutnošću slabog aglutinogena A2 u skupinama A i AB. Istovremeno, u slučaju određivanja krvne grupe bez ispitivanja seruma na prisutnost aglutinina (jednostavna reakcija), mogu se pojaviti pogreške zbog kojih je krv skupine A 2 B definirana kao grupa B (III), a krv A2 - kao skupina 0 (I). Stoga, da bi se izbjegle pogreške, određivanje krvne skupine davatelja i primatelja mora se provesti standardnim eritrocitima (dvostruka ili unakrsna reakcija). Da bi se identificirao aglutinogen A2, preporuča se ponoviti ispitivanje s drugim vrstama (šaržama) reagensa, koristeći različite laboratorijske staklene posude, s povećanjem vremena registracije reakcije.
Specifični reagensi za razjašnjavanje krvne grupe u prisutnosti slabih inačica antigena A (A1, A2, A3) metodom reakcije izravne aglutinacije su anti-A sl tsoliclon i anti-A reagens).
b) "panaglutinacija" ili "autoaglutinacija", tj. sposobnost krvi da daje istu nespecifičnu aglutinaciju sa svim serumima, pa čak i sa svojim vlastitim. Intenzitet takve reakcije slabi nakon 5 minuta, dok se istinska aglutinacija povećava. Najčešće se nalazi kod hematoloških, onkoloških bolesnika, opečenih bolesnika itd. Za kontrolu se preporučuje procjena da li se aglutinacija ispitivanih eritrocita događa u standardnom serumu grupe AB (IV) i fiziološkoj fiziološkoj otopini.
Krvna grupa u "panagglutinaciji" može se odrediti nakon ispiranja eritrocita tri puta. Da bi se uklonila nespecifična aglutinacija, ploča se stavlja u termostat na + 37 ° C na 5 minuta, nakon čega nespecifična aglutinacija nestaje, ali prava ostaje. Preporučuje se određivanje ponoviti primjenom monoklonskih antitijela, postavljanjem Coombsova testa.
U slučaju da ispiranje eritrocita ne daje željeni rezultat, potrebno je ponovno uzeti uzorak krvi u prethodno zagrijanu epruvetu, uzorak staviti u termo-spremnik za održavanje temperature od + 37 ° C i dostaviti ga u laboratorij na istraživanje. Određivanje krvne grupe mora se provesti na temperaturi od + 37 ° C, za koju se koriste prethodno zagrijani reagensi, fiziološka otopina i tableta.
c) eritrociti ispitivane krvi presavijeni su u "kovanice kovanica", što se tijekom makroskopije može pogrešno pretvoriti u aglutinate. Dodavanje 1-2 kapi izotonične otopine natrijevog klorida, nakon čega slijedi lagano ljuljanje tablete, obično uništava „novčiće novčića“.
d) mješovita ili nepotpuna aglutinacija: neki od eritrocita aglutiniraju, a neki ostaju slobodni. Primjećuje se kod bolesnika skupine A (II), B (III) i AB (IV) nakon transplantacije koštane srži ili tijekom prva tri mjeseca nakon transfuzije krvi grupe 0 (I). Heterogenost perifernih eritrocita jasno se potvrđuje testom DiaMed gelom.

Pogreške ovisno o biološkim karakteristikama ispitivanog seruma:

a) otkrivanje antitijela različite specifičnosti tijekom rutinskog testiranja rezultat je prethodne osjetljivosti. Prikladno je odrediti specifičnost antitijela i odabrati tipirane eritrocite bez antigena na koji je imunizacija otkrivena. Imunizirani primatelj mora pojedinačno odabrati kompatibilnu krv davatelja;
b) kod otkrivanja stvaranja "novčića" standardnih eritrocita u prisutnosti testiranog seruma, prikladno je potvrditi abnormalni rezultat korištenjem standardnih eritrocita grupe 0 (I). Da biste razlikovali „stupove novčića“ i prave aglutinate, dodajte 1-2 kapi izotonične otopine natrijevog klorida i protresite ploču, dok su „kovani novčići“ uništeni;
c) odsutnost anti-A - ili anti-B antitijela. Možda u novorođenčadi i bolesnika s supresijom humoralnog imuniteta;

ukupno stranica:

KNJIŽEVNOST [pokazati] .

Imunološki odabir davatelja i primatelja za transfuzije krvi, njegovih komponenata i transplantacija koštane srži / Comp. Shabalin V.N., Serova L.D., Bushmarina T.D. i drugi - Lenjingrad, 1979. - 29 str.
Kaleko SP, Serebryanaya NB, Ignatovich GP i dr. Alosenzibilizacija u terapiji hemokomponentima i optimizacija izbora histokompatibilnih parova primatelja-primatelja u vojnim bolnicama / Metoda. preporuke.- Sankt Peterburg, 1994.- 16 str.
Praktična transfuziologija / Ed. Kozinets G.I., Biryukova L.S., Gorbunova N.A. i sur. - Moskva: Triada-T, 1996. - 435 str.
Vodič za vojnu transfuziologiju / Ed. E. A. Nechaev. - Moskva, 1991. - 280 str.
Vodič za transfuzijsku medicinu / Ed. E. P. Svedentsova. - Kirov, 1999.- 716s.
Rumyantsev A.G., Agranenko V. A. Clinical transfusiology.- M .: GEOTAR MEDICINE, 1997.- 575 str.
Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Sigurna transfuzija krvi: Vodič za liječnike.- SPb .: Peter, 2000.- 320 str.
Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Serebryanaya N.B. Imunološka i infektivna sigurnost terapije hemokomponentima.- SPb .: Nauka, 1998.- 232 str.
Schiffman F.J. Patofiziologija krvi / Transl. s engleskog - M. - SPb .: Izdavačka kuća BINOM - Nevsky dialect, 2000. - 448 str.
Transfuzija krvi u kliničkoj medicini / Ed. P. L. Mollison, C. P. Engelfriet, M. Contreras.Oxford 1988 1233 str.

Izvor: Medicinska laboratorijska dijagnostika, programi i algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., St. Petersburg, Intermedica, 2001