تپه دریایی

واکنش ایمونوفلورسانس بر اساس فعل و انفعال آنتی بادی های ضد کلامیدیا با آنتی ژن کلامیدیا خاص جنس است. واکنش های ایمونوفلورسانس دو نوع است - مستقیم و غیرمستقیم. در حالت اول ، آنتی بادی اختصاصی به طور مستقیم با فلوروکروم برچسب گذاری شده و واکنش در یک مرحله اتفاق می افتد ، که به طور قابل توجهی زمان تحقیق را کاهش می دهد. در حالت دوم ، آنتی بادی خاص فاقد برچسب است و از آنتی بادی های دارای مارک دوم مخصوص آنتی بادی های ضد کلامیدیا برای تشخیص کمپلکس AG-AT تشکیل شده در مرحله اول استفاده می شود. نتیجه واکنش با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت بصری ارزیابی می شود.

علاوه بر واردات ، کیت های تشخیص داخلی نیز ظاهر شدند عفونت کلامیدیائی واکنش ایمونوفلورسانس مستقیم ، که عملا از نظر ویژگی و حساسیت کم نیستند ، اما قیمت آنها به طور قابل توجهی پایین تر است.

ماده مورد مطالعه ، لکه های اثر انگشت است که با رعایت قوانین تهیه شده است. اسمیرهای RIF روی شیشه های مخصوص عکس برگردان در یک منطقه محدود با قطر 8-10 میلی متر تهیه می شوند. پس از آن ، آنها در هوا خشک می شوند و با غوطه وری 5 - 10 دقیقه در سرد 96٪ (بهتر مطلوب) ثابت می شوند اتانول یا با استفاده از 0.1 - 0.15 میلی لیتر استون بدون آب خنک شده روی آماده سازی تا زمانی که کاملاً بخار شود. آماده سازی های ثابت را می توان بلافاصله آزمایش کرد یا در صورت لزوم ، در دمای اتاق به مدت 24 ساعت یا در -20 درجه سانتیگراد به مدت 2 هفته ذخیره کرد (لازم است قبل از آزمایش با پلاستیک ، دسترسی به رطوبت در هنگام ذخیره سازی و آوردن دارو به دمای اتاق از بین برود کیسه و ژل سیلیکا).

هنگام انجام RIF مستقیم ، محلول آنتی بادی های برچسب خوراکی به مقدار لازم برای پوشش کامل لکه (25 - 30 میکرولیتر) به مواد مخدر استفاده می شود. دارو به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد در یک مکان افقی در یک مکان افقی انکوبه می شود. برای جلوگیری از نتایج مثبت کاذب ، معرف را خشک نکنید. در مرحله بعد ، این لکه را به مدت 30 ثانیه در آب روان شسته ، در آب مقطر شستشو داده ، خشک می کنند و برای میکروسکوپ آماده می کنند.

هنگام انجام یک RIF غیرمستقیم ، مقدار مورد نیاز محلول آنتی بادی ضد کلامیدیا بر روی آماده سازی اعمال می شود و اولین انکوباسیون تحت همان شرایط انجام RIF مستقیم انجام می شود. سپس آماده سازی شسته شده ، در هوا خشک شده و معرف دوم اعمال می شود - آنتی بادی های دارای مارک به آنتی بادی های کلامیدیا و انکوباسیون دوم در یک اتاق مرطوب در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انجام می شود. پس از شستشو ، آماده سازی خشک شده و برای میکروسکوپ آماده می شود. توصیه می شود بلافاصله آماده سازی های تمام شده را مشاهده کنید. در صورت لزوم ، می توان مواد آماده سازی رنگی را به مدت 1 تا 2 روز در دمای 8-2- درجه سانتیگراد در یک مکان تاریک و بدون رطوبت نگهداری کرد.

میکروسکوپ با استفاده از سیستم غوطه وری انجام می شود. دو گزینه برای میکروسکوپ غوطه وری وجود دارد:

1. غوطه وری روغن: 20 - 25 میکرولیتر مایع نصب (گلیسیرین با بافر فسفات با pH 7/2 - 6/7) با مواد آماده شده خشک شده بمالید ، روی آن را با یک شیشه روکش بدون چربی بپوشانید ، روی آن یک قطره روغن غوطه وری غیر فلورسنت قرار دهید. سپس با لنز (با علامت "L" - لومینسانت) با بزرگنمایی 90 و چشمی با بزرگنمایی 5 استفاده و میکروسکوپ شد.

2. غوطه وری در آب: یک قطره 20 میکرولیتر بافر فسفات با pH 7.4 به آماده سازی نهایی اعمال می شود و با هدف غوطه وری در آب میکروسکوپ می شود (مارک گذاری - نوار سفید و "L" - لومینسانس) با بزرگنمایی 60 و یک چشمی با بزرگنمایی 5. غوطه وری در آب درخشندگی یکدست ، روشن و شفاف تری ایجاد می کند.

