REEF

La reazione di immunofluorescenza si basa sull'interazione degli anticorpi anti-clamidia con l'antigene della clamidia specifico del genere. Esistono due tipi di reazioni di immunofluorescenza: dirette e indirette. Nel primo caso, l'anticorpo specifico viene marcato direttamente con un fluorocromo e la reazione avviene in una fase, il che riduce notevolmente i tempi di ricerca. Nel secondo caso, l'anticorpo specifico non ha un'etichetta e i secondi anticorpi marcati specifici per gli anticorpi anti-Chlamydia vengono utilizzati per rilevare il complesso AG-AT formato nella prima fase. Il risultato della reazione viene valutato visivamente utilizzando un microscopio a fluorescenza.

Oltre all'importazione, sono comparsi kit diagnostici domestici infezione da clamidia reazione di immunofluorescenza diretta, che praticamente non è inferiore per specificità e sensibilità, ma ha un prezzo significativamente inferiore.

Il materiale per lo studio sono le impronte preparate nel rispetto delle regole. Gli strisci RIF vengono preparati su speciali vetri per decalcomanie all'interno di un'area limitata con un diametro di 8-10 mm. Successivamente vengono essiccate all'aria e fissate immergendole per 5-10 minuti a freddo al 96% (meglio assoluto) etanolo oppure applicando 0,1 - 0,15 ml di acetone anidro raffreddato alla preparazione fino a completa evaporazione. I preparati fissi possono essere testati immediatamente o, se necessario, conservati a temperatura ambiente per 24 ore oa -20 ° C per 2 settimane (è necessario escludere l'accesso di umidità durante la conservazione e portare il preparato a temperatura ambiente prima di testare con un sacchetto di plastica e gel di silice).

Quando si esegue una RIF diretta, una soluzione di anticorpi marcati viene applicata alla preparazione nella quantità necessaria per la copertura completa dello striscio (25-30 μl). Il farmaco viene incubato in posizione orizzontale in una camera umida per 15 minuti a + 37 ° C. Non asciugare il reagente per evitare risultati falsi positivi. Successivamente, lo striscio viene lavato in acqua corrente per 30 secondi, risciacquato in acqua distillata, asciugato e preparato per la microscopia.

Quando si esegue un RIF indiretto, la quantità richiesta di una soluzione di anticorpi anti-Chlamydia viene applicata alla preparazione e la prima incubazione viene eseguita nelle stesse condizioni del RIF diretto. Quindi la preparazione viene lavata, asciugata all'aria e viene applicato un secondo reagente - anticorpi etichettati per gli anticorpi della clamidia e una seconda incubazione viene eseguita in una camera umida a + 37 ° С per 15 minuti. Dopo il lavaggio, il preparato viene essiccato e preparato per la microscopia. Si consiglia di visionare immediatamente le preparazioni finite. Se necessario, è possibile conservare i preparati colorati per 1 - 2 giorni a + 2-8 ° C in un luogo buio senza umidità.

La microscopia viene eseguita utilizzando un sistema di immersione. Esistono due opzioni per la microscopia a immersione:

1. Immersione in olio: applicare 20 - 25 μl di liquido di montaggio (glicerina tamponata con tampone fosfato con pH 7,2 - 7,6) sulla preparazione essiccata finita, coprirla con un vetro di copertura sgrassato, su cui viene versata una goccia di olio da immersione non fluorescente quindi applicato e microscopizzato con una lente (marcatura “L” - luminescente) con un ingrandimento di 90 e un oculare con un ingrandimento di 5.

2. Immersione in acqua: una goccia di 20 μL di tampone fosfato con pH 7,4 viene applicata alla preparazione finita e microscopizzata con un obiettivo per immersione in acqua (marcatura - striscia bianca e "L" - luminescente) con un ingrandimento di 60 e un oculare con ingrandimento 5. L'immersione in acqua conferisce un bagliore più uniforme, luminoso e chiaro.

RIF consente di rilevare strutture antigeniche di corpi sia elementari che reticolari. Gli ET si trovano principalmente extracellulari, arrotondati con bordi lisci, piccoli (dimensioni 1: 100 - 1: 150 in relazione alle cellule circostanti), struttura omogenea, hanno un bagliore verde smeraldo specifico brillante, che, quando si lavora con una microscrew producono anelli di diffrazione (anelli Delectorsky). Le RT sono molto meno comuni, si trovano principalmente intracellulari, hanno una struttura meno omogenea, sono più polimorfiche, ma anche con bordi netti e hanno un bagliore verde smeraldo brillante specifico. Qualsiasi altro materiale fluorescente di forma irregolare, bordi irregolari e indistinti, con un colore verde opaco o un bagliore di un colore diverso è un artefatto. L'intensità, la luminosità e l'ombra di un bagliore specifico dipendono dal pH del fluido di montaggio o dal tampone utilizzato per la microscopia. L'elevata intensità di luminescenza FITC in un mezzo alcalino aumenta la sensibilità del metodo, ma porta ad un aumento del numero di oggetti con luminescenza aspecifica e, di conseguenza, a risultati falsi positivi. In un ambiente acido, l'intensità della luminescenza FITC diminuisce, il che può dare un risultato falso negativo. La microflora di accompagnamento, così come i nuclei delle cellule circostanti, sono macchiati in modo aspecifico in diverse tonalità di arancione con bromuro di indio, il loro citoplasma in diverse tonalità di blu Evans marrone-mattone.

Per ottenere un risultato affidabile, si consiglia di visualizzare molti campi visivi della preparazione. Il risultato è considerato positivo se il farmaco contiene cellule epiteliali ed è possibile rilevare almeno 6 corpi elementari con tutti i segni di cui sopra.

Il rilevamento di una quantità inferiore dell'agente patogeno rende il risultato dubbio e richiede un riesame, preferibilmente su uno sfondo di provocazione (cibo - alcol, farmaci - iniezione di pirogeno, meccanico - massaggio dell'uretra su un buge). Il controllo della cura deve essere effettuato non prima di due settimane dopo, poiché è possibile preservare il materiale antigenico non eliminato di un patogeno non vitale, che darà risultati falsi positivi... Ottenere 3 risultati di test negativi negli uomini per un mese e nelle donne entro 3 cicli mestruali, assenza manifestazioni cliniche un'infezione da clamidia indica il recupero.

Con un'adeguata preparazione del paziente, il rispetto delle regole per il prelievo del materiale e la stadiazione della reazione, RIF è un metodo altamente sensibile e specifico per la diagnosi della clamidia urogenitale e consente di identificare l'agente patogeno nel 90-95% dei pazienti. Questo metodo è relativamente economico, facile da eseguire, altamente informativo, non richiede attrezzature costose speciali, consente di ottenere rapidamente un risultato (0,5 - 1 ora) e di controllare visivamente la qualità del prelievo di materiale per la ricerca.

Metodi che utilizzano i principi della biologia molecolare

Il gruppo include metodi di sonde di DNA e reazione a catena della polimerasi (PCR), che consentono di identificare il materiale genetico del patogeno nel biomateriale studiato. I kit per la diagnosi della clamidia con sonde a DNA sono ancora in fase di sviluppo e sperimentazioni cliniche.

La PCR viene attivamente introdotta nella pratica della diagnostica di laboratorio. Il metodo si basa sull'isolamento di una specifica sequenza di DNA o RNA del patogeno utilizzando primer complementari, seguito dalla sua copia multipla e accumulo per l'ulteriore rilevamento con metodi di rilevamento convenzionali (elettroforesi o ELISA). Questo metodo ha un'elevata specificità e sensibilità, quasi si avvicina alla cultura e consente di rilevare singoli patogeni nel materiale di prova. Il metodo PCR richiede attrezzature costose speciali, un laboratorio separato appositamente attrezzato, formazione adeguata e qualifiche elevate personale medico... Allo stesso tempo, la mancanza di certificazione dei primer utilizzati in Russia e una sufficiente esperienza nell'applicazione del metodo PCR, la specificità del materiale di prova, la sua frequente contaminazione con microflora concomitante (che può dare risultati falsi positivi) non ci consente giudicare inequivocabilmente il suo valore nella diagnosi della clamidia urogenitale.

Pertanto, attualmente, il metodo più accessibile, semplice e allo stesso tempo altamente informativo per diagnosticare la clamidia urogenitale e stabilire una cura è la reazione di immunofluorescenza diretta (RIF). Il monitoraggio della dinamica del decorso della malattia e dell'efficacia del trattamento deve essere effettuato determinando il titolo degli anticorpi anti-Chlamydia nel siero del sangue mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA).

Il metodo di immunofluorescenza (RIF, reazione di immunofluorescenza, reazione di Koons) è un metodo per rilevare antigeni specifici utilizzando anticorpi coniugati a un fluorocromo. Possiede alta sensibilità e specificità.

Utilizzato per la diagnostica rapida malattie infettive (identificazione del patogeno nel materiale di prova), nonché per la determinazione dei recettori AT e di superficie e dei marcatori dei leucociti (immunofenotipizzazione) e di altre cellule.

La rilevazione di antigeni batterici e virali in materiali infettivi, tessuti animali e colture cellulari utilizzando anticorpi fluorescenti (sieri) è ampiamente utilizzata nella pratica diagnostica. La preparazione dei sieri fluorescenti si basa sulla capacità di alcuni fluorocromi (ad esempio, isotiocianato di fluoresceina) di legarsi chimicamente con le proteine \u200b\u200bdel siero di latte senza influire sulla loro specificità immunologica.

Esistono tre tipi di metodo: diretto, indiretto, con complemento. Il metodo RIF diretto si basa sul fatto che antigeni tissutali o microbi trattati con sieri immuni con anticorpi marcati con fluorocromi sono in grado di brillare ai raggi UV di un microscopio a fluorescenza. I batteri in uno striscio trattato con un siero così luminescente si illuminano lungo la periferia cellulare sotto forma di un bordo verde.

Il metodo RIF indiretto consiste nel rilevare il complesso antigene-anticorpo utilizzando siero antiglobulina (contro anticorpi) marcato con fluorocromo. Per questo, gli strisci di una sospensione di microbi vengono trattati con anticorpi del siero diagnostico di coniglio antimicrobico. Quindi gli anticorpi che non si sono legati agli antigeni dei microbi vengono lavati via e gli anticorpi rimasti sui microbi vengono rilevati trattando lo striscio con siero antiglobulina (anti-coniglio) marcato con fluorocromi. Di conseguenza, si forma un complesso di microbi + anticorpi di coniglio antimicrobici + anticorpi anti-coniglio marcati con fluorocromo. Questo complesso è osservato in un microscopio fluorescente, come nel metodo diretto.

Meccanismo. Uno striscio del materiale in esame viene preparato su un vetrino, fissato su una fiamma e trattato con siero di coniglio immune contenente anticorpi contro gli antigeni patogeni. Per formare un complesso antigene-anticorpo, il preparato viene posto in una camera umida e incubato a 37 ° C per 15 minuti, dopodiché viene accuratamente lavato con soluzione isotonica di cloruro di sodio per rimuovere gli anticorpi che non si sono legati all'antigene. Quindi si applica al farmaco un siero fluorescente di antiglobulina contro le globuline di coniglio, mantenuto per 15 minuti a 37 ° C, quindi il farmaco viene accuratamente lavato con una soluzione isotonica di cloruro di sodio. Come risultato del legame del siero antiglobulina fluorescente con anticorpi specifici fissati sull'antigene, si formano complessi luminosi antigene-anticorpo, che vengono rilevati mediante microscopia a luminescenza.

22. Test immunologico - metodo immunologico di laboratorio per la determinazione qualitativa o quantitativa di vari composti, macromolecole, virus, ecc., basato su una specifica reazione antigene-anticorpo. La rilevazione del complesso formato viene effettuata utilizzando un enzima come etichetta per la registrazione del segnale.

