Metodi di diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Regole per la diagnosi dell'infezione da HIV

Prodotto in molti modi diversi. Sembrerebbe che non ci sia niente di più facile che identificare questa malattia attraverso il prelievo di sangue. Ma non è così. La diagnosi dell'HIV può essere effettivamente rilevata in questo modo, ma ulteriori ricerche vengono condotte con metodi diversi. Dipende in gran parte da loro quale trattamento verrà prescritto al paziente e quali misure verranno prese successivamente. Tra i metodi più diffusi e altamente efficaci, è consuetudine distinguere l'analisi di screening e l'immun blotting. Ciascuno di essi dovrebbe essere considerato in modo più dettagliato.

Diagnostica dell'AIDS: analisi di screening

Nella fase iniziale della diagnosi dell'infezione da HIV viene utilizzato un test di screening o un metodo di test ELISA. Durante lo sviluppo di questo metodo in condizioni di laboratorio, le proteine \u200b\u200bdel virus sono state create artificialmente. Reagiscono in modo speciale agli anticorpi. Questi ultimi vengono prodotti nel corpo quando le cellule compaiono in esso, infettate da una terribile malattia. In questo caso, la diagnostica di laboratorio dell'HIV viene eseguita utilizzando enzimi artificiali. Interagendo con gli anticorpi, sono macchiati di un certo colore. Una striscia con un indicatore, dopo averla sporcata di sangue, viene posta sotto un apparecchio speciale con l'aiuto del quale è possibile determinare se una persona ha questa malattia o meno. I moderni metodi di diagnostica dell'HIV, incluso l'ELISA, consentono di determinare il fatto dell'infezione o della sua assenza con elevata precisione. Ma, come tutte le apparecchiature, l'apparato di screening ha un errore. Ecco perché, se necessario, l'analisi viene ripetuta dal paziente.

È importante sapere che il test ELISA è uno dei primi metodi per determinare la presenza di un virus dell'immunodeficienza nel corpo. L'infezione da HIV è una diagnosi che può essere rilevata solo poche settimane dopo l'infezione. Quando le cellule infette entrano nel flusso sanguigno, il sistema immunitario del corpo inizia a resistere attivamente. Vengono prodotti anticorpi, che vengono rilevati da test di laboratorio dopo due o tre settimane. La diagnosi precoce dell'infezione da HIV mediante un test ELISA consente la rilevazione di anticorpi contro il virus dell'immunodeficienza nel sangue umano. Questa è la sua principale differenza rispetto ad altri metodi moderni.

Vale la pena notare che in alcune persone gli anticorpi contro questa malattia iniziano a essere prodotti in un secondo momento. Possono essere necessarie dalle tre alle sei settimane dal momento dell'infezione all'inizio di questo processo. Questo è il motivo per cui gli esperti medici raccomandano test di screening da quattro a cinque settimane dopo il sesso non protetto o qualsiasi altro motivo per sospettare un'infezione accidentale.

I metodi ELISA per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV sono stati sviluppati da molto tempo. Oggi ci sono quattro generazioni di test. I più accurati ed efficaci sono quelli sviluppati per ultimi. La diagnostica di laboratorio dell'infezione da HIV e dell'AIDS utilizzando i test ELISA di terza e quarta generazione viene eseguita utilizzando proteine \u200b\u200be peptidi ricombinanti. La sensibilità di questi test agli anticorpi prodotti dall'organismo è del 92-93%. Stiamo parlando dei metodi di ricerca russi. Gli europei hanno imparato a fare questi test con una sensibilità del 99%.

I moderni metodi di diagnostica di laboratorio dell'infezione da HIV basati su ELISA vengono utilizzati non solo per rilevare la presenza di una malattia. Con l'aiuto dell'analisi di screening, è possibile monitorare la diffusione del virus dell'immunodeficienza, nonché raccogliere materiale di prova prima di prelevare il sangue dai donatori.

ELISA è un metodo standard per diagnosticare l'infezione da HIV: come si fa, perché dà un risultato falso?

La diagnosi di HIV e AIDS mediante ELISA è una procedura standard. Il sangue del paziente viene prelevato da una vena. Per l'analisi sono sufficienti cinque millilitri di materiale. Clinico la diagnosi di HIV di tipo 2 e 1 viene effettuata almeno otto ore dopo aver mangiato. I medici consigliano di farlo al mattino a stomaco vuoto. I risultati di uno studio completo sono noti dopo due o tre giorni. Lo screening rapido viene eseguito in meno tempo. Questo di solito richiede solo poche ore. Tuttavia, l'errore in questo caso aumenta. Una diagnosi esplicita di HIV è necessaria nei casi urgenti, ad esempio quando il paziente necessita di un intervento chirurgico urgente. Tale analisi viene necessariamente eseguita prima di interventi chirurgici non programmati, perché se un paziente ha un virus dell'immunodeficienza, i medici osservano maggiori misure di sicurezza. La diagnosi clinica dell'infezione da HIV in un breve periodo di tempo è necessaria anche nel caso in cui il sangue di un donatore debba essere prelevato rapidamente per salvare un altro paziente.

Ci sono momenti in cui a una persona è stato diagnosticato l'AIDS o l'HIV, ma di conseguenza non è stato confermato, o viceversa. Perché questo accade nel caso del test ELISA? Un risultato falso negativo può essere dovuto al fatto che il sangue non è stato adeguatamente preparato per la ricerca. A volte la ragione di ciò è l'esecuzione errata della sua recinzione. Un risultato falso negativo durante la verifica della diagnosi di infezione da HIV non è confermato anche nel caso in cui i materiali per lo studio siano stati prelevati troppo presto. Dopotutto, dopo l'infezione, dovrebbero essere trascorse almeno tre settimane. Ci sono casi in cui il risultato del rilevamento del virus dell'immunodeficienza è falso positivo. Ciò è dovuto allo stato generale dei sistemi immunitario e ormonale del corpo umano. Nella maggior parte dei casi, il paziente ha malattie che sono il risultato di un risultato falso positivo. Stiamo parlando di epatite alcolica, in cui il fegato produce enzimi speciali, che possono portare a una diagnosi errata di HIV. Anche la gravidanza e alcune malattie autoimmuni, insieme al mieloma multiplo, possono causare falsi positivi. Questo elenco potrebbe includere pazienti in dialisi e quelli che sono stati vaccinati poco prima della diagnosi differenziale di HIV.

Parlando di analisi di screening, è importante notare che questo metodo di ricerca richiede una conferma. I medici, prima di fare una diagnosi di HIV basata su di esso, assicurati di inviare un paziente per l'immunizzazione.

I principali metodi di diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV: immunizzazione

L'AIDS, la cui diagnosi e trattamento sono strettamente correlati, viene rilevato in diversi modi contemporaneamente. Come accennato in precedenza, un test ELISA non è sufficiente per determinare definitivamente la diagnosi. La diagnosi differenziale dell'infezione da HIV in questo caso è completata dall'immunizzazione. Nella medicina moderna, è chiamato il metodo di conferma finale per fare una diagnosi. Per la ricerca in questo caso vengono utilizzate proteine \u200b\u200bcontenute nel sangue del paziente. Sono separati in un gel speciale, dopo di che i lavoratori di laboratorio hanno l'opportunità di studiare la composizione molecolare del sangue.

La tempistica della diagnosi dell'HIV con questo metodo va da uno a tre giorni. Per la ricerca, il sangue viene prelevato dalla vena del soggetto, che viene posta su un tester con un gel. Il risultato, che è messo in discussione, può verificarsi durante la gravidanza, la presenza di processi oncologici, la tubercolosi. Se lo studio viene condotto in modo errato e se è stato eseguito troppo presto, può verificarsi una reazione falsa negativa al test. Dovrebbero trascorrere almeno tre settimane dal momento dell'infezione. Dopotutto, il tempo dopo il quale viene diagnosticato l'HIV dipende direttamente dallo stato di immunità.

Altri metodi per diagnosticare l'AIDS e l'HIV

La diagnostica radiologica per l'AIDS viene utilizzata, di regola, negli stadi terminali o secondari. Con il loro aiuto, è possibile stabilire i cambiamenti che si verificano nel corpo a causa di malattie secondarie o infezioni opportunistiche.

La diagnostica dell'HIV con biorisonanza, chiamata anche scansione non lineare, viene utilizzata principalmente nelle cliniche private per rilevare il virus dell'immunodeficienza. La medicina ufficiale considera questo metodo insufficientemente accurato ed efficace. Forse, il miglioramento della diagnostica non lineare in futuro consentirà di identificare questa terribile diagnosi già nel periodo di incubazione.

