Sisteme de testare imunologică "ds-ifa-hbeAg" și "ds-ifa-anti-hbe. Analiza pentru sifilis

Pentru o evaluare cuprinzătoare a stării corpului, se utilizează metoda ELISA de diagnosticare. Imunotestul enzimatic este conceput pentru a diagnostica imunodeficiențele infecțioase, hematologice, primare și secundare.

Ce este analiza ELISA

Mulți pacienți sunt interesați de metoda ELISA: ce este, de ce se desfășoară studiul. Testul imunosorbent legat de enzime a început să fie utilizat relativ recent. Inițial, structurile antigenice au fost studiate cu ajutorul său și au fost realizate numai în scopuri științifice. Apoi, oamenii de știință au ajuns la concluzia că, cu ajutorul enzimelor, este posibil să se identifice anticorpi specifici care apar ca răspuns la boala în curs de desfășurare.

Inițial, această tehnică a fost utilizată doar de instituțiile medicale cu profil îngust, în principal la stațiile de transfuzie de sânge. Metoda ELISA are o importanță deosebită pentru detectarea infecției cu HIV.

Astăzi această metodă are o gamă largă de aplicații. Laboratoarele moderne îl folosesc pentru a diagnostica:

• tumori;
• tulburări hormonale;
• infecții;
• procese infecțioase cronice sau transferate anterior;
• helminti.

Dacă apare un proces infecțios în organism, atunci acest tip de diagnostic este considerat cel mai optim pentru determinarea tipului de boală.

Esența metodei și tipurile acesteia

Metoda ELISA - ce este, care este esența acestui tip de cercetare? Aceasta și multe alte întrebări sunt de interes pentru pacienți. Baza acestei metode de diagnostic este legarea celulelor imune ale organismului de antigenii agenților infecțioși. Complexul rezultat este determinat folosind o enzimă specială.

Pentru a înțelege principiul metodei ELISA, trebuie să știți cum se desfășoară reacția antigen-anticorp. Antigenul este o moleculă derivată din proteine \u200b\u200bstrăină corpului, care pătrunde odată cu infecția. Particulele din sângele altcuiva care nu se potrivesc cu grupul sunt, de asemenea, considerate antigene. În organism, acestea provoacă un răspuns imun care vizează protejarea împotriva substanțelor străine. Prin urmare, corpul uman produce anticorpi - imunoglobuline care se pot lega de antigene, formând un complex imunitar. Astfel de compuși sunt mult mai ușor de recunoscut și distruși de către celulele imune.

Reacția pentru prezența unor astfel de complexe imune se desfășoară în condiții de laborator, folosind compuși gata pregătiți pentru a determina dacă există sânge similar.

Esența metodei ELISA este destul de simplă, totuși, datorită faptului că se efectuează un test de sânge pentru a detecta multe infecții și boli, există mai multe dintre soiurile sale. Fiecare dintre ele diferă în ceea ce privește aspectul și domeniul de aplicare. Poate fi ELISA directă sau indirectă. Metoda directă implică utilizarea anticorpilor imobilizați care reacționează cu antigeni. Principalul avantaj al acestei metode este că toate procesele pot fi automatizate, ceea ce înseamnă că diagnosticarea durează puțin.

Metoda indirectă presupune că se utilizează anticorpi secundari. Și pe faza solidă, antigenul este imobilizat. Analiza vă permite să determinați anticorpi împotriva diferitelor antigene. Acest lucru ajută la obținerea unui rezultat mai precis, dar metoda este complexă.

Beneficiile cercetării

Metoda ELISA are multe avantaje față de alte metode de diagnostic. Principalele includ următoarele:

• sensibilitate crescută;
• stabilitatea la depozitare a ingredientelor;
• viteza de diagnosticare;
• se poate folosi o cantitate mică de material de testare;
• există posibilitatea automatizării tuturor proceselor;
• infecția poate fi detectată în primele etape.

Această metodă de diagnostic este universală, prin urmare este potrivită pentru efectuarea unui examen de masă. Cu ajutorul analizei, este posibilă urmărirea dinamicii cursului procesului infecțios.

Indicații pentru analiză și eșantionarea materialelor

Un studiu care utilizează metoda ELISA poate fi prescris pentru suspiciunea de multe boli:

Sângele venos este examinat pentru prezența anticorpilor. Înainte de analiză, sunt izolate elemente din aceasta care pot complica studiul. Pot fi colectate și alte fluide biologice.

Pentru a obține cele mai exacte informații, prelevarea de sânge se efectuează pe stomacul gol. Dacă procedura a fost prescrisă pentru a determina o infecție latentă, cu câteva săptămâni înainte de analiză, trebuie să încetați să luați medicamente antibacteriene și antivirale. În funcție de echipamentul laboratorului unde a fost preluat materialul, rezultatul poate fi obținut în termen de 24 de ore. În cazuri urgente, acest timp este redus la câteva ore.

Analiza pentru sifilis

Utilizarea metodei ELISA ajută la determinarea prezenței multor infecții în organism, în special a sifilisului. Pentru studiu, sângele este prelevat dintr-o venă pe stomacul gol. Apoi, se efectuează un studiu pentru a ajuta la determinarea nu numai a prezenței bolii în organism, ci și a momentului exact al apariției acesteia, deoarece pe parcursul evoluției bolii, unii anticorpi sunt înlocuiți cu alții într-o ordine strict definită.

În faza acută, indicând un curs prelungit al bolii, sau cu o exacerbare a unei infecții cronice, se vor găsi în sânge imunoglobuline de tip M. Prezența imunoglobulinelor de tip A indică faptul că infecția a fost în organism de mai bine de 4 săptămâni. Imunoglobulinele din grupa G indică înălțimea bolii sau a terapiei anterioare.

Prin gradul de culoare al găurilor, se evaluează intensitatea cursului procesului infecțios, deoarece saturația sa depinde de numărul de complexe imune formate.

Testul HIV

Metoda ELISA este, de asemenea, utilizată pentru a analiza pentru că, în acest caz, are anumite caracteristici care sunt asociate cu evoluția și progresia bolii. Această metodă de cercetare este considerată cea mai acceptabilă pentru determinare, dar nu trebuie efectuată mai devreme de o lună după expunerea la factori de risc. Acest lucru se datorează prezenței unei perioade de incubație cuprinsă între 45 de zile și 6 luni. De aceea analiza trebuie repetată șase luni mai târziu.

• ascariaza;
• giardioza;
• toxoplasmoza etc.

În ciuda tuturor avantajelor, există și dezavantaje ale metodei ELISA. Principalul dezavantaj este că, atunci când efectuează un studiu, medicul trebuie să aibă în prealabil o presupunere cu privire la boală.

Dacă nu este posibil să se găsească accidental agentul patogen și să se determine proprietățile sale imunoanalizate. Testul indică doar prezența anticorpilor în sângele pacientului. Mai mult, aceasta este o analiză destul de costisitoare.

Decodarea analizei

Rezultatul unui ELISA de înaltă calitate va fi fie prezența anticorpilor, fie absența lor în sânge. Dacă se efectuează analize cantitative, atunci concentrația anticorpilor poate fi exprimată fie într-o valoare numerică, fie într-un anumit număr de semne +.

În plus, indicatori precum:

Indicatorul IgM indică cursul unui proces infecțios acut în organism. Absența sa completă poate indica absența agentului cauzal al bolii sau tranziția acesteia la stadiul cronic.

O citire a IgA cu un test IgM negativ indică o infecție cronică sau latentă. Prezența simultană a IgM și IgA indică faptul că boala este în stadiul acut... Prezența IgG indică trecerea bolii la stadiul cronic sau despre recuperarea completă și dezvoltarea imunității.

Acum există teste ELISA speciale pe care le poți face singur.

Titularii brevetului RU 2515051:

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei și medicinei. Sistem de testare imunologică pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane de tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în serul uman (plasmă). Sistemul de testare include un imunosorbent pe baza antigenelor de tip 1 ale virusului imunodeficienței umane (HIV-1 și HIV-1 grup O env), soluție de diluare a probei (PPC) și reactivi de detectare (conjugați, cromogen / substrat). Invenția se referă, de asemenea, la o metodă pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în serul de sânge uman (plasmă), prin examinarea serului de sânge al pacientului utilizând testul descris de imunosorbent legat de enzime. Invenția face posibilă determinarea rapidă și ușoară a momentului probabil al infecției cu HIV. 2 n.p. cristale f, 4 tab., 2 ex.

INVENȚIA se referă la domeniul biotehnologiei și medicinei. Și poate fi utilizat pentru a determina momentul probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane de tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în serul uman (plasmă).

Răspândirea infecției cu HIV rămâne o problemă reală lumea modernă... Deoarece diagnosticarea în timp util și de înaltă calitate este un mijloc real de reducere a răspândirii infecției cu HIV, dezvoltarea unui sistem eficient de testare care poate determina perioada probabilă de infecție este o sarcină importantă a societății moderne.

Analiza stadiului tehnicii a arătat existența unui număr de metode și teste propuse de diferiți autori pentru determinarea etapelor infecției cu HIV folosind diferite metode. Cunoscut, de exemplu, un test genetic molecular bazat pe determinarea încărcăturii virale a sângelui periferic prin metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR) (Kravchenko A.V., Serebrovskaya L.V., Golokhvostova E.L. și alții. Timazid în combinație cu Khivid și Invirase în terapia complexă a pacienților cu infecție HIV - Epidemiologie și boli infecțioase... - 1998. - Nr. 5 - p.51-52). O metodă cunoscută pentru evaluarea etapelor infecției cu HIV (Imunologie clinică și alergologie sub redacția G. Lawlor Jr. - M.: Practice, 2000. - S. 585-587), care constă în determinarea nivelului seric β 2 -microglobulină. Este descrisă o metodă pentru diagnosticarea etapelor infecției cu HIV (VV Pokrovsky și colab. " Diagnostic clinic și tratamentul infecției cu HIV ". - M.: GOU VUNMTs RF, 2001. - P.11), care constă în determinarea numărului absolut de limfocite CD4 + din sângele periferic. Există, de asemenea, o metodă cunoscută pentru diagnosticarea etapelor infecției cu HIV, pe baza faptului că studiul Serul de sânge al pacientului este determinat de testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) pentru a determina densitatea optică (DO) a probei inițiale de ser din sânge, reflectând nivelul anticorpilor specifici HIV și OD al probei de ser inițiale incubate timp de 10 minute cu 100 μl de soluție de izotiocianat de sodiu 3,5 M. 40% sau mai puțin diagnostică stadiul A - limfadenopatie generalizată, cu o scădere a AP în intervalul 40-60% - stadiul B - angiomatoză bacilară, candidoză orofaringiană etc., și cu o scădere a OP cu 60% sau mai mult - stadiul C - SIDA (RU 2251701).

Astfel, analiza stadiului tehnicii a arătat că niciuna dintre sursele existente nu poate servi drept cel mai apropiat analog invenției revendicate, deoarece toate aceste documente se referă la metode și teste care determină stadiul infecției cu HIV și niciuna dintre sursele descrise nu conține date tehnice. soluții care vizează determinarea intervalului de timp probabil al infecției. Invenția revendicată se referă la un sistem de testare care determină perioada probabilă de infecție cu infecție cu HIV. Analiza stadiului tehnicii nu a dezvăluit soluții similare menite să rezolve problema.

Prezenta invenție revendică un set de reactivi "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în serul uman (plasmă). Testul este destinat testării suplimentare a probelor HIV-pozitive, cu un rezultat confirmat pozitiv într-o pată imună. Este posibil să se studieze eșantioane cu un rezultat nedeterminat sau negativ al studiului într-o pată imunitară, în care este confirmată prezența ARN-ului HIV și / sau a antigenului HIV-1 p24.

Prezenta invenție revendică, de asemenea, o metodă de utilizare a acestui set de reactivi "DS-ELISA-HIV-AT-SROK" pentru a determina momentul probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în ser (plasmă ) sânge uman.

Rezultatul tehnic al invenției revendicate este de a determina momentul probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane de tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, simplitatea testului, care permite invenției revendicate să fie folosită pentru supravegherea epidemiologică a dinamicii răspândirii infecției cu HIV, identificarea seroconvertitorilor într-o anumită populație (vârstă-sex, grupuri sociale ale populației), precum și în timpul investigației epidemiologice a cazurilor și focarelor de infecție cu HIV.

Esența soluției tehnice propuse este că determinarea perioadei probabile de infecție cu HIV-1 se realizează utilizând un sistem de testare care include un imunosorbent pe bază de antigeni ai virusului imunodeficienței umane de tip 1 (HIV-1 env și HIV-1 grup O), soluție de diluare probe (PPC) și reactivi de detecție (conjugați, cromogen / substrat). Probele testate sunt testate nativ și diluate în soluție de diluare a probei. Conform rezultatelor testului, probele sunt împărțite în „devreme” și „târziu”. Eșantioane „timpurii” - perioada probabilă de infecție până la 9 luni de la momentul infecției, eșantioane „tardive” - perioada probabilă de infecție de 9 luni sau mai mult de la momentul infecției. Apartenența unei probe la „devreme” sau „târziu” este evaluată prin procentul de scădere a densității optice (DO) a probei diluate în raport cu cea nediluată.

Aceste exemple servesc pentru a ilustra concretizări specifice ale invenției și nu sunt destinate să limiteze drepturile solicitantului. Domeniul de aplicare al drepturilor solicitantului include toate variantele posibile ale invenției, inclusiv cele care nu sunt enumerate în această secțiune.

Ca imunosorbent, se utilizează antigene recombinante care conțin regiunile imunodominante ale grupului HIV HIV-1 și HIV-1. Conjugatul-1 este un amestec de antigene recombinate HIV-1 gp41 și HIV-1 gp41 conjugate cu biotină. În prima etapă, probele de testare, probele de control și diluțiile lor 1: 101, precum și PPC sunt incubate cu conjugat-1. Anticorpii specifici prezenți în probele pozitive testate și de control se leagă de antigeni adsorbiți în godeurile microplăcuței și antigeni conjugați cu biotină și formează complexe stabile. Probele în exces și conjugatul-1 sunt îndepărtate prin spălare. În etapa următoare, streptavidina conjugată cu peroxidază de hrean (conjugat-2) este adăugată la godeuri. Conjugatul-2 se leagă de complexul antigen-anticorp-antigen prezent în godeu. Conjugatul-2 în exces este îndepărtat prin spălare și apoi cromogenul / substratul este adăugat la godeuri. În puțurile cu conjugat legat-2, se dezvoltă o culoare albastră, care se transformă în galben când se adaugă soluția stop. Rezultatele sunt înregistrate cu ajutorul unui spectrofotometru.

Ca imunosorbent, se utilizează antigene recombinante care conțin regiunile imunodominante ale HIV-1 și HIV-1 grupa O env. Se utilizează un conjugat - un amestec de antigene recombinante HIV-1 gp41 și HIV-1 gp41 din grupa O conjugat cu peroxidază de hrean. În timpul analizei, probele, controalele și diluțiile acestora, precum și PPC-urile, sunt incubate cu conjugat în godeurile acoperite cu antigen ale plăcii. Complexul stabil rezultat după îndepărtarea excesului de probă și conjugat se manifestă prin adăugarea unui cromogen / substrat. În acest caz, se dezvoltă o culoare albastră, care se transformă în galben când se adaugă soluția de oprire. Rezultatele sunt înregistrate cu ajutorul unui spectrofotometru.

Apartenența probelor studiate la „devreme” sau „târziu” este estimată prin scăderea procentuală a OD la diluarea probei, care se calculează prin formula:

% D e n i e O P \u003d 100% - DESPRE P a r e d. Eșantion - O P s r. R R S O P întreg n despre o o f a z z și x 100%,

unde Opsr. RRS - valoarea medie a RRP (calculată de mai multe valori ale RRP RR).

Eșantioanele studiate ar trebui considerate ca fiind "timpurii": dacă scăderea OP este\u003e 40%.

Probele investigate trebuie considerate „întârziate”: dacă scăderea OD este ≤40%.

Un exemplu de calcul al scăderii% în OD atunci când diluați o probă este prezentat în Tabelul 1.

Este convenabil să utilizați Excel pentru contabilitatea și procesarea rezultatelor. Utilizarea acestei aplicații vă va permite să efectuați calcule automat. Programul de procesare a rezultatelor testelor se află pe discul atașat la kit sau poate fi găsit pe site-ul companiei.

În dezvoltarea și evaluarea testului, au fost utilizate probe de panouri de seroconversie (BBI, Inc., Zeptometrix, SUA) și probe de ser de sânge (plasmă) seropozitiv cu date probabile stabilite de infecție. Probabilitatea determinării corecte a duratei infecției cu virusul imunodeficienței umane tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, stabilită de grupuri de seroconversie, este de 100% (datele sunt prezentate în tabelul 2), pe baza probelor de ser de la persoane cu o perioadă de infecție stabilită condiționat (n \u003d 129) este de 94% (tabelele 3, 4; datele sunt date parțial).

Testul „DS-ELISA-HIV-AT-SROK” a evaluat posibilitatea studierii probelor de ser de sânge (plasmă) care conțin anticorpi împotriva HIV-1 de diferite subtipuri, inclusiv a celor pentru HIV-1 grupa O: panoul de referință QCS 42-28-327 -03R (GISK) (subtipuri A, B, C) (cu excepția eșantionului nr. 24, care conține anticorpi împotriva HIV-2), primul panou internațional de referință anti-HIV (Cod NIBSC: 02/210) (subtipuri A, B, C, E) (cu excepția eșantionului nr. 5, care conține anticorpi împotriva HIV-2), probe de ser de sânge (plasmă) conținând anticorpi împotriva HIV-1 grupa O (nr. 1342, K00175, K00259; BioMex). Rezultatele indică posibilitatea examinării probelor de ser de sânge (plasmă) care conțin anticorpi împotriva HIV-1 aparținând diferitelor subtipuri, inclusiv a celor din HIV-1 grupa O, în testul „DS-ELISA-HIV-AT-SROK”.

Specificitatea setului de reactivi „DS-ELISA-HIV-AT-SROK” a fost determinată prin examinarea probelor de ser sânge donat (n \u003d 352) care au prezentat rezultate negative în ELISA. Specificitatea a fost de 100%. În plus, au fost testate 255 probe de ser de sânge (negative în ELISA):

■ 167 probe de ser de sânge de la femei însărcinate și pacienți cu boli infecțioase;

■ 128 de probe de ser de sânge de la pacienți cu diferite boli netransmisibile.

Specificitatea a fost de 100%.

Datele obținute arată eficiența ridicată a sistemului de testare dezvoltat „DS-ELISA-HIV-AT-DROK” în determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în ser (plasmă) sânge uman.

1. Un sistem imunosorbent legat de enzime pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în serul de sânge uman (plasmă), caracterizat prin faptul că include un imunosorbent pe bază de antigeni virali imunodeficiență umană de tip 1 (HIV-1 și HIV-1 grup O env), soluție de diluare a probei (PPC) și reactivi de detecție, care sunt conjugați, cromogen / substrat.

2. O metodă pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane de tip 1 (HIV-1), inclusiv HIV-1 grupa O, în ser (plasmă) de sânge uman, bazată pe un conținut diferit de anticorpi în funcție de durata infecției, inclusiv separarea probei testate în două părți și diluarea uneia dintre ele; studiul ambelor părți (native și diluate) ale probei de ser de sânge a pacientului utilizând sistemul enzimatic imunoanalizat descris în revendicarea 1; determinarea densității optice (DO) a probelor native și diluate și a PPC; calculul valorii medii a OD RRS; calculul procentului de scădere OD a probei diluate în raport cu cea nediluată conform formulei
% D e n i e O P \u003d 100% - DESPRE P a r e d. Eșantion - O P s r. R R S O P întreg n despre o o f a z z și x 100%,
în același timp, perioada probabilă de infecție este considerată „timpurie” dacă scăderea OP este\u003e 40% și „tardivă” dacă scăderea OP este ≤40%.

Brevete similare:

Invenția se referă la o metodă computerizată care utilizează baze de date biochimice în dezvoltarea de noi compuși proteici. Proiectarea este realizată de operator folosind un program PROTCOM special scris, bazat pe utilizarea unei baze de date cu pentafragmente proteice.

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei și se referă la o metodă de detectare a proteinelor O-glicozilate în compoziția omogenatului celular, pregătită pentru analiza proteomică și fosfoproteomică.

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei și imunologiei. Se propune un anticorp monoclonal și porțiunile sale de legare a antigenului, care leagă în mod specific regiunea C-terminală sau centrală a factorului de inhibare a migrării macrofagelor (MIF).

Invenția se referă la domeniul biologiei moleculare și al diagnosticului medical. Se propune o metodă de detectare a proteinelor în stare amiloidă, în care se obține o probă de lizat dintr-o cultură de drojdie sau țesut de mamifer, se adaugă un detergent ionic la probă, proteinele în formă amiloidă sunt concentrate pe o membrană de acetat de celuloză și sunt detectate folosind aptameri, conjugați sau anticorpi specifici formei amiloide a proteinelor ...

Invenția se referă la biotehnologie, în special la teste imunosorbente legate de enzime și este o metodă pentru producerea probelor de control încorporate pentru teste imunosorbente legate de enzime pentru determinarea infecțiilor din grupul TORCH.

Invenția se referă la medicină, și anume la ginecologie, și poate fi utilizată pentru selecția individuală a medicamentelor care conțin tulpini probiotice de lactobacili pentru o terapie intravaginală eficientă.

SUBSTANȚĂ: grupul de invenții se referă la o compoziție a unui senzor-analizor de reactiv adaptat pentru a ajuta la determinarea concentrației unui analit într-o probă lichidă, la metodele de determinare a concentrației unui analit într-o probă lichidă și la o metodă de aplicare a compoziției unui senzor de reactiv al unui analizor pe un substrat prin serigrafie.

Grupa invențiilor se referă la medicina veterinară și se referă la compoziții adjuvante care conțin o combinație de Quil A sau fracția sa purificată, colesterol, bromură de dimetildioctadecilamoniu (DDA), acid poliacrilic (CARBOPOL) și CpG și / sau N- (2-deoxi-2-L-leucilamino Acetat de β-D-glucopiranozil) -N-octadecildilecanamidă; metode pentru prepararea unor astfel de compoziții adjuvante și utilizarea unor astfel de compoziții adjuvante în compoziții imunogene și vaccinale cu diverși antigeni.

Prezenta invenție se referă la domeniul biotehnologiei și medicinei. O metodă pentru crearea unui anticorp și a fragmentelor sale funcționale îndreptate împotriva unui antigen tumoral exprimat pe suprafața unei tumori, rezistent la cel puțin un compus antitumoral, bazat pe utilizarea pentru imunizarea unui omogenat și / sau a unei suspensii și / sau a unui lizat celular derivat din astfel de tumori. tumori. De asemenea, se ia în considerare utilizarea metodei conform invenției pentru producerea anticorpilor monoclonali și a fragmentelor funcționale ale acestora, anticorpii monoclonali obținuți prin această metodă, acizii nucleici care codifică, un vector de expresie, o celulă gazdă și o metodă de producere a anticorpilor utilizându-i, precum și hibridomi capabili să secreteze acești anticorpi, utilizarea anticorpilor și a fragmentelor funcționale ale acestora pentru fabricarea unui medicament, o compoziție antitumorală și utilizarea acestuia ca medicament. Această invenție poate găsi aplicații suplimentare în terapia tumorilor rezistente. 16 n. și 26 p.p. cristale f, 7 dwg., 4 ex., 6 tbl.

Invenția se referă la domeniul biotehnologiei și medicinei. Sistem de testare imunologică pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane de tip 1, inclusiv HIV-1 grupa O, în serul uman. Sistemul de testare include un imunosorbent pe bază de antigeni ai virusului imunodeficienței umane de tip 1, o soluție pentru diluarea probelor și a reactivilor de detectare. Invenția se referă, de asemenea, la o metodă pentru determinarea momentului probabil al infecției cu virusul imunodeficienței umane de tip 1, incluzând HIV-1 grupa O, în serul uman, prin examinarea serului de sânge al pacientului utilizând testul imunosorbent legat de enzimă descris. Invenția face posibilă determinarea rapidă și ușoară a momentului probabil al infecției cu HIV. 2 n.p. cristale f, 4 tab., 2 ex.

Preț: la cerere

Puteți adăuga un produs în coșul dvs. specificând cantitatea

A.P. OBRYADIN, T.I. ULANOVA
LLC "Asociația de cercetare și producție" Sisteme de diagnosticare ",

Nijni Novgorod
SISTEME DE TESTARE A IMUNOZIMILOR "DS-ELISA-HBeAg" și "DS-ELISA-anti-HBe" PENTRU DIAGNOSTIC SPECIFIC ȘI PREVEDEREA REZULTATELOR HEPATITEI ACUTE ȘI CRONICE B
Hepatita B - virală infecţiecaracterizată prin severă

afectarea ficatului inflamator. Aproximativ 1% din decese sunt observate în

perioada acută a bolii, în 4-10% din cazuri se produce o transformare în cronică

proces cu posibila formare a cirozei hepatice ulterioare și primare

hepatocarcinom.

În ciuda tendinței descendente a incidenței hepatitei acute B, continuă să se formeze un grup periculos epidemiologic de pacienți care au fost diagnosticați pentru prima dată cu hepatită virală cronică, precum și un grup de purtători ai agentului patogen. Un prognostic nefavorabil rămâne asociat cu o incidență ridicată a hepatitei B în rândul populației în vârstă de reproducere, precum și în rândul adolescenților.

Prin urmare, acum problemele legate de tratament, prevenire și diagnosticul hepatitei B. sunt deosebit de relevante. În prezent, metodele de imunoanaliză enzimatică sunt utilizate pe scară largă pentru a detecta markerii acestei infecții. Cei mai importanți markeri serologici ai VHB sunt antigenul e (AgHBe) și anticorpii împotriva antigenului e (anti-HBe). HBeAg este asociat cu o infecție crescută a sângelui, indicând replicarea activă a virusului hepatitei B (VHB). S-a stabilit că titrurile ridicate de HBeAg corespund unei activități ridicate de ADN polimerază și sunt întotdeauna combinate cu detectarea particulelor dane complete. Atunci când serul care conține HBeAg intră în sângele unei persoane sănătoase, riscul de infecție este cu multe ordine de mărime mai mare decât după debutul seroconversiei.

În hepatita acută B, HBeAg este detectat în sânge în stadiile incipiente ale procesului de infecție deja la prima manifestari clinice boli, rămânând în urmă cu apariția AgHBs cu o săptămână Hepatita acută B (VHB) a unui curs ciclic se caracterizează prin circulația pe termen scurt a AgHBe. În curând, la 2-3 săptămâni din perioada icterică, apare anti-HBe, ceea ce face posibilă prezicerea unui rezultat favorabil al bolii.

Anti-HBe circulă în sânge timp de 2-5 ani, mai rar timp de câteva luni.

Debutul seroconversiei HBeAg-anti-HBe marchează o scădere dramatică a activității

proces infecțios. Detectarea AgHBe în sângele pacienților după 2 luni de boală indică cronicitatea procesului patologic. În acest caz, anti-HBe se poate forma la mulți ani după apariția anticorpilor la HBcAg sau nu poate fi deloc detectat.

Apariția anti-HBe poate avea o valoare prognostică nefavorabilă în

perioadă acută de VHB în forme severe, care corespunde unei mutații în zona pre-nucleu cu

formarea tulpinii "e-" VHB.

Scopul această lucrare a fost dezvoltarea unor elemente extrem de sensibile și specifice

sisteme de testare imunosorbente legate de enzime pentru detectarea HBeAg și anti-HBe și evaluarea caracteristicilor lor principale.

Materiale si metode.

1. Sistem de testare imunologică "DS-ELISA-HBeAg". Începe testul curent

sunt anticorpi policlonali de capră împotriva HBeAg recombinant, produși de NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod, absorbiți pe faza solidă și un conjugat, care este anticorpii policlonali de capră împotriva HBeAg recombinant, etichetat cu peroxidază de hrean, produs de NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgor. Schema de analiză este un "sandwich" într-o etapă. Timpul total de reacție este de 1,5 ore. Proba de ser este analizată nediluată.

2. Sistem de testare imunologică "DS-ELISA-anti-HBe" Testul se bazează pe

hBeAg recombinant (AHBV 102), produs de NPO Diagnostic Systems,

Nijni Novgorod, absorbit pe faza solidă și conjugat anti-IgG cu peroxidază de hrean, fabricat de Sorbent Service, Moscova. Reacția are loc în două etape. Serul testat la o diluție de 1/10 este adăugat la antigenul imobilizat și, după incubare și îndepărtarea componentelor nelegate, imunocomplexele specifice sunt identificate folosind anticorpi monoclonali de șoarece împotriva IgG umane marcate cu peroxidază de hrean.

3. Pentru evaluarea sistemelor de testare dezvoltate, au fost utilizate 2178 probe de ser

sânge. Dintre acestea, 480 de probe de ser de la donatori sănătoși. 1680 probe reprezintă

sunt probe de ser de sânge care conțin diverși markeri ai virusului hepatitei B.

Au fost obținute în dinamică 18 probe de la pacienții cu diagnostic clinic de hepatită virală acută B. Toate probele au fost testate preliminar pentru prezența HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc utilizând sisteme de testare produse de NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod: ELISA-HBsAg / m, DS-ELISA-HBeAg, DS-ELISA-anti-HBe ”,„ ELISA-anti-HBs ”.

4. Evaluarea comparativă a sistemelor de testare dezvoltate a fost realizată folosind

medicament comercial "Monolisa HBe", fabricat de BIO-RAD, Franța;

Rezultate si discutii.NPO „Diagnostic Systems” a dezvoltat 2 noi kituri de diagnostic: „DS-ELISA-HBeAg” și „DS-ELISA-anti-HBe”. Sistemul de testare „DS-ELISA-HBeAg” este conceput pentru a detecta antigenul e al virusului hepatitei B în serul (plasma) sângelui uman prin testul imunosorbent legat de enzime și poate fi utilizat pentru diagnosticare specifică, determinând activitatea procesului infecțios, predicând severitatea și rezultatul hepatitei B.

Sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBe” este conceput pentru a detecta anticorpii IgG împotriva e-antigenului virusului hepatitei B în serul (plasma) sângelui uman și poate fi

utilizat în prognosticul cursului procesului infecțios și controlul terapiei pentru hepatita B.

Pentru a studia specificitatea noilor teste, a fost evaluată distribuția

densitatea optică (DO) a probelor de ser din sânge, care conțin și nu conțin

HBeAg sau anti-HBe. Am folosit probe de ser de sânge de la donatori sănătoși și probe de ser de sânge recoltate pentru diferiți markeri ai virusului hepatitei B pe

stații de transfuzie de sânge. Rezultatele studiului au arătat o separare semnificativă a celor două populații. Valorile OD ale probelor de ser fără HBeAg au variat între 0,011 și 0,111, iar vârful principal al probelor de ser care conțin HBeAg a variat între 2,186 și 3,186 (Figura 1a).

Fig.1a. Distribuția OD a probelor de ser cu și fărăHBeAg în sistemul de testare „DS-IFA-HBeAg»
Vârful corespunzător grupului de seruri cu un OD scăzut (0,3-0,6) este probabil alcătuit din probe de ser prelevate în stadiile incipiente ale procesului infecțios.

Deja în perioada de incubație la pacienți, HBsAg și HBeAg sunt înregistrate în mod regulat în sânge, ceea ce confirmă potențialul lor pericol epidemiologic.

Gama de densitate optică a probelor de ser care nu conțin anti-HBe

a fost în intervalul de la 0,002 la 0,122, iar vârful principal al DO al probelor de ser care conțin anti-HBe a variat între 2,441 și 3,231 (Figura 1b).

Figura: 1b. Distribuția OD a probelor de ser cu și fără anti-HFi, în sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBeAg»
S-au studiat caracteristicile distribuției OD a probelor pozitive anti-HBe

seruri care conțin ( n\u003d 78) și care nu conține HBsAg ( n=56).


Figura: 2a. HBe- probe de ser pozitive care conținHBsAg în sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBe».

Fig.2b. Caracteristici ale distribuției OP antiHBe- probe de ser pozitive care nu conțin HBsAg în sistemul de testare "DS-ELISA-anti-HBe».
Densitățile optice ale probelor de ser anti-HBe-87% fără HBsAg au variat de la 0,41 la 0,81 (Figura 2b). Cu toate acestea, doar 14% din probele de ser anti-HBe-pozitive care conțin HBsAg au avut DO în acest interval (Figura 2a). Se știe că în faza de convalescență târzie cu reactivitate negativă la HBsAg, se produce treptat o scădere a titrurilor anticorpilor la HBeAg (Figura 2b). Prin urmare, este posibil ca concentrația predominantă de probe anti-HBe-pozitive să corespundă cu OD mai mică de 0,8.

Datele obținute indică fiabilitatea separării dintre pozitiv și

probe de ser negative indiferent de stadiul bolii. Studiul sensibilității și specificității sistemelor de testare „DS-ELISA-HBeAg” și „DS-ELISA-antiHBe” a fost efectuat în comparație cu testul „Monolisa HBe” („BIORAD”, Franța) (tabelul 1).

tabelul 1
Caracteristici comparative ale sensibilității și specificității

sisteme de testare DS-ELISA-HBeAg și DS-ELISA-antiHB

Datele prezentate în Tabelul 1 arată 100% acordul rezultatelor.

Se știe că indicația combinată a AgHBe și anti-HBe, în special evaluarea cantitativă a acestora, are o valoare prognostică suplimentară. Creșterea rapidă a titrului anti-HBe caracterizează un răspuns imun activ umoral și elimină practic amenințarea cronicității. Am analizat modificarea conținutului de HBeAg / anti-HBe în probele de ser din sânge de la pacienții cu diagnostic clinic de hepatită virală acută B (Tabelul 2).

masa 2
Dinamica seroconversiei HBeAg / anti-HBe la pacienții cu VHB

* de la internarea în spital
Toate probele de ser au fost testate pentru detectarea markerilor serologici

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Perioada de observare a variat de la 13 la 38 de zile. La pacienții nr. 1, nr. 2 și nr. 6, anti-HBe s-au găsit deja pe fondul unei scăderi a titrului HBeAg. La pacienții nr. 3 și nr. 4 anti-HBe au apărut după ce HBeAg a dispărut din serul sanguin în zilele 21 și respectiv 8. Analiza detectării HBeAg în serul sanguin al pacientului nr. 5 la internarea în spital a arătat un rezultat negativ. În același timp, o conversie la anti-HBe a fost înregistrată în prima zi a examinării.

Toți subiecții au prezentat o tendință la o creștere a titrului anticorpilor la AgHBe în

seric, care permite prezicerea dinamicii favorabile a clinicii

manifestări ale OGV și recuperare rapidă.

Studiul noilor sisteme de testare a demonstrat fiabilitatea lor diagnostic ridicată. Rezultatele comparării DS-ELISA-HBeAg "și" DS-ELISA-antiHBe "au arătat 100% de acord cu testul" Monolisa HBe ".

În studiul probelor de ser ale pacienților cu hepatită B în dinamică, teste

sensibilitate și specificitate ridicate confirmate.

Timpul scurt de incubație al probelor de testare și conjugat (1 oră) face posibilă determinarea tacticii corecte de conducere măsuri de tratament... Sistemele de testare dezvoltate sunt ușor de instalat și economice (50 µl de ser este necesar pentru determinarea HBeAg și 10 µl de ser pentru determinarea anti-HBe). Caracteristicile de înaltă calitate ale testelor permit utilizarea lor cu succes în prezicerea cursului procesului infecțios și monitorizarea terapiei pentru hepatita B.
LITERATURĂ

1.Mayer K.P. Hepatita și consecințele hepatitei / K.P. Mayer. - M., GEOTAR, Medicină, 1999.- C.720

2.G.G. Onișcenko Răspândirea hepatitei virale ca o amenințare la adresa securității naționale / G.G. Onișcenko, L.A. Dementyeva // Journal of Microbiology. –2003.-№ 4.- С.93-99.

3.Sorinson S.N. Hepatita virala / S. N. Sorinson. - Sankt Petersburg, Teza, 1997. - 306 p.

4. Baumeister M. Virusul hepatitei B și epitopii specifici antigenului și limitările imunoanalizelor anti-HBe comerciale / M. Baumeister // Journal of Medical Virology - 2000.-N 60. - P.256-263.

5.Kane M. Program global pentru controlul infecției cu hepatită B / M. Kane // Vaccin. 1995. N131 (Supliment. 1) P.47-6. Shunichi stăteadespre. Tulpini de virus ale hepatitei B cu mutații în promotorul principal la pacienții cu hepatită fulminantă / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- P.241-248.

7. Ou J.-H. Biologie moleculară a virusului hepatitei B și antigen. / J.-H. Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997. - Nr. 12 (Supliment.1) - P. 178-187.

8.Tiollais P. Virusul hepatitei B. / P. Tiollais, C. Sourcel, A. Dejean // Natura. - 1985. - P.317, 489-495
Publicat: J. "Clinic diagnostice de laborator"- 2005.-№6-С-34-37