Analisi P24. Valore prognostico della rilevazione dell'antigene p24 dell'HIV utilizzando sistemi di test con maggiore sensibilità analitica

Antigene dell'HIV: che cos'è, che ruolo gioca nella diagnosi?

La diagnosi del virus dell'immunodeficienza viene eseguita in vari modi. Tuttavia, i più popolari negli ultimi anni stanno guadagnando sistemi di test supersensibili. Con il loro aiuto, è possibile identificare questo disturbo nelle prime fasi. Per questo, viene utilizzato l'antigene dell'HIV, la cui presenza nel corpo è garantita per indicare una diagnosi spiacevole e pericolosa. Per rilevarlo vengono utilizzati diversi studi.

Perché la risposta antigene-anticorpo dell'HIV 1, 2 è l'indicatore più affidabile della presenza di un virus dell'immunodeficienza?

Controllo del virus dell'immunodeficienza nel governo istituzioni mediche è libero. Ma è fatto in due fasi, se necessario. Inizialmente, gli AG per l'HIV non vengono testati. La prima analisi per la presenza o l'assenza di una determinata malattia ha lo scopo di rilevare gli anticorpi. Questo è il test ELISA. Il test immunoassorbente legato all'enzima consente di identificare le persone che hanno la garanzia di non essere ammalate dal virus dell'immunodeficienza (se il test è stato eseguito secondo tutte le regole).

Oltre che condizionatamente infetto. Perché condizionatamente? Il fatto è che gli anticorpi contro l'HIV 1,2, a differenza dell'AH contro questo virus, sono secreti nel corpo per altri motivi. Di cosa si tratta esattamente. Prima di tutto, questo è possibile con le malattie del sistema immunitario. In caso di problemi con questo sistema vitale, il corpo, come difesa, produce anticorpi, che sono determinati dal dosaggio immunoenzimatico, come quelli che si manifestano con questa pericolosa malattia. Se il risultato ELISA è positivo, il paziente viene indirizzato a uno studio aggiuntivo, che si basa sul rilevamento della reazione AH - tipo AT 1,2. Nelle cliniche viene spesso utilizzato l'immun blotting. Questo è il tipo di test più comune per rilevare il virus dell'immunodeficienza. Con il suo aiuto, l'antigene e gli anticorpi contro l'HIV 1 e 2 non vengono solo rilevati, ma anche testati per la forza della reazione.

Cos'è l'antigene HIV p24?

Prima di parlare di quali metodi possono essere utilizzati per rilevare l'antigene hiv ag dell'HIV, è necessario spiegare di cosa si tratta. Gli scienziati sono stati a lungo in grado di scoprire che AG, che è etichettato come p24 nei moduli di prova e nei laboratori, è un capside di un retrovirus. A proposito di in parole semplici, è una proteina del virus dell'immunodeficienza. La determinazione dell'antigene dell'HIV è impossibile senza la rilevazione di anticorpi del primo e del secondo tipo. Dopotutto, gli AG sono strettamente legati agli anticorpi. Si formano nell'organismo come risposta immunitaria alla comparsa di anticorpi, i quali, a loro volta, sono una sorta di "invasori" volti a distruggere il sistema immunitario e produrre materiale biologico pericoloso.

АТ e АГ ai tipi di HIV 1 e 2 vengono rilevati in reazione l'uno con l'altro. I primi svolgono il ruolo di molecole estranee nel corpo umano. Questi ultimi servono come una sorta di sviluppatori di proteine \u200b\u200bo polisaccaridi. Nel caso del virus dell'immunodeficienza, l'AH induce una risposta immunitaria. Di conseguenza, nella medicina e nella scienza relative allo studio di questa malattia, sono classificati come immunogeni.

L'antigene P24 dei tipi di HIV 1 e 2 viene rilevato solo attraverso uno studio completo del materiale biologico. Molto spesso, il sangue venoso viene utilizzato per l'analisi. In alcuni casi, lo sperma o il liquido secretorio secreto dagli organi genitali femminili è adatto a questo. Analisi combinata per Antigene HIV prodotto in tre modi noti. Di quali studi specifici stiamo parlando? Si tratta di un immunosoppressore, un test combinato (HIV hiv combo) e un test di immunocemiluminescenza. Ciascuno di essi dovrebbe essere discusso separatamente.

Immune blotting: anticorpi e antigeni contro l'HIV 1 e 2

Come accennato in precedenza, l'immuno-blotting è uno dei test più comuni per rilevare l'antigene dell'HIV. Come viene prodotto? Inizialmente, il sangue viene prelevato dalla vena del paziente. L'esame viene eseguito a stomaco vuoto. Trenta - quaranta minuti prima di questo, il paziente non è consigliato di fumare. L'essenza dello studio sta nel fatto che se una persona ha un virus dell'immunodeficienza di tipo 1 o 2 nel corpo, la reazione antigene-anticorpo è persistente e inestricabile. Il materiale biologico del soggetto viene prima suddiviso in uno speciale reagente, quindi posto su una striscia, che, di regola, è un blister con celle di polistirolo. Come risultato dell'aggiunta di reagenti speciali, l'assistente di laboratorio scopre prima se si verificherà questa reazione e quindi, con l'aiuto di ripetuti lavaggi di sangue, trae conclusioni su quanto sia persistente. Ciò consente di capire se nel corpo è presente un virus dell'immunodeficienza, che in futuro è il fattore più importante per la diagnosi.

Si raccomanda di eseguire il test per l'HIV AG-AT, prodotto mediante immunostimolazione, non prima di quattro-cinque settimane dopo la presunta infezione. Nonostante questo test sia un sistema di quarta generazione, non è ipersensibile e presenta un errore di diversi punti percentuali (da due a tre).

Analisi ipersensibile: anticorpi anti-HIV duo anti-HIV (combo) di tipo 1, 2

Il test combinato HIV (hiv) ag-ab (AG-AT), a differenza dell'immun blotting, è ipersensibile. Esperti medici affermano che il suo utilizzo è consigliabile già due settimane dopo la presunta infezione. È finalizzato allo studio di anticorpi specifici, che sono una sorta di risposta immunitaria del corpo umano a un invasore come il virus dell'immunodeficienza, nonché p24 AG. Anche gli anticorpi HIV duo di tipo 1 e 2 hanno lo scopo di rilevare gli anticorpi contro questo pericoloso disturbo. Con il suo aiuto, è possibile non solo rilevarli nel sangue, ma anche determinare il tipo di malattia.

Il test combinato dell'antigene dell'HIV è un test combinato. Controlla anche la reazione antigene-anticorpo, che indica la presenza di una terribile malattia nel corpo.

Test di immunocemiluminescenza: hiv 1,2 combo HIV AT-AG IHLA

Anche il test IHLA per l'HIV at-ag è ipersensibile. Tale studio si basa su una sorta di reazione AG-AT. La specificità del metodo è di circa il novantadue percento, mentre la sua affidabilità varia da novantotto a novantanove. Da ciò possiamo concludere che tale analisi ha un errore, ma è relativamente piccolo. E, se necessario, può essere facilmente coperto con un controllo ripetuto. Tale analisi viene applicata già due o tre settimane dopo la presunta infezione.

Questo test HIV combinato ha lo scopo di esaminare il sangue venoso, nel caso di controllo della presenza di un virus dell'immunodeficienza nel corpo. Quando vengono rilevate altre malattie e patologie, viene utilizzata l'urina o il liquido secretorio, che viene secreto dai genitali. Anche AT e AG al virus dell'immunodeficienza nell'IHLA vengono testati per la reazione. Per questo, vengono utilizzati reagenti speciali e strisce con cellule. Uno studio condotto in più fasi consente di stabilire una diagnosi in modo rapido e accurato o di confutarla.

Tutti i metodi di cui sopra per diagnosticare il virus dell'immunodeficienza mediante una reazione AT-AG persistente sono efficaci. Differiscono solo in termini di tempo di ricerca consentito. Spetta al medico decidere quale metodo utilizzare.

Test per HIV / AIDS - antigene p24 nel sangue

L'antigene p24 è assente nel siero.

L'antigene p24 è una proteina della parete nucleotidica dell'HIV. Lo stadio delle manifestazioni primarie dopo l'infezione da HIV è una conseguenza dell'inizio del processo replicativo. L'antigene p24 appare nel sangue 2 settimane dopo l'infezione e può essere rilevato da ELISA nel periodo da 2 a 8 settimane. Dopo 2 mesi dall'inizio dell'infezione, l'antigene p24 scompare dal sangue. Più tardi in decorso clinico Le infezioni da HIV segnano un secondo aumento dei livelli di proteina p24 nel sangue. Cade sulla formazione dell'AIDS.

I sistemi di test ELISA esistenti per la rilevazione dell'antigene p24 vengono utilizzati per la diagnosi precoce dell'HIV nei donatori di sangue e nei bambini, per determinare la prognosi del decorso della malattia e monitorare la terapia. Il metodo ELISA ha un'elevata sensibilità analitica, che consente la rilevazione dell'antigene p24 dell'HIV-1 nel siero del sangue a concentrazioni di 5-10 pkg / ml e inferiori a 0,5 ng / ml di HIV-2, e specificità. Allo stesso tempo, va notato che il contenuto dell'antigene p24 nel sangue è soggetto a variazioni individuali, il che significa che solo il 20-30% dei pazienti può essere rilevato utilizzando questo studio in primo periodo dopo l'infezione.

Gli anticorpi contro l'antigene p24 delle classi IgM e IgG compaiono nel sangue a partire dalla 2a settimana, raggiungono un picco entro 2-4 settimane e rimangono a questo livello per diverse volte - Gli anticorpi IgM per diversi mesi, scompaiono entro un anno dall'infezione, e gli anticorpi IgG possono durare anni.

Editor esperto medico

Alexey Portnov

Formazione scolastica: Università medica nazionale di Kiev. AA. Bogomolets, specialità - "Medicina generale"

Metodi per diagnosticare l'infezione da HIV

Attualmente, le nuove tecnologie diagnostiche consentono di identificare le cause eziologiche e patogenetiche di molte malattie e influenzano radicalmente i risultati del trattamento. Forse i risultati più impressionanti dell'introduzione di queste tecnologie nella pratica clinica sono stati raggiunti nel campo dell'immunologia e della diagnostica. malattie infettive.

I sistemi di test basati sul dosaggio immunoenzimatico e sull'analisi di immunocemiluminescenza consentono la rilevazione di anticorpi di varie classi, il che aumenta significativamente il contenuto informativo dei metodi di sensibilità clinica, analitica e specificità per la diagnosi di malattie infettive. Va notato che i progressi più significativi nella diagnosi delle infezioni sono associati all'introduzione del metodo della reazione a catena della polimerasi nella pratica di laboratorio, che è considerato il "gold standard" nella diagnosi e nella valutazione dell'efficacia del trattamento di una serie di malattie infettive.

Per lo studio possono essere utilizzati vari materiali biologici: siero, plasma sanguigno, raschiatura, biopsia, pleurica o liquido cerebrospinale (CSF). Prima di tutto, i metodi diagnostica di laboratorio le infezioni hanno lo scopo di identificare malattie come epatite virale B, C, D, infezione da citomegalovirus, infezioni a trasmissione sessuale (gonorrea, clamidia, micoplasma, ureaplasma), tubercolosi, infezione da HIV, ecc.

Infezione da HIV - una malattia causata dal virus dell'immunodeficienza umana (HIV), a lungo persistendo nei linfociti, nei macrofagi, nelle cellule del tessuto nervoso, a seguito dei quali un danno lentamente progressivo al sistema immunitario e sistemi nervosi organismo, manifestato da infezioni secondarie, tumori, encefalite subacuta e altri cambiamenti patologici.

Gli agenti causali dell'infezione - virus dell'immunodeficienza umana del 1 ° e 2 ° tipo (HIV-1, HIV-2) - appartengono alla famiglia dei retrovirus, la sottofamiglia dei virus lenti. I virioni sono particelle sferiche di 100-140 nm di diametro. La particella virale ha un involucro fosfolipidico esterno contenente glicoproteine \u200b\u200b(proteine \u200b\u200bstrutturali) con un certo peso molecolare misurato in kilodaltons. Nell'HIV-1, questi sono gpl60, gpl20, gp41. L'involucro interno del virus che copre il nucleo è anche rappresentato da proteine \u200b\u200bcon un peso molecolare noto - p17, p24, p55 (l'HIV-2 contiene gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Il genoma dell'HIV include l'RNA e l'enzima trascrittasi inversa (trascrittasi inversa). Affinché il genoma del retrovirus si connetta con il genoma della cellula ospite, il DNA viene prima sintetizzato sul modello di RNA virale utilizzando la trascrittasi inversa. Quindi il DNA del provirus viene inserito nel genoma della cellula ospite. L'HIV ha una variabilità antigenica pronunciata che è molto superiore a quella del virus dell'influenza.

Nel corpo umano, l'obiettivo principale dell'HIV sono i linfociti T, che trasportano il maggior numero di recettori CD4 sulla superficie. Dopo che l'HIV è penetrato nella cellula con l'aiuto della revertasi, seguendo il modello del suo RNA, il virus sintetizza il DNA, che è incorporato nell'apparato genetico della cellula ospite (linfociti CD4) e vi rimane per tutta la vita in uno stato di provirus. Oltre ai linfociti T helper, sono colpiti i macrofagi, i linfociti B, le cellule della neuroglia, la mucosa intestinale e alcune altre cellule. La ragione della diminuzione del numero di linfociti T (cellule CD4) non è solo l'effetto citopatico diretto del virus, ma anche la loro fusione con cellule non infette. Insieme alla sconfitta dei linfociti T nei pazienti con infezione da HIV, si osserva l'attivazione policlonale dei linfociti B con un aumento della sintesi delle immunoglobuline di tutte le classi, in particolare IgG e IgA, e il successivo esaurimento di questa parte del sistema immunitario. La regolazione alterata dei processi immunitari si manifesta anche con un aumento del livello di α-interferone, β2-microglobulina e una diminuzione del livello di IL-2. Come conseguenza della disfunzione del sistema immunitario, soprattutto quando il numero di linfociti T (CD4) diminuisce a 400 cellule in 1 μl di sangue o meno, si verificano condizioni per la replicazione incontrollata dell'HIV con un aumento significativo del numero di virioni in vari ambienti del corpo. Come risultato della sconfitta di molte parti del sistema immunitario, una persona infetta da HIV diventa indifesa contro gli agenti patogeni di varie infezioni.

Sullo sfondo dell'aumento dell'immunosoppressione, si sviluppano gravi malattie progressive che non si verificano in una persona con un funzionamento normale sistema immunitario... Si tratta di malattie che l'Organizzazione mondiale della sanità (OMS) ha definito come malattie marker o indicatori dell'AIDS.

Il primo gruppo - malattie inerenti solo all'immunodeficienza grave (CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Il secondo gruppo - malattie che possono svilupparsi sia sullo sfondo di una grave immunodeficienza, sia in alcuni casi senza di essa.

Pertanto, in questi casi, è necessaria la conferma di laboratorio della diagnosi.

• candidosi dell'esofago, trachea, bronchi;
• criptococcosi extrapolmonare;
• criptosporidiosi con diarrea per più di 1 mese;
• lesioni da citomegalovirus di vari organi diversi dal fegato, milza o linfonodi in un paziente di età superiore a 1 mese;
• un'infezione causata dal virus dell'herpes simplex, manifestata da ulcere sulla pelle e sulle mucose, che persistono per più di 1 mese, nonché bronchite, polmonite o esofagite di qualsiasi durata, che colpiscono un paziente di età superiore a 1 mese;
• sarcoma di Kaposi generalizzato in pazienti di età inferiore ai 60 anni;
• linfoma del cervello (primario) in pazienti di età inferiore ai 60 anni;
• polmonite interstiziale linfocitica e / o displasia linfoide polmonare nei bambini sotto i 12 anni di età;
• infezione disseminata causata da micobatteri atipici (mycobacterium complex M. aviumintracellulare) con localizzazione extrapolmonare o localizzazione (oltre ai polmoni) nella pelle, linfonodi cervicali, linfonodi delle radici dei polmoni;
• polmonite da pneumocystis;
• leucoencefalopatia multifocale progressiva;
• toxoplasmosi del cervello in pazienti di età superiore a 1 mese.

• infezioni batteriche, combinate o ricorrenti, nei bambini di età inferiore ai 13 anni (più di due casi in 2 anni di osservazione): sepsi, polmonite, meningite, danni alle ossa o alle articolazioni, ascessi causati da bastoncini emofilici, streptococchi;
• coccidioidomicosi disseminata (localizzazione extrapolmonare);
• Encefalopatia da HIV (demenza da HIV, demenza da AIDS);
• istoplasmosi con diarrea persistente per più di 1 mese;
• isosporosi con diarrea persistente per più di 1 mese;
• sarcoma di Kaposi a qualsiasi età;
• linfoma del cervello (primario) in persone di qualsiasi età;
• altri linfomi a cellule B (ad eccezione della malattia di Hodgkin) o linfomi di immunofenotipo sconosciuto: linfomi a piccole cellule (come il linfoma di Burkitt, ecc.); sarcomi immunoblastici (linfomi immunoblastici, a grandi cellule, istiocitici diffusi, diffusi indifferenziati);
• micobatteriosi disseminata (non tubercolosi) con lesioni oltre ai polmoni della pelle, ai linfonodi cervicali o ilari;
• tubercolosi extrapolmonare (con danni agli organi interni, oltre ai polmoni);
• setticemia da salmonella, ricorrente;
• Distrofia da HIV (esaurimento, drammatica perdita di peso).

Esistono molte classificazioni dell'AIDS.

Secondo la nuova classificazione proposta dai Centri statunitensi per il controllo delle malattie (Tabella 2 - si veda il link alla fonte sopra), la diagnosi di AIDS è stabilita in persone con una conta delle cellule CD4 inferiore a 200 / μL, anche in assenza di malattie indicatore dell'AIDS.

La categoria B comprende varie sindromi, le più importanti delle quali sono angiomatosi bacillare, candidosi orofaringea, candidosi vulvovaginale ricorrente, difficile da trattare, displasia cervicale, carcinoma cervicale, porpora trombocitopenica idiopatica, listeriosi, neuropatia periferica.

Anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 nel sangue

Gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 sono normalmente assenti nel siero del sangue.

La determinazione degli anticorpi contro l'HIV è il metodo principale per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Il metodo si basa sul test ELISA (enzima-linked immunosorbent assay): la sensibilità è superiore al 99,5%, la specificità è superiore al 99,8%. Gli anticorpi anti-HIV compaiono nel 90–95% delle persone infette entro 1 mese dall'infezione, nel 5–9% - dopo 6 mesi, nello 0,5–1% - in un secondo momento. Nella fase dell'AIDS, il numero di anticorpi può diminuire fino a scomparire completamente.

Il risultato della ricerca si esprime qualitativamente: positivo o negativo.

Un risultato negativo del test indica l'assenza di anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 nel siero del sangue. Il laboratorio emette un risultato negativo immediatamente quando è pronto. Al ricevimento di un risultato positivo - rilevamento di anticorpi contro l'HIV - per evitare risultati falsi positivi in \u200b\u200blaboratorio, l'analisi viene ripetuta altre 2 volte.

Immunoblotting per gli anticorpi contro le proteine \u200b\u200bvirali dell'HIV nel siero del sangue

Gli anticorpi contro le proteine \u200b\u200bvirali dell'HIV sono normalmente assenti nel siero del sangue.

Il metodo ELISA per la determinazione degli anticorpi contro l'HIV è un metodo di screening. Quando si ottiene un risultato positivo, per confermarne la specificità, si utilizza il metodo di immunoblotting - Western-blot - contro precipitazione in gel di anticorpi nel siero del paziente con varie proteine \u200b\u200bvirali, separate per peso molecolare mediante elettroforesi e applicate su nitrocellulosa. Vengono determinati gli anticorpi contro le proteine \u200b\u200bvirali gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17, ecc.

Secondo le raccomandazioni del Centro russo per la prevenzione e il controllo dell'AIDS, il rilevamento di anticorpi contro una delle glicoproteine \u200b\u200bgp41, gpl20, gpl60 dovrebbe essere considerato un risultato positivo. Se vengono rilevati anticorpi contro altre proteine \u200b\u200bdel virus, il risultato è considerato dubbio, tale paziente deve essere esaminato due volte, dopo 3 e 6 mesi.

L'assenza di anticorpi contro specifiche proteine \u200b\u200bdell'HIV significa che il dosaggio immunoenzimatico ha dato un risultato falso positivo. Allo stesso tempo, nel lavoro pratico, nel valutare i risultati del metodo del Western blotting, è necessario lasciarsi guidare dalle istruzioni fornite dall'azienda al "Kit per Western blotting" utilizzato.

Il metodo immunoblotting viene utilizzato per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV.

Antigene P24 nel siero

L'antigene p24 è assente nel siero del sangue.

L'antigene p24 è una proteina della parete nucleotidica dell'HIV. Lo stadio delle manifestazioni primarie dopo l'infezione da HIV è una conseguenza dell'inizio del processo replicativo. L'antigene p24 appare nel sangue 2 settimane dopo l'infezione e può essere rilevato da ELISA nel periodo da 2 a 8 settimane. Dopo 2 mesi dal momento dell'infezione, l'antigene p24 scompare dal sangue. Successivamente, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, si osserva un secondo aumento del contenuto di proteina p24 nel sangue. Cade sulla formazione dell'AIDS. I sistemi di test ELISA esistenti per la rilevazione dell'antigene p24 vengono utilizzati per la diagnosi precoce dell'HIV nei donatori di sangue e nei bambini, per determinare la prognosi del decorso dell'AIDS e per il monitoraggio della terapia nei pazienti affetti da AIDS. ELISA ha un'elevata sensibilità analitica, che consente di rilevare l'antigene p24 dell'HIV-1 nel siero del sangue a una concentrazione di 5-10 pkg / ml e l'HIV-2 - inferiore a 0,5 ng / ml e la specificità. Tuttavia, va notato che il livello dell'antigene p24 nel sangue è soggetto a variazioni individuali, il che significa che solo il 20-30% dei pazienti può essere rilevato utilizzando questo studio nel primo periodo dopo l'infezione (Rose N.R. et al., 1997).

Gli anticorpi contro l'antigene p24 delle classi IgM e IgG compaiono nel sangue dalla 2a settimana, raggiungono un picco entro 2-4 settimane e rimangono a questo livello per varie volte: Anticorpi IgM - per diversi mesi, scompaiono entro un anno dall'infezione, e gli anticorpi IgG possono durare anni.

L'algoritmo per la diagnosi dell'infezione da HIV dipende dalla fase della malattia ed è caratterizzato da un cambiamento nella dinamica degli anticorpi di rilevamento di varie classi (Fig.1, 2 - vedere il collegamento alla fonte sopra).

Il risultato della ricerca è espresso qualitativamente - positivo o negativo. Un risultato negativo del test indica l'assenza di anticorpi contro l'HIV-1 e l'antigene HIV-2 e p24 nel siero del sangue.

Il laboratorio emette un risultato negativo immediatamente quando è pronto. Alla ricezione di un risultato positivo - rilevamento di anticorpi contro HIV-1 e HIV-2 e / o antigene p24 - per evitare risultati falsi positivi in \u200b\u200blaboratorio, l'analisi viene ripetuta altre 2 volte.

Indipendentemente dai risultati dei test ottenuti, il campione di sangue del paziente ei risultati di 3 test vengono inviati dal laboratorio al centro regionale per l'AIDS per confermare un risultato positivo o per verificare un risultato non definito. In questi casi, il centro regionale per l'AIDS fornirà la risposta finale a questo sondaggio.

Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi (qualitativa)

Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi - PCR (qualitativamente) viene eseguita al fine di:

• risoluzione di risultati discutibili di studi di immunoblotting;
• per la diagnosi precoce dell'infezione da HIV;
• monitoraggio dell'efficacia del trattamento antivirale;
• determinare lo stadio della malattia da AIDS (transizione dall'infezione alla malattia).

In caso di infezione primaria da HIV, il metodo PCR consente di rilevare l'HIV RNA nel sangue già 10-14 giorni dopo l'infezione.

Il risultato della ricerca si esprime qualitativamente: positivo o negativo. Un risultato negativo del test indica l'assenza di HIV RNA nel sangue.

Un risultato positivo - il rilevamento dell'HIV RNA - indica che il paziente è infetto.

Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi (quantitativa)

L'HIV è normalmente assente nel sangue.

La quantificazione diretta dell'HIV RNA mediante PCR consente una stima più accurata del tasso di sviluppo dell'AIDS nelle persone infette da HIV rispetto alla determinazione della conta delle cellule CD4, e quindi una valutazione più accurata della loro sopravvivenza. Un numero elevato di particelle virali di solito è correlato a uno stato immunitario gravemente compromesso e con un basso numero di cellule CD4. Un basso numero di particelle virali è generalmente correlato a un migliore stato immunitario e a una maggiore conta delle cellule CD4. Il contenuto di RNA virale nel sangue consente di prevedere la transizione della malattia allo stadio clinico. Quando il contenuto di HIV RNA-1 è\u003e copie / ml, quasi tutti i pazienti si sviluppano quadro clinico AIDS (Senior D., Holden E., 1996).

Gli individui con HIV-1 nel sangue\u003e copie / ml hanno una probabilità 10,8 volte maggiore di sviluppare l'AIDS rispetto a quelli con sangue HIV-1<копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Un'indicazione per il trattamento dei pazienti affetti da HIV è stata sviluppata da un gruppo di esperti statunitensi. Il trattamento è indicato per i pazienti con conta delle cellule CD4 nel sangue<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >copie / ml (PCR). La valutazione dei risultati della terapia antiretrovirale nelle persone infette da HIV viene effettuata riducendo il livello sierico di HIV RNA.

Con un trattamento efficace, il livello di viremia dovrebbe diminuire di 10 volte durante le prime 8 settimane ed essere al di sotto del limite di rilevamento del metodo (PCR) (<500 копий/мл) через 4–6 месяцев после начала терапии.

Così, ad oggi, molti metodi di ricerca sono stati introdotti e utilizzati nella pratica clinica per la diagnosi dell'infezione da HIV, come per tutte le altre infezioni virali. Tra questi, il ruolo principale è dato alla ricerca sierologica. I metodi principali per la diagnosi delle infezioni da HIV sono presentati nella Tabella 3 (vedere il collegamento alla fonte sopra), dove sono suddivisi in base all'importanza di ciascun metodo per rilevare i virus in quattro livelli:

• A - il test viene solitamente utilizzato per confermare la diagnosi;
• B - il test è utile in determinate circostanze per la diagnosi di alcune forme di infezione;
• C - il test è usato raramente per scopi diagnostici, ma è di grande importanza per le indagini epidemiologiche;
• D - il test non viene solitamente utilizzato dai laboratori per scopi diagnostici.

Poiché per la diagnosi delle infezioni virali, oltre a scegliere il metodo di analisi ottimale, è altrettanto importante identificare e prendere correttamente un biomateriale per la ricerca, la Tabella 4 (vedere il link alla fonte sopra) fornisce raccomandazioni per la scelta del biomateriale ottimale per la ricerca dell'infezione da HIV.

Per monitorare l'infezione da HIV, si dovrebbero utilizzare le capacità di uno studio completo dello stato immunitario - determinazione quantitativa e funzionale di tutti i suoi collegamenti: umorale, immunità cellulare e resistenza aspecifica in generale.

Nelle moderne condizioni di laboratorio, il principio multistadio della valutazione dello stato immunologico include la determinazione di una sottopopolazione di linfociti, immunoglobuline del sangue. Quando si valutano gli indicatori, si deve tenere presente che l'infezione da HIV è caratterizzata da una diminuzione del rapporto delle cellule T CD4 / CD8 inferiore a 1. L'indice CD4 / CD8 1,5-2,5 indica uno stato normale, più di 2,5 indica iperattività, meno 1.0 - indica immunodeficienza. Inoltre, il rapporto CD4 / CD8 può essere inferiore a 1 nell'infiammazione grave.

Questo rapporto è di fondamentale importanza nella valutazione del sistema immunitario nei pazienti con AIDS, perché l'HIV infetta e distrugge selettivamente i linfociti CD4, per cui il rapporto CD4 / CD8 scende a valori significativamente inferiori a 1.

La valutazione dello stato immunologico si basa anche sull'identificazione di difetti generali o "grossolani" nel sistema di immunità cellulare e umorale: ipergammaglobulinemia (aumentata concentrazione di IgA, IgM, IgG) o ipogammaglobulinemia allo stadio terminale; un aumento della concentrazione di immunocomplessi circolanti; diminuzione della produzione di citochine; indebolimento della risposta dei linfociti ad antigeni e mitogeni.

La violazione del rapporto tra le popolazioni nel pool totale di linfociti B è caratteristica di un'immunità umorale insufficiente. Tuttavia, questi cambiamenti non sono specifici per l'infezione da HIV e possono verificarsi anche in altre malattie. In una valutazione completa di una serie di altri parametri di laboratorio, va tenuto presente che l'infezione da HIV è anche caratterizzata da: anemia, linfa e leucopenia, trombocitopenia, aumento del livello di β2-microglobulina e proteina C-reattiva, aumento dell'attività delle transaminasi nel siero del sangue.

Antigene P24 nel siero

L'ag p24 in siero è assente nella norma.

Ag p24 è una proteina della parete nucleotidica dell'HIV. Lo stadio delle manifestazioni primarie dopo l'infezione da HIV è una conseguenza dell'inizio del processo replicativo. Ag p24 appare nel sangue 2 settimane dopo l'infezione e può essere rilevato da ELISA nel periodo da 2 a 8 settimane. 2 mesi dopo l'inizio dell'infezione, l'Ag p24 scompare dal sangue. Successivamente, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, si osserva un secondo aumento del contenuto di proteina p24 nel sangue. Cade sulla formazione dell'AIDS. I sistemi di test ELISA esistenti per la rilevazione dell'Ag p24 vengono utilizzati per la diagnosi precoce dell'HIV nei donatori di sangue e nei bambini, per determinare la prognosi del decorso della malattia e per il monitoraggio della terapia. Il metodo ELISA ha un'elevata sensibilità analitica, che rende possibile rilevare l'HIV-1 p24 Ag nel siero del sangue a concentrazioni di 5-10 pg / ml e meno di 0,5 ng / ml di HIV-2 e la specificità. Allo stesso tempo, va notato che il contenuto di Ag p24 nel sangue è soggetto a variazioni individuali, il che significa che solo il 20-30% dei pazienti può essere rilevato utilizzando questo studio nel primo periodo dopo l'infezione.

Gli anticorpi IgM e IgG anti-Ag p24 compaiono nel sangue a partire dalla 2a settimana, raggiungono un picco entro 2-4 settimane e rimangono a questo livello per tempi diversi - Gli anticorpi IgM per diversi mesi, scompaiono entro un anno dall'infezione, e gli anticorpi IgG possono persistere per anni.

L'aspetto delle classi AT in diversi stadi dell'infezione da HIV è mostrato in Fig.

Figura: Aspetto delle classi AT in vari stadi dell'infezione da HIV

Anticorpi anti-HIV 1 e 2 e antigene HIV 1 e 2 (HIV Ag / Ab Combo)

Anticorpi anti-HIV 1 e 2 e antigene HIV 1 e 2 (HIV Ag / Ab Combo): una descrizione completa della diagnosi, indicazioni per l'implementazione, interpretazione dei risultati.

Gli anticorpi contro l'HIV 1 e 2 e l'antigene HIV 1 e 2 (HIV Ag / Ab Combo) sono anticorpi che si formano nel corpo durante l'infezione con il virus dell'immunodeficienza umana.

Il virus dell'immunodeficienza umana (HIV) è un membro della famiglia dei retrovirus e danneggia le cellule del sistema immunitario. Il virus è di due tipi, l'HIV-1 è più comune, l'HIV-2, principalmente nei paesi africani.

L'HIV è incorporato nelle cellule umane, le particelle virali si moltiplicano, di conseguenza, sulla superficie cellulare compaiono antigeni virali, a cui vengono prodotti gli anticorpi corrispondenti. Il loro rilevamento nel sangue consente di diagnosticare l'infezione da HIV.

Gli anticorpi del virus dell'immunodeficienza umana possono essere rilevati da tre a sei settimane dopo che il virus è entrato nel flusso sanguigno. Un forte aumento del virus nel sangue è caratteristico dello stadio delle manifestazioni primarie, questo periodo cade dalla terza alla sesta settimana dal momento dell'infezione ed è chiamato "sieroconversione". In questo momento, l'infezione può essere rilevata dal laboratorio e clinicamente non si manifesta affatto o procede come una malattia fredda con linfonodi ingrossati.

Dopo 12 settimane dal momento dell'infezione, gli anticorpi si trovano in quasi tutti i pazienti. Nell'ultimo stadio della malattia, chiamato AIDS, il numero di anticorpi diminuisce.

Quanto tempo dal momento dell'infezione verrà rilevata l'infezione da HIV dipende dal sistema di test utilizzato in un particolare laboratorio. I sistemi di test combinati di quarta generazione rilevano l'infezione da HIV due settimane dopo che il virus è entrato nel flusso sanguigno. E i sistemi di test di prima generazione hanno rilevato l'HIV solo dopo 6-12 settimane.

Quando si esegue un'analisi combinata, è possibile rilevare l'antigene dell'HIV p24, che è il capside del virus. Viene rilevato nel sangue 1-4 settimane dopo l'infezione, anche prima che la concentrazione di anticorpi nel sangue aumenti (prima della "sieroconversione"). Inoltre, lo studio combinato rivela gli anticorpi contro l'HIV-1, HIV-2, disponibili per la diagnosi da due a otto settimane dopo l'infezione.

Prima della sieroconversione, nel sangue vengono rilevati sia p24 che anticorpi anti-HIV-1 e HIV-2. Dopo la sieroconversione, gli anticorpi si legano all'antigene p24, quindi la p24 non viene rilevata e vengono rilevati gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2. Quindi, p24 e gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 vengono nuovamente rilevati nel sangue. Quando una persona con infezione da HIV sviluppa l'AIDS, la produzione di anticorpi è compromessa, quindi gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 potrebbero non essere presenti.

La diagnosi dell'infezione da HIV viene effettuata nella fase di pianificazione della gravidanza e con l'attuale osservazione di una donna incinta, poiché l'infezione da HIV può essere trasmessa dalla donna al feto durante la gravidanza, il parto e l'allattamento.

Indicazioni per la diagnostica dell'HIV

Sesso occasionale.

Febbre senza motivo oggettivo.

Linfonodi ingrossati in diverse aree anatomiche.

Preparazione per la ricerca

Il test HIV viene eseguito 3-4 settimane dopo la presunta infezione. Se il risultato è negativo, il test viene ripetuto dopo tre e sei mesi.

Dall'ultimo pasto al prelievo di sangue, l'intervallo di tempo dovrebbe essere superiore a otto ore.

Alla vigilia, escludere i cibi grassi dalla dieta, non assumere bevande alcoliche.

Non fumare 1 ora prima dell'esame del sangue.

Il sangue per la ricerca viene prelevato al mattino a stomaco vuoto, anche il tè o il caffè sono esclusi.

È consentito bere acqua naturale.

Materiale di ricerca

Decodificare i risultati della diagnostica dell'HIV

L'analisi è qualitativa. Se non vengono trovati anticorpi contro l'HIV, la risposta è "negativa".

Se vengono rilevati anticorpi contro l'HIV, il test viene ripetuto con una serie diversa di test. Un risultato positivo ripetuto richiede uno studio con il metodo immunoblot, il "gold standard" della diagnostica dell'HIV.

1. La persona non è infetta da HIV.
2. Stadio terminale dell'infezione da HIV (AIDS).
3. Variante sieronegativa dell'infezione da HIV (formazione tardiva di anticorpi contro l'HIV).

1. La persona è infetta da HIV.
2. Il test non è informativo nei bambini di età inferiore a un anno e mezzo, nati da madri con infezione da HIV.
3. Un risultato falso positivo in presenza di anticorpi nel sangue contro il virus Epstein-Barr, il principale complesso di istocompatibilità e il fattore reumatoide.

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