Diagnosi di infezione da HIV: metodo sierologico e sue caratteristiche

Questa è una tecnica relativamente nuova in cui i criteri di laboratorio per la diagnosi dell'infezione da HIV si basano sul principio antigene-anticorpo. Nel caso del virus dell'immunodeficienza, la ricerca di anticorpi contro il virus avviene nel corpo umano. Per questo, viene utilizzato un antigene derivato artificialmente, a cui devono rispondere gli anticorpi. Marcatori sierologici specifici dell'infezione da HIV causano cambiamenti specifici nella composizione del sangue. Va notato che questo metodo di ricerca è più efficace nella fase acuta, che termina con la sieroconversione. Segue un periodo di latenza asintomatico, durante il quale non è facile trovare l'antigene.

Diagnosi di riferimento dell'infezione da HIV: descrizione e caratteristiche

I valori di riferimento dell'HIV sono considerati i più accurati nell'identificazione di una diagnosi. Questo metodo di ricerca combina test ELISA e immunosoppressione. Il laboratorio diagnostico di riferimento dell'HIV consente la raccolta dei test e la loro successiva elaborazione in due modi contemporaneamente. Ciò consente di ottenere il risultato più accurato entro 24 ore. Un nuovo controllo dell'analisi ottenuta nel laboratorio di riferimento è necessario solo se i dati del test ELISA e dell'immun blot sono contraddittori. Questo è un evento abbastanza raro che si verifica più spesso nelle persone con le malattie concomitanti sopra descritte.

La diagnostica dell'HIV è uno dei compiti primari che devono affrontare i dipendenti del dispensario dermatovenerologico, nonché i dipendenti del policlinico.

La malattia è caratterizzata dai medici come molto insidiosa. È caratterizzato da un decorso cronico e non risponde al trattamento completo. È importante rilevarlo in modo tempestivo per assumere il controllo e prevenire la diffusione incontrollata. Quali sono le caratteristiche del virus dell'immunodeficienza umana e come può essere infettato, i pazienti sono spesso interessati.

Quali sono i modi per diagnosticare la malattia e quali segni suggeriscono un'infezione?

Oggi puoi sentire da tutto il mondo quanto sia pericolosa l'infezione da HIV. Tuttavia, pochi spiegano qual è questo pericolo. Di conseguenza, i pazienti dispongono di una serie incompleta di informazioni e, di conseguenza, non prendono sul serio la minaccia. Ma l'HIV è estremamente pericoloso. È classificata come una malattia virale lentamente progressiva incline a un decorso cronico. In questa patologia, il sistema immunitario è principalmente colpito.

I medici attirano l'attenzione dei pazienti sul fatto che la morte non si verifica a causa del virus dell'immunodeficienza stesso, in quanto tale.

Una persona muore per infezioni concomitanti, il corpo non è più in grado di fornire una protezione completa contro le quali. Inoltre, la causa della morte sono i tumori del cancro, che non sono in grado di combattere la ridotta immunità.

In effetti, il meccanismo attraverso il quale l'infezione da HIV colpisce il sistema immunitario è piuttosto complesso. Come notano i medici, i pazienti non hanno bisogno di capirlo a fondo. Basta sapere che la malattia può ridurre il livello di immunità a valori critici. Di conseguenza, il corpo non sarà in grado di difendersi da varie influenze esterne, che prima o poi porteranno alla morte.

Come si verifica l'infezione

È importante capire che l'infezione da HIV oggi è circondata da un'ampia varietà di miti.

I pazienti sono molto poco informati su quando possono essere infettati e quando la salute è fuori pericolo.

La prima cosa da ricordare è che l'HIV è molto fragile nel suo ambiente. Ciò significa che un microrganismo patogeno è in grado di vivere pienamente e per lungo tempo solo nel corpo umano. Non tollera il riscaldamento oltre i 50 gradi (muore all'istante). Inoltre incapace di resistere ai processi di essiccazione. Non tutti i fluidi corporei contengono abbastanza virus da provocare l'infezione.

Il pericolo maggiore è rappresentato da:

• sangue;
• pre-eiaculato;
• sperma;
• scarico dalla vagina femminile;
• linfa;
• latte materno.

Se uno qualsiasi di questi liquidi entra in contatto con le mucose, in cui sono presenti microtraumi o con la pelle lesa, si verifica un'infezione.

È anche possibile se il fluido estraneo entra direttamente nel flusso sanguigno. La saliva e le lacrime, contrariamente alla credenza popolare, non sono una minaccia. A causa della natura del virus e del suo basso tasso di sopravvivenza, viene trasmesso in diversi modi:

• tratto genitale i.e. con rapporti sessuali non protetti, che inevitabilmente comportano il contatto di fluidi biologici e mucose del corpo sensibili al patogeno;
• via parenterale i.e. trasmissione del virus con il sangue durante la sua trasfusione o per l'uso di strumenti non sterili per scopi medici;
• percorso verticale i.e. di madre in figlio (oggi, se una donna assume la terapia antiretrovirale e rifiuta di allattare, la probabilità di infezione del bambino durante il parto è ridotta al minimo).

È importante capire che se sono necessari microtraumi o ferite aperte per l'infezione attraverso la pelle, allora per l'infezione attraverso la mucosa questa non è una condizione necessaria. La differenza è spiegata dal fatto che le mucose e la pelle del corpo umano hanno una struttura completamente diversa. Questa differenza deve essere presa in considerazione.

Quali sono i segni per sospettare l'HIV

Molti pazienti sono interessati alla domanda su quali segni sono solitamente sospettati di essere infettati dal virus dell'immunodeficienza umana.

• un aumento irragionevole della temperatura di tipo sistemico, che non può essere spiegato da nessun'altra infezione e che persiste a lungo, nonostante le misure adottate per il trattamento;
• un forte aumento delle dimensioni dei linfonodi (prima di tutto, i nodi nella zona inguinale soffrono, ma è anche possibile il loro coinvolgimento in tutto il corpo);

• una forte diminuzione del peso corporeo, che non può essere spiegata da diete, stress, interruzioni ormonali e altri motivi;
• reclami di disturbi delle feci che hanno seguito il paziente per molto tempo e non è possibile trovare il motivo per cui sono comparsi;
• una pronunciata tendenza alla transizione di eventuali malattie infettive in forme croniche e la natura dell'agente patogeno non ha molta importanza, sia le patologie batteriche che quelle virali sono croniche;
• si sviluppano malattie provocate da microflora condizionatamente patogena, che non rappresenta una minaccia per una persona la cui immunità è completamente funzionale (ad esempio, micoplasmosi, ureaplasmosi, candidosi, ecc.).

La clinica dell'infezione da HIV è molto aspecifica, come dicono i medici. Per questo motivo, spesso è difficile fare una diagnosi. Molti pazienti ignorano completamente i sintomi allarmanti, preferendo non cercare aiuto medico. Anche se la malattia influisce fortemente sul loro benessere generale.

È importante capire che l'infezione da HIV potrebbe non essere avvertita per molto tempo. E quando compaiono i primi segni, una persona potrebbe anche non associarli alla possibilità della sua infezione e tentare di essere curata a casa.

Metodi diagnostici

La diagnostica di laboratorio dell'HIV è stata sviluppata per molto tempo ed è stata utilizzata con successo per diagnosticare questa pericolosa malattia.

La malattia non può essere riconosciuta solo dai sintomi. Pertanto, la conferma della diagnosi basata su tecniche di laboratorio gioca spesso un ruolo decisivo.

Esistono vari metodi per diagnosticare l'HIV. In Russia, in primo luogo, la preferenza è data all'immun blotting e alle reazioni ELISA. Questi metodi sono spesso usati come metodi di screening, ad esempio, durante il controllo del personale medico.

Sistemi ELISA

Spesso i pazienti chiedono ai loro medici con quale metodo avviare una ricerca diagnostica se sospettano un'infezione da virus dell'immunodeficienza umana.

Qualsiasi medico competente dirà che la preferenza dovrebbe essere data al dosaggio immunoenzimatico. È questa tecnica la prima fase diagnostica in Russia.

Il principio di ELISA è semplice. In laboratorio, i medici hanno creato proteine \u200b\u200bspeciali. Sono in grado di rilevare e interagire con gli anticorpi prodotti dall'organismo in risposta al contatto con l'HIV. Quindi uno speciale enzima indicatore viene aggiunto al sistema, che cambia colore. Nella fase finale, il materiale viene elaborato utilizzando un apparecchio speciale e il medico riceve il risultato finale.

ELISA è molto popolare.

Innanzitutto per il fatto che si possono ottenere risultati anche se non sono trascorse più di poche settimane dall'introduzione dell'agente patogeno nell'organismo.