RIF اجازه می دهد ساختارهای آنتی ژنی هر دو اجسام ابتدایی و مشبک شناسایی شود. ET ها عمدتا خارج سلولی ، گرد با لبه های صاف ، کوچک (اندازه 1: 100 - 1: 150 نسبت به سلولهای اطراف) ، ساختار همگن ، دارای درخشش خاص زمرد سبز روشن هستند ، که هنگام کار با میکرو اسکرو ، می تواند حلقه های پراش (حلقه های Delectorsky) را بدهید. RT بسیار کمتر شایع است ، عمدتا درون سلولی قرار دارد ، ساختار یکنواختی کمتری دارد ، چند شکل است ، اما دارای لبه های واضح است و دارای درخشش خاص سبز زمردی روشن است. هر ماده فلورسنت دیگری با شکل نامنظم ، لبه های نامشخص نامنظم ، داشتن رنگ سبز مبهم یا درخشش با رنگ متفاوت اشاره به مصنوعات دارد. شدت ، روشنایی و سایه یک درخشش خاص به PH مایع نصب شده یا بافر مورد استفاده برای میکروسکوپ بستگی دارد. شدت زیاد لومینسانس FITC در یک محیط قلیایی حساسیت روش را افزایش می دهد ، اما منجر به افزایش تعداد اجسام با لومینسانس غیر اختصاصی می شود و ، در نتیجه ، به نتایج مثبت کاذب منجر می شود. در یک محیط اسیدی ، شدت لومینسانس FITC کاهش می یابد ، که می تواند یک نتیجه منفی کاذب ایجاد کند. میکرو فلورای همراه ، و همچنین هسته سلولهای اطراف ، به طور مشخص در سایه های مختلف نارنجی با برمید ایندیوم لکه دار می شوند ، سیتوپلاسم آنها در سایه های مختلف آبی ایوانز قهوه ای آجری است.

برای به دست آوردن یک نتیجه قابل اعتماد ، توصیه می شود بسیاری از زمینه های مشاهده آماده سازی را مشاهده کنید. اگر دارو حاوی سلولهای اپیتلیال باشد و در نتیجه بتوان حداقل 6 جسم اولیه را که دارای تمام علائم فوق هستند ، نتیجه مثبت ارزیابی کرد.

تشخیص مقدار کمتری از پاتوژن ، نتیجه را زیر سوال می برد و نیاز به بررسی مجدد دارد ، ترجیحاً در پس زمینه تحریک (غذا - الکل ، دارو - تزریق پیروژن ، مکانیکی - ماساژ مجرای ادرار بر روی حفره). کنترل این درمان باید زودتر از دو هفته بعد انجام شود ، زیرا ممکن است ماده آنتی ژنی حذف نشده از پاتوژن غیر زنده حفظ شود ، که نتایج مثبت کاذب... به دست آوردن 3 نتیجه منفی مطالعه در مردان در طی یک ماه و در زنان در 3 ماه چرخه قاعدگی، غیبت تظاهرات بالینی عفونت کلامیدیا بهبودی را نشان می دهد.

RIF ، با آماده سازی مناسب بیمار ، مطابقت با قوانین مصرف مواد و مرحله بندی واکنش ، یک روش بسیار حساس و خاص برای تشخیص کلامیدیا دستگاه ادراری است و به شما امکان می دهد در 90 - 95٪ بیماران پاتوژن را شناسایی کنید. این روش نسبتاً ارزان ، انجام آسان ، بسیار آموزنده است ، به تجهیزات گران قیمت خاصی احتیاج ندارد ، به شما امکان می دهد به سرعت نتیجه (0/5 - 1 ساعت) را بدست آورید و از نظر بصری کیفیت مصرف مواد برای تحقیق را کنترل کنید.

روش هایی با استفاده از اصول زیست شناسی مولکولی

این گروه شامل روش های پروب DNA و واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) است که شناسایی مواد ژنتیکی پاتوژن را در ماده بیولوژیکی مورد مطالعه امکان پذیر می کند. کیت های تشخیص کلامیدیا با پروب های DNA هنوز در دست ساخت و آزمایش های بالینی هستند.

PCR به طور فعال در عمل تشخیص آزمایشگاهی معرفی می شود. این روش بر اساس جداسازی یک توالی DNA یا RNA خاص از پاتوژن با استفاده از آغازگرهای مکمل و به دنبال آن کپی برداری و تجمع چندگانه آن برای شناسایی بیشتر با روش های مرسوم تشخیص (الکتروفورز یا ELISA) است. این روش از ویژگی و حساسیت بالایی برخوردار است ، تقریباً به فرهنگ نزدیک می شود و به شما امکان می دهد پاتوژن های منفرد را در ماده آزمایش تشخیص دهید. روش PCR نیاز به تجهیزات گران قیمت ویژه ، آزمایشگاه مجهز ویژه ، آموزش مناسب و مدارک عالی دارد کادر پزشکی... در عین حال ، عدم صدور گواهینامه پرایمرهای مورد استفاده در روسیه و تجربه کافی در استفاده از روش PCR ، ویژگی مواد آزمایشگاهی و آلودگی مکرر آن با میکرو فلورا همزمان (که می تواند نتایج مثبت کاذب ایجاد کند) به ما اجازه نمی دهد بدون ابهام درباره ارزش آن در تشخیص کلامیدیا ادراری تناسلی قضاوت می کنیم.

بنابراین ، در حال حاضر ، در دسترس ترین ، ساده ترین و در عین حال بسیار آموزنده ترین روش برای تشخیص کلامیدیا دستگاه ادراری و ایجاد درمان ، واکنش ایمونوفلورسانس مستقیم (RIF) است. نظارت بر پویایی روند بیماری و اثربخشی درمان باید با تعیین تیتر آنتی بادی های ضد کلامیدیا در سرم خون با روش سنجش ایمنی جاذب مرتبط با آنزیم (ELISA) انجام شود.

روش ایمونوفلورسانس (RIF ، واکنش ایمونوفلورسانس ، واکنش Koons) روشی برای تشخیص آنتی ژن های خاص با استفاده از آنتی بادی های متصل به یک فلوئوروکروم است. از حساسیت و ویژگی بالایی برخوردار است.

برای تشخیص سریع استفاده می شود بیماری های عفونی (شناسایی پاتوژن در ماده آزمایش) ، همچنین برای تعیین گیرنده های AT و سطحی و نشانگرهای لکوسیت ها (ایمونوفنوتیپ) و سلول های دیگر.

تشخیص آنتی ژن های باکتریایی و ویروسی در مواد عفونی ، بافت های حیوانی و کشت سلولی با استفاده از آنتی بادی های فلورسنت (سرم) به طور گسترده ای در اقدامات تشخیصی استفاده می شود. تهیه سرم های فلورسنت بر اساس توانایی برخی از فلوروکروم ها (به عنوان مثال ایزوتیوسیانات فلورسئین) در پیوند شیمیایی با پروتئین های آب پنیر بدون تأثیر بر ویژگی ایمنی آنها است.

سه روش وجود دارد: مستقیم ، غیرمستقیم ، همراه با مكمل. روش RIF مستقیم بر این واقعیت استوار است که آنتی ژن های بافتی یا میکروب های تحت درمان با سرم ایمنی با آنتی بادی های برچسب خورده با فلوروکروم قادر به درخشش در اشعه ماورا بنفش میکروسکوپ فلورسنت هستند. باکتری های موجود در لکه ای که با چنین درخشندگی سرم لومینسانس در امتداد حاشیه سلول به شکل حاشیه سبز برخورد می کنند.

روش RIF غیرمستقیم شامل تشخیص کمپلکس آنتی ژن - آنتی بادی با استفاده از آنتی گلوبولین (علیه آنتی بادی ها) سرم برچسب خورده با فلوئوروکروم است. برای این منظور ، لکه های ناشی از سوسپانسیون میکروب ها با آنتی بادی های سرم تشخیصی خرگوش ضد میکروبی درمان می شوند. سپس آنتی بادی هایی که آنتی ژن های میکروب ها را متصل نکرده اند ، شسته شده و آنتی بادی های باقیمانده روی میکروب ها با درمان اسمیر با سرم آنتی گلوبولین (ضد خرگوش) با برچسب فلوروکروم ، شناسایی می شوند. در نتیجه ، مجموعه ای از میکروب + آنتی بادی خرگوش ضد میکروبی + آنتی بادی ضد خرگوش با برچسب فلوروکروم تشکیل می شود. این مجموعه همانند روش مستقیم در میکروسکوپ فلورسنت مشاهده می شود.

سازوکار. یک لکه از مواد آزمایش شده روی یک اسلاید تهیه می شود ، روی شعله ثابت می شود و با سرم خرگوش ایمنی حاوی آنتی بادی علیه آنتی ژن های بیماری زا درمان می شود. برای تشکیل یک کمپلکس آنتی ژن و آنتی بادی ، دارو در محفظه ای مرطوب قرار می گیرد و به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوباتور می شود و پس از آن با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک کاملاً شسته می شود تا آنتی بادی هایی که به آنتی ژن متصل نشده اند از بین برود. سپس سرم آنتی گلوبولین فلورسنت در برابر گلوبولینهای خرگوش به محلول زده می شود ، به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوباسیون می شود و سپس آماده سازی کاملا با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک شسته می شود. در نتیجه اتصال سرم آنتی گلوبولین فلورسنت با آنتی بادی های خاص ثابت شده روی آنتی ژن ، مجتمع های آنتی ژن-آنتی بادی درخشان تشکیل می شود که توسط میکروسکوپ فلورسانس شناسایی می شود.

22. سنجش ایمنی - روش ایمونولوژیکی آزمایشگاهی برای تعیین کیفی یا کمی ترکیبات مختلف ، ماکرومولکول ها ، ویروس ها و غیره ، که بر اساس واکنش خاص آنتی ژن - آنتی بادی است. تشخیص کمپلکس تشکیل شده با استفاده از آنزیمی به عنوان برچسب برای ثبت سیگنال انجام می شود.

طبقه بندی:

رقابتی (هر دو ترکیب تجزیه و تحلیل شده و آنالوگ آن در سیستم وجود دارد)

غیررقابتی (اگر سیستم فقط شامل ترکیب آنالیز شده و محلهای اتصال مربوطه باشد (آنتی ژن و آنتی بادیهای اختصاصی))

مستقیم و غیرمستقیم

1. سرم حاوی مخلوط آم ، انکوباتور شده با ag ، روی یک بستر جامد ثابت شده است.

2.at که به ag متصل نمی شود با شستشوی مکرر برداشته می شود.

3. به آنتی بادی های متصل کننده ضد Ag یک آنتی سرم با مارک آنزیمی اضافه کنید

4. مقدار آنزیم نشانگر متصل به در را تعیین کنید

غیر مستقیم:

سرم Ab مثبت

1. آنتی بادی های خاص در سرم مورد مطالعه ، متصل به یک بستر جامد است

2. آنتی بادی های خاص ، برچسب خورده با آنزیم ، با AG متصل تعامل ندارند ؛ محتوای نشانگر در بستر کم است

سرم Ab منفی

1. آنتی بادی های غیر اختصاصی در سرم مورد مطالعه ، آنتی بادی های ثابت شده روی یک بستر جامد را متصل نمی کنند.

2. آنتی بادی های خاص با مارک آنزیمی با یک آنتی ژن ثابت تداخل می کنند - محتوای مارکر زیاد است

شایع ترین آن فاز جامد ifa است که در آن یکی از اجزای پاسخ ایمنی (آنتی ژن یا آنتی بادی) روی یک حامل جامد جذب می شود. از میکرو پانل های پلی استایرن به عنوان یک حامل جامد استفاده می شود. هنگام تعیین آنتی بادی ها ، سرم خون دارای برچسب آنزیم و مخلوطی از محلول ها برای آنزیم و کروموژن به ترتیب با آنتی ژن سورب شده به چاه ها اضافه می شوند. هر بار پس از افزودن م nextلفه بعدی ، معرف های بی بند و بار با شستشوی کامل از چاه ها خارج می شوند. اگر نتیجه مثبت باشد ، رنگ محلول کروموژن تغییر می کند.

یک حامل فاز جامد را می توان نه تنها با یک آنتی ژن بلکه با یک آنتی بادی نیز حساس کرد. سپس آنتی ژن مورد نظر با آنتی بادی های جذب شده به داخل چاه ها وارد می شود ، سرم ایمنی دارای برچسب آنزیم در برابر آنتی ژن و سپس مخلوطی از محلول های بستر آنزیم و کروموژن اضافه می شود.

کاربرد:برای تشخیص بیماری های ناشی از عوامل بیماری زای ویروسی و باکتریایی.

23. واکنش سرولوژیک - واکنشی که واکنش آنتی ژن (میکروب ، ویروس ، پروتئین خارجی) با آنتی بادی های سرم خون بررسی می شود.

آزمایشات سرولوژی - اینها روش هایی برای مطالعه برخی از آنتی بادی ها و آنتی ژن ها در سرم خون بیماران ، بر اساس پاسخ های ایمنی است. با کمک آنها ، آنتی ژن های میکروب یا بافت نیز شناسایی می شوند تا بتوانند آنها را شناسایی کنند.

شناسایی آنتی بادی های عامل عفونی یا آنتی ژن مربوطه در سرم خون بیمار امکان ایجاد علت بیماری را فراهم می کند.

مطالعات سرولوژی همچنین برای تعیین آنتی ژن های گروه های خونی ، آنتی ژن های بافتی و سطح پیوند هومورال ایمنی استفاده می شود.

آزمایشات سرولوژی شامل واکنش های سرولوژی مختلف است:

1. واکنش آگلوتیناسیون.

2. واکنش بارندگی.

3. واکنش خنثی سازی.

4. واکنش با مشارکت مکمل.

5. واکنش با استفاده از آنتی بادی یا آنتی ژن های دارای برچسب.

واکنش ایمونوفلورسانس (RIF) - واکنش سرولوژی، اجازه می دهد تا آنتی بادی های آنتی ژن های شناخته شده را تشخیص دهیم. این روش شامل میکروسکوپ لکه های لکه دار است.

این واکنش در ایمونولوژی ، ویروس شناسی و میکروب شناسی استفاده می شود. به شما امکان می دهد وجود ویروس ها ، باکتری ها ، قارچ ها ، پروتوزوآها و ICC را تعیین کنید. RIF به طور گسترده ای در اقدامات تشخیصی برای تشخیص آنتی ژن های ویروسی و باکتریایی در مواد عفونی استفاده می شود. این روش بر اساس توانایی فلوروکروم در اتصال با پروتئین ها بدون نقض ویژگی ایمنی آنها است. این ماده عمدتا در تشخیص عفونت های دستگاه ادراری استفاده می شود.

روشهای زیر برای انجام واکنش ایمونوفلورسانس وجود دارد: مستقیم ، غیرمستقیم ، همراه با مکمل. روش مستقیم شامل رنگ آمیزی مواد با فلوروکروم ها است. به دلیل توانایی درخشش آنتی ژن های میکروب ها یا بافت ها در اشعه ماورا بنفش میکروسکوپ فلورسنت ، آنها به عنوان سلول هایی با حاشیه سبز رنگ روشن تعریف می شوند.

یک روش غیر مستقیم تعیین آنتی ژن + آنتی بادی کمپلکس است. برای این ، مواد آزمایش شده با آنتی بادی های سرم خرگوش ضد میکروبی در نظر گرفته می شود برای تشخیص. پس از اتصال آنتی بادی ها به میکروب ها ، آنها از سلولهای غیرقانونی جدا شده و با سرم ضد خرگوش با برچسب فلوروکروم درمان می شوند. پس از آن ، مجموعه میکروب + آنتی بادی های ضد میکروبی + آنتی بادی های ضد خرگوش با استفاده از میکروسکوپ ماوراio بنفش به روش مشابه با روش مستقیم تعیین می شود.

واکنش ایمونوفلورسانس در تشخیص سفلیس ضروری است. تحت تأثیر فلوئوروکروم ، عامل ایجاد کننده سفلیس به عنوان یک سلول با مرز سبز و زرد تعریف می شود. عدم درخشش به این معنی است که بیمار به سفلیس آلوده نشده است. این آزمایش اغلب با واکنش مثبت واسرمن تجویز می شود. این روش در تشخیص بسیار مثر است ، زیرا به شما امکان می دهد پاتوژن موجود را شناسایی کنید مراحل اولیه بیماریها

علاوه بر این واقعیت که RIF به شما امکان می دهد سفلیس را تشخیص دهید ، از آن برای تعیین وجود عوامل بیماری زا مانند کلامیدیا ، مایکوپلاسما ، تریکوموناس و همچنین عوامل بیماری زای سوزاک و تبخال دستگاه تناسلی استفاده می شود.

برای تجزیه و تحلیل ، از اسمیر یا خون وریدی استفاده می شود. روش اسمیر کاملا بدون درد است و هیچ خطری ندارد. آماده سازی برای تحویل این تحلیل ضروری است. استفاده از محصولات بهداشتی مانند کمی یا ژل دوازده ساعت قبل توصیه نمی شود. همچنین ، گاهی اوقات طبق شهادت یک پزشک تحریک انجام می شود. برای انجام این کار ، آنها توصیه می کنند غذای پرادویه یا الکل مصرف کنید ، یا تزریق ماده تحریک کننده ای مانند گونوواکسین یا پیروژنال انجام شود. علاوه بر این ، فاصله بین گرفتن داروهای ضد باکتری و تحویل آنالیز باید حداقل چهارده روز باشد.

هنگام ارزیابی نتایج ، باید این واقعیت را در نظر گرفت که لومینسانس نه تنها در باکتری های زنده ، بلکه در باکتری های مرده ، به ویژه کلامیدیا نیز مشاهده می شود. بعد از یک دوره مصرف آنتی بیوتیک ، سلولهای کلامیدیا مرده نیز درخشش پیدا می کنند.

با آماده سازی مناسب بیمار و رعایت تکنیک استفاده از اسمیر ، این تجزیه و تحلیل به شما امکان می دهد بیماری را در مراحل اولیه تعیین کنید ، که برای درمان به موقع بسیار مهم است. طرفهای مثبت این روش زمان کوتاهی برای بدست آوردن نتیجه ، سهولت اجرا و هزینه پایین تحلیل است.

این معایب شامل این واقعیت است که برای تجزیه و تحلیل مقدار زیادی از ماده مورد مطالعه به مقدار کافی مورد نیاز است. علاوه بر این ، تنها یک تکنسین باتجربه می تواند نتایج را ارزیابی کند.

RIF برای اولین بار توسط Coombs در سال 1942 ارائه شد ، براساس شناسایی آنتی ژن ها در مواد بالینی ، آماده سازی سلول های خونی و غیره با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال یا سرم های دارای برچسب فلوئوروکروم (RIF مستقیم) است. اولین آنتی بادی های (تشخیصی) را می توان با سرم ضد ایمونوگلوبولین دارای برچسب فلوروکروم (RIF غیرمستقیم) تشخیص داد. اصلاحاتی در RIF برای تشخیص آنتی بادی به عوامل عفونی در سرم خون یا آنتی بادی در سرم خون وجود دارد.

محبوبیت RIF با اقتصاد ، حضور آن توضیح داده می شود دامنه وسیع کیت های تشخیصی ، پاسخ سریع امروزه ، این واکنش از هر دو سرم پلی کلونال و آنتی بادی های مونوکلونال با مارک ایزوتیوسیانات فلورسئین (FITC) استفاده می کند. برای کاهش لومینسانس پس زمینه غیر اختصاصی ، آماده سازی با آلبومین سرم گاو برچسب زده شده با رودامین یا اوانز آبی درمان می شود.

اغلب اوقات ، RIF برای تشخیص سریع پاتوژن در مواد پاتولوژیک استفاده می شود. در این حالت ، همانند میکروسکوپ معمولی ، از مواد مورد مطالعه بر روی لام شیشه ای لکه تهیه می شود. این دارو با متیل الکل ، استون یا سایر مواد شیمیایی ثابت کننده ثابت می شود. سرم یا آنتی بادی های مونوکلونال دارای برچسب FITC بر روی سطح اسمیر ثابت اعمال می شود (در مورد RIF غیرمستقیم ، ابتدا دارو با سرم در برابر آنتی ژن مورد نظر درمان می شود و سپس با آنتی بادی های برچسب دار به ایمونوگلوبولین های مورد استفاده در مرحله اول) از آنجا که RIF نوعی تحلیل ناهمگن است ، یک مرحله با شستشو از مرحله دیگر جدا می شود.

نتایج حاصل از واکنش با استفاده از میکروسکوپ لومینسانس در نظر گرفته می شود ، در سیستم نوری که مجموعه ای از فیلترهای نور نصب شده است ، روشنایی آماده سازی را با نور ماوراio بنفش یا بنفش آبی با طول موج مشخص ارائه می دهد. محقق ماهیت درخشش ، شکل ، اندازه اشیا و موقعیت نسبی آنها را ارزیابی می کند.

هنگام تنظیم RIF برای تشخیص آنتی بادی ها ، لکه ها از سویه مرجع پاتوژن تهیه می شوند. سرم آزمایش به لام زده می شود. اگر آنتی بادی های مورد نظر در آن وجود داشته باشد ، پس به آنتی ژن های سلول های میکروبی متصل می شوند. شستشوی آماده سازی با محلول بافر ، آنتی بادی های غیرقابل اتصال را از بین می برد. سپس دارو با سرم برچسب خورده شده در برابر ایمونوگلوبولین های انسانی درمان می شود. در صورت نتیجه مثبت واکنش در حین میکروسکوپ اسمیر در میکروسکوپ فلورسنت ، تابش خاصی از فرهنگ مرجع مشاهده می شود.

عیب اصلی RIF ذهنی بودن آن است.

معیارهای کلاسیک برای ویژگی این واکنش عبارتند از:

· مورفولوژی مشخصه ، اندازه و محل پاتوژن در لام.

· طبیعت محیطی درخشندگی جسم.

· رنگ فلورسانس ؛

· شدت فلورسانس.

هنگام مطالعه اشیا large بزرگ (تریکوموناس ، سلولهای انسانی ، سلولهای آلوده به باکتری یا ویروس) ، این معیارها به شما امکان می دهد تا نتیجه قابل اطمینان بگیرید. در همان زمان ، اجسام اولیه کلامیدیا و مایکوپلاسما دارای اندازه هایی هستند که در حد قدرت تفکیک میکروسکوپ لومینسانس قرار دارند. در این حالت ، ارزیابی ریخت شناسی میکروارگانیسم ها دشوار است و لومینسانس ویژگی محیطی خود را از دست می دهد. معیارهای باقی مانده به وضوح برای شناسایی قابل اعتماد میکروارگانیسم مشاهده شده کافی نیستند. در رابطه با موارد فوق ، ماهیت ذهنی حسابداری واکنش ، الزامات ویژه ای را برای صلاحیت پرسنل مجری تحقیق ایجاد می کند.

2.2. روش سنجش ایمنی فلورسانس با زمان حل شده (FIA BP ، Etkins R. et Wallac O.، 1984)

این نوع FIA بر اساس اصول جذب یکی از معرفها در فاز جامد و استفاده از فناوری ساندویچ استوار است. شناسایی دوگانه ، شبیه به ELISA. با این حال ، یک تمایز مهم در این روش استفاده از کلات های لانتانید (عناصر کمیاب خاکی از یوروپیوم ، ساماریوم ، تربیوم و دیسپروزیوم) به عنوان برچسب است. از مزایای FIA VR می توان به حساسیت بالای آن ، فن آوری مرحله بندی شبیه ELISA و احتمال تقویت قابل توجه سیگنال مفید به دلیل نسبت بسیار زیاد سیگنال به نویز اشاره کرد. یک برچسب خاص فلورسنت نسبت به فلورسانس زمینه ، بسیار زیاد و طولانی تر فلورس می کند. علاوه بر این ، برچسب توانایی بازیابی توانایی درخشش را دارد (تابش تحریک پالسی با دوره 1 ثانیه - بیش از 1000 پالس برای حسابداری استفاده می شود) ، که منجر به تجمع (تقویت) سیگنال مفید می شود. سیستم توصیف شده توسط شرکت PerkinElmer ، ایالات متحده آمریکا ، تحت نام Delfia تحقق یافته و حساسیت آن در تعیین آنتی ژن ها بیش از 10-17 M است.

2.3 جریان سنجی

واکنش ایمونوفلورسانس که در سال 1942 توسط Koons کشف شد ، یک روش تحقیق جدید نیست. با این حال ، ظهور فناوری های هیبریدوما ، که امکان به دست آوردن آنتی بادی های مونوکلونال را فراهم می آورد ، به این واکنش "زندگی دوم" بخشید ، زیرا استفاده از آنها باعث افزایش حساسیت این واکنش و ویژگی آن چندین برابر شده است.

و امروز ما در مورد واکنش ایمونوفلورسانس مستقیم و غیرمستقیم (RIF) به عنوان یک روش تشخیصی Koons برای مردان و زنان بالغ در دوران بارداری به شما جزئیات خواهیم گفت.

واکنش ایمونوفلورسانس چیست

با ایجاد یک فرصت عالی برای دستیابی سریع به یک تشخیص دقیق ، واکنش ایمونوفلورسانس به شما امکان می دهد حضور عامل ایجاد کننده بیماری را در مواد پاتولوژیک تعیین کنید. برای این منظور از ماده ای که مخصوصاً با استفاده از برچسب FITC (ایزوتیوسیانات فلورسئین) پردازش می شود استفاده می شود و به عنوان یک تجزیه و تحلیل ناهمگن مورد مطالعه قرار می گیرد.

برای بدست آوردن نتیجه ، از میکروسکوپ لومینسانس استفاده می شود ، در سیستم نوری آن مجموعه ای از فیلترهای نور وجود دارد که با نور آبی-بنفش یا فرابنفش دارای طول موج مشخص ، آماده سازی را فراهم می کند. این شرایط به فلوروکروم اجازه می دهد تا در محدوده مشخص شده منعکس شود. محقق خصوصیات درخشش ، شخصیت آن ، اندازه اشیا objects و موقعیت نسبی آنها را ارزیابی می کند.

به چه کسانی اختصاص داده شده است؟

برای تشخیص انواع بیماری های ویروسی می توان از آزمایش ایمونوفلورسانس استفاده کرد. به طور خاص ، زمانی تجویز می شود معاینه جامع برای شناسایی عوامل زیر:

• وجود ویروس در بدن ؛
• عفونت سالمونلا
• وجود آنتی ژن های خاص در بدن ؛
• احتمال عفونت بدن با کلامیدیا ، مایکوپلاسما و سایر میکروارگانیسم ها را نشان می دهد که توانایی تحریک بیماری های ویروسی انسان را دارند.
• تشخیص بیماری های ویروسی در حیوانات.

نشانه های ذکر شده استفاده از واکنش ایمونوفلورسانس را در تشخیص بیماری های ویروسی از طبیعت مختلف در ارگانیسم انسان و حیوان امکان پذیر می کند.

اهداف

از آنجا که این روش تشخیصی دارای مزایای زیادی است که از جمله آنها می توان به بازدهی بالا ، سرعت اجرا و بدست آوردن نتیجه و همچنین عدم وجود تعداد زیادی موارد منع مصرف ، آن را تعیین کننده وجود در بدن دانست. عفونت های ویروسی... بنابراین ، این تجزیه و تحلیل می تواند هم برای تعیین و هم برای روشن شدن تشخیص ، که بر اساس آن رژیم درمانی تجویز می شود ، تجویز شود.

این روش احساسات ناخوشایندی ایجاد نمی کند ، بنابراین لازم است مواد برای تجزیه و تحلیل ، که از هر مایع بدن گرفته می شود: بزاق ، خلط ، خراش از سطح غشاهای مخاطی. برای تجزیه و تحلیل می توان خون نیز گرفت. فرکانس واکنش ایمونوفلورسانس توسط پزشک معالج تجویز می شود ، وی باید اطلاعات مربوط به پویایی فرآیندهای رخ داده در بدن را بدست آورد.

از آنجا که این تجزیه و تحلیل هم به بدن و هم به سلامت عمومی فرد آسیب نمی رساند ، می تواند در صورت لزوم تجویز شود.

انواع چنین رویه ای

امروزه انواع مختلفی از این تجزیه و تحلیل استفاده می شود که هر یک از آنها دارای تعدادی از آنها هستند ویژگی های خاص و به شما امکان می دهد دقیق ترین تصویر را از فرآیندهای رخ داده در بدن بدست آورید.

انواع واکنشهای ایمونوفلورسانس عبارتند از:

1. - یکی از سریع ترین انواع تشخیص ، این تجزیه و تحلیل امکان دستیابی به داده های کمی را بدون استفاده از رقت های سریال فراهم می کند. با استفاده از اندازه گیری های به دست آمده از چگالی نوری مایع ، می توان سطح غلظت قطعه مورد نظر را به طور دقیق تعیین کرد. هنگام استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال برای اجرای آن ، از امکانات گسترده این نوع تجزیه و تحلیل استفاده می شود ، که تعیین مرحله روند عفونی ، شدت آن را امکان پذیر می کند.
2. تشخیص DNA - این روش بر اساس اتصال مکمل نوکلئوتیدها است که برای آن می توان از مایعاتی مانند بزاق ، خون ، مایع مغزی نخاعی ، ادرار ، خلط ، نمونه برداری ، خون استفاده کرد. این روش در تشخیص وجود ویروس های پاپیلوما در بدن بسیار مثر است ، با این حال ، بسیاری از سیستم های آزمایش مدرن گاهی اوقات می توانند نتایج مثبت و کاذب منفی داشته باشند. آنها می توانند در اثر آلودگی نمونه های مایع برای تجزیه و تحلیل DNA خاص ایجاد شوند ، که وجود آن می تواند ماهیت تو در تو یا کلی داشته باشد.
3. ایمونوکروموگرافی - ویژگی این روش برای تعیین وجود یک محیط آسیب شناختی و ویروس ها در بدن شامل استفاده از آنتی بادی های برچسب زده شده در طول واکنش است. این روش تشخیصی برای شناسایی و میزان فعالیت روند عفونت با استرپتوکوکهای گروه A و همچنین کلامیدیا از انواع زیر استفاده می شود: Clamikit R Innotech International، Clearview TM Chlamydia از Oxoid. دارای بالاترین حساسیت ممکن ، سیستم های آزمایشی که بر اساس این روش تحقیق ساخته شده اند. معمولاً به عنوان آزمون جهت گیری استفاده می شوند.

انواع ذکر شده دارای ویژگی های انجام و ویژگی های خاص نتایج ، اما همه آنها به منظور به دست آوردن اطلاعات در مورد وجود میکروارگانیسم ها و ویروس های آسیب شناختی در بدن و همچنین میزان تولید مثل و فعالیت آنها هستند.

موارد مصرف برای

واکنش ایمونوفلورسانس می تواند برای تشخیص هر نوع محیط پاتولوژیک در بدن تجویز شود.

هنگام انجام این نوع تشخیص ، کلامیدیا ، تریکوموناس ، گونوکوک و همچنین انواع مختلفی از لامبلیا تعیین می شود. و ، و سایر بیماری ها نیز به RIF نیاز دارند. تعیین پزشک برای اجرای آن اجباری است.

موارد منع مصرف برای

از آنجا که برای انجام این واکنش به عنوان ماده آزمایشی به هر نوع مایعات بدن نیاز است ، مصرف آنها معمولاً دشوار نیست و هیچ منع مصرفی برای اجرای واکنش ایمونوفلورسانس وجود ندارد. با این حال ، در دوران بارداری و در کودکان زیر 6 ماه ، نمونه برداری از مواد برای تحقیق با حداکثر احتیاط انجام می شود.

عدم استفاده از موارد منع مصرف باعث می شود که این نوع تشخیص وقتی پزشک برای همه بیماران تجویز می کند ، انجام شود. ایمنی آن با استفاده از وسایل ضد عفونی شده و سرنگ های یکبار مصرف تضمین می شود.

آماده شدن برای روش

هیچ ویژگی خاصی برای استفاده از این ماده برای تجزیه و تحلیل وجود ندارد. برای او با معده خالی خون گرفته می شود تا جایی وجود نداشته باشد محتوای بالا این شامل موادی است که می توانند تغییر کنند قرائت واقعی و یک تصویر نادرست ارائه دهید.

چگونه مجموعه آزمایشات انجام می شود؟

از آنجا که آماده سازی ویژه ای برای تجزیه و تحلیل لازم نیست ، فقط مصرف غذا 12 ساعت قبل از آن و عدم استفاده از آن منتفی است مواد مخدر، نمونه گیری از ماده آزمایش به عنوان یک فرآیند طبیعی مصرف مایعات بدن برای تجزیه و تحلیل انجام می شود.

احساسات ذهنی در طول عمل ممکن است بسته به حساسیت متفاوت باشد.

رمزگشایی نتایج

استفاده از سیستم های آزمون مدرن به شما امکان می دهد دقیق ترین نتایج تحلیل را بدست آورید. از داده های زیر برای رمزگشایی نتیجه استفاده می شود:

• درجه شدت فلورسانس ؛
• سایه فلورسانس؛
• طبیعت محیطی روند درخشان جسم ؛
• مشخصات مورفولوژی ، محل پاتوژن در لکه گرفته شده از ماده آزمایش و اندازه آن.

در طول مطالعه روی اشیا large بزرگ (به عنوان مثال ، گاردنلا ، تریکومونا ، سلولهایی که قبلاً به ویروس آلوده شده اند) ، معیارهای فوق امکان دستیابی به نتایج قابل اطمینان را فراهم می کند. با این حال ، اجسام اولیه مایکوپلاسما و کلامیدیا ابعادی دارند که در حد قدرت حلال یک میکروسکوپ لومینسانس است ، که این کار را دشوار می کند

از آنجا که لومینسانس محیطی مقداری از شدت خود را از دست می دهد ، نتیجه دقیقی نمی گیرد. معیارهای باقی مانده دیگر برای شناسایی دقیق میکروارگانیسم های مورد مطالعه کافی نیستند. به همین دلیل ، الزامات ویژه ای برای متخصصانی که انجام می دهند اعمال می شود نظر داده شده تحقیق: سطح صلاحیت آنها باید کافی باشد تا با داده های موجود کار کند.

به همین دلیل ، فقط یک پزشک با سطح صلاحیت مناسب می تواند با رمزگشایی آنالیز بدست آمده مقابله کند. با استفاده از روش RIF در زیر قیمت تحقیق را بخوانید.

هزینه متوسط

هزینه واکنش ایمونوفلورسانس به محل و سطح آن بستگی دارد موسسه پزشکی ، و همچنین صلاحیت تحلیلگر انجام دهنده تجزیه و تحلیل. امروزه این هزینه از 1280 تا 2160 روبل متغیر است.

ویدئوی زیر درباره واکنشهای ایمنی شناختی بیشتر به شما می گوید: