REEF

Imūnfluorescences reakcijas pamatā ir antihlamīdiju antivielu mijiedarbība ar ģints specifisko hlamīdiju antigēnu. Ir divu veidu imūnfluorescences reakcijas - tiešas un netiešas. Pirmajā gadījumā specifiskā antiviela tiek tieši marķēta ar fluorohromu, un reakcija notiek vienā posmā, kas ievērojami samazina pētījumu laiku. Otrajā gadījumā specifiskajai antivielai nav marķējuma, un otrajā marķētajā antivielā, kas raksturīga anti-Chlamydia antivielām, tiek izmantoti pirmajā posmā izveidotā AG-AT kompleksa noteikšana. Reakcijas rezultātu vizuāli novērtē, izmantojot fluorescējošu mikroskopu.

Papildus importētajiem parādījās vietējie diagnostikas komplekti hlamīdiju infekcija tieša imūnfluorescences reakcija, kas praktiski nav zemāka par specifiskumu un jutīgumu, bet kurai ir ievērojami zemāka cena.

Pētījuma materiāls ir pirkstu nospiedumu uztriepes, kas sagatavotas saskaņā ar noteikumiem. RIF uztriepes tiek sagatavotas uz speciāla uzlīmes stikla ierobežotā vietā ar diametru 8-10 mm. Pēc tam tos žāvē gaisā un nofiksē, iegremdējot 5-10 minūtes aukstā 96% (labāk absolūti) etanols vai preparātam uzliek 0,1 - 0,15 ml atdzesēta bezūdens acetona, līdz tas pilnībā iztvaiko. Fiksētos preparātus var pārbaudīt nekavējoties vai, ja nepieciešams, uzglabāt istabas temperatūrā 24 stundas vai -20 ° C temperatūrā 2 nedēļas (pirms testēšanas ar plastmasas maisiņu un silikagelu ir nepieciešams izslēgt mitruma piekļuvi uzglabāšanas laikā un zāļu temperatūras paaugstināšanu istabas temperatūrā).

Veicot tiešu RIF, preparātam tiek uzklāts marķētu antivielu šķīdums tādā daudzumā, kas nepieciešams pilnīgai uztriepes pārklāšanai (25 - 30 μl). Zāles inkubē horizontālā stāvoklī mitrā kamerā 15 minūtes + 37 ° C temperatūrā. Reaģents nedrīkst izžūt, lai izvairītos no kļūdaini pozitīviem rezultātiem. Pēc tam uztriepi 30 sekundes mazgā tekošā ūdenī, noskalo destilētā ūdenī, nosusina un sagatavo mikroskopijai.

Veicot netiešu RIF, preparātam tiek uzklāts nepieciešamais anti-Chlamydia antivielu šķīduma daudzums, un pirmo inkubāciju veic tādos pašos apstākļos kā tiešās RIF laikā. Pēc tam preparātu nomazgā, žāvē gaisā un uzklāj otru reaģentu - marķētas antivielas pret hlamīdiju antivielām, un otro inkubāciju veic mitrā kamerā + 37 ° C temperatūrā 15 minūtes. Pēc mazgāšanas preparātu nosusina un sagatavo mikroskopijai. Gatavos preparātus ieteicams nekavējoties apskatīt. Ja nepieciešams, krāsainus preparātus var uzglabāt 1 - 2 dienas + 2-8 ° C temperatūrā tumšā vietā bez mitruma.

Mikroskopiju veic, izmantojot iegremdēšanas sistēmu. Iegremdēšanas mikroskopijai ir divas iespējas:

1. Eļļas iegremdēšana: Gatavam žāvētam preparātam uzklāj 20 - 25 μl montāžas šķidruma (glicerīnu, kas buferēts ar fosfāta buferšķīdumu ar pH 7,2 - 7,6), pārklāj to ar attaukotu pārklājošo stiklu, uz kura pēc tam uzklāj pilienu nefluorescējošas iegremdējamās eļļas un mikroskopē ar lēcu (marķējums “L ”- luminiscējošs) ar 90 palielinājumu un okulāru ar 5 palielinājumu.

2. Iegremdēšana ūdenī: 20 µl fosfāta buferšķīduma piliens ar pH 7,4 tiek uzklāts uz gatavo preparātu un mikroskopēts ar ūdens iegremdēšanas objektīvu (marķējums - balta svītra un “L” - luminiscējoša) ar palielinājumu 60 un okulāru ar palielinājumu 5. Ūdens iegremdēšana nodrošina vienmērīgāku, spilgts un skaidrs mirdzums.