È importante capire che il dosaggio immunoenzimatico non rileva il virus stesso nel sangue, ma gli anticorpi ad esso.

In molte persone, possono iniziare a essere prodotti più tardi di due settimane dopo, il che potrebbe causare un risultato errato. Esistono diverse generazioni di test ELISA.

Le più moderne e di grande precisione sono quelle che appartengono alla 3a e 4a generazione. I medici notano che è meglio, se c'è una scelta, dare la preferenza ai reagenti europei, poiché la loro precisione raggiunge il 99%. Il tempo per ottenere i risultati ELISA è in media da 2 a 10 giorni.

Perché ELISA può essere falso

È importante comprendere che il dosaggio immunoenzimatico può fornire risultati sia falsi positivi che falsi negativi. Sebbene il rischio di un tale sviluppo di eventi sia estremamente ridotto.

Il paziente può ottenere risultati falsi negativi se l'analisi è stata presentata troppo presto e gli anticorpi non hanno ancora avuto il tempo di formarsi nel corpo.

Per escludere una tale reazione, si raccomanda ai pazienti di essere testati più volte a intervalli diversi.

In alcune condizioni si riscontra un test falso positivo. Ad esempio, pazienti con:

• epatite alcolica;
• mielomi in gran numero;
• alcune malattie autoimmuni;
• donne durante la gravidanza, ecc.

In tali malattie, il sangue umano viene reintegrato con anticorpi. Possono assomigliare agli anticorpi dell'HIV nella struttura, il che confonde i reagenti, provocando una reazione. Certamente, negli ultimi anni, i sistemi di test sono diventati sempre più sensibili. Tuttavia, il problema dei falsi risultati non è stato ancora completamente risolto.

Immunoblotting

In condizioni moderne, è impossibile fare una diagnosi di HIV positiva basandosi solo su ELISA. È necessario confermare i risultati ottenuti, che viene eseguita utilizzando la reazione di immunoblotting (immunoblotting, IB).

Per eseguire l'IB, il laboratorio deve disporre di strisce reattive speciali. Le proteine \u200b\u200bvirali vengono applicate a loro. Prima dell'analisi, il sangue del paziente prelevato dalla vena viene preparato in modo speciale.

Il materiale biologico ottenuto viene aggiunto al gel, in cui le proteine \u200b\u200bsono separate dal loro peso. Quindi, una striscia precedentemente preparata viene abbassata nella massa risultante.

La striscia si bagna (si verificano macchie), vengono rilevate strisce su di essa se sono presenti proteine \u200b\u200bdell'HIV nel materiale. Se non ci sono proteine, bagnarsi non cambia l'aspetto della striscia.

Esistono diverse interpretazioni del Western blotting. Tuttavia, indipendentemente dal metodo utilizzato da un particolare ospedale o laboratorio per la decodifica, la probabilità di una diagnosi corretta è del 99,9%.

L'immunoblotting può dare risultati errati, spesso si chiedono i pazienti? Sì, questo è possibile, ad esempio, se il paziente è malato di tubercolosi, è incinta o soffre di oncologia.

PCR per aiutare

La PCR è un altro metodo in grado di diagnosticare il virus dell'immunodeficienza umana nel sangue e in altri fluidi biologici, dove la sua concentrazione è piuttosto elevata.

Come notano i medici, la reazione a catena della polimerasi può dare un risultato positivo entro 10 giorni dal primo contatto del corpo con l'infezione.

È importante capire che la PCR in alcuni casi fornisce risultati falsi positivi. Ciò è spiegato dal fatto che il metodo ha una sensibilità molto elevata.

Di conseguenza, reagisce spesso ad anticorpi simili, indicando processi patologici completamente diversi nel corpo del paziente.

Nonostante l'elevata sensibilità e la bassa probabilità di ottenere risultati falsi, la PCR non è ampiamente utilizzata. Ciò è spiegato da diversi fattori. Innanzitutto, per eseguire la reazione a catena della polimerasi è necessaria un'attrezzatura speciale, il cui prezzo è piuttosto alto. In secondo luogo, il personale che lavora con l'apparecchiatura deve essere altamente qualificato, il che può anche causare difficoltà. Queste caratteristiche insieme rendono la PCR un metodo diagnostico costoso e, di conseguenza, non disponibile per tutti.

Nonostante il fatto che la PCR non sia un metodo di screening, viene utilizzata, ad esempio, per testare un neonato per l'infezione con il virus dell'immunodeficienza umana.

Sistemi Express per la diagnostica

Medici e scienziati hanno fatto di tutto per creare test rapidi per valutare l'infezione da HIV. Come notano i medici, quando si utilizzano questi sistemi, è possibile ottenere un risultato entro 15 minuti dall'esecuzione del test.

I test rapidi dell'HIV si basano sul principio dell'immunocromatografia. Il sistema di solito include una striscia imbevuta di reagenti speciali.

Il compito del paziente è applicare sangue, sperma o qualsiasi altro fluido biologico che possa contenere anticorpi contro il virus.

Se vengono rilevati, sulla striscia appariranno due strisce colorate, una delle quali è di controllo e l'altra diagnostica. In caso contrario, verrà alla luce solo la striscia di controllo.

È importante capire che i test rapidi non garantiscono al 100% che una persona non sia infetta o, al contrario, infettata dall'HIV. In ogni caso, i risultati ottenuti con il loro aiuto devono essere confermati in laboratorio mediante immunoblotting.

I sistemi di test rapidi sono convenienti per i pazienti che vogliono calmarsi a casa. Tuttavia, come notano i medici, anche se con il loro aiuto una persona ha ricevuto un risultato negativo, se sospetti cambiamenti negativi nel corpo, dovresti comunque consultare un medico.

Quale medico dovresti contattare se sospetti un'infezione

Molti pazienti si chiedono a quale medico rivolgersi se sospettano l'infezione da HIV. Prima di tutto, si consiglia di visitare un venereologo. È questo medico professionista specializzato in malattie che possono essere trasmesse da persona a persona attraverso il contatto sessuale.

Il venereologo sarà in grado di condurre un esame competente, raccogliere l'anamnesi e decidere quali esami sono necessari affinché il paziente formuli una diagnosi accurata. A sua discrezione, può anche indirizzare il paziente all'ospedale per malattie infettive. Soprattutto se sospetta ancora di avere l'HIV.

Il virus dell'immunodeficienza umana è una malattia comune. Chiunque sia sessualmente attivo può affrontarlo.

La conoscenza delle caratteristiche della diffusione e della diagnosi di questa malattia nelle realtà moderne è fondamentale se il paziente vuole mantenere la sua salute e la longevità. Solo una visita tempestiva dal medico ti consentirà di tenere sotto controllo l'infezione e proteggerti da essa!

Diagnostica clinica e di laboratorio dell'infezione da HIV ha tre direzioni:

1. Stabilire il fatto di infezione da HIV, diagnosi di infezione da HIV.
2. Determinazione dello stadio del decorso clinico della malattia e identificazione delle malattie secondarie.
3. Previsione della progressione del decorso clinico della malattia, monitoraggio di laboratorio dell'efficacia del trattamento e degli effetti collaterali dei farmaci antiretrovirali.

1. Stabilimento dell'infezione da HIV, diagnosi dell'infezione da HIV

Per determinare l'infezione da HIV, vengono utilizzati i seguenti indicatori specifici: anticorpi contro l'HIV, antigeni dell'HIV, RNA dell'HIV e DNA del provirus. Gli anticorpi anti-HIV vengono determinati mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) o immunoblotting, che è essenzialmente un tipo di ELISA. Gli antigeni (proteine) dell'HIV sono determinati mediante ELISA. Con l'aiuto di metodi genetici molecolari di reazione a catena della polimerasi (PCR) e bDNA, è possibile determinare l'RNA dell'HIV e il DNA del provirus. L'utilizzo di un ulteriore metodo di ibridazione degli acidi nucleici con specifiche sonde di DNA consente di verificare la specificità delle sequenze di DNA ottenute durante la PCR. La sensibilità della PCR è la rilevazione di geni virali in una cellula su cinquemila.

Nell'infezione primaria, si osserva la seguente dinamica dei marcatori dell'HIV nel sangue delle persone infette. Nel primo mese, a seguito dell'attivazione del processo replicativo, si verifica un forte aumento della carica virale (il contenuto di HIV RNA nel plasma), quindi, a causa della diffusione del virus e della massiccia infezione delle cellule bersaglio nel sangue e nei linfonodi, diventa possibile determinare il DNA provirale. Il fatto di rilevare il DNA del provirus integrato nel genoma della cellula bersaglio è di fondamentale valore diagnostico.

La carica virale riflette l'intensità del processo replicativo nelle cellule infette. Durante il periodo dell'infezione primaria, il livello di carica virale è diverso se infettato da diversi sottotipi di HIV, ma la dinamica dei suoi cambiamenti è approssimativamente la stessa. Quindi, se infettato dal sottotipo B, ad esempio, se nel primo mese dopo l'infezione la carica virale è di 700 copie / ml, nel 2 ° mese c'è una diminuzione a 600, nel 3 ° - fino a 100, nel 4 ° - fino a 50 copie / ml. Tale dinamica è osservata sullo sfondo di un aumento del contenuto di anticorpi specifici contro l'HIV nel sangue. Il contenuto di DNA provirale nelle cellule mononucleate del sangue di pazienti con infezione da HIV è caratterizzato da relativa costanza durante i primi 6 mesi con lievi fluttuazioni in alcuni sottotipi. Pertanto, i carichi di RNA e DNA non sono identici.

Durante la fase di incubazione, per qualche tempo, non c'è formazione di anticorpi specifici contro l'HIV in quantità sufficiente per la determinazione con i metodi di laboratorio esistenti. Prima della registrazione degli anticorpi, si osserva per un tempo molto breve la comparsa nel sangue della proteina Nef, che reprime il processo replicativo, e della proteina strutturale p24. L'antigene p24 può essere rilevato nel sangue con il metodo del test immunoassorbente legato all'enzima già 1-2 mesi dopo l'infezione ed essere determinato fino all'ottava settimana, quindi il suo contenuto diminuisce drasticamente. Inoltre, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, c'è un secondo aumento del contenuto di proteina p24 nel sangue. Cade sulla formazione dell'AIDS. La scomparsa delle proteine \u200b\u200bcore libere (non legate da anticorpi) p24 nel sangue e la comparsa di anticorpi specifici contro le proteine \u200b\u200bdell'HIV segnano l'inizio della sieroconversione (Fig. 9.6).

La viremia e l'antigenemia causano la formazione di anticorpi IgM specifici (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Gli anticorpi liberi delle classi IgM e IgG contro la proteina p24 possono comparire a partire dalla 2a settimana, il loro contenuto aumenta entro 2-4 settimane, raggiungendo un certo livello, al quale permane per mesi (IgM) e anni (IgG) (Fig. 9.7).

La comparsa di sieroconversione completa, quando un alto livello di anticorpi IgG specifici contro le proteine \u200b\u200bstrutturali dell'HIV p24, gp41, gp120, gp160 è registrato nel sangue periferico, facilita notevolmente la diagnosi di infezione da HIV. Gli anticorpi anti-HIV compaiono nel 90-95% di quelli infettati entro 3 mesi dall'infezione, nel 5-9% - nel periodo da 3 a 6 mesi dal momento dell'infezione e nello 0,5-1% - in un secondo momento.

Nonostante il fatto che gli anticorpi contro l'HIV compaiano per ultimi, il principale indicatore diagnostico di laboratorio fino ad oggi è la rilevazione di anticorpi specifici mediante ELISA e immunoblotting.

Dati presentati nella tabella 9.2 [mostrare] e 9.3 [mostrare] , dimostrano chiaramente l'elevata sensibilità dei moderni sistemi di dosaggio immunosorbente legato agli enzimi per la determinazione degli anticorpi contro l'HIV, che è superiore alla sensibilità dell'immunoblotting. In alcuni casi, al ricevimento di un risultato primario positivo in ELISA, può essere confermato in immunoblotting solo dopo 2-3 settimane.

Quando si esaminano pazienti con infezione da HIV (HIV-infetti) utilizzando sistemi di test immunoblotting di aziende leader nel mondo, gli anticorpi contro gp160 e p24 / 25 vengono rilevati in tutti i casi, gli anticorpi verso altre proteine \u200b\u200bvengono rilevati nel 38,8-93,3% dei casi (Tabella 2). 9.4 [mostrare] ).

Difficoltà nel rilevare gli anticorpi nei pazienti con infezione da HIV possono sorgere durante periodi di viremia e antigenemia massicce, quando gli anticorpi specifici esistenti nel sangue sono associati a particelle virali e il processo replicativo supera la produzione di nuovi anticorpi antivirali. Questa situazione può sorgere e scomparire durante il processo infettivo.

Nei pazienti con un sistema immunitario inizialmente indebolito, la viremia e l'antigenemia compaiono prima e rimangono a un livello elevato fino all'esito della malattia. In tali pazienti, vi è un basso contenuto di anticorpi liberi contro l'HIV, a causa di due ragioni: produzione insufficiente di anticorpi da parte dei linfociti B e legame di anticorpi da parte di virioni e proteine \u200b\u200bdell'HIV solubili, pertanto, per determinare l'infezione, sono necessari sistemi di test con maggiore sensibilità o modifiche dei metodi di analisi che prevedono lo stadio del rilascio di anticorpi da immunocomplessi.

Molto spesso, una diminuzione del contenuto di anticorpi contro l'HIV per i motivi indicati si verifica nella fase terminale, quando gli anticorpi contro l'HIV nel siero potrebbero non essere catturati né dall'analisi dell'immunosorbente legato all'enzima né dal metodo dell'immunoblotting (Western blot). Oltre alla comparsa di anticorpi specifici contro l'HIV, la risposta immunitaria nei primi 4 mesi è caratterizzata da una diminuzione del contenuto di cellule CD4 + infette nel sangue e da un aumento delle cellule CD8 +. Inoltre, il contenuto delle cellule che trasportano i recettori CD4 e CD8 si stabilizza e rimane invariato per qualche tempo. L'aumento del contenuto di linfociti CD8 è una reazione protettiva, perché La citotossicità cellulo-dipendente è realizzata dai linfociti CD8 +, che mirano a distruggere le cellule infettate da HPV. Inizialmente, i linfociti citotossici (CTL) rispondono alla proteina regolatrice Nef del virus, che svolge un ruolo importante nella riduzione della carica virale (RNA) nel plasma di una persona con infezione da HIV nei primi mesi. Quindi viene formata una risposta dal CTL ad altri, incl. proteine \u200b\u200bstrutturali dell'HIV, a seguito delle quali, 12 mesi dopo l'infezione, l'effetto citotossico aumenta in modo significativo.

Schemi per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV

Tenendo conto della dinamica data di specifici marcatori di infezione da HIV nella pratica, è consigliabile aderire ai seguenti schemi diagnostici di laboratorio negli adulti (Fig. 9.8-9.10).

I diagrammi riflettono le tre fasi principali della diagnosi primaria di laboratorio dell'infezione da HIV:

1. Selezione.
2. Riferimento.
3. Esperto.

La necessità di più fasi della diagnostica di laboratorio è principalmente dovuta a considerazioni economiche. Quindi, ad esempio, il costo per eseguire uno studio di esperti con l'aiuto di sistemi di test domestici utilizzando il metodo immunoblotting è fino a $ 40, screening (utilizzando il metodo ELISA) - circa 0,2, ovvero il rapporto è 1: 200.

Nella prima fase (Figura 9.8), i soggetti vengono testati per gli anticorpi contro l'HIV utilizzando un test immunoassorbente legato agli enzimi progettato per rilevare gli anticorpi per entrambi i tipi di virus: HIV-1 e HIV-2.

Il lisato virale, le proteine \u200b\u200bricombinanti e i peptidi sintetici sono utilizzati dai produttori nei sistemi di test proposti come base antigenica. Ciascuno dei portatori elencati di determinanti antigenici dell'HIV ha i suoi vantaggi e svantaggi. Pertanto, quando si scelgono kit di test di costo approssimativamente uguale, dovrebbero essere preferiti kit con la massima sensibilità (preferibilmente 100%). Tra i sistemi di test di pari costo e sensibilità, è opportuno soffermarsi su quelli con la massima specificità.

Sulla base del lisato del virus, sono stati creati i primi sistemi di test per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Negli anni '80, tali sistemi di test erano caratterizzati da una sensibilità inferiore al 100% e una bassa specificità, manifestata da un numero elevato (fino al 60%) di risultati falsi positivi.

Durante la formazione di un virione in una coltura di linfociti, la sua membrana viene creata dalla membrana esterna e quindi contiene antigeni del principale complesso di istocompatibilità delle classi I e II. Questa circostanza provoca reazioni false positive nel caso in cui nel sangue dei pazienti siano presenti anticorpi contro alloantigeni di istocompatibilità.

Successivamente, per ottenere un virus, è stato proposto di utilizzare una coltura di macrofagi, in cui le particelle virali si formano principalmente a livello intracellulare non germogliando dalla membrana cellulare esterna, ma dalle membrane del reticolo endoplasmatico. Questa tecnologia ha ridotto il numero di falsi positivi.