Classificazione:

Competitivo (sia il composto analizzato che il suo analogo sono presenti nel sistema)

Non competitivo (se il sistema contiene solo il composto analizzato ei corrispondenti siti di legame (antigene e anticorpi specifici))

Diretto e indiretto

1. Siero contenente una miscela di am, incubato con ag, fissato su un substrato solido.

2.at che non si legano vengono rimossi con lavaggi ripetuti.

3. Aggiungere un antisiero marcato con un enzima agli anticorpi leganti anti-Ag

4.determinare la quantità di enzima marker legato a at

Indiretto:

Siero positivo

1 ab specifico nel siero studiato bind ag fissato su un substrato solido

2.Gli anticorpi specifici, marcati con un enzima, non interagiscono con gli anticorpi legati; il contenuto del marker nel substrato è basso

Siero Ab negativo

1. Gli anticorpi non specifici nel siero studiato non legano gli anticorpi fissati su un substrato solido

2. Gli amminoacidi specifici etichettati con un enzima interagiscono con un antigene fisso - il contenuto del marker è alto

Il più comune è ifa in fase solida, in cui uno dei componenti della risposta immunitaria (antigene o anticorpo) viene assorbito su un veicolo solido. I micro pannelli di polistirolo vengono utilizzati come supporto solido. Quando si determinano gli anticorpi, il siero di sangue marcato con enzima e una miscela di soluzioni per l'enzima e il cromogeno vengono aggiunti in sequenza ai pozzetti con l'antigene assorbito. Ogni volta che si aggiunge il componente successivo, i reagenti non legati vengono rimossi dai pozzetti mediante lavaggio accurato. Se il risultato è positivo, il colore della soluzione cromogena cambia.

Un veicolo in fase solida può essere sensibilizzato non solo con un antigene, ma anche con un anticorpo. Quindi l'antigene desiderato viene aggiunto ai pozzetti con anticorpi adsorbiti, viene aggiunto il siero immunitario marcato con enzima contro l'antigene e quindi una miscela di soluzioni del substrato per l'enzima e il cromogeno.

Applicazione:per la diagnosi di malattie causate da patogeni virali e batterici.

23. Reazione sierologica - la reazione mediante la quale viene investigata la reazione di un antigene (microbo, virus, proteina estranea) con anticorpi di siero di sangue.

Test sierologici - Questi sono metodi per studiare determinati anticorpi o antigeni nel siero del sangue dei pazienti, in base alle risposte immunitarie. Con il loro aiuto, vengono rilevati anche antigeni di microbi o tessuti per identificarli.

La rilevazione di anticorpi contro l'agente infettivo o l'antigene corrispondente nel siero del sangue del paziente consente di stabilire la causa della malattia.

Gli studi sierologici vengono utilizzati anche per determinare gli antigeni dei gruppi sanguigni, gli antigeni dei tessuti e il livello dell'immunità umorale.

I test sierologici includono varie reazioni sierologiche:

1. Reazione di agglutinazione.

2. Reazione di precipitazione.

3. Reazione di neutralizzazione.

4. Reazione con la partecipazione del complemento.

5. Reazione utilizzando anticorpi o antigeni marcati.

Reazione di immunofluorescenza (RIF) - reazione sierologica, consentendo la rilevazione di anticorpi contro antigeni noti. Il metodo consiste nella microscopia di strisci colorati.

Questa reazione è utilizzata in immunologia, virologia e microbiologia. Consente di determinare la presenza di virus, batteri, funghi, protozoi e ICC. RIF è ampiamente utilizzato nella pratica diagnostica per rilevare antigeni virali e batterici in materiale infettivo. Il metodo si basa sulla capacità del fluorocromo di legarsi alle proteine \u200b\u200bsenza disturbare la loro specificità immunologica. Viene utilizzato principalmente nella diagnosi delle infezioni del tratto urinario.

Esistono i seguenti metodi per eseguire la reazione di immunofluorescenza: diretta, indiretta, con complemento. Il metodo diretto consiste nel colorare il materiale con fluorocromi. A causa della capacità degli antigeni di microbi o tessuti di brillare nei raggi UV di un microscopio a fluorescenza, sono definiti come cellule con un bordo verde dai colori vivaci.

Un metodo indiretto consiste nel determinare il complesso antigene + anticorpo. Per questo, il materiale di prova viene trattato con anticorpi di siero di coniglio antimicrobico destinato alla diagnostica. Dopo che gli anticorpi si legano ai microbi, vengono separati da quelli non legati e trattati con siero anti-coniglio marcato con fluorocromo. Successivamente, il complesso di microbo + anticorpi animicrobici + anticorpi anti-coniglio viene determinato utilizzando un microscopio ultravioletto allo stesso modo del metodo diretto.

La reazione di immunofluorescenza è indispensabile nella diagnosi della sifilide. Sotto l'influenza del fluorocromo, l'agente eziologico della sifilide è definito come una cellula con un bordo giallo-verde. La mancanza di luce significa che il paziente non è infetto dalla sifilide. Questo test viene spesso prescritto con una reazione positiva di Wasserman. Questo metodo è molto efficace nella diagnostica, poiché consente di identificare l'agente patogeno fasi iniziali malattie.

Oltre al fatto che RIF consente di diagnosticare la sifilide, viene anche utilizzato per determinare la presenza di agenti patogeni come clamidia, micoplasma, Trichomonas, nonché patogeni della gonorrea e dell'herpes genitale.

Per l'analisi vengono utilizzati strisci o sangue venoso. La procedura di striscio è completamente indolore e non rappresenta alcun pericolo. È necessario prepararsi per la consegna di questa analisi. Si sconsiglia di utilizzare prodotti per l'igiene come poco o gel dodici ore prima. Inoltre, a volte viene eseguita una provocazione secondo la testimonianza di un medico. Per questo, raccomandano di assumere cibo piccante o alcol o viene eseguita un'iniezione di una sostanza provocante, ad esempio un gonovaccino o pirogeno. Inoltre, l'intervallo tra l'assunzione farmaci antibatterici e la consegna delle analisi deve essere di almeno quattordici giorni.

Quando si valutano i risultati, si dovrebbe tener conto del fatto che la luminescenza si osserva non solo nei batteri viventi, ma anche in quelli morti, in particolare la clamidia. Dopo un ciclo di antibiotici, anche le cellule morte della clamidia si illuminano.

Con un'adeguata preparazione del paziente e l'aderenza alla tecnica di prendere uno striscio, questa analisi consente di identificare le malattie nelle prime fasi, il che è molto importante per un trattamento tempestivo. Lati positivi Questo metodo è un tempo breve per ottenere un risultato, facilità di implementazione e basso costo di analisi.

Gli svantaggi includono il fatto che per l'analisi è necessaria una quantità sufficientemente grande del materiale in esame. Inoltre, solo un tecnico esperto può valutare i risultati.

Per la prima volta offerto da Coombs nel 1942, il RIF si basa sulla rilevazione di antigeni in materiale clinico, preparazioni di cellule del sangue, ecc. Utilizzando anticorpi monoclonali o sieri marcati con fluorocromo (RIF diretto). I primi anticorpi (diagnostici) possono essere rilevati con siero anti-immunoglobulina marcato con fluorocromi (RIF indiretto). Esistono modifiche del RIF per la rilevazione di anticorpi contro agenti infettivi nel siero del sangue o anticorpi nel siero del sangue.

La popolarità del RIF si spiega con la sua economia, la presenza vasta gamma kit diagnostici, risposta rapida. Oggi, questa reazione utilizza sia sieri policlonali che anticorpi monoclonali marcati con isotiocianato di fluoresceina (FITC). Per ridurre la luminescenza di fondo aspecifica, i preparati vengono trattati con albumina di siero bovino marcato con rodamina o blu Evans.

Molto spesso, RIF viene utilizzato per rilevare rapidamente l'agente patogeno nel materiale patologico. In questo caso, uno striscio viene preparato dal materiale in esame su un vetrino, come per la microscopia convenzionale. Il farmaco viene fissato con alcool metilico, acetone o altri fissativi chimici. I sieri o gli anticorpi monoclonali marcati con FITC vengono applicati sulla superficie dello striscio fisso (nel caso di RIF indiretto, il farmaco viene prima trattato con siero contro l'antigene desiderato, quindi con anticorpi marcati contro le immunoglobuline utilizzati nella prima fase). Poiché RIF è una sorta di analisi eterogenea, una fase viene separata dall'altra mediante lavaggio.

I risultati della reazione vengono presi in considerazione utilizzando un microscopio luminescente, nel sistema ottico di cui è installato un set di filtri luminosi, fornendo illuminazione del preparato con luce ultravioletta o blu-violetta con una data lunghezza d'onda. Il ricercatore valuta la natura del bagliore, la forma, le dimensioni degli oggetti e la loro posizione relativa.

Quando si imposta il RIF per la rilevazione degli anticorpi, vengono preparati strisci dal ceppo di riferimento dell'agente patogeno. Il siero in esame viene applicato su uno striscio. Se gli anticorpi desiderati sono presenti in esso, si legano agli antigeni delle cellule microbiche. Il lavaggio della preparazione con una soluzione tampone rimuove gli anticorpi non legati. Quindi il farmaco viene trattato con siero marcato contro le immunoglobuline umane. In caso di risultato positivo della reazione durante la microscopia a striscio in un microscopio a fluorescenza, si osserva un bagliore specifico della coltura di riferimento.

Il principale svantaggio di RIF è la sua soggettività.

I criteri classici per la specificità di questa reazione sono:

· Morfologia caratteristica, dimensione e localizzazione dell'agente patogeno nello striscio;

· La natura periferica del bagliore dell'oggetto;

· Colore della fluorescenza;

· Intensità di fluorescenza.

Quando si studiano oggetti di grandi dimensioni (Trichomonas, cellule umane, cellule infettate da batteri o virus), questi criteri consentono di ottenere un risultato affidabile. Allo stesso tempo, i corpi elementari della clamidia e del micoplasma hanno dimensioni che giacciono al limite del potere risolutivo di un microscopio luminescente. In questo caso, la valutazione della morfologia dei microrganismi è difficile e il bagliore perde il suo carattere periferico. I restanti criteri sono chiaramente insufficienti per un'identificazione affidabile del microrganismo osservato. In relazione a quanto sopra, la natura soggettiva della contabilità di reazione impone requisiti speciali alle qualifiche del personale che conduce la ricerca.

2.2. Test immunologico a fluorescenza risolto nel tempo (FIA BP, Etkins R. et Wallac O., 1984)

Questo tipo di FIA si basa sui principi di assorbimento di uno dei reagenti sulla fase solida e sull'uso della tecnologia sandwich, ad es. doppio riconoscimento, simile a ELISA. Tuttavia, un'importante differenza del metodo è l'uso di chelati di lantanidi (elementi delle terre rare europio, samario, terbio e disprosio) come etichetta. I vantaggi del FIA VR sono la sua alta sensibilità, una tecnologia di staging simile a ELISA e il potenziale per un'amplificazione significativa del segnale utile a causa dell'elevatissimo rapporto segnale-rumore. Una specifica etichetta fluorescente emette una fluorescenza incommensurabilmente più forte e più lunga della fluorescenza di fondo. Inoltre, il tag ha la capacità di ripristinare la capacità di brillare (per la contabilizzazione, la radiazione di eccitazione pulsata con un periodo di 1 s - vengono utilizzati più di 1000 impulsi), che porta all'accumulo (amplificazione) del segnale utile. Il sistema descritto è realizzato dalla società PerkinElmer, USA, con il nome Delfia e ha una sensibilità di oltre 10 -17 M nella determinazione degli antigeni.

2.3. Citometria a flusso

Scoperta nel 1942 da Koons, la reazione di immunofluorescenza non è un nuovo metodo di ricerca. Tuttavia, l'emergere di tecnologie di ibridoma, che hanno permesso di ottenere anticorpi monoclonali, ha dato una "seconda vita" a questa reazione, poiché il loro utilizzo ha permesso più volte di aumentare la sensibilità di questa reazione e la sua specificità.

E oggi ti parleremo in dettaglio della reazione dell'immunofluorescenza diretta e indiretta (RIF) come metodo diagnostico Koons per uomini e donne adulti durante la gravidanza.

Cos'è una reazione di immunofluorescenza

Fornendo un'eccellente opportunità per ottenere rapidamente una diagnosi accurata, la reazione di immunofluorescenza consente di determinare la presenza dell'agente eziologico della malattia nel materiale patologico. Per questo, uno striscio viene utilizzato da un materiale che viene elaborato appositamente utilizzando FITC etichettato (isotiocianato di fluoresceina) e viene studiato come analisi eterogenea.

Per ottenere il risultato si utilizza un microscopio luminescente; nel suo sistema ottico è presente una serie di filtri di luce per fornire al preparato luce blu-violetta o ultravioletta di una data lunghezza d'onda. Questa condizione consente al fluorocromo di riflettere entro un determinato intervallo. Il ricercatore valuta le proprietà del bagliore, la sua natura, le dimensioni degli oggetti e la loro posizione relativa.

A chi è assegnato?

Un test di immunofluorescenza può essere utilizzato per diagnosticare una varietà di malattie virali. In particolare, è prescritto quando esame completo per identificare i seguenti fattori:

• la presenza di un virus nel corpo;
• infezione da salmonella;
• l'esistenza di alcuni antigeni nel corpo;
• viene rivelata la probabilità di infezione del corpo da clamidia, micoplasma e altri microrganismi che hanno la capacità di eccitare le malattie virali umane;
• diagnostica delle malattie virali negli animali.

Le indicazioni elencate consentono di utilizzare la reazione di immunofluorescenza nella rilevazione di malattie virali di varia natura nell'organismo umano e animale.

Obiettivi del

Poiché questo metodo diagnostico ha molti vantaggi, che dovrebbero includere la sua alta efficienza, la velocità di attuazione e l'ottenimento del risultato, nonché l'assenza di un gran numero di controindicazioni, determina la presenza nel corpo infezione virale... Pertanto, questa analisi può essere prescritta sia per impostare che per chiarire la diagnosi, sulla base della quale viene prescritto un regime di trattamento.

La procedura non provoca sensazioni spiacevoli, poiché è necessario ottenere materiale per l'analisi, che viene prelevato da qualsiasi fluido corporeo: saliva, espettorato, raschiamento dalla superficie delle mucose. Il sangue può anche essere prelevato per l'analisi. La frequenza della reazione di immunofluorescenza è prescritta dal medico curante, che deve ottenere dati sulla dinamica dei processi che si verificano nel corpo.

Poiché questa analisi non danneggia sia il corpo che il benessere generale di una persona, può essere prescritta secondo necessità.

Tipi di tale procedura

Oggi vengono utilizzate diverse varietà di questa analisi, ognuna delle quali ha un numero di caratteristiche specifiche e consente di ottenere il quadro più dettagliato dei processi che si verificano nel corpo.

I tipi di reazioni di immunofluorescenza includono:

1. - uno dei tipi di diagnostica in più rapido sviluppo, questa analisi consente di ottenere dati quantitativi senza l'uso di diluizioni seriali. Utilizzando le misurazioni ottenute della densità ottica del liquido, è possibile determinare con precisione il livello di concentrazione del componente desiderato. Le ampie possibilità di questo tipo di analisi vengono utilizzate quando si utilizzano anticorpi monoclonali per la sua implementazione, il che consente di determinare la fase del processo infettivo, la sua gravità;
2. Diagnostica del DNA - questo metodo si basa sul legame complementare dei nucleotidi, per i quali possono essere utilizzati fluidi come saliva, sangue, liquido cerebrospinale, urina, espettorato, biopsie, sangue. Questo metodo è più efficace nel rilevare la presenza di virus del papilloma nel corpo, tuttavia, molti sistemi di test moderni possono occasionalmente fornire risultati falsi positivi e falsi negativi. Possono essere causati dalla contaminazione di campioni liquidi per l'analisi di DNA specifico, la cui presenza può essere annidata o totale;
3. immunocromografia - la specificità di questo metodo per determinare la presenza di un ambiente patologico e di virus nel corpo consiste nell'uso di anticorpi etichettati durante la reazione. Questo metodo diagnostico viene utilizzato per rilevare e il grado di attività del processo di infezione da streptococchi di gruppo A, nonché clamidia dei seguenti tipi: Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia di Oxoid. Con la massima sensibilità possibile, testare i sistemi che si basano su questa metodologia di ricerca. sono solitamente usati come test di orientamento.

Le varietà elencate hanno caratteristiche di esecuzione e caratteristiche specifiche risultati, ma sono tutti finalizzati ad ottenere dati sulla presenza di microrganismi patologici e virus nell'organismo, nonché sul grado di riproduzione e attività.

Indicazioni per

La reazione di immunofluorescenza può essere prescritta per rilevare qualsiasi tipo di ambiente patologico nel corpo.

Durante questo tipo di diagnosi vengono determinati clamidia, trichomonas, gonococco e, così come lamblia di tutti i tipi. e, e anche altre malattie richiedono RIF. La nomina di un medico per la sua attuazione è obbligatoria.

Controindicazioni per

Poiché per eseguire questa reazione come materiale di prova è necessario qualsiasi tipo di fluido corporeo, il loro prelievo di solito non è difficile e non ci sono controindicazioni per l'attuazione della reazione di immunofluorescenza. Tuttavia, durante la gravidanza e nei bambini sotto i 6 mesi di età, il prelievo di materiale per la ricerca viene effettuato con le massime precauzioni.

L'assenza di controindicazioni consente di effettuare questo tipo di diagnosi quando un medico prescrive a tutti i pazienti. La sua sicurezza è garantita dall'utilizzo di strumenti disinfettati e siringhe monouso.

Preparazione per la procedura

Non ci sono peculiarità nel prendere materiale per questa analisi. Il sangue viene prelevato per lui a stomaco vuoto in modo che non ci sia alto contenuto in esso sostanze che possono cambiare letture vere e dare un'immagine falsa.

Com'è la raccolta dei test

Poiché non è richiesta una preparazione speciale per l'analisi, è esclusa solo l'assunzione di cibo 12 ore prima e l'assenza di utilizzo droghe, il campionamento del materiale di prova viene eseguito come un normale processo di prelievo del fluido corporeo per l'analisi.

I sentimenti soggettivi durante la procedura possono variare a seconda della sensibilità.

Decodificare i risultati

L'utilizzo di moderni sistemi di test consente di ottenere i risultati di analisi più accurati. I seguenti dati vengono utilizzati per decifrare il risultato:

• il grado di intensità della fluorescenza;
• tonalità di fluorescenza;
• la natura periferica del processo luminoso dell'oggetto;
• caratteristiche di morfologia, posizione del patogeno nello striscio prelevato del materiale di prova e sue dimensioni.

Durante lo studio di oggetti di grandi dimensioni (ad esempio gardenrella, Trichomonas, cellule già infettate da virus), i criteri sopra riportati consentono di ottenere i risultati più affidabili. Tuttavia, i corpi elementari di micoplasma e clamidia hanno dimensioni che si trovano al limite dei poteri risolutivi di un microscopio luminescente, il che rende difficile

non ottiene un risultato accurato, poiché il bagliore periferico perde parte della sua intensità. I restanti criteri non sono più sufficienti per identificare con precisione i microrganismi in esame. Per questo motivo, vengono imposti requisiti speciali agli specialisti che eseguono vista data ricerca: il livello delle loro qualifiche dovrebbe essere sufficiente per operare con i dati disponibili.

Per questo motivo solo un medico con il livello di qualifica appropriato può occuparsi della decodifica dell'analisi ottenuta. Leggi il prezzo della ricerca utilizzando il metodo RIF di seguito.

costo medio

Il costo della reazione di immunofluorescenza dipende dal luogo della sua attuazione e dal livello istituzione medica e anche le qualifiche dell'analista che conduce l'analisi. Oggi il costo varia da 1280 a 2160 rubli.

Il video qui sotto ti dirà di più sulle reazioni immunologiche: