Diagnosi di infezione da HIV. Antigene P24 che cos'è l'analisi p24
L'urgenza di identificare le persone con infezione da HIV nelle prime fasi dell'infezione è dovuta alla necessità di un'indagine epidemiologica più efficace, organizzazione tempestiva delle necessarie misure preventive tra le persone di contatto, nonché possibile applicazione terapia antiretrovirale a ciclo breve per abbassare la carica virale e migliorare la prognosi. Informare tempestivamente il paziente sull'infezione aiuta a ridurre il rischio di trasmissione della malattia e la sua possibile partecipazione alla donazione.
La diagnosi di infezione da HIV prima della comparsa di un risultato positivo di immunocromia (IB) è confermata dal rilevamento dell'antigene p24 e / o dell'acido nucleico dell'HIV nel siero del sangue del paziente.
La determinazione dell'antigene p24 mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) è un modo semplice ed economico per dimostrare la presenza di una proteina virale nel sangue di un paziente a causa della replicazione virale intensiva nelle prime settimane dopo l'infezione. Il test dell'antigene p24 è disponibile per i laboratori con capacità ELISA di routine. Rispetto alla determinazione della carica virale con il metodo della reazione a catena della polimerasi, è meno costoso e laborioso. Nonostante sia nota la strategia per rilevare l'infezione nel periodo sieronegativo, questo test non è stato ancora incluso nell'algoritmo per la diagnosi dell'HIV. È noto che la percentuale più alta di rilevamento di p24 si osserva nei sieri con risultati IB discutibili. Tuttavia, è stato dimostrato che i sistemi di test con una soglia analitica di sensibilità standard (10 pg / ml) hanno una sensibilità diagnostica e un valore predittivo insufficienti della p24 rilevata per l'inclusione nel processo diagnostico di routine. A questo proposito, lo sviluppo e l'implementazione di un sistema di test per l'antigene p24 con maggiore sensibilità analitica è di grande interesse.
Lo scopo del lavoro è valutare il significato prognostico della rilevazione dell'antigene p24 dell'HIV utilizzando sistemi di test con soglie differenti sensibilità analitica in persone con risultati dubbi di IB.
In uno studio retrospettivo sui sieri con un risultato indefinito per gli anticorpi anti-HIV nell'IB, l'uso di un sistema di test per l'antigene p24 con una soglia di sensibilità analitica di 0,5 pg / ml ha rivelato il 50% dei pazienti infetti e l'uso di un sistema di test che rileva 8 pg / ml - 22,9%. L'utilizzo di un set aggiuntivo di reagenti per la distruzione del complesso immunitario consente di aumentare la rilevazione dell'antigene p24 fino al 55,3%. Il valore predittivo della presenza di infezione da HIV con ulteriori test per l'antigene p24 è stato del 91,7-96%. L'introduzione di un test aggiuntivo per l'antigene HIV p24 con una sensibilità analitica di 0,5 pg / ml nell'algoritmo diagnostico dell'HIV permette di confermare la diagnosi di HIV per fase iniziale malattie in almeno il 13% dei casi in persone con esito incerto di IB. (Vedi articolo: Neshumaev D.A. et al. "Il valore predittivo di rilevare l'antigene p24 dell'HIV utilizzando sistemi di test con maggiore sensibilità analitica").
"Diagnostica clinica di laboratorio", 2009, n. 2, p. 40 - 42.
Diagnostica clinica e di laboratorio dell'infezione da HIV ha tre direzioni:
- Stabilire il fatto di infezione da HIV, diagnosi di infezione da HIV.
- Definizione della fase decorso clinico malattie e identificazione delle malattie secondarie.
- Previsione della progressione del decorso clinico della malattia, monitoraggio di laboratorio dell'efficacia del trattamento e degli effetti collaterali dei farmaci antiretrovirali.
1. Stabilimento dell'infezione da HIV, diagnosi dell'infezione da HIV
Per determinare l'infezione da HIV, vengono utilizzati i seguenti indicatori specifici: anticorpi contro l'HIV, antigeni dell'HIV, RNA dell'HIV e DNA del provirus. Gli anticorpi anti-HIV vengono determinati mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) o immunoblotting, che è essenzialmente un tipo di ELISA. Gli antigeni (proteine) dell'HIV sono determinati mediante ELISA. Con l'aiuto di metodi genetici molecolari di reazione a catena della polimerasi (PCR) e bDNA, è possibile determinare l'RNA dell'HIV e il DNA del provirus. L'utilizzo di un ulteriore metodo di ibridazione degli acidi nucleici con specifiche sonde di DNA consente di verificare la specificità delle sequenze di DNA ottenute durante la PCR. La sensibilità della PCR è la rilevazione di geni virali in una cellula su cinquemila.
In caso di infezione primaria, si osserva la seguente dinamica dei marcatori dell'HIV nel sangue delle persone infette. Nel primo mese, a seguito dell'attivazione del processo replicativo, si verifica un forte aumento della carica virale (il contenuto di HIV RNA nel plasma), quindi, a causa della diffusione del virus e della massiccia infezione delle cellule bersaglio nel sangue e nei linfonodi, diventa possibile determinare il DNA provirale. Il fatto di rilevare il DNA del provirus integrato nel genoma della cellula bersaglio è di fondamentale valore diagnostico.
La carica virale riflette l'intensità del processo replicativo nelle cellule infette. Durante il periodo dell'infezione primaria, il livello di carica virale è diverso se infettato da diversi sottotipi di HIV, ma la dinamica dei suoi cambiamenti è approssimativamente la stessa. Quindi, se infettato dal sottotipo B, ad esempio, se nel primo mese dopo l'infezione la carica virale è di 700 copie / ml, nel 2 ° mese c'è una diminuzione a 600, nel 3 ° - a 100, nel 4 ° - a 50 copie / ml. Tale dinamica è osservata sullo sfondo di un aumento del contenuto di anticorpi specifici contro l'HIV nel sangue. Il contenuto di DNA provirale nelle cellule mononucleate del sangue di infezione da HIV è caratterizzato da relativa costanza durante i primi 6 mesi con lievi fluttuazioni in alcuni sottotipi. Pertanto, i carichi di RNA e DNA non sono identici.
Durante la fase di incubazione, per qualche tempo, non si ha formazione di anticorpi specifici contro l'HIV in quantità sufficiente a determinare l'esistente metodi di laboratorio... Prima della registrazione degli anticorpi, si osserva per un tempo molto breve la comparsa nel sangue della proteina Nef, che reprime il processo replicativo, e della proteina strutturale p24. L'antigene p24 può essere rilevato nel sangue con il metodo del test immunoassorbente legato all'enzima già 1-2 mesi dopo l'infezione ed essere determinato fino all'ottava settimana, quindi il suo contenuto diminuisce drasticamente. Inoltre, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, c'è un secondo aumento del contenuto di proteina p24 nel sangue. Cade sulla formazione dell'AIDS. La scomparsa delle proteine \u200b\u200bcore libere (non legate da anticorpi) p24 nel sangue e la comparsa di anticorpi specifici contro le proteine \u200b\u200bdell'HIV segnano l'inizio della sieroconversione (Fig. 9.6).
Viremia e antigenemia causano la formazione di anticorpi IgM specifici (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Gli anticorpi liberi delle classi IgM e IgG contro la proteina p24 possono comparire a partire dalla 2a settimana, il loro contenuto aumenta entro 2-4 settimane, raggiungendo un certo livello, al quale rimane per mesi (IgM) e anni (IgG) (Fig. 9.7).
La comparsa di sieroconversione completa, quando un alto livello di anticorpi IgG specifici contro le proteine \u200b\u200bstrutturali dell'HIV p24, gp41, gp120, gp160 è registrato nel sangue periferico, facilita notevolmente la diagnosi di infezione da HIV. Gli anticorpi anti-HIV compaiono nel 90-95% di quelli infettati entro 3 mesi dall'infezione, nel 5-9% - nel periodo da 3 a 6 mesi dal momento dell'infezione e nello 0,5-1% - in un secondo momento.
Nonostante il fatto che gli anticorpi contro l'HIV compaiano per ultimi, il principale indicatore diagnostico di laboratorio fino ad oggi è la rilevazione di anticorpi specifici mediante ELISA e immunoblotting.