RIF ļauj noteikt gan elementāru, gan retikulāru ķermeņu antigēnu struktūras. ET atrodas galvenokārt ārpusšūnu veidā, noapaļoti ar gludām malām, mazi (izmērs 1: 100 - 1: 150 attiecībā pret apkārtējām šūnām), viendabīga struktūra, tiem ir spilgti specifisks smaragda-zaļš mirdzums, kas, strādājot ar mikroskrūvi, var dot difrakcijas gredzenus (gredzenus). Delectorsky). RT ir daudz retāk sastopamas, atrodas galvenokārt intracelulāri, tām ir mazāk viendabīga struktūra, tās ir vairāk polimorfas, bet arī ar skaidrām malām un tām ir spilgti specifiska smaragda zaļa mirdzums. Jebkurš cits neregulāras formas, neregulāras neskaidras malas fluorescējošs materiāls ar blāvi zaļu krāsu vai citas krāsas mirdzumu attiecas uz artefaktiem. Konkrēta spīduma intensitāte, spilgtums un nokrāsa ir atkarīga no montāžas šķidruma vai mikroskopijai izmantotā bufera pH. Augsta FITC luminiscences intensitāte sārmainā vidē palielina metodes jutīgumu, bet izraisa objektu ar nespecifisku luminiscenci skaita pieaugumu un līdz ar to arī kļūdaini pozitīvus rezultātus. Skābā vidē FITC luminiscences intensitāte samazinās, kas var dot kļūdaini negatīvu rezultātu. Pavadošā mikroflora, kā arī apkārtējo šūnu kodoli ir nespecifiski iekrāsoti dažādos oranžas toņos ar indija bromīdu, to citoplazma - dažādos ķieģeļu brūnā Evans zilā toņos.

Lai iegūtu ticamu rezultātu, ieteicams apskatīt daudzus preparāta redzes laukus. Rezultāts tiek uzskatīts par pozitīvu, ja zāles satur epitēlija šūnas un ir iespējams noteikt vismaz 6 elementārķermeņus ar visām iepriekšminētajām pazīmēm.

Mazāka patogēna daudzuma noteikšana padara rezultātu apšaubāmu un prasa atkārtotu pārbaudi, vēlams uz provokācijas fona (pārtika - alkohols, medikamenti - pirogēna injekcija, mehāniska - urīnizvadkanāla masāža uz bug). Ārstēšanas kontrole jāveic ne agrāk kā divas nedēļas vēlāk, jo ir iespējams saglabāt neizdzīvoto dzīvotnespējīgā patogēna antigēno materiālu, kas viltus pozitīvi rezultāti... Iegūstot 3 negatīvus pētījuma rezultātus vīriešiem mēneša laikā un sievietēm 3 menstruālo ciklu laikā, Nr klīniskās izpausmes hlamīdiju infekcija norāda uz atveseļošanos.

Pareizi sagatavojot pacientu, ievērojot materiāla ņemšanas un reakcijas iestudēšanas noteikumus, RIF ir ļoti jutīga un specifiska metode uroģenitālās hlamīdijas diagnosticēšanai un ļauj identificēt patogēnu 90 - 95% pacientu. Šī metode ir salīdzinoši lēta, viegli izpildāma, ļoti informatīva, neprasa īpašu dārgu aprīkojumu, ļauj ātri iegūt rezultātu (0,5 - 1 stunda) un vizuāli kontrolēt materiāla ņemšanas kvalitāti pētījumiem.

Metodes, kurās izmanto molekulārās bioloģijas principus

Grupā ietilpst DNS zondu un polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) metodes, kas ļauj identificēt patogēna ģenētisko materiālu pētītajā biomateriālā. Komplekti hlamīdiju diagnosticēšanai ar DNS zondēm joprojām tiek izstrādāti un tiek veikti klīniskie pētījumi.

PĶR tiek aktīvi ieviests laboratorijas diagnostikas praksē. Metode ir balstīta uz konkrētas patogēna DNS vai RNS sekvences izolēšanu, izmantojot komplementārus gruntējumus, kam seko tā daudzkārtēja kopēšana un uzkrāšana turpmākai noteikšanai ar parastām noteikšanas metodēm (elektroforēzi vai ELISA). Šai metodei ir augsta specifika un jutība, tā gandrīz tuvojas kultūrai un ļauj testa materiālā atklāt atsevišķus patogēnus. PĶR metode prasa īpašu dārgu aprīkojumu, atsevišķu speciāli aprīkotu laboratoriju, atbilstošu apmācību un augsti kvalificētu medicīnas personālu. Tajā pašā laikā Krievijā izmantoto primeru sertificēšanas trūkums un pietiekama pieredze PĶR metodes piemērošanā, testa materiāla specifika, tā bieža piesārņošana ar vienlaicīgu mikrofloru (kas var dot kļūdaini pozitīvus rezultātus) neļauj mums viennozīmīgi spriest par tā vērtību uroģenitālās hlamīdijas diagnostikā.