Uno dei migliori in termini di caratteristiche più importanti - sensibilità e specificità - sono i test immunosorbenti legati agli enzimi riconosciuti, che utilizzano una combinazione di lisato virale purificato con peptidi sintetici, che sono le porzioni antigenicamente più significative delle proteine \u200b\u200bvirali, o proteine \u200b\u200bricombinanti.

La sensibilità del sistema di test dipende anche dalle caratteristiche degli altri componenti dei kit. Pertanto, i sistemi di test in cui vengono utilizzati coniugati che riconoscono gli anticorpi non solo della classe IgG, ma anche IgM e IgA, consentono di rilevare una fase precedente di sieroconversione. L'uso di sistemi di test sembra essere promettente, con l'aiuto dei quali è possibile determinare contemporaneamente sia gli anticorpi antivirali che l'antigene p24, il che rende la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV ancora prima.

Il risultato positivo primario deve essere ricontrollato riesaminando il campione nello stesso sistema di test, ma preferibilmente in un lotto diverso e da un diverso assistente di laboratorio. Se durante un secondo studio si ottiene un risultato negativo, lo studio viene eseguito una terza volta.

Dopo la conferma di un risultato positivo, si consiglia di prelevare nuovamente il sangue e testarlo per gli anticorpi contro l'HIV come primario. Il prelievo di sangue ripetuto previene l'errore causato dall'etichettatura imprecisa delle provette e dalla compilazione dei moduli di riferimento.

Il siero positivo al siero nella fase di screening viene inviato per studi di riferimento eseguiti utilizzando due o tre sistemi di test ELISA altamente specifici. In caso di due risultati positivi, viene effettuato uno studio esperto utilizzando il metodo immunoblotting.

L'utilizzo di saggi immunoenzimatici nella diagnostica di riferimento, che possono essere utilizzati per differenziare anticorpi specifici contro HIV-1 e HIV-2, facilita ulteriori lavori e consente di studiare immediatamente un campione positivo in fase esperta utilizzando l'apposito immunoblotting (HIV-1 o HIV-2) ...

L'opinione di un esperto di laboratorio sull'infezione da HIV viene formulata solo sulla base di un risultato Western blot positivo. Quando si esegue la diagnostica esperta, è necessario utilizzare la nomenclatura dei geni e dei prodotti genici dell'HIV proposta nel 1990 da un gruppo di esperti dell'OMS (Tabella 9.5 [mostrare] ).

La specificità delle bande sull'immunoblot deve essere valutata con molta attenzione e attenzione, utilizzando i risultati degli studi sui sieri di controllo (positivi e negativi), che vengono effettuati parallelamente allo studio dei campioni sperimentali, e un campione dell'immunoblot con la designazione delle proteine \u200b\u200bdell'HIV (allegato dal produttore al sistema di test). L'interpretazione dei risultati ottenuti dovrebbe essere eseguita secondo le istruzioni allegate al sistema di prova. Di norma, il criterio di positività è la presenza obbligatoria di anticorpi contro due proteine \u200b\u200b(precursore, esterno o transmembrana) codificate dal gene env e la possibile presenza di anticorpi contro i prodotti di altri due geni strutturali dell'HIV - gag e pol (Tabella 9.6 [mostrare] ).

In caso di ottenere un risultato dubbio, è necessario utilizzare l'elenco delle raccomandazioni per il chiarimento finale dei risultati dell'immunoblotting (Tabella 9.7 [mostrare] ).

Secondo le raccomandazioni del Centro scientifico e metodologico russo per la prevenzione e il controllo dell'AIDS, si considera un risultato positivo se sono presenti anticorpi contro almeno una delle proteine \u200b\u200bgp41, gp120, gp160 in combinazione con anticorpi contro altre proteine \u200b\u200bspecifiche dell'HIV-1 o senza di loro. Queste raccomandazioni sono formulate sulla base dell'esperienza con i sieri di bambini da focolai nosocomiali, in cui gli anticorpi erano spesso determinati solo contro una delle proteine \u200b\u200bdell'involucro del virus.

La maggior parte dei pazienti inizialmente esaminati sieropositivi in \u200b\u200bELISA appartiene alla fase della linfoadenopatia generalizzata persistente (PGL) o alla fase asintomatica. Pertanto, su un immunoblot (una striscia di nitrocellulosa su cui sono immobilizzate le proteine \u200b\u200bdell'HIV), di regola, viene determinata la seguente combinazione di anticorpi contro l'HIV-1: anticorpi contro le proteine \u200b\u200benv coat gp160, gp120 e gp41, codificate dal gene env, in combinazione con anticorpi contro le proteine \u200b\u200bcore p24 (proteina nucleocapside codificato dal gene gag) e p31 / 34 (endonucleasi codificato dal gene pol).

Reazioni positive con solo proteine \u200b\u200bgag e / o po possono verificarsi nella fase iniziale della sieroconversione e anche indicare un'infezione da HIV-2 o una risposta aspecifica.

In caso di ottenere un risultato dubbio, è possibile utilizzare varie tecniche metodologiche per chiarire il fatto dell'infezione da HIV.

A seconda delle capacità tecniche (disponibilità di kit diagnostici e reagenti, apparecchiature con attrezzature speciali e formazione del personale), il laboratorio esperto esegue ulteriori studi diagnostici (Figura 9.10).

In alcuni casi, è consigliabile utilizzare metodi di genetica molecolare per determinare le sequenze genetiche dell'HIV nel siero, nei linfociti del sangue o nelle punture dei linfonodi. La verifica della specificità delle sequenze di DNA ottenute a seguito di PCR può essere effettuata mediante il metodo di ibridazione degli acidi nucleici con specifiche sonde di DNA.

I metodi di radioimmunoprecipitazione (RIP) e immunofluorescenza indiretta (IFL) possono essere utilizzati anche per la verifica finale dei sieri con risultati discutibili nell'immunoblotting.

La rilevazione dell'HIV RNA nel plasma sanguigno mediante metodo qualitativo o quantitativo non è significativa per la diagnosi di infezione da HIV. Questo risultato deve essere confermato con metodi standard, come l'immunoblotting, 2-4 mesi dopo aver ricevuto la risposta primaria discutibile o negativa.

L'isolamento dell'HIV nella coltura cellulare è la verità ultima. Tuttavia, il metodo è complicato, costoso e viene eseguito solo in laboratori di ricerca appositamente attrezzati.

Il contenuto di cellule CD4 + nel sangue è un indicatore aspecifico, tuttavia, in casi discutibili (ELISA "+", immunoblot "-", la presenza di segni clinici di infezione da HIV / AIDS) può essere utilizzato come guida per prendere una decisione esperta. Se in laboratorio è possibile eseguire solo immunoblotting, è necessario attenersi alle raccomandazioni riportate nella tabella. 9.7 e Fig. 9.9.

Le persone il cui esame del siero esperto ha prodotto risultati dubbi (incerti), ad eccezione dei casi di rilevamento di anticorpi solo contro p17 (HIV-1) o p16 (HIV-2), devono essere ritestati entro 6 mesi (dopo 3 mesi). Nel caso di una vera infezione da HIV, dopo 3-6 mesi, si osserva una tendenza "positiva" nello spettro degli anticorpi - formazione aggiuntiva di anticorpi verso altre proteine \u200b\u200bdel virus. Una reazione falsa è caratterizzata dalla persistenza di un modello di macchia immunitaria dubbia per lungo tempo o dalla scomparsa di bande sospette. Se dopo il periodo specificato i risultati di immunoblotting ripetuti sono negativi o rimangono dubbi, in assenza di fattori di rischio, sintomi clinici o altri fattori associati all'infezione da HIV, la persona può essere considerata sieronegativa per gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2.

Risultati falsi positivi dovuti al contenuto nel sangue dei pazienti di anticorpi contro alloantigeni di istocompatibilità, che fanno parte dell'involucro dell'HIV, appaiono sull'immunoblot sotto forma di bande a livello di gp41 e gp31. Le ragioni di altre reazioni aspecifiche (ad esempio, a p24, che si trova spesso in individui con processi autoimmuni) non sono state ancora chiarite.

Il miglioramento della tecnologia per la produzione di saggi immunosorbenti legati agli enzimi ha consentito di ottenere un'elevata sensibilità, fino al 99,99%, mentre la sensibilità del metodo di immunoblotting è del 97%. Pertanto, un risultato negativo in immunoblotting con risultati positivi in \u200b\u200bELISA può indicare il periodo iniziale di sieroconversione, caratterizzato da un basso livello di anticorpi specifici. Pertanto, è necessario ripetere lo studio dopo 1,5-2 mesi, ovvero il periodo di tempo necessario per completare la sieroconversione, per ottenere una concentrazione di anticorpi specifici nel sangue sufficiente per il rilevamento mediante immunoblotting.

Un risultato positivo (risultati) di uno studio nella fase di riferimento o solo di screening della diagnosi di laboratorio di infezione da HIV, ovvero un risultato positivo in qualsiasi test di immunoassorbimento legato all'enzima, in ultima analisi non confermato da metodi esperti, viene interpretato come la presenza di anticorpi con reazione crociata nel sangue. La reazione crociata si riferisce al legame di siti non specifici da parte di anticorpi sulle proteine \u200b\u200bo sui peptidi dell'HIV utilizzati come base antigenica nel sistema di test in cui si ottiene un risultato positivo.

In assenza di immunodeficienza e segni clinici di infezione da HIV, tali persone sono considerate sieronegative per gli anticorpi anti-HIV e devono essere rimosse dal registro.

La diagnosi finale di infezione da HIV viene stabilita solo sulla base di tutti i dati clinici, epidemiologici e di laboratorio. Solo il medico curante ha il diritto di informare il paziente sulla diagnosi di infezione da HIV.

Il metodo principale per la diagnosi di laboratorio di conferma (esperta) dell'infezione da HIV è l'immunoblotting. Tuttavia, data la sua sensibilità inferiore rispetto all'ELISA, numerosi ricercatori hanno suggerito di utilizzare una combinazione di diversi sistemi di test per la determinazione finale della presenza di anticorpi specifici contro l'HIV. Ad esempio, G. van der Groen et al. ha proposto un'alternativa al metodo di immunoblotting per il controllo dei risultati positivi della fase di screening della diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Implica lo studio del materiale in parallelo in tre sistemi di test, che si basano su diversi metodi per la rilevazione di anticorpi specifici contro l'HIV (diverse varianti di ELISA, test di agglutinazione) utilizzando antigeni di diversa natura. Gli autori sono riusciti a trovare tali combinazioni di sistemi di test, il cui utilizzo fornisce il 100% di sensibilità e specificità rispetto ai risultati ottenuti nell'immunoblotting.

L'economicità di questo metodo di diagnostica esperta è un indubbio vantaggio, tuttavia, la mancanza di informazioni su quali proteine \u200b\u200bspecifiche del virus hanno anticorpi nel sangue del paziente non consente di valutare la specificità della reazione in ogni singolo caso, nonché di monitorare i cambiamenti nello spettro degli anticorpi in una fase iniziale di sieroconversione.

La diagnostica di laboratorio dell'infezione da HIV nei bambini nati da madri con infezione da HIV ha le sue caratteristiche. Dal momento della nascita per un lungo periodo (fino a 15 mesi), gli anticorpi materni contro l'HIV possono circolare nel sangue di tali bambini. Solo le immunoglobuline della classe IgG penetrano nella barriera placentare, pertanto il rilevamento di nmmupoglobuline specifiche per HPV delle classi IgM e IgA in un bambino consente di confermare l'infezione, ma un risultato negativo non può indicare l'assenza di HIV.

I bambini di età inferiore a 1 mese non hanno ancora la replicazione dell'HPV e l'unico metodo di verifica è la PCR. Anche la determinazione dell'antigene p24 nei bambini di età superiore a 1 mese è un metodo di conferma.

L'assenza di anticorpi contro l'HIV nei neonati non significa che il virus non sia penetrato nella barriera placentare. In ogni caso, i figli di madri con infezione da HIV sono soggetti a esame diagnostico di laboratorio e osservazione entro 36 mesi dalla nascita.

I risultati dei test di laboratorio per i marker di infezione da HIV richiedono un'attenta interpretazione e devono essere considerati solo insieme ai dati degli esami epidemiologici e clinici. D'altra parte, va notato che nonostante l'elevata sensibilità dei metodi moderni, i risultati negativi della ricerca non possono escludere completamente la presenza di infezione da HIV. Pertanto, un risultato negativo del test, ad esempio, mediante immunoblotting, può essere formulato solo come assenza di anticorpi specifici contro l'HIV-1 e l'HIV-2.

Diagnosi di infezione da HIV in pazienti sieronegativi

La qualità dei sistemi di test utilizzati nella diagnostica di laboratorio dell'infezione da HIV migliora ogni anno, la loro sensibilità aumenta. Tuttavia, l'elevata variabilità dell'HIV può portare alla comparsa di nuovi tipi, anticorpi contro i quali potrebbero non essere riconosciuti dai sistemi di test esistenti. Inoltre, sono noti casi di risposta umorale atipica del sistema immunitario dell'ospite al virus. Così, L. Montagnier nel 1996 riferì di due pazienti affetti da AIDS nei quali non erano stati rilevati anticorpi specifici nel sangue da diversi anni, la diagnosi fu fatta sulla base di dati clinici e di laboratorio confermati solo dall'isolamento dell'HPV-1 in coltura cellulare. In tali casi, è necessario utilizzare le raccomandazioni dell'OMS, secondo le quali la diagnosi clinica di infezione da HIV negli adulti e nei bambini è possibile in presenza di una delle 12 malattie indicatrici di AIDS:

1. candidosi dell'esofago, della trachea, dei bronchi, dei polmoni;
2. criptococcosi extrapolmonare;
3. criptosporidiosi con diarrea per più di un mese;
4. lesione da citomegalovirus di qualsiasi organo (eccetto e in aggiunta a fegato, milza e linfonodi in un paziente di età superiore a 1 mese):
5. un'infezione causata dal virus dell'herpes simplex che persiste per più di 1 mese in un paziente di età superiore a 1 mese;
6. linfoma del cervello in un paziente di età inferiore ai 60 anni;
7. polmonite interstiziale linfocitica in un bambino sotto i 13 anni;
8. infezione dissiminata causata da batteri del gruppo Micobacterium avium intracellulare o M. Kansassii;
9. polmonite da pneumocystis;
10. leucoencefalopatia multifocale progressiva;
11. toxoplasmosi del sistema nervoso centrale in pazienti di età superiore a 1 mese.

La presenza di una di queste malattie consente di diagnosticare l'infezione da HIV in assenza della possibilità di eseguire un esame del sangue di laboratorio per la presenza di anticorpi contro l'HIV, o anche se si ottiene un risultato sieronegativo.

fonte: Diagnostica di laboratorio medico, programmi e algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., San Pietroburgo, Intermedica, 2001

Solo test speciali possono rivelare l'AIDS. Il processo di test stesso consiste nel rilevare gli anticorpi prodotti dall'organismo in risposta alla comparsa di un virus. I metodi di laboratorio per la diagnosi dell'AIDS includono quattro test che vengono utilizzati per rilevare la malattia.

Il primo - ELISA (test immunoassorbente legato all'enzima) è il metodo diagnostico più comune. Questa analisi può determinare la quantità di anticorpi che si sono accumulati nel corpo. Questo di solito è possibile solo se il virus è entrato nel flusso sanguigno e sono passati tre mesi da quel momento. Come mostra la pratica, l'uno percento dei risultati fornisce un risultato falso negativo o falso positivo.

Un risultato falso negativo è possibile se gli anticorpi non si sono ancora sviluppati contro il virus o se l'AIDS è allo stadio terminale, cioè il virus è presente nel sangue, ma ce n'è così tanto che gli anticorpi e le cellule CD-4 sono praticamente assenti. Per verificare un risultato negativo, puoi ripetere l'ELISA, ma solo dopo 3 mesi.

Nella maggior parte dei casi, un risultato falso positivo viene fornito dall'esame di pazienti affetti da malattie croniche autoimmuni, infettive, oncologiche e di altro tipo. Un risultato falso positivo può essere riscontrato anche nelle donne in gravidanza. Pertanto, ogni risultato positivo viene necessariamente ricontrollato, ma solo sull'immunoblot: questo è un test più sensibile.

Se il risultato dell'immunoblot è positivo, soprattutto dopo il risultato ELISA, l'affidabilità è del 99,9%, e questa è la massima precisione per un test medico (inoltre, qualsiasi).

Il secondo è immunoblot (full Immune Blotting). Questo test rileva la presenza di anticorpi specifici contro l'HIV. In questo caso, il risultato è negativo, positivo, dubbio (è anche chiamato indefinito).

Un risultato dubbio potrebbe indicare che l'HIV è presente nel flusso sanguigno, per il quale il corpo non ha ancora sviluppato l'intero spettro di anticorpi. In questo caso, gli anticorpi contro l'HIV nel siero compaiono in 1-3-6 mesi. uno dopo l'altro, dal momento in cui è stato ricevuto il primo discutibile risultato. Se i risultati sono confermati, ciò indica l'infezione da HIV nella fase iniziale.

Il risultato incerto di questo test può indicare il contrario. Non esiste un'infezione da HIV in sé, ma il corpo umano ha anticorpi simili agli anticorpi contro l'HIV. Di norma, un risultato dubbio si verifica nelle donne in gravidanza, nei pazienti con tubercolosi, nei riceventi, nei malati di cancro, nonché in coloro che hanno ricevuto più trasfusioni di sangue (cioè trasfusioni di sangue). Un paziente il cui risultato di questo test ha mostrato incertezza viene monitorato da un medico di malattie infettive per sei mesi e viene testato in 1-3-6 mesi.

Il terzo è la PCR (reazione a catena della polimerasi). Questa diagnosi di AIDS consente di determinare il DNA e l'RNA del virus. Questa è una reazione abbastanza sensibile ed efficace che ti consente di studiare il DNA per ottenere un risultato. In questo caso, il DNA viene prelevato da una cellula ed esaminato moltiplicando le sequenze di DNA caratteristiche

Questo test si applica:

• per determinare quale virus è nel corpo (c'è HIV 1 e HIV-2);
• determinare la presenza o l'assenza dell'HIV;
• determinare e controllare la carica virale;
• per determinare lo stato di HIV di un neonato nato da una madre con infezione da HIV.

Questo test ha un'elevata sensibilità: è in grado di rilevare un virus anche se sono trascorsi una decina di giorni dal presunto momento dell'infezione. Una sensibilità così elevata del test reagisce ad altre infezioni, quindi spesso dà risultati falsi positivi. I risultati di questo test non costituiscono una base per una diagnosi definitiva.

Questo test richiede personale medico altamente qualificato e sofisticate apparecchiature di laboratorio. Questo è un test costoso e quindi non viene utilizzato nel test HIV gratuito.

Il quarto è un test espresso. Questo test viene utilizzato principalmente in casi di emergenza - durante il parto, per motivi di salute durante l'intervento chirurgico. I risultati dei test rapidi sono generalmente confermati dai test HIV di routine.

/ 16
Il peggiore Migliore

Il test per l'infezione da HIV è soggetto a:

2. Persone con diagnosi sospetta o confermata: infezione batterica nei bambini di età inferiore a 13 anni, multipla e ricorrente; candidosi dell'esofago, della trachea, dei bronchi o dei polmoni; cancro cervicale invasivo; coccidioidomicosi disseminata o extrapolmonare; criptococcosi extrapolmonare; criptosporidiosi con diarrea per 1 mese o più; lesioni da citomegalovirus di altri organi, ad eccezione di fegato, milza, linfonodi in pazienti di età superiore a 1 mese; retinite da citomegalovirus con perdita della vista; infezione da herpes che causa ulcere multifocali che non guariscono entro 1 mese o bronchite, polmonite, esofagite; istoplasmosi disseminata o extrapolmonare; isosporosi con diarrea per più di 1 mese; tubercolosi diffusa o extrapolmonare; tubercolosi polmonare negli adulti o negli adolescenti di età superiore a 13 anni; tubercolosi extrapolmonare; altre malattie causate da micobatteri, diverse da M. tuberculosis disseminata o extrapolmonare; polmonite causata da pneumocisti; leucoencefalopatia multifocale progressiva; setticemia da salmonella (eccetto Salmonella typhi), ricorrente; toxoylase-mosaico del cervello nei bambini di età superiore a 1 mese; Sarcomi di Kaposi; polmonite interstiziale linfoide nei bambini sotto i 13 anni di età; Linfomi di Burkitt; linfoma immunoblastico; linfoma cerebrale primario; sindrome da deperimento, epatite B, trasporto di HBsAg; mononucleosi infettiva; herpes zoster ricorrente nelle persone di età superiore a 60 anni; Malattie trasmesse sessualmente.

Il laboratorio altamente specializzato esegue:

a) determinazione di anticorpi, antigeni e immunocomplessi circolanti nel sangue; coltivazione del virus, identificazione del suo materiale genomico e degli enzimi;

b) valutazione delle funzioni del legame cellulare del sistema immunitario. Il ruolo principale appartiene ai metodi di diagnostica sierologica, volti a determinare gli anticorpi, nonché gli antigeni dell'agente patogeno nel sangue e altri fluidi biologici del corpo.

Il test degli anticorpi HIV viene eseguito per:

a) sicurezza delle trasfusioni di sangue e dei trapianti;

b) sorveglianza, test al fine di monitorare la prevalenza dell'infezione da HIV e studiare le dinamiche della sua prevalenza in una determinata popolazione;

c) diagnostica dell'infezione da HIV, cioè test volontario del siero di sangue di persone praticamente sane o pazienti con vari segni e sintomi clinici simili all'infezione da HIV o all'AIDS.

Il sistema per la diagnostica di laboratorio dell'infezione da HIV si basa su un principio a tre fasi. La prima fase è lo screening, progettato per eseguire esami del sangue primari per la presenza di anticorpi alle proteine \u200b\u200bdell'HIV. La seconda fase è quella di riferimento: consente di utilizzare speciali tecniche metodologiche per chiarire (confermare) il risultato positivo primario ottenuto in fase di screening. Il terzo etano - esperto, è destinato alla verifica finale della presenza e specificità dei marker di infezione da HIV individuati nelle precedenti fasi della diagnostica di laboratorio. La necessità di più fasi della diagnostica di laboratorio è principalmente dovuta a considerazioni economiche.

In pratica vengono utilizzati diversi test che consentono di identificare gli infetti da HIV con un sufficiente grado di affidabilità:

ELISA (ELISA) -test (saggio immunoassorbente legato all'enzima) di rilevamento del primo livello, è caratterizzato da un'elevata sensibilità, sebbene meno specifica delle seguenti;

Immune blot (Western-blot), un test molto specifico e più utilizzato per differenziare tra HIV-1 e HIV-2;

Test antigenemia P25, efficace nelle fasi iniziali dell'infezione;

Reazione a catena della polimerasi (PCR).

In caso di screening di massa di campioni di sangue, si consiglia di testare miscele di sieri di un gruppo di soggetti, compilati in modo tale che la diluizione finale di ciascun campione non superi 1: 100. Se la miscela siero-corrente è positiva, viene testato ogni siero della miscela positiva. Questo metodo non porta ad una perdita di sensibilità sia nell'ELISA che nell'immunoblot, ma riduce i costi di manodopera e il costo dell'esame primario del 60-80%.

Durante la sierodiagnosi primaria dell'infezione da HIV, gli anticorpi totali vengono determinati utilizzando test di screening di screening - ELISA e reazioni di agglutinazione. Nella seconda fase (arbitrato), viene utilizzato un test più complesso: un immunoblot, che consente non solo di confermare o rifiutare la conclusione iniziale, ma anche di farlo a livello di determinazione degli anticorpi alle singole proteine \u200b\u200bvirali.

Test immunosorbente collegato (ELISA) è il metodo principale e più utilizzato per la determinazione degli anticorpi contro l'HIV. Ma gli svantaggi dell'utilizzo dell'ELISA nella sierodiagnosi dell'infezione da HIV includono frequenti risultati falsi positivi. A questo proposito, il risultato in ELISA non è una base per una conclusione sulla sieropositività all'HIV del soggetto. Ciò è dovuto alla purificazione insufficiente dell'immunosorbente dalle proteine \u200b\u200bdi zavorra; legame spontaneo degli anticorpi del siero alla plastica, se le sue aree non occupate dall'immunosorbente non sono sufficientemente bloccate o non bloccate da una proteina neutra completamente speciale; interazione incrociata con le proteine \u200b\u200bdell'HIV dell'immunosorbente di varie proteine \u200b\u200bpresenti nel sangue di soggetti con determinati processi patologici autoimmuni più spesso come sclerosi multipla, LES, tubercolosi; con donazioni frequenti, malattie infettive e oncologiche, ustioni, gravidanza, trasfusioni di sangue ripetute, trapianti di organi e tessuti, nonché persone in emodialisi; con la presenza di fattore reumatoide nel sangue, che spesso provoca reazioni false positive all'HIV; la presenza nel sangue delle persone esaminate di anticorpi contro le proteine \u200b\u200bgag dell'HIV e principalmente contro la proteina p24 (ovviamente si formano anticorpi contro i retrovirus eso o endogeni non ancora identificati). Poiché l'anti-p24 viene sintetizzato senza errori nelle prime fasi della sieroconversione dell'HIV, viene effettuato un ulteriore monitoraggio immunologico delle persone con anticorpi alle proteine \u200b\u200bgag dell'HIV, nonché la loro rimozione dalla donazione.

La sensibilità e la specificità del test immunoassorbente legato all'enzima sono in costante aumento. Di conseguenza, l'ELISA di quarta generazione non è inferiore nelle sue capacità diagnostiche all'immun blotting e può essere utilizzato non solo durante lo screening, ma anche nella fase di conferma della diagnosi di infezione da HIV [Smolskaya T. T., 1997].

Immunoblotting è il metodo finale di diagnostica sierologica, che consente di trarre una conclusione finale sulla positività o negatività dell'HIV del soggetto.

Esiste una chiara correlazione tra i risultati dello studio sui sieri in immunoblot ed ELISA - due volte positivi in \u200b\u200bELISA con diversi sistemi di test, i sieri nel 97-98% dei casi sono poi positivi all'HIV nell'immunoblotting. Se i sieri sono risultati positivi all'ELISA solo in uno dei due sistemi di test utilizzati, nell'immunoblot sono positivi solo nel 4% dei casi. Nel 5% dei casi, quando si conducono studi di conferma su persone con dati positivi, ELISA-immunoblot può fornire risultati "indeterminati" e tra questi, in circa il 20% dei casi, risultati "indeterminati" causano anticorpi contro le proteine \u200b\u200bgag dell'HIV-1 (p55, p25, p18 ). La presenza di anticorpi solo contro le proteine \u200b\u200bgag dell'HIV-1 è la ragione per un ulteriore esame del siero del sangue per l'infezione da HIV-2.

La valutazione dei risultati dell'immunoblotting viene eseguita rigorosamente in conformità con le istruzioni allegate al sistema di test. In assenza di istruzioni sull'interpretazione dei risultati nelle istruzioni, dovrebbero essere utilizzati i criteri dell'OMS.

Al ricevimento di risultati positivi degli studi nella fase di riferimento della diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV e di un risultato negativo dello studio con il metodo dell'immunocromia, 6 mesi dopo il primo esame viene eseguita una diagnosi esperta obbligatoria ripetuta.

Se i risultati dell'immunoblotting 12 mesi dopo lo studio del primo campione rimangono negativi o incerti, quindi in assenza di fattori di rischio, sintomi clinici o altri fattori associati all'infezione da HIV, il soggetto viene rimosso dall'osservazione del dispensario.

Tra i metodi sierologici, in caso di risultati incerti, l'immunoblot viene utilizzato come diagnosi esperta. radioimmunoprecipitazione (STRAPPARE). Si basa sull'uso di proteine \u200b\u200bvirali etichettate con iodio radioattivo e i precipitati vengono rilevati utilizzando contatori beta. Gli svantaggi del metodo includono l'alto costo delle attrezzature, la necessità di attrezzature per questi scopi in stanze speciali.

Le persone con diagnosi di infezione da HIV sono soggette a costante osservazione dinamica con esame di laboratorio obbligatorio ogni 6 mesi.

La reazione a catena della polimerasi (PCR) rivela sequenze nucleotidiche pre-moltiplicate specifiche per il genoma di un dato patogeno. La moltiplicazione isolata di un gene o di un suo frammento, detta amplificazione, la PCR permette di effettuare in vitro utilizzando l'enzima DNA polimerasi termostabile. In 2-3 ore, la PCR ti consente di ottenere milioni di copie di una parte specifica del virus. Nell'infezione da HIV, dall'RNA cellulare, compreso l'RNA del virus, se è stato riprodotto nella cellula o è stato integrato nel suo genoma, si ottiene una quantità sufficiente di DNA provirale mediante trascrizione inversa e ibridazione con "sonde" oligonucleotidiche marcate per l'analisi, che viene rilevata e quantificata , nonché in relazione all'appartenenza al genoma dell'HIV, mediante marcatura radioattiva o altro della sonda, stabilendo l'omologia del DNA e delle sequenze amminoacidiche specifiche del virus. La sensibilità della PCR è la rilevazione di geni virali in una cellula su cinquemila.

La PCR, anche quantitativa, può essere utilizzata solo per determinare la carica virale sul plasma per risolvere il problema di iniziare il trattamento farmacologico per un paziente o cambiare i farmaci antiretrovirali. La PCR non può essere raccomandata per la diagnosi di infezione da HIV, poiché anche i metodi più moderni della sua dichiarazione e dei reagenti consentono di determinare la carica virale non inferiore a un certo livello - 50 copie / ml. E la complessità del test PCR e il suo costo elevato (circa $ 200) ne annullano l'uso diffuso come metodo di diagnosi quotidiana di laboratorio dell'infezione da HIV. Pertanto, la PCR rimane indispensabile solo per valutare la carica virale sul plasma in pazienti con una diagnosi già stabilita di infezione da HIV al fine di risolvere il problema della terapia del paziente.

Le fasi della diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV sono mostrate schematicamente in Fig. 1.

Figura: 1. Fasi della diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV

Durante l'infezione da HIV, c'è un periodo di "finestra di laboratorio buia" quando la quantità di anticorpi contro l'HIV è insufficiente per la sensibilità dei sistemi di test. Questo periodo varia da una settimana a tre mesi dal momento dell'infezione da HIV, a seconda del livello di sensibilità del sistema di test. Dato questo fenomeno, sorgono difficoltà nell'esame del sangue donato da persone che si trovano nel periodo di infezione da HIV menzionato. Pertanto, nella maggior parte dei paesi del mondo, è stato introdotto un sistema di utilizzo del sangue solo dopo che è stato conservato per 3-6 mesi al fine di effettuare un riesame obbligatorio per l'infezione da HIV dei donatori di queste dosi di sangue e dei suoi componenti.

Lo stadio delle manifestazioni primarie è caratterizzato dall'attività del processo replicativo. La viremia e l'antigenemia risultanti causano la formazione di anticorpi IgM specifici: anti-p24, anti-gp41, anti-gp120. L'antigene p24 in alcuni degli infetti può essere rilevato nel sangue tramite ELISA già 2 settimane dopo l'infezione e determinato fino a 8 settimane. Inoltre, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, c'è un secondo aumento del contenuto di proteina p24 nel sangue, che si verifica durante la formazione dello stadio dell'AIDS.

L'emergere della sieroconversione completa, quando viene registrato un alto livello di anticorpi IgG specifici contro le proteine \u200b\u200bstrutturali dell'HIV gp41, p24, gpl20 nel sangue periferico, facilita notevolmente la diagnosi di infezione da HIV. La maggior parte dei kit commerciali sono progettati per indicare solo tali anticorpi.

Le difficoltà nel rilevare gli anticorpi nei pazienti con infezione da HIV possono sorgere durante periodi di viremia e antigenemia massicce, quando gli anticorpi specifici disponibili nel sangue vengono spesi per legare le particelle virali e il processo replicativo supera la produzione di nuovi anticorpi antivirali.

Negli individui con un sistema immunitario inizialmente indebolito, la viremia e l'antigenemia compaiono prima e rimangono a un livello elevato fino all'esito della malattia. Allo stesso tempo, tali pazienti hanno un basso contenuto di anticorpi liberi contro l'HIV, a causa di due motivi: produzione insufficiente di anticorpi da parte dei linfociti B e legame di virioni e proteine \u200b\u200bdell'HIV solubili da parte degli anticorpi, pertanto, per determinare l'infezione, sono necessari sistemi di test con maggiore sensibilità o modifiche dei metodi di analisi. la fase di rilascio degli anticorpi dagli immunocomplessi.

Nonostante l'abbondanza di marcatori specifici dell'infezione da HIV, il più spesso determinato è la presenza di anticorpi totali contro le proteine \u200b\u200bdell'HIV. Il termine "totale" indica la presenza di due classi di anticorpi (IgG e IgM) e un'ampia gamma di anticorpi contro varie proteine \u200b\u200bdell'HIV, principalmente strutturali.

Determinazione delle cellule CD4. Il principale indicatore clinico e di laboratorio per la diagnosi dello stadio dell'infezione da HIV, il grado di distruzione del sistema immunitario nei pazienti nella vita di tutti i giorni era la determinazione del contenuto di linfociti CD4 +: una diminuzione del livello inferiore a 200 cellule / mm3 è il criterio principale per diagnosticare l'AIDS. Si ritiene che tutte le persone con infezione da HIV con una conta dei linfociti CD4 + di 200 cellule / mm3 e inferiore necessitino sia di terapia antivirale che di prevenzione della polmonite da Pneumocystis. E sebbene 1/3 dei linfociti con infezione da HIV con un numero di linfociti C04 + inferiore a 200 cellule / mm3 non abbia manifestazioni cliniche, l'esperienza ha dimostrato che sviluppano sintomi nei prossimi 2 mesi, quindi sono tutti considerati pazienti con AIDS.