Dati presentati nella tabella 9.2 [mostrare] e 9.3 [mostrare] , dimostrano chiaramente l'elevata sensibilità dei moderni sistemi di dosaggio immunosorbente legato agli enzimi nella determinazione degli anticorpi contro l'HIV, che è superiore alla sensibilità dell'immunoblotting. In alcuni casi, al ricevimento di un risultato primario positivo in ELISA, può essere confermato in immunoblotting solo dopo 2-3 settimane.
| Tabella 9.3. Un esempio di monitoraggio della sieroconversione (secondo N. Fleury, 2000) | |||||
| Il momento della determinazione | Antigene P24, pg / ml | Anticorpi contro le proteine \u200b\u200bdell'HIV | |||
| ELISA, OP arr / OP cr ** | Immunoblotting | ||||
| HIV DUO | Gen-screen | Uniforme | |||
| Paziente 1 | |||||
| In primis | 17 | 1,24 | meno di 1 | meno di 1 | * |
| Dopo 4 giorni | 67 | 1,36 | 1,85 | meno di 1 | - |
| In 7 giorni | * | 2,33 | 6,84 | meno di 1 | - |
| Dopo 2 giorni | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| Paziente 2 | |||||
| In primis | 400 | 13 | meno di 1 | meno di 1 | - |
| In 5 giorni | 450 | 18 | 2,11 | meno di 1 | - |
| Dopo 10 giorni | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| Nota: * - non determinato ** - il rapporto tra la densità ottica del campione di siero studiato e il valore critico (soglia) della densità ottica |
|||||
Quando si esaminano pazienti con infezione da HIV (HIV-infetti) utilizzando sistemi di test immunoblotting di aziende leader nel mondo, vengono rilevati anticorpi contro gp160 e p24 / 25 in tutti i casi, anticorpi contro altre proteine \u200b\u200bnel 38,8-93,3% dei casi (Tabella 2). 9.4 [mostrare] ).
Difficoltà nel rilevare gli anticorpi nei pazienti con infezione da HIV possono sorgere durante periodi di viremia e antigenemia massicce, quando gli anticorpi specifici esistenti nel sangue sono associati a particelle virali e il processo replicativo supera la produzione di nuovi anticorpi antivirali. Questa situazione può sorgere e scomparire durante il processo infettivo.
Nei pazienti con un sistema immunitario inizialmente indebolito, la viremia e l'antigenemia compaiono prima e persistono alto livello prima dell'esito della malattia. In tali pazienti, vi è un basso contenuto di anticorpi liberi contro l'HIV, a causa di due motivi: produzione insufficiente di anticorpi da parte dei linfociti B e legame di anticorpi da parte di virioni e proteine \u200b\u200bdell'HIV solubili, pertanto, per determinare l'infezione, sono necessari sistemi di test con maggiore sensibilità o modifiche dei metodi di analisi che prevedono lo stadio del rilascio di anticorpi da immunocomplessi.
Molto spesso, una diminuzione del contenuto di anticorpi contro l'HIV per questi motivi si verifica nella fase terminale, quando gli anticorpi contro l'HIV nel siero potrebbero non essere rilevati senza l'uso di metodi di dosaggio immunosorbente legato all'enzima o il metodo di immunoblotting (Western blot). Oltre alla comparsa di anticorpi specifici contro l'HIV, la risposta immunitaria nei primi 4 mesi è caratterizzata da una diminuzione del contenuto di cellule CD4 + infette nel sangue e da un aumento delle cellule CD8 +. Inoltre, il contenuto delle cellule che trasportano i recettori CD4 e CD8 si stabilizza e rimane invariato per qualche tempo. L'aumento del contenuto di linfociti CD8 è una reazione protettiva, perché la citotossicità cellulo-dipendente è realizzata dai linfociti CD8 +, che mirano a distruggere le cellule infettate da HPV. Inizialmente, i linfociti citotossici (CTL) reagiscono alla proteina regolatrice Nef del virus, che svolge un ruolo importante nella riduzione della carica virale (RNA) nel plasma di una persona con infezione da HIV nei primi mesi. Quindi viene formata una risposta dal CTL ad altri, incl. proteine \u200b\u200bstrutturali dell'HIV, a seguito delle quali, 12 mesi dopo l'infezione, l'effetto citotossico aumenta in modo significativo.
Schemi diagnostica di laboratorio Infezione da HIV
Tenendo conto della dinamica data di marcatori specifici di infezione da HIV nella pratica, è consigliabile aderire ai seguenti schemi diagnostici di laboratorio negli adulti (Fig. 9.8-9.10).
I diagrammi riflettono le tre fasi principali della diagnosi primaria di laboratorio dell'infezione da HIV:
- Selezione.
- Riferimento.
- Esperto.
La necessità di più fasi della diagnostica di laboratorio è principalmente dovuta a considerazioni economiche. Quindi, ad esempio, il costo per eseguire uno studio di esperti con l'aiuto di sistemi di test domestici utilizzando il metodo immunoblotting è fino a $ 40, screening (tramite ELISA) - circa 0,2, cioè il rapporto è 1: 200.
Nella prima fase (Fig. 9.8), i soggetti vengono testati per gli anticorpi contro l'HIV utilizzando un test immunoassorbente legato all'enzima, progettato per rilevare gli anticorpi per entrambi i tipi di virus: HIV-1 e HIV-2.
Il lisato virale, le proteine \u200b\u200bricombinanti e i peptidi sintetici sono utilizzati dai produttori nei sistemi di test proposti come base antigenica. Ciascuno dei portatori elencati di determinanti antigenici dell'HIV ha i suoi vantaggi e svantaggi. Pertanto, quando si scelgono kit di test di costo approssimativamente uguale, dovrebbero essere preferiti kit con la massima sensibilità (preferibilmente 100%). Tra i sistemi di test di pari costo e sensibilità, è opportuno soffermarsi su quelli con la massima specificità.
Sulla base del lisato del virus, sono stati creati i primi sistemi di test per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Negli anni '80, tali sistemi di test erano caratterizzati da una sensibilità inferiore al 100% e da una bassa specificità, manifestata da un gran numero (fino al 60%) di risultati falsi positivi.
Durante la formazione di un virione in una coltura di linfociti, la sua membrana viene creata dalla membrana esterna e quindi contiene antigeni del principale complesso di istocompatibilità delle classi I e II. Questa circostanza provoca reazioni false positive se nel sangue dei pazienti sono presenti anticorpi contro alloantigeni di istocompatibilità.
Successivamente, per ottenere un virus, è stato proposto di utilizzare una coltura di macrofagi, in cui le particelle virali si formano principalmente intracellulari non germogliando dalla membrana cellulare esterna, ma dalle membrane del reticolo endoplasmatico. Questa tecnologia ha ridotto il numero di falsi positivi.
Uno dei migliori in termini di caratteristiche più importanti - sensibilità e specificità - sono i sistemi di analisi immunosorbenti legati agli enzimi riconosciuti, che utilizzano una combinazione di lisato virale purificato con peptidi sintetici, che sono le regioni antigenicamente più significative delle proteine \u200b\u200bvirali, o proteine \u200b\u200bricombinanti.
La sensibilità del sistema di test dipende anche dalle caratteristiche degli altri componenti dei kit. Pertanto, i sistemi di test in cui vengono utilizzati coniugati che riconoscono gli anticorpi non solo della classe IgG, ma anche IgM e IgA, consentono di rilevare una fase precedente di sieroconversione. L'uso di sistemi di test sembra essere promettente, con l'aiuto dei quali è possibile determinare contemporaneamente sia gli anticorpi antivirali che l'antigene p24, il che rende la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV ancora prima.
Il risultato positivo primario deve essere ricontrollato riesaminando il campione nello stesso sistema di test, ma preferibilmente in un lotto diverso e da un diverso assistente di laboratorio. Se durante un secondo studio si ottiene un risultato negativo, lo studio viene eseguito una terza volta.
Dopo la conferma di un risultato positivo, si consiglia di prelevare nuovamente il sangue e testarlo per gli anticorpi contro l'HIV come primario. Il prelievo di sangue ripetuto previene l'errore causato da un'etichettatura imprecisa delle provette e dalla compilazione di moduli di riferimento.
Il siero siero positivo nella fase di screening viene inviato per studi di riferimento eseguiti utilizzando due o tre sistemi di test ELISA altamente specifici. In caso di due risultati positivi, viene eseguito uno studio esperto utilizzando il metodo immunoblotting.
L'uso di test di immunoassorbimento enzimatico nella diagnostica di riferimento, che possono essere utilizzati per differenziare anticorpi specifici contro HIV-1 e HIV-2, facilita il lavoro ulteriore e consente di studiare immediatamente un campione positivo in fase di esperti utilizzando l'immunoblotting appropriato (HIV-1 o HIV-2) ...
L'opinione di un esperto di laboratorio sull'infezione da HIV viene formulata solo sulla base di un risultato Western blot positivo. Quando si esegue una diagnostica esperta, è necessario utilizzare la nomenclatura dei geni e dei prodotti genici dell'HIV proposta nel 1990 da un gruppo di esperti dell'OMS (Tabella 9.5 [mostrare] ).
La specificità delle bande sull'immunoblot deve essere valutata con molta attenzione e attenzione, utilizzando i risultati degli studi sui sieri di controllo (positivi e negativi), che vengono effettuati parallelamente allo studio dei campioni sperimentali, e un campione dell'immunoblot con la designazione delle proteine \u200b\u200bdell'HIV (allegato dal produttore al sistema di test). L'interpretazione dei risultati ottenuti dovrebbe essere eseguita secondo le istruzioni allegate al sistema di prova. Di norma, il criterio di positività è la presenza obbligatoria di anticorpi contro due proteine \u200b\u200b(precursore, esterno o transmembrana) codificate dal gene env e l'eventuale presenza di anticorpi contro i prodotti di altri due geni strutturali dell'HIV - gag e pol (Tabella 9.6 [mostrare] ).
| Tabella 9.6. Criteri per l'interpretazione dei risultati di immunoblotting per HIV-1 e HIV-2 (WHO, 1990) | |||
| Risultato | HIV-1 | HIV-2 | |
| Positivo | +/- strisce pol +/- strisce bavaglio | 2 bande env (precursore, gp esterno o gp transmembrana) +/- strisce pol +/- strisce bavaglio |
|
| Negativo | Mancanza di bande specifiche per l'HIV-1 | Mancanza di bande specifiche per l'HIV-2 | |
| Incerto | Altri profili non visti come positivi o negativi | ||
In caso di ottenere un risultato dubbio, è necessario utilizzare l'elenco delle raccomandazioni per il chiarimento finale dei risultati dell'immunoblotting (Tabella 9.7 [mostrare] ).
| Tabella 9.7. Raccomandazioni per il chiarimento definitivo dei risultati di immunoblot incerti (WHO, 1990) | |
| La presenza di bande corrispondenti alle proteine \u200b\u200bdell'HIV | Interpretazione del risultato, ulteriori azioni |
| HIV-1 | |
| Solo p17 | |
| Solo P24 e gp160 | Questo modello insolito può verificarsi all'inizio della sieroconversione. Ripetere immediatamente il test del campione. Se si ottiene lo stesso profilo, è necessario prelevare un secondo campione da testare in immunoblotting 2 settimane dopo aver prelevato il 1 ° campione. |
| Altri profili | Questi profili (gag e / o pol senza env) possono indicare sieroconversione o reazioni aspecifiche |
| HIV-2 | |
| Solo p16 | Può essere classificato come negativo, non sono richieste definizioni aggiuntive |
| I band env con o senza gag / pol | Ripetere il test sullo stesso campione utilizzando un lotto diverso di reagenti |
| Solo P24 o gp140 | Questo profilo insolito può verificarsi all'inizio della sieroconversione. Ripetere immediatamente il test del campione. Se si ottiene lo stesso profilo, 2 settimane dopo aver prelevato il 1 ° campione, è necessario prelevare un secondo campione per il test in immunoblotting |
| Altri profili | Questi profili (gag e / o pol senza env) possono indicare sieroconversione o reazioni aspecifiche. |
Secondo le raccomandazioni del Centro scientifico e metodologico russo per la prevenzione e il controllo dell'AIDS, si considera un risultato positivo se sono presenti anticorpi contro almeno una delle proteine \u200b\u200bgp41, gp120, gp160 in combinazione con anticorpi contro altre proteine \u200b\u200bspecifiche dell'HIV-1 o senza di loro. Queste raccomandazioni sono fatte sulla base dell'esperienza con i sieri di bambini da focolai nosocomiali, in cui gli anticorpi erano spesso determinati solo verso una delle proteine \u200b\u200bdell'involucro del virus.
La maggior parte dei pazienti inizialmente esaminati sieropositivi in \u200b\u200bELISA appartengono alla fase della linfoadenopatia generalizzata persistente (PGL) o alla fase asintomatica. Pertanto, su un immunoblot (una striscia di nitrocellulosa su cui sono immobilizzate le proteine \u200b\u200bdell'HIV), di regola, viene determinata la seguente combinazione di anticorpi contro l'HIV-1: anticorpi contro le proteine \u200b\u200bdell'involucro gp160, gp120 e gp41, codificati dal gene env, in combinazione con anticorpi contro le proteine \u200b\u200bcentrali p24 (proteina nucleocapside codificato dal gene gag) e p31 / 34 (endonucleasi codificato dal gene pol).
Reazioni positive con solo proteine \u200b\u200bgag e / o po possono verificarsi nella fase iniziale della sieroconversione e indicano anche un'infezione da HIV-2 o una reazione aspecifica.
In caso di ottenere un risultato dubbio, è possibile utilizzare varie tecniche metodologiche per chiarire il fatto dell'infezione da HIV.
A seconda delle capacità tecniche (disponibilità di kit diagnostici e reagenti, apparecchiature con attrezzature speciali e formazione del personale), il laboratorio esperto esegue ulteriori studi diagnostici (Figura 9.10).
In alcuni casi, è consigliabile utilizzare metodi di genetica molecolare per determinare le sequenze genetiche dell'HIV nel siero, nei linfociti del sangue o nelle punture dei linfonodi. La verifica della specificità delle sequenze di DNA ottenute a seguito di PCR può essere effettuata mediante il metodo di ibridazione degli acidi nucleici con specifiche sonde di DNA.
I metodi di radioimmunoprecipitazione (RIP) e immunofluorescenza indiretta (IFL) possono essere utilizzati anche per la verifica finale dei sieri con risultati discutibili nell'immunoblotting.
La rilevazione dell'HIV RNA nel plasma sanguigno mediante metodo qualitativo o quantitativo non è significativa per la diagnosi di infezione da HIV. Questo risultato deve essere confermato con metodi standard, come l'immunoblotting, 2-4 mesi dopo aver ricevuto la risposta primaria discutibile o negativa.
L'isolamento dell'HIV nella coltura cellulare è la verità ultima. Tuttavia, il metodo è complicato, costoso e viene eseguito solo in laboratori di ricerca appositamente attrezzati.
Il contenuto di cellule CD4 + nel sangue è un indicatore aspecifico, tuttavia in casi discutibili (ELISA "+", immunoblot "-", la presenza segni clinici HIV / AIDS) può essere utilizzato come linea guida per il processo decisionale esperto. Se in laboratorio è possibile eseguire solo immunoblotting, è necessario attenersi alle raccomandazioni riportate nella tabella. 9.7 e Fig. 9.9.
Le persone il cui esame del siero esperto ha prodotto risultati dubbi (incerti), con l'eccezione dei casi di rilevamento di anticorpi solo contro p17 (HIV-1) o p16 (HIV-2), devono essere ritestati entro 6 mesi (dopo 3 mesi). Nel caso di una vera infezione da HIV, dopo 3-6 mesi, si osserva una tendenza "positiva" nello spettro degli anticorpi - formazione aggiuntiva di anticorpi verso altre proteine \u200b\u200bdel virus. Una reazione falsa è caratterizzata dalla persistenza per lungo tempo di un modello di macchie immunitarie dubbia o dalla scomparsa di bande sospette. Se dopo il periodo specificato i risultati di immunoblotting ripetuti sono negativi o rimangono dubbi, quindi in assenza di fattori di rischio, sintomi clinici o altri fattori associati all'infezione da HIV, una persona può essere considerata sieronegativa per gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2.
Risultati falsi positivi dovuti al contenuto nel sangue di pazienti di anticorpi contro alloantigeni di istocompatibilità, che fanno parte dell'involucro dell'HIV, appaiono sull'immunoblot sotto forma di bande a livello di gp41 e gp31. Le ragioni di altre reazioni aspecifiche (ad esempio, a p24, che si trova spesso in individui con processi autoimmuni) non sono state ancora chiarite.
Il miglioramento della tecnologia di produzione dei sistemi di dosaggio immunosorbente legato agli enzimi ha consentito di ottenere un'elevata sensibilità, fino al 99,99%, mentre la sensibilità del metodo di immunoblotting è del 97%. Pertanto, un risultato negativo nell'immunoblotting con risultati positivi in \u200b\u200bELISA può indicare il periodo iniziale di sieroconversione, caratterizzato da un basso livello di anticorpi specifici. Pertanto, è necessario ripetere lo studio dopo 1,5-2 mesi, ovvero il periodo di tempo necessario per completare la sieroconversione, per ottenere una concentrazione di anticorpi specifici nel sangue sufficiente per il rilevamento mediante immunoblotting.
Un risultato (risultati) positivi di uno studio nella fase di riferimento o solo di screening della diagnosi di laboratorio di infezione da HIV, ovvero un risultato positivo in qualsiasi dosaggio immunoenzimatico, di conseguenza, non confermato da metodi esperti, viene interpretato come la presenza di anticorpi a reazione crociata nel sangue dell'esame. La reazione crociata si riferisce al legame di siti non specifici da parte di anticorpi sulle proteine \u200b\u200bo sui peptidi dell'HIV utilizzati come base antigenica nel sistema di test in cui si ottiene un risultato positivo.
In assenza di immunodeficienza e segni clinici di infezione da HIV, tali persone sono considerate sieronegative per gli anticorpi anti-HIV e devono essere rimosse dal registro.
La diagnosi finale di infezione da HIV viene stabilita solo sulla base di tutti i dati clinici, epidemiologici e di laboratorio. Solo il medico curante ha il diritto di informare il paziente sulla diagnosi di infezione da HIV.
Il metodo principale per la diagnosi di laboratorio di conferma (esperta) dell'infezione da HIV è l'immunoblotting. Tuttavia, data la sua sensibilità inferiore rispetto all'ELISA, diversi ricercatori hanno suggerito di utilizzare una combinazione di diversi sistemi di test per la determinazione finale della presenza di anticorpi specifici contro l'HIV. Ad esempio, G. van der Groen et al. ha proposto un'alternativa al metodo di immunoblotting per il controllo dei risultati positivi della fase di screening della diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Implica lo studio del materiale in parallelo in tre sistemi di test, che si basano su diversi metodi per rilevare specifici anticorpi anti-HIV (diverse varianti ELISA, test di agglutinazione) utilizzando antigeni di diversa natura. Gli autori sono riusciti a trovare tali combinazioni di sistemi di test, il cui utilizzo fornisce il 100% di sensibilità e specificità rispetto ai risultati ottenuti nell'immunoblotting.
L'economicità di questo metodo di diagnostica esperta è un indubbio vantaggio, tuttavia, la mancanza di informazioni su quali proteine \u200b\u200bspecifiche del virus hanno anticorpi nel sangue del paziente non consente di valutare la specificità della reazione in ogni singolo caso, nonché di monitorare i cambiamenti nello spettro degli anticorpi in una fase iniziale di sieroconversione.
La diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV nei bambini nati da madri con infezione da HIV ha le sue caratteristiche. Dal momento della nascita per un lungo periodo (fino a 15 mesi), gli anticorpi materni contro l'HIV possono circolare nel sangue di tali bambini. Solo le immunoglobuline della classe IgG penetrano nella barriera placentare, pertanto, il rilevamento di nmmupoglobuline HPV specifiche delle classi IgM e IgA in un bambino consente di confermare l'infezione, ma un risultato negativo non può indicare l'assenza di HIV.
I bambini di età inferiore a 1 mese non hanno ancora la replicazione dell'HPV e l'unico metodo di verifica è la PCR. Anche la determinazione dell'antigene p24 nei bambini di età superiore a 1 mese è un metodo di conferma.
L'assenza di anticorpi contro l'HIV nei neonati non significa che il virus non sia penetrato nella barriera placentare. In ogni caso, i figli di madri con infezione da HIV sono soggetti a visita diagnostica di laboratorio e osservazione entro 36 mesi dalla nascita.
risultati ricerca di laboratorio per i marcatori di infezione da HIV richiedono un'attenta interpretazione e devono essere presi in considerazione solo insieme ai dati di indagini epidemiologiche e cliniche. D'altra parte, va notato che nonostante l'elevata sensibilità dei metodi moderni, i risultati negativi della ricerca non possono escludere completamente la presenza di infezione da HIV. Pertanto, un risultato del test negativo, ad esempio mediante immunoblotting, può essere formulato solo come assenza di anticorpi specifici contro l'HIV-1 e l'HIV-2.
Diagnosi di infezione da HIV in pazienti sieronegativi
La qualità dei sistemi di test utilizzati nella diagnostica di laboratorio dell'infezione da HIV migliora ogni anno, la loro sensibilità aumenta. Tuttavia, l'elevata variabilità dell'HIV può portare alla comparsa di nuovi tipi, anticorpi contro i quali potrebbero non essere riconosciuti dai sistemi di test esistenti. Inoltre, sono noti casi di risposta umorale atipica del sistema immunitario dell'ospite al virus. Così, L. Montagnier nel 1996 riferì di due pazienti affetti da AIDS nei quali non erano stati rilevati anticorpi specifici nel sangue da diversi anni, la diagnosi fu fatta sulla base di dati clinici e di laboratorio confermati solo dall'isolamento dell'HPV-1 in coltura cellulare. In questi casi, è necessario utilizzare le raccomandazioni dell'OMS, secondo le quali diagnostica clinica L'infezione da HIV negli adulti e nei bambini è possibile con una delle 12 malattie indicatrici di AIDS:
- candidosi dell'esofago, della trachea, dei bronchi, dei polmoni;
- criptococcosi extrapolmonare;
- criptosporidiosi con diarrea per più di un mese;
- danno da citomegalovirus a qualsiasi organo (escluso e oltre al fegato, milza e linfonodi in un paziente di età superiore a 1 mese):
- un'infezione causata dal virus dell'herpes simplex che persiste per più di 1 mese in un paziente di età superiore a 1 mese;
- linfoma del cervello in un paziente di età inferiore ai 60 anni;
- polmonite interstiziale linfocitica in un bambino di età inferiore a 13 anni;
- infezione dissiminata causata da batteri del gruppo Micobacterium avium intracellulare o M. Kansassii;
- polmonite da pneumocystis;
- leucoencefalopatia multifocale progressiva;
- toxoplasmosi centrale sistemi nervosiin pazienti di età superiore a 1 mese.
La presenza di una di queste malattie consente di diagnosticare l'infezione da HIV in assenza della possibilità di eseguire un esame del sangue di laboratorio per la presenza di anticorpi contro l'HIV, o anche se si ottiene un risultato sieronegativo.
fonte: Diagnostica di laboratorio medico, programmi e algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., San Pietroburgo, Intermedica, 2001
Attualmente, le nuove tecnologie diagnostiche consentono di identificare le cause eziologiche e patogenetiche di molte malattie e influenzano radicalmente i risultati del trattamento. Forse i risultati più impressionanti dell'introduzione di queste tecnologie nella pratica clinica sono stati raggiunti nel campo dell'immunologia e della diagnostica. malattie infettive.
I sistemi di test basati sul dosaggio immunoenzimatico e sull'analisi immunochemiluminescente consentono la rilevazione di anticorpi di varie classi, il che aumenta notevolmente il contenuto informativo della sensibilità clinica e analitica e dei metodi di specificità per la diagnosi delle malattie infettive. Va notato che i progressi più significativi nella diagnosi delle infezioni sono associati all'introduzione del metodo della reazione a catena della polimerasi nella pratica di laboratorio, che è considerato il "gold standard" nella diagnosi e nella valutazione dell'efficacia del trattamento di una serie di malattie infettive.
Vari materiali biologici possono essere utilizzati per la ricerca: siero, plasma sanguigno, raschiatura, biopsia, liquido pleurico o cerebrospinale (CSF). Prima di tutto, i metodi di diagnosi di laboratorio delle infezioni sono finalizzati all'identificazione di malattie come epatite virale B, C, D, infezione da citomegalovirus, infezioni a trasmissione sessuale (gonorrea, clamidia, micoplasma, ureaplasma), tubercolosi, infezione da HIV, ecc.
Infezione da HIV - una malattia causata dal virus dell'immunodeficienza umana (HIV), a lungo persistendo in linfociti, macrofagi, cellule del tessuto nervoso, a seguito del quale si sviluppa un danno lentamente progressivo al sistema immunitario e nervoso del corpo, manifestato da infezioni secondarie, tumori, encefalite subacuta e altri cambiamenti patologici.
Gli agenti causali dell'infezione - virus dell'immunodeficienza umana del 1 ° e 2 ° tipo (HIV-1, HIV-2) - appartengono alla famiglia dei retrovirus, la sottofamiglia dei virus lenti. I virioni sono particelle sferiche di 100-140 nm di diametro. La particella virale ha un involucro fosfolipidico esterno contenente glicoproteine \u200b\u200b(proteine \u200b\u200bstrutturali) con un certo peso molecolare misurato in kilodaltons. Nell'HIV-1, questi sono gpl60, gpl20, gp41. L'involucro interno del virus che copre il nucleo è anche rappresentato da proteine \u200b\u200bcon un peso molecolare noto - p17, p24, p55 (l'HIV-2 contiene gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).
Il genoma dell'HIV include l'RNA e l'enzima trascrittasi inversa (trascrittasi inversa). Affinché il genoma del retrovirus si connetta al genoma della cellula ospite, il DNA viene prima sintetizzato sul modello di RNA virale utilizzando la trascrittasi inversa. Quindi il DNA del provirus viene inserito nel genoma della cellula ospite. L'HIV ha una marcata variabilità antigenica che è significativamente superiore a quella del virus dell'influenza.
Nel corpo umano, l'obiettivo principale dell'HIV sono i linfociti T, che trasportano il maggior numero di recettori CD4 sulla superficie. Dopo che l'HIV è penetrato nella cellula con l'aiuto della revertasi, seguendo il modello del suo RNA, il virus sintetizza il DNA, che è incorporato nell'apparato genetico della cellula ospite (linfociti CD4) e vi rimane per tutta la vita in uno stato di provirus. Oltre ai linfociti T helper, sono colpiti i macrofagi, i linfociti B, le cellule della neuroglia, la mucosa intestinale e alcune altre cellule. La ragione della diminuzione del numero di linfociti T (cellule CD4) non è solo l'effetto citopatico diretto del virus, ma anche la loro fusione con cellule non infette. Insieme alla sconfitta dei linfociti T nei pazienti con infezione da HIV, c'è un'attivazione policlonale dei linfociti B con un aumento della sintesi delle immunoglobuline di tutte le classi, in particolare IgG e IgA, e il successivo esaurimento di questa parte del sistema immunitario. La regolazione alterata dei processi immunitari si manifesta anche con un aumento del livello di α-interferone, β2-microglobulina e una diminuzione del livello di IL-2. Come conseguenza della disfunzione del sistema immunitario, soprattutto quando il numero di linfociti T (CD4) diminuisce a 400 cellule in 1 μl di sangue o meno, si verificano condizioni per la replicazione incontrollata dell'HIV con un aumento significativo del numero di virioni in vari ambienti del corpo. Come risultato della sconfitta di molte parti del sistema immunitario, una persona infetta da HIV diventa indifesa contro gli agenti patogeni di varie infezioni.
Sullo sfondo dell'aumento dell'immunosoppressione, si sviluppano gravi malattie progressive che non si verificano in una persona con un sistema immunitario normalmente funzionante. Si tratta di malattie che l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) ha definito come malattie marker o indicatori dell'AIDS.
Malattie dell'indicatore dell'AIDS
Il primo gruppo - malattie inerenti solo all'immunodeficienza grave (CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.
Il secondo gruppo - malattie che possono svilupparsi sia sullo sfondo di una grave immunodeficienza, sia in alcuni casi senza di essa.
Pertanto, in questi casi, è necessaria la conferma di laboratorio della diagnosi.
Primo gruppo:
- candidosi dell'esofago, trachea, bronchi;
- criptococcosi extrapolmonare;
- criptosporidiosi con diarrea per più di 1 mese;
- lesioni da citomegalovirus di vari organi diversi dal fegato, milza o linfonodi in un paziente di età superiore a 1 mese;
- un'infezione causata dal virus dell'herpes simplex, manifestata da ulcere sulla pelle e sulle mucose, che persistono per più di 1 mese, nonché bronchite, polmonite o esofagite di qualsiasi durata, che colpiscono un paziente di età superiore a 1 mese;
- sarcoma di Kaposi generalizzato in pazienti di età inferiore ai 60 anni;
- linfoma del cervello (primario) in pazienti di età inferiore ai 60 anni;
- polmonite interstiziale linfocitica e / o displasia linfoide polmonare nei bambini sotto i 12 anni di età;
- infezione disseminata causata da micobatteri atipici (mycobacterium complex M. aviumintracellulare) con localizzazione extrapolmonare o localizzazione (oltre ai polmoni) nella pelle, linfonodi cervicali, linfonodi delle radici dei polmoni;
- polmonite da pneumocystis;
- leucoencefalopatia multifocale progressiva;
- toxoplasmosi del cervello in pazienti di età superiore a 1 mese.
Secondo gruppo:
- infezioni batteriche, combinate o ricorrenti, nei bambini di età inferiore ai 13 anni (più di due casi in 2 anni di osservazione): sepsi, polmonite, meningite, danni alle ossa o alle articolazioni, ascessi causati da bastoncelli emofilici, streptococchi;
- coccidioidomicosi disseminata (localizzazione extrapolmonare);
- Encefalopatia da HIV (demenza da HIV, demenza da AIDS);
- istoplasmosi con diarrea persistente per più di 1 mese;
- isosporosi con diarrea persistente per più di 1 mese;
- il sarcoma di Kaposi a qualsiasi età;
- linfoma del cervello (primario) in persone di qualsiasi età;
- altri linfomi a cellule B (ad eccezione della malattia di Hodgkin) o linfomi di immunofenotipo sconosciuto: linfomi a piccole cellule (come il linfoma di Burkitt, ecc.); sarcomi immunoblastici (linfomi immunoblastici, a grandi cellule, istiocitici diffusi, diffusi indifferenziati);
- micobatteriosi disseminata (non tubercolosi) con lesioni oltre ai polmoni della pelle, ai linfonodi cervicali o ilari;
- tubercolosi extrapolmonare (con danni agli organi interni, oltre ai polmoni);
- setticemia da salmonella, ricorrente;
- Distrofia da HIV (esaurimento, drammatica perdita di peso).
La tabella 1 (vedere il collegamento alla fonte sopra) elenca le malattie che definiscono l'AIDS ei loro agenti eziologici.
Esistono molte classificazioni dell'AIDS.
Secondo la nuova classificazione proposta dai Centri statunitensi per il controllo delle malattie (Tabella 2 - si veda il link alla fonte sopra), la diagnosi di AIDS è stabilita in persone con una conta delle cellule CD4 inferiore a 200 / μL, anche in assenza di malattie indicatore dell'AIDS.
La categoria B comprende varie sindromi, le più importanti delle quali sono angiomatosi bacillare, candidosi orofaringea, candidosi vulvovaginale ricorrente, difficile da trattare, displasia cervicale, carcinoma cervicale, porpora trombocitopenica idiopatica, listeriosi, neuropatia periferica.
Anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 nel sangue
Gli anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 sono normalmente assenti nel siero del sangue.
La determinazione degli anticorpi contro l'HIV è il principale metodo di diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV. Il metodo si basa sul test ELISA (enzima-linked immunosorbent assay): la sensibilità è superiore al 99,5%, la specificità è superiore al 99,8%. Gli anticorpi contro l'HIV compaiono nel 90-95% delle persone infette entro 1 mese dall'infezione, nel 5-9% - dopo 6 mesi, nello 0,5-1% - in un secondo momento. Nella fase dell'AIDS, il numero di anticorpi può diminuire fino a scomparire completamente.
Il risultato della ricerca si esprime qualitativamente: positivo o negativo.
Un risultato negativo del test indica l'assenza di anticorpi contro l'HIV-1 e l'HIV-2 nel siero del sangue. Il laboratorio emette un risultato negativo immediatamente quando è pronto. Al ricevimento di un risultato positivo - rilevamento di anticorpi contro l'HIV - per evitare risultati falsi positivi in \u200b\u200blaboratorio, l'analisi viene ripetuta altre 2 volte.
Immunoblotting per gli anticorpi contro le proteine \u200b\u200bvirali dell'HIV nel siero del sangue
Gli anticorpi contro le proteine \u200b\u200bvirali dell'HIV sono normalmente assenti nel siero del sangue.
Il metodo ELISA per la determinazione degli anticorpi contro l'HIV è un metodo di screening. Quando si ottiene un risultato positivo, per confermarne la specificità, viene utilizzato il metodo di immunoblotting - Western-blot - contro precipitazione in gel di anticorpi nel siero del paziente con varie proteine \u200b\u200bvirali separate per peso molecolare mediante elettroforesi e applicate alla nitrocellulosa. Vengono determinati gli anticorpi contro le proteine \u200b\u200bvirali gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17, ecc.
Secondo le raccomandazioni del Centro russo per la prevenzione e il controllo dell'AIDS, il rilevamento di anticorpi contro una delle glicoproteine \u200b\u200bgp41, gpl20, gpl60 dovrebbe essere considerato un risultato positivo. Se vengono rilevati anticorpi contro altre proteine \u200b\u200bdel virus, il risultato è considerato dubbio, tale paziente deve essere esaminato due volte, dopo 3 e 6 mesi.
L'assenza di anticorpi contro specifiche proteine \u200b\u200bdell'HIV significa che il dosaggio immunoenzimatico ha dato un risultato falso positivo. Allo stesso tempo, nel lavoro pratico, nel valutare i risultati del metodo del Western blotting, è necessario lasciarsi guidare dalle istruzioni fornite dall'azienda al "Kit per Western blotting" utilizzato.
Il metodo immunoblotting viene utilizzato per la diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV.
Antigene P24 nel siero
L'antigene p24 è assente nel siero del sangue.
L'antigene p24 è una proteina della parete nucleotidica dell'HIV. Lo stadio delle manifestazioni primarie dopo l'infezione da HIV è una conseguenza dell'inizio del processo replicativo. L'antigene p24 appare nel sangue 2 settimane dopo l'infezione e può essere rilevato da ELISA nel periodo da 2 a 8 settimane. Dopo 2 mesi dal momento dell'infezione, l'antigene p24 scompare dal sangue. Successivamente, nel decorso clinico dell'infezione da HIV, si osserva un secondo aumento del contenuto di proteina p24 nel sangue. Cade sulla formazione dell'AIDS. I sistemi di test ELISA esistenti per la rilevazione dell'antigene p24 vengono utilizzati per la diagnosi precoce dell'HIV nei donatori di sangue e nei bambini, per determinare la prognosi del decorso dell'AIDS e per il monitoraggio della terapia nei pazienti affetti da AIDS. ELISA ha un'elevata sensibilità analitica, che consente di rilevare l'antigene p24 dell'HIV-1 nel siero a una concentrazione di 5-10 pkg / ml e l'HIV-2 - inferiore a 0,5 ng / ml e la specificità. Tuttavia, va notato che il livello dell'antigene p24 nel sangue è soggetto a variazioni individuali, il che significa che solo il 20-30% dei pazienti può essere rilevato utilizzando questo studio nel primo periodo dopo l'infezione (Rose N.R. et al., 1997).
Gli anticorpi contro l'antigene p24 delle classi IgM e IgG compaiono nel sangue dalla 2a settimana, raggiungono un picco entro 2-4 settimane e rimangono a questo livello per varie volte: Anticorpi IgM - per diversi mesi, scompaiono entro un anno dall'infezione, e gli anticorpi IgG possono durare anni.
L'algoritmo per la diagnosi dell'infezione da HIV dipende dalla fase della malattia ed è caratterizzato da un cambiamento nella dinamica degli anticorpi di rilevamento di varie classi (Fig.1, 2 - vedere il collegamento alla fonte sopra).
Il risultato della ricerca è espresso qualitativamente - positivo o negativo. Un risultato del test negativo indica l'assenza di anticorpi contro l'HIV-1 e l'antigene HIV-2 e p24 nel siero del sangue.
Il laboratorio emette un risultato negativo immediatamente quando è pronto. Alla ricezione di un risultato positivo - rilevamento di anticorpi contro HIV-1 e HIV-2 e / o antigene p24 - per evitare risultati falsi positivi in \u200b\u200blaboratorio, l'analisi viene ripetuta altre 2 volte.
Indipendentemente dai risultati dei test ottenuti, il campione di sangue del paziente ei risultati di 3 test vengono inviati dal laboratorio al centro regionale AIDS per confermare un risultato positivo o per verificare un risultato non definito. In questi casi, il centro regionale per l'AIDS darà la risposta finale a questo sondaggio.
Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi (qualitativa)
Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi - PCR (qualitativamente) viene eseguita al fine di:
- risoluzione di risultati discutibili di studi di immunoblotting;
- per la diagnosi precoce dell'infezione da HIV;
- monitoraggio dell'efficacia del trattamento antivirale;
- determinare lo stadio della malattia dell'AIDS (transizione dall'infezione alla malattia).
In caso di infezione primaria da HIV, il metodo PCR consente di rilevare l'HIV RNA nel sangue già 10-14 giorni dopo l'infezione.
Il risultato della ricerca si esprime qualitativamente: positivo o negativo. Un risultato negativo del test indica l'assenza di HIV RNA nel sangue.
Un risultato positivo - il rilevamento dell'HIV RNA - indica che il paziente è infetto.
Rilevazione dell'HIV mediante reazione a catena della polimerasi (quantitativa)
L'HIV è normalmente assente nel sangue.
La quantificazione diretta dell'HIV RNA mediante PCR consente una previsione più accurata del tasso di sviluppo dell'AIDS nelle persone infette da HIV rispetto alla determinazione della conta delle cellule CD4, e quindi una valutazione più accurata della loro sopravvivenza. Un numero elevato di particelle virali di solito è correlato a uno stato immunitario gravemente compromesso e con un basso numero di cellule CD4. Un basso numero di particelle virali è generalmente correlato a un migliore stato immunitario e conte più elevate di CD4. Il contenuto di RNA virale nel sangue consente di prevedere la transizione della malattia allo stadio clinico. Quando il contenuto di HIV RNA-1 è\u003e 74100 copie / ml, quasi tutti i pazienti sviluppano un quadro clinico dell'AIDS (Senior D., Holden E., 1996).
Gli individui con HIV-1 nel sangue\u003e 10.000 copie / ml hanno una probabilità 10,8 volte maggiore di sviluppare l'AIDS rispetto a quelli con sangue HIV-1<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.
Un'indicazione per il trattamento dei pazienti affetti da HIV è stata sviluppata da un gruppo di esperti statunitensi. Il trattamento è indicato per i pazienti con conta delle cellule CD4 nel sangue<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20.000 copie / ml (PCR). La valutazione dei risultati della terapia antiretrovirale nelle persone infette da HIV viene effettuata riducendo il livello sierico di HIV RNA.
Con un trattamento efficace, il livello di viremia dovrebbe diminuire di 10 volte durante le prime 8 settimane ed essere al di sotto del limite di rilevamento del metodo (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.
Così, ad oggi, molti metodi di ricerca sono stati introdotti e utilizzati nella pratica clinica per la diagnosi dell'infezione da HIV, come per tutte le altre infezioni virali. Tra questi, il ruolo principale è dato alla ricerca sierologica. I metodi principali per la diagnosi delle infezioni da HIV sono presentati nella Tabella 3 (vedere il collegamento alla fonte sopra), dove sono suddivisi in base all'importanza di ciascun metodo per rilevare i virus in quattro livelli:
- A - il test viene solitamente utilizzato per confermare la diagnosi;
- B - il test è utile in determinate circostanze per la diagnosi di alcune forme di infezione;
- C - il test è usato raramente per scopi diagnostici, ma è di grande importanza per le indagini epidemiologiche;
- D - il test non viene solitamente utilizzato dai laboratori per scopi diagnostici.
Poiché per la diagnosi delle infezioni virali, oltre a scegliere il metodo di analisi ottimale, non è meno importante identificare e prendere correttamente un biomateriale per la ricerca, la Tabella 4 (vedi il link alla fonte sopra) fornisce raccomandazioni per la scelta del biomateriale ottimale per la ricerca dell'infezione da HIV.
Per monitorare l'infezione da HIV, si dovrebbero utilizzare le capacità di uno studio completo dello stato immunitario - determinazione quantitativa e funzionale di tutti i suoi legami: umorale, immunità cellulare e resistenza aspecifica in generale.
Nelle moderne condizioni di laboratorio, il principio multistadio della valutazione dello stato immunologico include la determinazione di una sottopopolazione di linfociti, immunoglobuline del sangue. Quando si valutano gli indicatori, è necessario tenere presente che l'infezione da HIV è caratterizzata da una diminuzione del rapporto tra le cellule T CD4 / CD8 inferiore a 1. L'indice CD4 / CD8 1,5-2,5 indica uno stato normale, più di 2,5 indica iperattività, meno 1.0 - indica immunodeficienza. Inoltre, il rapporto CD4 / CD8 può essere inferiore a 1 nell'infiammazione grave.
Questo rapporto è di fondamentale importanza nella valutazione del sistema immunitario nei pazienti con AIDS, perché l'HIV colpisce e distrugge selettivamente i linfociti CD4, per cui il rapporto CD4 / CD8 diminuisce a valori significativamente inferiori a 1.
La valutazione dello stato immunologico si basa anche sull'identificazione di difetti generali o "grossolani" nel sistema di immunità cellulare e umorale: ipergammaglobulinemia (aumentata concentrazione di IgA, IgM, IgG) o ipogammaglobulinemia allo stadio terminale; un aumento della concentrazione di immunocomplessi circolanti; diminuzione della produzione di citochine; indebolimento della risposta dei linfociti ad antigeni e mitogeni.
La violazione del rapporto tra le popolazioni nel pool totale di linfociti B è caratteristica di un'immunità umorale insufficiente. Tuttavia, questi cambiamenti non sono specifici dell'infezione da HIV e possono verificarsi anche in altre malattie. In una valutazione completa di una serie di altri parametri di laboratorio, va tenuto presente che l'infezione da HIV è anche caratterizzata da: anemia, linfa e leucopenia, trombocitopenia, aumento del livello di β2-microglobulina e proteina C-reattiva, aumento dell'attività delle transaminasi nel siero del sangue.
nel negozio online: 10% di sconto!
in laboratorio:
510strofinare
Esprimere
1 020strofinareil costo è indicato senza tenere conto del costo del campionamento del materiale biologico
Aggiungere al carrello della spesaAnticorpi contro l'HIV - un test di screening per la diagnosi dell'infezione da HIV.
Disponibilità dei risultati dell'analisi
Normale *: consegnato prima delle 12:00 (11.00 a Podolsk) - 1 giorno lavorativo, consegnato dopo le 12:00 (11.00 a Podolsk) - 2 giorni lavorativi
Tempo di preparazione analisi in modalità express (Cito)
| Tempo di consegna | Prontezza | |
|---|---|---|
| Giorni della settimana | Fine settimana | |
| Clinica presso il laboratorio CIR su Dubrovka | ||
| 08:00-12:00 | - | 1 giorno |
| 12:00-20:30 | - | |
| Maryino, Novokuznetskaya, Voikovskaya | ||
| 08:00-12:00 | 09:00-12:00 | 1 giorno |
| 12:00-20:30 | 12:00-17:00 | Il giorno successivo, come consegnato alle 8:00 |
| Butovo | ||
| 08:00-12:00 | 09:00-12:00 | 1 giorno |
| Podolsk | ||
| 08:00-11:00 | 09:00-10:00 | 1 giorno |
Il valore delle analisi
Un'analisi per gli anticorpi contro l'HIV (virus dell'immunodeficienza umana, HIV, virus dell'immunodeficienza umana) rileva gli anticorpi nel sangue che si formano nel corpo in risposta all'infezione con il virus.
HIV - Virus dell'immunodeficienza umana - un microrganismo che causa l'AIDS (AIDS (sindrome da immunodeficienza acquisita)).
Modi di trasmissione del virus dell'immunodeficienza umana
- sessuale - durante il contatto sessuale non protetto con un partner con infezione da HIV. Il rischio di infezione è più alto con il rapporto anale, il più basso con il rapporto orale.
- contatto con sangue infetto - quando si utilizzano aghi, strumenti non sterili, durante la trasfusione di sangue donato.
- percorso di trasmissione verticale- da una madre con infezione da HIV al feto durante la gravidanza, durante il parto, durante l'allattamento.
Indicazioni per l'esame
- Ricovero programmato
- Preparazione per la chirurgia
- Pianificazione della gravidanza e gravidanza (incluse nello standard dell'esame)
- Sesso occasionale non protetto, frequenti cambi di partner sessuali
- Presenza di fattori di rischio per infezione (ad esempio, operatori sanitari)
- Reclami: ingrossamento dei linfonodi in diverse aree, sudorazione notturna, febbre prolungata (temperatura), perdita di peso, diarrea prolungata,
- Rilevazione delle seguenti malattie o delle loro combinazioni: tubercolosi, candidosi, toxoplasmosi, frequenti recidive di infezione da herpes virus, polmonite causata da micoplasmi, legionella, polmonite da pneumocystis, sarcoma di Kaposi.
Quando eseguire il test per gli anticorpi anti-HIV
- Ricovero programmato, preparazione all'intervento: verificare con l'ospedale.
- Pianificare una gravidanza: nel programma di preparazione alla gravidanza.
- Gravidanza: almeno tre volte durante la gravidanza secondo il calendario ostetrico.
- Se ci sono fattori di rischio per l'infezione - almeno una volta all'anno.
- Infezione presunta: il tempo medio per la comparsa di anticorpi nel sangue è di 2 settimane dal momento dell'infezione, il massimo è di 6 mesi. Di solito, i test vengono effettuati dopo 1, 3 e 6 mesi.
- In presenza di reclami e rilevamento delle malattie sopra elencate: immediatamente.
Come fare il test nei Laboratori CIR?
Per risparmiare tempo, effettua un ordine per l'analisi in Negozio online! Pagando il tuo ordine online, ottieni uno sconto 10% per l'intero ordine effettuato!
Materiali correlati
Quando i risultati sono necessari rapidamente, vieni in qualsiasi clinica CIR. Ottieni i risultati del test la sera.
Lo screening prenatale non è solo una valutazione del rischio di sviluppare malformazioni fetali, ma anche una valutazione dei rischi di complicanze della gravidanza - nel più breve tempo possibile!
Attenzione!In caso di reazioni positive e discutibili, il termine per l'emissione del risultato può essere prolungato fino a 10 giorni lavorativi.
Anticorpi contro l'HIV 1, 2 tipi, antigene p 24 - lo studio di anticorpi specifici che sono sorti nel corpo in risposta all'infezione con i tipi di virus dell'immunodeficienza umana (HIV) 1, 2 e l'antigene p 24 del virus dell'immunodeficienza umana.
HIV(virus dell'immunodeficienza umana) - un virus della famiglia dei retrovirus (virus a replicazione lenta), che infetta le cellule del sistema immunitario umano (CD4, T-helper) e causa la sindrome da immunodeficienza acquisita.
Il periodo di incubazione è generalmente di 3-6 settimane. In rari casi, gli anticorpi contro l'HIV iniziano a essere rilevati solo pochi mesi o più dopo l'infezione. Il livello della loro concentrazione può diminuire notevolmente nel periodo terminale della malattia. In rari casi, gli anticorpi contro l'infezione da HIV possono scomparire per molto tempo.
Antigene p 24 HIV 1,2 il tipo rilevato nel siero del sangue indica una fase iniziale della malattia. Durante le prime settimane dopo l'infezione, la quantità di virus e antigene p24 nel sangue aumenta rapidamente. Non appena gli anticorpi contro l'HIV 1, 2 iniziano a essere prodotti, il livello dell'antigene p24 inizia a diminuire.
La determinazione dell'antigene p 24 consente di diagnosticare l'infezione da HIV nelle prime fasi dell'infezione, prima dello sviluppo di anticorpi.
Il rilevamento simultaneo di anticorpi contro il virus HIV-1,2 e l'antigene del virus p 24 aumenta il valore diagnostico dello studio.
Questo test rileva gli anticorpi contro l'HIV-1,2, nonché l'antigene p24 dell'HIV-1,2. L'analisi consente di diagnosticare l'infezione da HIV nelle prime fasi.
Modi di trasmissione dell'infezione:
- sessuale;
- con trasfusione di sangue;
- da una madre infetta a un neonato.
Infezione da HIV - malattia grave e di lunga durata, che è accompagnata da danni alle cellule del sistema immunitario umano; metodi efficaci di trattamento e mezzi di prevenzione specifica (vaccini) non sono ancora stati sviluppati contro di esso.
La fonte del virus dell'immunodeficienza sono gli esseri umani. Il virus nell'uomo può essere isolato da sperma, secrezioni cervicali, linfociti, plasma sanguigno, liquido cerebrospinale, lacrime, saliva, urina e latte materno, ma la concentrazione del virus in essi è diversa. La più alta concentrazione del virus si trova nei seguenti mezzi biologici: sperma, sangue, secrezioni cervicali.
I modi in cui il virus può essere trasmesso da una persona infetta a una persona non infetta sono limitati.
Vie di trasmissione dell'HIV
Esistono 3 modi di trasmissione del virus dell'immunodeficienza:
- Il percorso sessuale è il più frequente. L'infezione si verifica durante il contatto sessuale non protetto, mentre il virus entra nel corpo attraverso le mucose. Ferite sulla mucosa, ulcere, infiammazioni: aumentano la probabilità di infezione. Nelle persone con infezioni a trasmissione sessuale, il rischio di infezione attraverso il contatto con una persona infetta è 2-5 volte superiore. Per la trasmissione del virus è importante non solo il grado di intimità del contatto, ma anche la quantità dell'agente patogeno. Con il sesso non protetto, una donna ha circa tre volte più probabilità di essere infettata da un uomo, poiché una quantità maggiore di virus entra nel suo corpo e la donna ha una superficie molto più ampia attraverso la quale il virus può entrare nel corpo (mucosa vaginale). Il rischio di infezione è più alto con il rapporto anale e minimo con il rapporto orale.
- Contatto con il sangue di una persona infetta: a) quando si usano aghi, siringhe, utensili per la preparazione di farmaci, strumenti medici non sterili condivisi; b) l'introduzione di farmaci nella preparazione di cui viene utilizzato il sangue; c) utilizzo, trasfusione di sangue di donatore infetto e preparati che ne derivano (il rischio è estremamente basso, poiché tutti i donatori, così come il sangue, sono attentamente controllati).
- Dalla madre con infezione da HIV (percorso verticale) al feto durante la gravidanza, attraverso il canale del parto e l'allattamento.
AIDS - lo stadio terminale dell'infezione da HIV
L'AIDS non si sviluppa immediatamente. Nella maggior parte delle persone con anticorpi contro il virus dell'immunodeficienza, i segni clinici dell'AIDS potrebbero non comparire per 2-10 anni o più e con un trattamento efficace questo periodo è significativamente aumentato. Questo perché ci vuole un tempo abbastanza lungo per ridurre il numero di cellule T CD4 a un livello in cui il sistema immunitario è indebolito.
Il virus infetta anche altri tipi di cellule, comprese le cellule del sistema nervoso centrale e le cellule del sangue rosso e bianco, in cui il virus sembra essere in uno stato "dormiente" per molto tempo prima di moltiplicarsi attivamente. I fattori che influenzano la progressione della malattia sono diversi: caratteristiche genetiche, ceppo virale, stato psicologico del paziente, condizioni di vita e altri.
Il decorso della malattia e la durata delle fasi dipendono anche dal fatto che la persona riceva il trattamento e, in caso affermativo, da quali farmaci.
4 fasi dell'infezione da HIV
- Il periodo di incubazione ("periodo finestra") è il tempo dal momento dell'infezione fino alla comparsa nel sangue umano di anticorpi (proteine \u200b\u200bprotettive del sistema immunitario) al virus. Durante questo periodo, l'infezione non si manifesta in alcun modo, tutti i test sono negativi, ma la persona è già contagiosa. Il periodo di incubazione può durare fino a 3 mesi (in media 25 giorni).
- Stadio delle manifestazioni primarie. Dura in media 2-3 settimane ed è caratterizzato da un forte aumento della quantità di virus nel sangue. Questa condizione è chiamata "malattia da sieroconversione", poiché in questo momento gli anticorpi contro il virus compaiono nel sangue in quantità sufficienti per essere rilevati durante i test. Questo periodo nella maggior parte delle persone non si manifesta in alcun modo, tuttavia nel 20-30% si possono notare fenomeni simil-influenzali: febbre, ingrossamento dei linfonodi, cefalea, mal di gola, malessere, affaticamento e dolori muscolari. Questa condizione scompare dopo 2-4 settimane senza alcun trattamento.
- Periodo asintomatico. Viene dopo la fine delle manifestazioni primarie dell'infezione e dura in media fino a 10 anni se non trattata. Durante questo periodo, il sistema immunitario sta combattendo il virus nel corpo umano: il numero di particelle virali aumenta gradualmente e l'immunità diminuisce. Verso la fine di questa fase, le persone infette mostrano linfonodi ingrossati, sudorazione notturna, malessere generale e compaiono le prime manifestazioni di infezioni opportunistiche che si verificano nell'uomo, con un forte indebolimento del sistema immunitario. Queste infezioni sono causate da microrganismi che ci circondano e non causano infezioni nelle persone sane. Un sistema immunitario indebolito può anche portare allo sviluppo di altre malattie, come il cancro.
- L'AIDS è l'ultimo stadio di questa malattia ed è caratterizzato dalla comparsa di una serie di malattie dovute a un indebolimento del sistema immunitario del corpo. Tipicamente, i pazienti hanno una conta T CD4 molto bassa; una o più infezioni opportunistiche gravi (polmonite da pneumocystis, grave infezione fungina, tubercolosi, ecc.), che causano la morte in assenza di trattamento; malattie oncologiche; encefalopatia (danno cerebrale, accompagnato dallo sviluppo di demenza).
La diagnosi di infezione da HIV è un processo complesso basato su dati di esami di laboratorio, clinici ed epidemiologici, con analisi del sangue di laboratorio che svolgono il ruolo principale nella formulazione della diagnosi.
Il metodo principale di diagnostica di laboratorio è il rilevamento di anticorpi contro il virus mediante test immunoenzimatico.
La procedura per condurre test di laboratorio per la presenza di antigeni del virus dell'immunodeficienza umana e anticorpi contro questo virus è rigorosamente regolata dagli ordini del Ministero della Salute della Federazione Russa e include:
- fase di screening (screening) con metodi di dosaggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA) approvati per l'uso;
- la fase di verifica (conferma) ricerca con metodo immunoblot nel laboratorio del centro AIDS cittadino.
La diagnosi di laboratorio della presenza del virus dell'immunodeficienza nei bambini nati da madri infette da questo virus ha le sue caratteristiche. Gli anticorpi materni contro il virus (classe Ig G) possono circolare nel sangue dei bambini fino a 15 mesi dalla nascita. L'assenza di anticorpi contro il virus nei neonati non significa che non sia penetrato nella barriera placentare. I figli di madri infette dal virus dell'immunodeficienza sono soggetti a esami di laboratorio e diagnostici entro 36 mesi dalla nascita.
Fino a quando non si ottiene un risultato positivo in immunoblot e un risultato negativo dello studio, una persona è considerata sana e le misure antiepidemiche non vengono prese con lui.
Il materiale per testare gli anticorpi contro il virus dell'immunodeficienza è il sangue venoso, che dovrebbe essere preferibilmente donato a stomaco vuoto.
Ovviamente, testare la presenza del virus è un affare volontario di ogni persona. I test per il trasporto del virus dell'immunodeficienza non possono essere prescritti con la forza, senza il consenso del paziente. Ma devi anche capire che prima viene fatta la diagnosi corretta, maggiori sono le possibilità che hai di vivere una vita lunga e appagante, anche di esserne portatore.
Indicazioni:
- linfonodi ingrossati in più di due aree;
- leucopenia con linfopenia;
- sudorazioni notturne;
- forte perdita di peso di una ragione poco chiara;
- diarrea per più di tre settimane di causa sconosciuta;
- febbre di causa sconosciuta;
- pianificare una gravidanza;
- preparazione preoperatoria, ricovero in ospedale;
- identificazione delle seguenti infezioni o delle loro combinazioni: tubercolosi, toxoplasmosi manifesta, infezione herpes-virale spesso ricorrente, candidosi degli organi interni, nevralgia ripetuta da herpes zoster, causata da micoplasma, pneumocystis o polmonite da legionella;
- sarcoma di Kaposi in giovane età;
- sesso occasionale.
Si consiglia di donare il sangue al mattino, dalle 8 alle 12 ore. Il sangue viene prelevato a stomaco vuoto o dopo 4-6 ore di digiuno. È consentita acqua potabile senza gas e zucchero. Alla vigilia del test, i sovraccarichi di cibo dovrebbero essere evitati.
Regole per la registrazione dell'HIV:
La registrazione delle domande di ricerca in DNKOM viene effettuata in base a un passaporto o un documento che lo sostituisce (carta di migrazione, registrazione temporanea nel luogo di residenza, certificato di militare, certificato dell'ufficio passaporti in caso di perdita del passaporto, carta di registrazione dall'hotel). Il documento presentato deve contenere informazioni sulla registrazione temporanea o permanente nel territorio della Federazione Russa e una fotografia. In mancanza del passaporto (documento sostitutivo), il paziente ha diritto a rilasciare domanda anonima per la consegna del biomateriale. Con un esame anonimo, alla domanda e al campione di biomateriale ricevuto dal cliente viene assegnato un numero noto solo al paziente e al personale medico che ha effettuato l'ordine.
I risultati di studi svolti in forma anonima non possono essere sottoposti a ricovero, esami professionali e non sono soggetti ad iscrizione all'ORUIB.
Interpretazione dei risultati
Il test per gli anticorpi HIV 1/2 è di buona qualità. In assenza di anticorpi, la risposta è "negativa". Se vengono rilevati anticorpi contro l'HIV, lo studio viene ripetuto in un'altra serie. Se un risultato positivo viene ripetuto in un test immunoassorbente legato agli enzimi, il campione viene inviato per lo studio con il metodo immunoblot di conferma, che è il "gold standard" nella diagnosi dell'HIV.
Risultato positivo:
- Infezione da HIV;
- un risultato falso positivo che richiede studi ripetuti o aggiuntivi *;
- lo studio non è informativo nei bambini di età inferiore a 18 mesi nati da madri con infezione da HIV.
Risultato negativo:
- non infetto (sono stati osservati i termini diagnostici dell'analisi);
- decorso sieronegativo dell'infezione (gli anticorpi vengono prodotti in ritardo);
- stadio terminale dell'AIDS (la formazione di anticorpi contro l'HIV è compromessa);
- lo studio non è informativo (i termini diagnostici non sono soddisfatti).