Tādējādi pašlaik vispieejamākā, vienkāršākā un vienlaikus ļoti informatīvā metode uroģenitālās hlamīdijas diagnosticēšanai un izārstēšanas noteikšanai ir tiešā imūnfluorescences (RIF) reakcija. Slimības kursa dinamikas un ārstēšanas efektivitātes uzraudzība jāveic, nosakot anti-hlamīdiju antivielu titru asins serumā, izmantojot enzīmu imūnsorbcijas testu (ELISA).

Imūnfluorescences metode (RIF, imūnfluorescences reakcija, Koonsa reakcija) ir metode specifisku AH noteikšanai, izmantojot antivielas, kas konjugētas ar fluorohromu. Piemīt augsta jutība un specifika.

Izmanto ekspress diagnostikai infekcijas slimības (patogēna identifikācija testa materiālā), kā arī leikocītu un imūnfenotipēšanas un citu šūnu AT un virsmas receptoru un marķieru noteikšanai.

Baktēriju un vīrusu antigēnu noteikšana infekcijas materiālos, dzīvnieku audos un šūnu kultūrās, izmantojot fluorescējošas antivielas (serumus), tiek plaši izmantota diagnostikas praksē. Fluorescējošu serumu sagatavošana pamatojas uz dažu fluorohromu (piemēram, fluoresceīna izotiocianāta) spēju ķīmiski saistīties ar sūkalu olbaltumvielām, neietekmējot to imunoloģisko specifiku.

Ir trīs veidu metodes: tieša, netieša, ar papildinājumu. Tiešā RIF metode ir balstīta uz faktu, ka audu antigēni vai mikrobi, kas apstrādāti ar imūnserumiem ar antivielām, kas marķētas ar fluorohromiem, spēj mirdzēt fluorescējoša mikroskopa UV staros. Ar šādu luminiscējošu serumu apstrādātajā uztriepē esošās baktērijas zaļā apmales veidā spīd gar šūnu perifēriju.

Netiešā RIF metode sastāv no antigēna-antivielu kompleksa noteikšanas, izmantojot antiglobulīna (pret antivielām) serumu, kas marķēts ar fluorohromu. Šim nolūkam uztriepes no mikrobu suspensijas apstrādā ar antimikrobiālā trušu diagnostiskā seruma antivielām. Tad antivielas, kas nav saistījušās ar mikrobu antigēniem, tiek nomazgātas, un uz mikrobiem palikušās antivielas tiek noteiktas, uztriepi apstrādājot ar antiglobulīna (prettrušu) serumu, kas marķēts ar fluorohromiem. Rezultātā veidojas mikrobu + pretmikrobu trušu antivielu + pret trušu antivielu komplekss, kas apzīmēts ar fluorohromu. Šis komplekss tiek novērots fluorescējošā mikroskopā, tāpat kā tiešajā metodē.

Mehānisms. No testa materiāla uztriepi sagatavo uz priekšmetstikliņa, nostiprina uz liesmas un apstrādā ar trušu imūno serumu, kas satur antivielas pret patogēna antigēniem. Lai izveidotu antigēna-antivielu kompleksu, preparātu ievieto mitrā kamerā un inkubē 37 ° C temperatūrā 15 minūtes, pēc tam to rūpīgi nomazgā ar izotonisko nātrija hlorīda šķīdumu, lai noņemtu antivielas, kas nav saistītas ar antigēnu. Pēc tam preparātam tiek uzklāts fluorescējošs antiglobulīna serums pret trušu globulīniem, tas tiek turēts 15 minūtes 37 ° C temperatūrā, un pēc tam preparātu rūpīgi nomazgā ar izotonisko nātrija hlorīda šķīdumu. Fluorescējoša antiglobulīna seruma saistīšanās rezultātā ar specifiskām antigēnam piestiprinātām antivielām veidojas gaismas antigēna-antivielu kompleksi, kurus nosaka ar luminiscences mikroskopiju.

22. Imūnanalīze - laboratorijas imunoloģiskā metode dažādu savienojumu, makromolekulu, vīrusu utt. kvalitatīvai vai kvantitatīvai noteikšanai, kuras pamatā ir specifiska antigēna-antivielu reakcija. Izveidotā kompleksa noteikšana tiek veikta, izmantojot fermentu kā signālu signālu reģistrēšanai.

Klasifikācija:

Konkurētspējīgs (sistēmā ir gan analizētais savienojums, gan tā analogs)

Nekonkurējošs (ja sistēma satur tikai analizēto savienojumu un atbilstošās saistīšanās vietas (antigēnu un specifiskās antivielas))

Tieša un netieša

1. Serumu, kas satur am maisījumu, inkubē ar ag, kas piestiprināts uz cieta substrāta.

2. kas nesaistās ag, noņem, atkārtoti mazgājot.

3. Pievienojiet antivielām, kas saista ag, ar fermentu iezīmētu antiserumu

4. nosaka marķiera enzīma daudzumu, kas saistīts ar

Netiešs:

Ab pozitīvs serums

1. specifiskas antivielas pētītajā serumā saista ag, kas fiksēts uz cieta substrāta

2. Specifiskas antivielas, kas marķētas ar fermentu, nesadarbojas ar saistītām antivielām; marķiera saturs substrātā ir mazs

Ab negatīvs serums

1. Nespecifiskās antivielas pētītajā serumā nesaista antivielas, kas fiksētas uz cieta substrāta

2. Specifiskas aminoskābes, kas apzīmētas ar fermentu, mijiedarbojas ar fiksētu argu - marķiera saturs ir augsts

Visizplatītākā ir cietās fāzes ifa, kurā viens no imūnās atbildes komponentiem (antigēns vai antiviela) ir sorbēts uz cieta nesēja. Polistirola mikropaneļus izmanto kā cietu nesēju. Nosakot antivielas, iedobēs ar sorbēto antigēnu secīgi pievieno ar fermentu iezīmētu asins serumu un fermenta un hromogēna šķīdumu maisījumu. Katru reizi pēc cita komponenta pievienošanas nesaistītos reaģentus no akām noņem, rūpīgi mazgājot. Ja rezultāts ir pozitīvs, hromogēna šķīduma krāsa mainās.

Cietās fāzes nesēju var sensibilizēt ne tikai ar antigēnu, bet arī ar antivielu. Tad iedobēs pievieno vēlamo antigēnu ar adsorbētām antivielām, pievieno ar enzīmu iezīmētu imūnserumu pret antigēnu un pēc tam fermenta un hromogēna substrāta šķīdumu maisījumu.

Pielietojums:vīrusu un baktēriju patogēnu izraisītu slimību diagnosticēšanai.

23. Seroloģiskā reakcija - reakcija, ar kuras palīdzību tiek pētīta antigēna (mikroba, vīrusa, svešķermeņu olbaltumvielu) reakcija ar asins seruma antivielām.

Seroloģiskie testi - Šīs ir metodes, kā pētīt noteiktas antivielas vai antigēnus pacientu asins serumā, pamatojoties uz imūnreakcijām. Ar to palīdzību tiek identificēti arī mikrobu vai audu antigēni, lai tos identificētu.

Antivielu noteikšana pret infekcijas ierosinātāju vai atbilstošo antigēnu pacienta asins serumā ļauj noteikt slimības cēloni.

Seroloģiskos pētījumus izmanto arī, lai noteiktu asins grupu antigēnus, audu antigēnus un imunitātes humorālās saites līmeni.

Seroloģiskie testi ietver dažādas seroloģiskas reakcijas:

1. Aglutinācijas reakcija.

2. Nokrišņu reakcija.

3. Neitralizācijas reakcija.

4. Reakcija ar komplementa piedalīšanos.

5. Reakcija, izmantojot marķētas antivielas vai antigēnus.

Imūnfluorescences reakcija (RIF) - seroloģiskā reakcija, ļaujot noteikt antivielas pret zināmiem antigēniem. Metode sastāv no krāsotu uztriepju mikroskopijas.

Šo reakciju izmanto imunoloģijā, viroloģijā un mikrobioloģijā. Tas ļauj noteikt vīrusu, baktēriju, sēnīšu, vienšūņu un ICC klātbūtni. RIF diagnostikas praksē tiek ļoti plaši izmantots vīrusu un baktēriju antigēnu noteikšanai infekcijas materiālā. Metodes pamatā ir fluorohroma spēja saistīties ar olbaltumvielām, netraucējot to imunoloģisko specifiku. To galvenokārt lieto urīnceļu infekciju diagnostikā.

Imūnfluorescences reakcijas veikšanai ir šādas metodes: tieša, netieša, ar komplementu. Tiešā metode sastāv no materiāla krāsošanas ar fluorohromiem. Sakarā ar mikrobu vai audu antigēnu spēju mirdzēt fluorescējoša mikroskopa UV staros, tos definē kā šūnas ar spilgtas krāsas zaļu apmali.

Netieša metode ir antigēna + antivielu kompleksa noteikšana. Lai to izdarītu, testa materiālu apstrādā ar antimikrobiālā trušu seruma antivielām, kas paredzētas diagnostikai. Pēc antivielu saistīšanās ar mikrobiem tās atdala no nesaistītajām un apstrādā ar anti-trušu serumu, kas marķēts ar fluorohromu. Pēc tam, izmantojot ultravioleto staru mikroskopu, tāpat kā ar tiešo metodi, nosaka mikrobu + antimikrobiālo antivielu + pret trušu antivielu kompleksu.

Imūnfluorescences reakcija ir neaizstājama sifilisa diagnostikā. Fluorhroma ietekmē sifilisa izraisītājs tiek definēts kā šūna ar dzeltenzaļu robežu. Gaismas neesamība nozīmē, ka pacients nav inficēts ar sifilisu. Šo testu bieži izraksta ar pozitīvu Vasermana reakciju. Šī metode ir ļoti efektīva diagnostikā, jo tā ļauj identificēt patogēnu agrīnās stadijas slimības.

Papildus tam, ka RIF ļauj diagnosticēt sifilisu, to lieto arī, lai noteiktu tādu patogēnu klātbūtni kā hlamīdijas, mikoplazmas, Trichomonas, kā arī gonorejas un dzimumorgānu herpes patogēnus.

Analīzei izmanto uztriepes vai venozās asinis. Uztriepes procedūra ir pilnīgi nesāpīga un nerada briesmas. Ir nepieciešams sagatavoties šīs analīzes veikšanai. Divpadsmit stundas pirms nav ieteicams lietot tādus higiēnas līdzekļus kā nedaudz vai želejas. Arī dažreiz saskaņā ar ārsta liecību tiek veikta provokācija. Lai to izdarītu, viņi iesaka lietot pikantu ēdienu vai alkoholu, vai arī tiek veikta provocējošas vielas, piemēram, gonovakcīnas vai pirogenāla, injekcija. Turklāt intervālam starp antibakteriālo līdzekļu lietošanu un analīzes veikšanu jābūt vismaz četrpadsmit dienām.

Novērtējot rezultātus, jāņem vērā fakts, ka luminiscence tiek novērota ne tikai dzīvās, bet arī mirušās baktērijās, īpaši hlamīdijās. Pēc antibiotiku kursa mirdz arī mirušās hlamīdiju šūnas.

Pareizi sagatavojot pacientu un ievērojot uztriepes paņemšanas tehniku, šī analīze ļauj identificēt slimības agrīnā stadijā, kas ir ļoti svarīgi savlaicīgai ārstēšanai. Pozitīvās puses Šī metode ir īss laiks, lai iegūtu rezultātu, ieviešanas vieglumu un zemas analīzes izmaksas.

Starp trūkumiem var minēt faktu, ka analīzei nepieciešams pietiekami liels pētāmā materiāla daudzums. Turklāt rezultātus var novērtēt tikai pieredzējis speciālists.

Pirmo reizi Kumbs piedāvā 1942. gadā, RIF pamatā ir antigēnu noteikšana klīniskajā materiālā, asins šūnu preparātos utt., Izmantojot monoklonālas antivielas vai serumus, kas marķēti ar fluorohromu (tiešais RIF). Pirmās (diagnostiskās) antivielas var noteikt ar anti-imūnglobulīna serumu, kas marķēts ar fluorohromiem (netiešs RIF). Ir RIF modifikācijas, lai noteiktu antivielas pret infekcijas izraisītājiem asins serumā vai antivielas asins serumā.

RIF popularitāti izskaidro tā rentabilitāte, plaša diagnostikas komplektu klāsta pieejamība un atbildes iegūšanas ātrums. Mūsdienās šajā reakcijā tiek izmantoti gan poliklonālie serumi, gan monoklonālās antivielas, kas apzīmētas ar fluoresceīna izotiocianātu (FITC). Lai samazinātu nespecifisko fona luminiscenci, preparātus apstrādā ar liellopu seruma albumīnu, kas marķēts ar rodamīnu vai Evansu zilu.

Visbiežāk RIF tiek izmantots, lai ātri atklātu patogēnu patoloģiskā materiālā. Šajā gadījumā no pētāmā materiāla uz stikla slaida tiek sagatavota uztriepe, tāpat kā parastajai mikroskopijai. Zāles tiek fiksētas ar metilspirtu, acetonu vai citu ķīmisku fiksatoru. Uz fiksētās uztriepes virsmas tiek uzklāti FITC marķēti serumi vai monoklonālas antivielas (netiešas RIF gadījumā zāles vispirms apstrādā ar serumu pret vēlamo antigēnu un pēc tam ar iezīmētām antivielām pret imūnglobulīniem, ko lieto pirmajā posmā). Tā kā RIF ir sava veida neviendabīga analīze, vienu posmu no otra atdala ar mazgāšanu.

Reakcijas rezultāti tiek ņemti vērā, izmantojot luminiscējošu mikroskopu, kura optiskajā sistēmā ir uzstādīts gaismas filtru komplekts, nodrošinot preparāta apgaismojumu ar ultravioleto vai zili violeto gaismu ar noteiktu viļņa garumu. Pētnieks novērtē spīduma raksturu, objektu formu, lielumu un to relatīvo stāvokli.

Nosakot RIF antivielu noteikšanai, no patogēna standartcelma tiek sagatavotas uztriepes. Testa serumu uzklāj uz uztriepes. Ja tajā ir vēlamās antivielas, tās saistās ar mikrobu šūnu antigēniem. Preparāta mazgāšana ar buferšķīdumu noņem nesaistītās antivielas. Tad zāles apstrādā ar marķētu serumu pret cilvēka imūnglobulīniem. Ja reakcijas rezultāts pozitīvs ir uztriepes mikroskopijas laikā fluorescējošā mikroskopā, tiek novērots specifisks standartkultūras mirdzums.

Galvenais RIF trūkums ir tā subjektivitāte.

Klasiskie šīs reakcijas specifiskuma kritēriji ir:

· Raksturīgā morfoloģija, patogēna lielums un atrašanās vieta uztriepē;

· Objekta spīduma perifērais raksturs;

· Fluorescences krāsa;

· Fluorescences intensitāte.

Pētot lielus objektus (Trichomonas, cilvēka šūnas, šūnas, kas inficētas ar baktērijām vai vīrusiem), šie kritēriji ļauj iegūt ticamu rezultātu. Tajā pašā laikā hlamīdiju un mikoplazmas pamata ķermeņiem ir izmēri, kas atrodas uz luminiscējošā mikroskopa izšķirtspējas robežas. Šajā gadījumā mikroorganismu morfoloģijas novērtēšana ir grūta, un luminiscence zaudē perifēro raksturu. Pārējie kritēriji acīmredzami nav pietiekami, lai ticami identificētu novēroto mikroorganismu. Saistībā ar iepriekš minēto reakcijas uzskaites subjektīvais raksturs izvirza īpašas prasības pētījuma veicēja personāla kvalifikācijai.

2.2. Ar laiku izšķirta fluorescences imūnanalīze (FIA BP, Etkins R. et Wallac O., 1984)

Šāda veida FIA pamatā ir viena no reaģentiem cietās fāzes sorbcijas principi un sviestmaižu tehnoloģijas izmantošana, t.i. dubultā atzīšana, līdzīgi kā ELISA. Tomēr svarīga metodes atšķirība ir lantanīda helātu (retzemju elementu eiropija, samārijs, terbijs un disprozijs) izmantošana kā etiķete. FIA VR priekšrocības ir tā augsta jutība, ELISA līdzīgā iestudēšanas tehnoloģija un iespēja ievērojami palielināt noderīgo signālu ļoti augstās signāla un trokšņa attiecības dēļ. Īpaša fluorescējoša etiķete fluorescē neizmērojami spēcīgāk un ilgāk nekā fona fluorescence. Turklāt tagam ir spēja atjaunot spīdēšanu (impulsa ierosmes starojums ar 1 s periodu - uzskaitei tiek izmantoti vairāk nekā 1000 impulsi), kas noved pie lietderīgā signāla uzkrāšanās (pastiprināšanas). Aprakstīto sistēmu realizē PerkinElmer, ASV, ar nosaukumu Delfia, un tās jutība antigēna noteikšanā ir lielāka par 10-17 M.

2.3. Plūsmas citometrija

Kūnss atklāja 1942. gadā, imūnfluorescences reakcija nav jauna pētījumu metode. Tomēr hibridomas tehnoloģiju parādīšanās, kas ļāva iegūt monoklonālas antivielas, šai reakcijai piešķīra "otro dzīvi", jo to izmantošana vairākas reizes ļāva palielināt šīs reakcijas jutīgumu un specifiskumu.

Un šodien mēs jums sīkāk pastāstīsim par tiešās un netiešās imūnfluorescences (RIF) reakciju kā Koons diagnostikas metodi pieaugušajiem vīriešiem un sievietēm grūtniecības laikā.

Kas ir imūnfluorescences reakcija

Nodrošinot lielisku iespēju ātri iegūt precīzu diagnozi, imunofluorescences reakcija ļauj noteikt patogēna klātbūtni patoloģiskajā materiālā. Šim nolūkam tiek izmantota uztriepe no materiāla, kas ir īpaši apstrādāts, izmantojot marķētu FITC (fluoresceīna izotiocianāts), un tiek pētīts kā neviendabīga analīze.

Rezultāta iegūšanai tiek izmantots luminiscējošs mikroskops; tā optiskajā sistēmā ir gaismas filtru komplekts, lai preparātu nodrošinātu ar zili violetu vai ultravioleto gaismu ar noteiktu viļņa garumu. Šis nosacījums ļauj fluorohromam atstaroties noteiktā diapazonā. Pētnieks novērtē spīduma īpašības, tā raksturu, objektu lielumu un to relatīvo stāvokli.

Kam tas ir piešķirts?

Imūnfluorescences testu var izmantot, lai diagnosticētu dažādas vīrusu slimības. Jo īpaši tas ir paredzēts visaptverošai pārbaudei, lai noteiktu šādus faktorus:

• vīrusa klātbūtne organismā;
• salmonellas infekcija;
• noteiktu antigēnu esamība organismā;
• tiek atklāta ķermeņa inficēšanās ar hlamīdijām, mikoplazmu un citiem mikroorganismiem iespējamība uzbudināt cilvēka vīrusu slimības;
• dzīvnieku vīrusu slimību diagnostika.

Uzskaitītās indikācijas ļauj izmantot imūnfluorescences reakciju, atklājot dažāda rakstura vīrusu slimības cilvēka un dzīvnieka organismā.

Programmas mērķi

Tā kā šai diagnostikas metodei ir daudz priekšrocību, kas ietver tās augstu efektivitāti, ieviešanas ātrumu un rezultāta iegūšanu, kā arī liela daudzuma kontrindikāciju neesamību, tā nosaka vīrusu infekciju klātbūtni organismā. Tādēļ šo analīzi var noteikt gan diagnozes noteikšanai, gan precizēšanai, pamatojoties uz kuru tiek noteikts ārstēšanas režīms.

Procedūra neizraisa nepatīkamas sajūtas, jo ir nepieciešams iegūt materiālu analīzei, kas tiek ņemts no jebkura ķermeņa šķidruma: siekalām, krēpām, skrāpējumiem no gļotādu virsmas. Analīzei var ņemt arī asinis. Imūnfluorescences reakcijas biežumu nosaka ārstējošais ārsts, kuram jāiegūst dati par organismā notiekošo procesu dinamiku.

Tā kā šī analīze nekaitē gan ķermenim, gan cilvēka vispārējai labsajūtai, to var parakstīt pēc nepieciešamības.

Šādas procedūras veidi

Mūsdienās tiek izmantotas vairākas šīs analīzes šķirnes, katrai no tām ir vairākas specifiskas iezīmes, un tās ļauj iegūt visprecīzāko priekšstatu par procesiem, kas notiek organismā.

Imūnfluorescences reakciju veidi ietver:

1. - viens no visstraujāk attīstošajiem diagnostikas veidiem, šī analīze ļauj iegūt kvantitatīvus datus, neizmantojot sērijveida atšķaidījumus. Izmantojot iegūtos šķidruma optiskā blīvuma mērījumus, ir iespējams precīzi noteikt vēlamās sastāvdaļas koncentrācijas līmeni. Šāda veida analīzes plašās iespējas tiek izmantotas, ja tās ieviešanai izmanto monoklonālas antivielas, kas ļauj noteikt infekcijas procesa fāzi, tā smagumu;
2. DNS diagnostika - šīs metodes pamatā ir komplementāra nukleotīdu saistīšana, kurai var izmantot tādus šķidrumus kā siekalas, asinis, cerebrospinālais šķidrums, urīns, krēpas, biopsijas, asinis. Šī metode ir visefektīvākā, lai noteiktu papilomas vīrusu klātbūtni organismā, tomēr daudzas mūsdienu testēšanas sistēmas laiku pa laikam var dot kļūdaini pozitīvus un kļūdaini negatīvus rezultātus. Tos var izraisīt šķidruma paraugu piesārņošana specifiskas DNS analīzei, kuru klātbūtne var būt ligzdota vai pilnīga;
3. imūnhromogrāfija - šīs metodes specifika, lai noteiktu patoloģiskas vides un vīrusu klātbūtni organismā, sastāv no marķētu antivielu lietošanas reakcijas laikā. Šo diagnostikas metodi izmanto, lai noteiktu A grupas streptokoku, kā arī šādu veidu hlamīdiju infekcijas procesa aktivitātes pakāpi: Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia no Oxoid. Ar visaugstāko iespējamo jutību pārbauda sistēmas, kas balstītas uz šo pētījumu metodoloģiju. parasti izmanto kā orientēšanās testu.

Uzskaitītajām šķirnēm ir izpildes īpatnības un rezultātu īpašās īpašības, tomēr to visu mērķis ir iegūt datus par patoloģisko mikroorganismu un vīrusu klātbūtni organismā, kā arī par to pavairošanas un aktivitātes pakāpi.

Indikācijas

Imūnfluorescences reakciju var noteikt, lai noteiktu jebkura veida patoloģisko vidi organismā.

Šāda veida diagnozes laikā nosaka visu veidu hlamīdijas, Trichomonas, gonokokus un, kā arī visu veidu lamblijas. un citām slimībām ir nepieciešama arī RIF. Ārsta iecelšana ir obligāta tā īstenošanai.

Kontrindikācijas

Tā kā šīs reakcijas veikšanai kā testa materiālam ir nepieciešams jebkura veida ķermeņa šķidrums, to uzņemšana parasti nav grūta, un imūnfluorescences reakcijas īstenošanai nav kontrindikāciju. Tomēr grūtniecības laikā un bērniem līdz 6 mēnešu vecumam materiālu ņemšana pētījumiem tiek veikta ar maksimāliem piesardzības pasākumiem.

Kontrindikāciju trūkums ļauj veikt šāda veida diagnozi, kad ārsts izraksta visiem pacientiem. Tās drošību garantē dezinficētu instrumentu un vienreiz lietojamu šļirču izmantošana.

Sagatavošanās procedūrai

Materiāla ņemšanai šai analīzei nav īpatnību. Viņam paņem asinis tukšā dūšā, lai to nebūtu augsts saturs tajā esošās vielas, kas var mainīties patiesie rādījumi un sniedz nepatiesu priekšstatu.

Kā notiek testu vākšana

Tā kā īpaša sagatavošana analīzei nav nepieciešama, tiek izslēgta tikai ēdiena uzņemšana 12 stundas pirms tā un lietošanas neesamība narkotikas, testa materiāla paraugu ņemšanu veic kā normālu ķermeņa šķidruma ņemšanas procesu analīzei.

Subjektīvās sajūtas procedūras laikā var atšķirties atkarībā no jutīguma.

Rezultātu dekodēšana

Mūsdienu testa sistēmu izmantošana ļauj iegūt visprecīzākos analīzes rezultātus. Rezultāta atšifrēšanai tiek izmantoti šādi dati:

• fluorescences intensitātes pakāpe;
• fluorescences toni;
• objekta kvēlojošā procesa perifērais raksturs;
• morfoloģijas raksturojums, patogēna atrašanās vieta ņemtajā testa materiāla uztriepē un tā lielums.

Pētot lielus objektus (piemēram, gardenrella, Trichomonas, šūnas, kas jau ir inficētas ar vīrusiem), iepriekš minētie kritēriji ļauj iegūt visticamākos rezultātus. Tomēr mikoplazmas un hlamīdiju pamata ķermeņiem ir izmēri, kas atrodas uz luminiscējošā mikroskopa izšķirtspējas robežas, kas apgrūtina

tas nesaņem precīzu rezultātu, jo perifērijas spīdums zaudē daļu intensitātes. Atlikušie kritēriji vairs nav pietiekami, lai precīzi identificētu pētāmos mikroorganismus. Šī iemesla dēļ speciālistiem, kas veic, tiek noteiktas īpašas prasības dotais skats pētījumi: viņu kvalifikācijas līmenim jābūt pietiekamam, lai darbotos ar pieejamajiem datiem.

Šī iemesla dēļ tikai ārsts ar atbilstošu kvalifikācijas līmeni var tikt galā ar iegūtās analīzes dekodēšanu. Par pētījumu cenu, izmantojot RIF metodi, lasiet zemāk.

vidējās izmaksas

Imūnfluorescences reakcijas izmaksas ir atkarīgas no atrašanās vietas un līmeņa medicīnas iestāde un arī analīzi veicošā analītiķa kvalifikācija. Šodien izmaksas svārstās no 1280 līdz 2160 rubļiem.

Zemāk esošajā videoklipā jūs uzzināsiet vairāk par imunoloģiskām reakcijām: