Valoarea grupelor de sânge conform sistemului AVO. Sistemele antigenice de sânge

Testarea anticorpilor prin sistemul ABO- un studiu clinic general care vizează detectarea alfa- sau beta-izohemaglutininelor în sânge - anticorpi IgG naturali la antigenii A sau B. lipsă Determinați în caz de incompatibilitate între mamă și făt pentru antigenele sistemului ABO. Detectarea anticorpilor antigrup în sângele unei femei însărcinate este necesară pentru diagnosticul conflictului intergrup și implementarea în timp util a măsurilor terapeutice pentru a preveni avortul spontan, nașterea prematură, boala hemolitică a fătului (nou-născut). Sângele este extras dintr-o venă. Metoda de cercetare - reacție de aglutinare. În mod normal (cu o probabilitate redusă de conflict intergrup), rezultatul este negativ. Disponibilitatea rezultatelor analizei este de o zi lucrătoare.

Anticorpii conform sistemului ABO sau anticorpii antigrup sunt imunoglobuline, care sunt produse atunci când în sânge apare un antigen care este incompatibil într-o relație de grup. Grupul sanguin depinde de proteinele speciale prezente pe partea exterioară a membranei eritrocitare - aglutinogeni. ÎN practică medicală se determină aglutinogenii A, B și D. La persoanele cu grupa sanguină I, eritrocite fără proteine ​​A și B, cu grupa II - cu proteine ​​de tip A, cu grupa III - cu proteine ​​de tip B, cu grupa IV - cu proteine de tipurile A și B Prezența sau absența aglutinogenului D determină un factor Rh pozitiv sau negativ. Anticorpii anti-grup sunt produși de organism atunci când pătrund în sânge celule roșii din sânge cu aglutinogeni A sau B. Reacția acestor anticorpi duce la distrugerea globulelor roșii străine.

Producerea de anticorpi conform sistemului ABO este posibilă cu transfuzii de sânge, când sângele fătului și al mamei este amestecat. Teoretic, incompatibilitatea grupului de sânge este determinată în următoarele cazuri: dacă destinatarul (mama) are grupa de sânge I sau III, iar donatorul (fătul) - II; dacă destinatarul (mama) are grupa de sânge I sau II, iar donatorul (fătul) are III; dacă destinatarul (mama) are grupa sanguină I, II sau III, iar donatorul (fătul) - IV. În practică, producția de anticorpi antigrup este cel mai adesea observată la femeile cu grupa de sânge I, deoarece nu conține aglutinogeni A și B și, în același timp, este cea mai frecventă. Imunoconflictul în timpul sarcinii poate duce la eritroblastoza nou-născutului, cu transfuzii de sânge - la hemoliza intravasculară a eritrocitelor. Sunt expuse riscului beneficiarilor după mai multe transfuzii, precum și femeile însărcinate care au suferit transfuzii de sânge, întreruperi artificiale și naturale, care au copii cu boli hemolitice.

Pentru un test de sânge pentru anticorpi utilizând sistemul ABO, sângele este extras dintr-o venă. Cea mai comună metodă de cercetare este reacția de aglutinare folosind un gel difuz. Rezultatele sunt utilizate în obstetrică și ginecologie în planificarea și monitorizarea sarcinii, precum și în chirurgie și terapie intensivă pentru transfuzii de sânge.

Indicații

Un test de sânge pentru anticorpi în conformitate cu sistemul ABO este indicat femeilor în timpul sarcinii dacă există probabilitatea de a dezvolta un conflict de grup imunologic. La determinarea riscului, se ia în considerare combinația grupelor sanguine parentale. Prezența anticorpilor în sânge este determinată cel mai adesea la femeile însărcinate cu grupa I, dacă II, III sau IV au fost transmise de la tată la copil. De asemenea, combinațiile de materne II + III sau IV paterne, III materne + II sau IV paterne sunt, de asemenea, probabil conflictuale. Atunci când se prescrie o analiză, sunt luați în considerare și alți factori de risc: afectarea permeabilității placentare, traumatisme abdominale, proceduri de diagnostic invazive (de exemplu, amniocenteza). În toate aceste cazuri, este posibil ca eritrocitele fetale să pătrundă în sângele mamei, urmate de producerea de anticorpi antigrup. Este imposibil să se determine clinic prezența unui conflict imunologic de acest tip - femeia nu simte nicio modificare. Dar dacă nu urmăriți titrul anticorpului, atunci există riscul de a dezvolta boală hemolitică la copil, care se manifestă prin edem, galbenitate, anemie, mărirea splinei și a ficatului, în cazuri severe - întârzieri de dezvoltare.

O altă indicație pentru testarea sângelui pentru anticorpi conform sistemului ABO sunt complicațiile după transfuzia de sânge. Într-un conflict de grup, se dezvoltă adesea hemoliza acută intravasculară - o reacție la distrugerea globulelor roșii din sângele injectat. Se manifestă ca o senzație de arsură la locul perfuziei, febră, frisoane, dureri de spate și trunchi și atacuri de panică. La monitorizarea sarcinii, decizia de a efectua o analiză este luată de medic, luând în considerare totalitatea factorilor de risc pentru dezvoltarea conflictului de grup. Un test de sânge pentru anticorpi conform sistemului ABO nu este un test de screening, spre deosebire, de exemplu, de un test pentru anticorpii anti-eritrocite. Acest lucru se datorează faptului că un conflict imunologic de acest tip se dezvoltă rar și boala hemolitică se desfășoară într-o formă ușoară și se manifestă în principal prin icterul nou-născuților

Pregătirea pentru analiză și eșantionare

Materialul pentru testarea anticorpilor conform sistemului ABO este sângele venos. Procedura de colectare se efectuează de obicei dimineața. Nu există cerințe speciale pentru pregătire, este recomandabil să donați sânge la 4-6 ore după ce ați mâncat. Ultimele 30 de minute trebuie petrecute într-un mediu calm, fără stres fizic sau emoțional. Sângele este extras din vena cubitală folosind un sistem de vid fără anticoagulant sau cu un activator de coagulare. Depozitat la temperaturi de la 2 la 8 ° C, în termen de 2-3 ore este livrat la laborator.

Anticorpii conform sistemului ABO sunt determinați în sânge prin metoda de aglutinare. Procedura de cercetare cuprinde mai multe etape. În primul rând, proba de testare este adăugată la microtuburi cu gel de filtrare. Apoi sunt așezate într-un incubator pentru o vreme, apoi într-o centrifugă. Eritrocitele, care sunt conectate cu anticorpii antigrup, sunt mai mari și, prin urmare, nu trec prin gel, ci rămân la suprafața acestuia. Ca rezultat al centrifugării, eritrocitele libere se așează pe fundul tubului. Distribuția celulelor roșii din sânge este utilizată pentru a evalua prezența anticorpilor în probă. Pregătirea rezultatelor cercetării durează 1 zi.

Valorile normale

Anticorpii sistemului ABO sunt prezentați în două tipuri - α și β. Primele sunt produse pentru aglutinogenul A, cele din urmă pentru aglutinogenul B. Ambele tipuri de anticorpi pot fi naturale și imune, adică dobândite ca urmare a sensibilizării. În mod normal, titrul anticorpilor α naturali este de la 1: 8 la 1: 256, titrul anticorpilor β naturali este de la 1: 8 la 1: 128. Anticorpii imunitari antigrup nu sunt detectați în mod normal. Scăderea fiziologică a nivelului de anticorpi naturali poate fi determinată la copii și vârstnici.

Creșterea valorilor

Motivul creșterii valorilor analizei pentru anticorpi conform sistemului ABO este sensibilizarea corpului cauzată de aportul unui antigen incompatibil din punct de vedere al caracteristicilor grupului. În aceste cazuri, titrurile de anticorpi antigrup naturali cresc și uneori se determină anticorpii antigrup imuni cu forme complete și incomplete. Cel mai adesea, abaterile de această natură sunt diagnosticate la femeile însărcinate cu grupa sanguină I, deoarece eritrocitele nu au aglutinogene nici de tip A, nici de tip B, iar frecvența apariției grupului este de 45%.

Scăderea valorilor

Scăderea valorilor analizei pentru anticorpi conform sistemului ABO nu are valoarea diagnosticului, cauzele sale pot fi unele patologii, de exemplu, agamaglobulinemia, boala Hodgkin, leucemia limfocitară cronică. În absența izoimunizării cu factori specifici, anticorpii antigrup imuni sunt absenți, iar titrurile naturale sunt scăzute.

Tratamentul abaterilor de la normă

Un test de sânge pentru anticorpi conform sistemului ABO este cel mai mare valoare predictivă la monitorizarea sarcinilor la femeile cu grupa sanguină I. Rezultatele sale fac posibilă identificarea stării de sensibilizare la factorii de grup și prevenirea dezvoltării unui conflict imunologic care să ducă la eritroblastoza nou-născutului. Dacă se detectează un titru crescut de anticorpi antigrup naturali, se determină anticorpii imuni, atunci este necesar să solicitați sfatul medicului obstetrician-ginecolog care conduce sarcina. Decizia cu privire la necesitatea și tactica terapiei este luată de un specialist în mod individual.

Procedura pentru determinarea grupelor de sânge conform sistemului ABO constă în detectarea antigenelor A și B în eritrocite folosind anticorpi standard și utilizarea aglutininelor în plasmă sau ser din sângele analizat cu eritrocite standard. Tehnica a fost dezvoltată la începutul secolului al XX-lea și este încă utilizată activ în medicină. Determinarea antigenelor A și B se efectuează datorită tsoliclonelor anti-A și anti-B.

Noțiuni de bază

La donatori, nu numai antigenele din eritrocite sunt întotdeauna determinate, ci și aglutininele din ser (plasmă) folosind eritrocitele standard. Sângele venos este utilizat ca biomaterial. Înainte de studiu, este necesar să renunțați la alimentele grase cu o zi înainte de analiză și să nu fumați timp de o jumătate de oră înainte de a face testul. Grupurile de sânge sunt determinate de două ori: mai întâi în secția medicală, unde se procură materialul și apoi este confirmată de cercetări în laborator.

Determinarea grupelor de sânge conform sistemului ABO este principalul test utilizat în medicina transfuzională. Unele animale au, de asemenea, un sistem similar de grupe sanguine, cum ar fi cimpanzeii, gorilele și bonobii.

Istoria descoperirilor

În știință, există o opinie general acceptată conform căreia metoda de determinare a grupelor de sânge conform sistemului ABO a fost identificată pentru prima dată de către Karl Landsteiner, un om de știință austriac, în 1900. Apoi a descris în lucrarea sa trei tipuri de antigeni. Pentru aceasta treizeci de ani mai târziu a primit Premiul Nobel pentru Medicină și Fiziologie. Datorită faptului că nu au existat legături strânse între oamenii de știință, s-a stabilit ulterior că serologul ceh Jan Jansky, indiferent de cercetările lui K. Landsteiner, a descris mai întâi patru grupe sanguine umane, dar cercetările sale nu au fost cunoscute de un public larg. În prezent, clasificarea dezvoltată de Y. Yansky este utilizată în Rusia și republicile fostei URSS. În Statele Unite, W.L. Moss a scris o lucrare similară în 1910.

Metodă de determinare a grupelor de sânge conform sistemului ABO folosind tsoliclone

Tipul de sânge trebuie determinat într-o cameră cu iluminare bună, respectând un interval de temperatură cuprins între 15 și 25 grade Celsius, deoarece abaterile de la această normă pot afecta rezultatele testelor. Inițialele și prenumele pacientului sunt scrise pe o placă sau placă. De la stânga la dreapta sau în cerc, se aplică denumirile standard ale grupurilor (O (I), A (II), B (III)). Sub ele sunt plasate picătură cu picătură serul corespunzător cu pipete separate pentru fiecare tip. Apoi li se adaugă sângele pacientului. Materialul pentru cercetare este preluat de pe lobul urechii sau deget. Acest lucru este cerut de tehnica de determinare a grupei de sânge conform sistemului ABO.

De asemenea, este legală utilizarea globulelor roșii într-o eprubetă după formarea unui cheag. Este necesar ca cantitatea de ser să fie de zece ori mai mare decât cantitatea de sânge adăugată. După aceea, picăturile sunt amestecate cu tije de sticlă (separat pentru fiecare). În termen de cinci minute, scuturând ușor placa, urmăriți apariția reacției de hemaglutinare. Se constată în faptul că apar mici bulgări roșii, apoi se contopesc în altele mai mari. În acest moment, serul își pierde aproape complet culoarea.

Pentru a elimina hemaglutinarea falsă prin lipirea simplă a eritrocitelor, trebuie să adăugați o picătură de soluție salină după trei minute și să verificați dacă aglutinarea persistă. Dacă da, atunci este adevărat. Gata, definiția grupelor de sânge conform sistemului ABO este acum completă.

Interpretarea rezultatelor

Ca urmare, pot fi observate patru reacții:

• nu se produce aglutinare cu niciunul dintre seruri - primul grup este O (I);
• reacția s-a manifestat cu serurile I (ab) și III (a) - a doua grupă A (II);
• aglutinarea are loc cu serurile I (ab) și II (b) - al treilea grup B (III);
• dacă reacția are loc cu trei seruri, este necesar să se efectueze o procedură suplimentară cu reactivi din grupa AB (IV), care sunt standard; dacă nu există aglutinare într-o astfel de picătură, putem presupune că aceasta este a 4-a grupă sanguină AB (IV).

Metoda rapidă pentru factorul Rh

Metoda de determinare a grupelor de sânge conform sistemului ABO implică detectarea simultană a factorului Rh (Rh).

Suprafața plăcii este umezită preliminar și pe ea sunt scrise „ser de control” și „ser anti-rhesus”. Apoi, una sau două picături de reactivi necesari sunt plasate sub inscripții și se adaugă materialul analizat. Pentru aceasta, puteți utiliza și sânge dintr-un deget (în aceeași cantitate ca volumul serului) sau eritrocite rămase în partea inferioară a tubului după apariția unui cheag (jumătate din volumul serului). Alegerea materialului nu afectează rezultatul final. Apoi sângele și serul sunt amestecate cu o tijă de sticlă uscată, după care reacția este de așteptat timp de cinci minute. Pentru a elimina citirile false, se adaugă soluție izotonică de clorură de sodiu după trei până la patru minute (doar câteva picături). Determinarea grupei sanguine în conformitate cu sistemul ABO și Rh se efectuează foarte des.

Dacă apare aglutinarea eritrocitelor în picătura serică, aceasta indică un sânge Rh pozitiv. Conform statisticilor, Rh + se găsește la 85% din populația lumii. Absența sa ne permite să vorbim despre afiliere Rh-negativă. Dacă în serul de control apare aglutinarea, atunci devine inutilizabilă. Din păcate, algoritmul de determinare a grupelor sanguine ABO nu funcționează întotdeauna perfect.

Ce greșeli se pot face cu această tehnică?

Inexactitățile în determinarea apartenenței sângelui la un anumit grup depind de următoarele motive:

• Tehnic.
• Specificitatea biologică a sângelui în studiu.
• Caracterul defect al serurilor și eritrocitelor standard.

Erori tehnice

Posibile erori la determinarea grupei sanguine a sistemului ABO într-un mod transversal:

Erori specifice biologice

Erorile asociate cu specificitatea biologică a sângelui analizat sunt împărțite în două tipuri.

• Depinde de caracteristicile eritrocitelor.
• Erori datorate caracteristicilor biologice ale serului.

Să luăm în considerare fiecare tip mai detaliat.

Depinde de caracteristicile eritrocitelor

• Aglutinarea tardivă datorită formelor „slabe” de eritrocite și antigene. Pentru a evita greșelile, este necesar să se determine grupa sanguină a donatorilor și a primitorilor care utilizează eritrocite standard. Aglutinogenul A 2 ar trebui identificat prin retestare cu alte tipuri de reactivi și alte articole din sticlă, crescând timpul de înregistrare a reacției.
• „Panaglutinare” („autoaglutinare”) - capacitatea sângelui de a arăta aceeași reacție nespecifică cu toate serurile, inclusiv cu ale sale. După cinci minute, severitatea unei astfel de aglutinări slăbește, deși ar trebui să crească. Cazuri similare se observă la pacienții cu cancer, la pacienții cu arsuri etc. Ca martor, este necesar să se evalueze manifestarea aglutinării eritrocitelor analizate în serul standard al celui de-al patrulea grup și al soluției saline. Când grupul sanguin de „panaglutinare” este determinat ca urmare a triplei spălări a eritrocitelor. Dacă nu dă rezultatul dorit, merită să extrageți din nou o probă de sânge într-un tub încălzit înainte de procedură și puneți proba într-un termocontainer pentru a ajuta la menținerea temperaturii de 37 grade Celsius sau mai mult. Apoi trebuie dus la laborator unde se menține temperatura de mai sus și se utilizează soluție salină încălzită, placă și reactivi.

• Uneori, eritrocitele sângelui analizat sunt aranjate ca „coloane de monede” și pot fi confundate cu aglutinate. Dacă adăugați două picături de soluție izotonică și scuturați ușor comprimatul, globulele roșii din sânge sunt în poziția corectă.
• Aglutinarea incompletă sau mixtă care apare la pacienții cu al doilea, al treilea și al patrulea grup ca urmare a transplantului de măduvă osoasă sau în primele trei luni după transfuzia de sânge 0 (I).

Ser biologic

Erori asociate cu utilizarea eritrocitelor și serurilor standard defecte

Serurile slabe cu o dată de expirare sau care au un titlu mai mic de 1:32 sunt capabile să genereze aglutinare slabă și tardivă. Utilizarea acestor reactivi este inacceptabilă.

Utilizarea eritrocitelor sau serurilor standard inutilizabile preparate în condiții nesterile și conservate insuficient duce la apariția aglutinării „bacteriene” de natură nespecifică.

Există multe ipoteze populare despre grupele de sânge ale sistemului ABO, care au apărut imediat după descoperirea sa în diferite culturi ale lumii. De exemplu, în anii 30 ai secolului trecut, în Japonia și în alte țări, a câștigat popularitate o teorie care conectează un grup sanguin cu un anumit tip de personalitate. Teorii similare sunt populare astăzi.

Există, de asemenea, o părere că o persoană cu grupa A este susceptibilă la o mahmureală severă, cu care O este asociată dinti buni, și grupul A2 - cu cel mai înalt nivel IQ. Dar astfel de afirmații nu au fost dovedite științific.

Am examinat determinarea grupelor de sânge conform sistemului ABO folosind seruri standard.

Acest sistem este principalul care determină compatibilitatea sau incompatibilitatea sângelui transfuzat. Include doi antigeni importanți determinați genetic: A și B - și două tipuri de anticorpi împotriva acestora, aglutininele a și b. Combinațiile de aglutinogeni și aglutinine definesc 4 grupe ale sistemului ABO. Acest sistem este singurul în care în plasma persoanelor neimune există anticorpi naturali împotriva antigenului lipsă. La majoritatea oamenilor, aglutinogenul A este bine pronunțat (are o mare putere antigenică): cu anticorpi anti-A (a), dă o reacție pronunțată de aglutinare a eritrocitelor. La aproximativ 12% dintre indivizii din grupele A (11) și AB (IV), antigenul are proprietăți antigenice slabe, este desemnat ca antigen A2. Astfel, există un grup de antigeni A: A1 (puternic) și mai slab A2, A3, A4 etc. Existența antigenului slab A trebuie amintită atunci când se determină grupele de sânge, deoarece eritrocitele cu astfel de antigeni sunt capabile să producă doar târziu și aglutinare slabă, care poate duce la erori. Speciile de antigen B slab sunt foarte rare. Anticorpii sistemului ABO a (anti-A) și b (anti-B) sunt o proprietate normală a plasmei sanguine, care nu se schimbă calitativ în timpul vieții unei persoane, și b sunt anticorpi complet, reci. În majoritatea cazurilor, acestea nu se găsesc la nou-născuți și apar în primele trei luni de viață sau chiar un an. Aglutininele de grup ating dezvoltarea deplină până la vârsta de 18 ani, iar la bătrânețe titrul (nivelul) lor scade, ceea ce se observă și în stările de imunodeficiență. În plus față de grupul normal (natural) angitsl și, în unele cazuri, există anticorpi imuni anti-A și anti-B. Cel mai motiv comun aceasta este o sarcină în care au mama și fătul diferite grupuri sânge, mai des dacă mama este grupa 1 (0), fătul 11 ​​(A) sau W (B). Determinarea grupei de sânge este necesară pentru transfuzia de sânge compatibilă. În acest caz, este necesar să respectați regula: eritrocitele donatorului nu ar trebui să conțină antigenul corespunzător anticorpilor destinatarului, adică A și a, B și b, deoarece altfel va avea loc distrugerea masivă a eritrocitelor injectate de către anticorpii pacientului. - hemoliza, care poate duce la moartea destinatarului. Anticorpii de grup ai donatorului pot fi ignorați, deoarece sunt diluați cu plasma destinatarului. Prin urmare, sângele din grupa O (I), care nu conține aglutinogeni, poate fi transfuzat persoanelor cu orice grup de sânge. Persoanele cu 0 (1) grupă de sânge sunt considerate „donatori universali”. Sângele grupului A (P) poate fi transfuzat în destinatari ai grupului A (P) și al grupului AB (IV), care nu au aglutinine în plasmă. Grupa sanguină H (W) poate fi transfuzată la indivizi cu grupa H (W) și AB (IV).

Determinarea grupelor de sânge ale sistemului ABO se efectuează prin următoarele metode.

I. Determinarea grupei sanguine folosind seruri standard izohemaglutinante. Cu această metodă, prezența sau absența aglutinogenilor este stabilită în sânge și, pe baza acesteia, se ajunge la o concluzie cu privire la apartenența la grup a sângelui în studiu.

2. Determinarea grupei sanguine într-o cale încrucișată, adică utilizând simultan seruri standard izohemaglutinante și eritrocite standard. În această metodă, ca și în prima, se determină prezența sau absența aglutinogenilor și, în plus, prezența sau absența aglutininelor de grup este stabilită utilizând eritrocite standard.

3. Determinarea grupei sanguine folosind anticorpi monoclonali (COLICLONI).

EROARE ÎN DETERMINAREA GRUPURILOR DE SÂNGE

Erori tehnice. Încălcarea regulilor prezentate pentru determinarea grupelor de sânge poate duce la o evaluare incorectă a rezultatelor reacției. O abatere de la reguli poate fi:

Utilizarea serurilor standard sau a eritrocitelor standard (expirate, contaminate cu seruri de uscare);

Amestecarea probelor de sânge;

Poziționarea incorectă a serurilor sau fotocitelor standard în rafturi;

Ordinea greșită de aplicare a reactivilor standard pe placă;

Raport greșit dintre ser și celule roșii din sânge (nu 10: 1);

Cercetări la temperaturi mai mici de 15 ° C (apare aglutinarea la rece) sau mai mare de 25 ° C (aglutinarea încetinește);

Nerespectarea timpului necesar reacției (5 minute);

Nu adăugați soluție fiziologică urmată de balansarea plăcii;

Nu utilizați reacția de control cu ​​grupa serică ABo (IV);

Utilizarea de pipete murdare sau umede, bastoane, farfurii.

În toate cazurile cu un rezultat neclar sau îndoielnic, este necesar să se re-determine grupa sanguină printr-o metodă încrucișată folosind seruri standard din alte serii.

Erori asociate cu caracteristicile biologice ale sângelui analizat.

Determinarea incorectă a grupelor A 2 și A 2 B. Eritrocitele cu un antigen slab A cu antiser formează aglutinați mici, care apar lent. Reacția poate fi luată în considerare ca fiind negativă, adică grupa A 2 este înregistrată în mod eronat ca O (1) și A 2 B - ca B (W). Riscul unei astfel de erori este deosebit de mare odată cu prezența simultană a erorilor tehnice (raportul dintre ser și eritrocite este de 10: 1, temperatura este peste 25 ° C, rezultatele sunt luate în considerare mai devreme de 5 minute).

Erori asociate prezenței aglutinării nespecifice a eritrocitelor studiate. Acest fenomen este observat la pacienți tumori maligne, leucemie, sepsis, arsuri, ciroză hepatică, anemie hemolitică autoimună și este cauzată de disproteinemie. Controlul cu grupa serică ABo (IV) relevă prezența aglutinării nespecifice. În aceste cazuri, este necesar să re-determinați apartenența la grup utilizând metoda încrucișată. O soluție salină încălzită la 37 ° poate fi adăugată la picături unde se observă aglutinarea. Dacă este necesar, puteți spăla eritrocitele în studiu cu soluție salină caldă (37 °) și redetermina grupa sanguină.

Erori asociate prezenței extraaglutininelor. În serul sanguin al persoanelor din grupele A2 (P) și A2B (IV), anticorpii la antigenul A1 - A1 se găsesc în aproximativ 1% din cazuri. Acest lucru complică determinarea grupului sanguin prin metoda încrucișată, deoarece serul acestor indivizi aglutină eritrocitele standard ale grupului A (P), adică se manifestă ca ser al grupului 0 (1).

În unele boli, există o scădere a aglutinabilității eritrocitelor, în special a grupei A (P).

În stările de imunodeficiență, vârstnicii au o scădere a nivelului de aglutinine de grup.

În toate cazurile de obținere a unui rezultat îndoielnic, determinarea grupei de sânge trebuie repetată prin metoda încrucișată folosind seruri cu activitate mai mare.

18. Antigene de resus. Grupuri ale sistemului Rh. Semnificația clinică. Metode de determinare a antigenilor rhesus și a posibilelor erori.

Antigenele resului sunt al doilea cel mai important în practica transfuzională după grupele sanguine ABO.În perioada de introducere activă a transfuziei de sânge în clinică, numărul complicațiilor post-transfuzionale după transfuzia repetată de sânge ABO compatibil cu antigenul a crescut semnificativ. Sistemul Rhesus include șase antigeni, care sunt desemnați în paralel folosind două nomenclaturi: Wiener (Rh 0, rh ", rh", Hr 0, hr ", hr"); Fisher și Reis (D, C, E, d, c, e).

Rh 0 - D, rh "- C, rh" - E, Hr 0 - d, hr "- c, hr" - e.

Deoarece antigenul Rho (D) este cel mai activ în acest sistem, se numește factorul Rh. În funcție de prezența sau absența acestui factor, oamenii sunt împărțiți în Rh-pozitiv (Rh +) și Rh-negativ (Rh-). Această diviziune este acceptată numai în raport cu destinatarii. Antigenii rh "(C) și rh" (E) sunt mai puțin activi decât Rho (D), dar pot fi produși și anticorpi împotriva acestora la persoanele care nu conțin antigeni C și E în eritrocite. Prin urmare, cerințele pentru eritrocitele donatorilor Rh negativi sunt mai stricte. Eritrocitele nu trebuie să conțină nu numai antigenul D, ci și C și E. Antigenele Hro (d), hr "(c), hr" (e) se caracterizează printr-o activitate scăzută, deși anticorpii hr "(c) pot provoca conflicte izoimunologice. La 1-3% dintre indivizii Rh-pozitivi din eritrocite are o variantă slabă a antigenului D - D ", care determină prezența aglutinării mici, discutabile în determinarea factorului Rh. În aceste cazuri, afilierea Rh a sângelui destinatarului sau a femeii gravide este indicată ca Rh-negativă (Rh-), iar afilierea Rh a sângelui donatorului ca Rh-pozitiv (Rh +). Transfuzia de sânge cu Angen D u la destinatari Rh-negativi nu este permisă. Antigenele resului se formează la 8-10 săptămâni de embriogeneză, iar antigenicitatea lor poate chiar să depășească activitatea antigenelor la adulți. Sistemul Rhesus, spre deosebire de sistemul ABO, nu are anticorpi naturali. Anticorpii anti-Rhesus apar numai după imunizarea unui organism Rh-negativ ca urmare a transfuziei de sânge Rh-pozitiv sau a sarcinii cu un făt Rh-pozitiv. În corpul persoanelor sensibilizate, anticorpii împotriva antigenelor Rh persistă câțiva ani, uneori pe parcursul întregii lor vieți. În majoritatea cazurilor, titrul anticorpilor anti-rhesus scade treptat, dar crește din nou brusc atunci când sângele Rh-pozitiv reintră în organism. Anticorpii Rh diferă prin specificitate (anti-D, an-III C etc.) și proprietăți serologice (complete și incomplete). Anticorpii complecși provoacă aglutinarea globulelor roșii din mediul salin la temperatura camerei. Pentru manifestarea aglutinării sub influența anticorpilor incompleti, sunt necesare condiții speciale: temperatură ridicată, mediu coloidal (gelatină, proteină din zer). Anticorpii completi (IgM) sunt sintetizați la începutul răspunsului imun și dispar în curând din sânge. Anticorpii incompleti (IgG, IgA) apar mai târziu, sunt sintetizați pentru o lungă perioadă de timp și sunt cauza dezvoltării bolii hemolitice la nou-născuți, deoarece aceștia trec prin placentă și afectează celulele fătului.

Determinarea afilierii Rh a sângelui

Metoda de determinare a factorului Rh depinde de forma anticorpilor Rh din serul standard și de metoda de producție a acestuia. O seră anti-rhesus este atașată unei instrucțiuni însoțitoare cu o descriere a metodei pentru care este destinată această serie de ser distribuit.

La fiecare studiu, pentru a verifica specificitatea și activitatea serului anti-rhesus, este necesar să se stabilească un control. Pentru control, se utilizează eritrocite standard Rh-pozitive din grupa 0 (1) sau același grup cu sângele testat și eritrocite standard Rh-negative din același grup cu sângele testat.

Atunci când se determină apartenența la Rh prin două serii de seruri standard în acele cazuri când sunt utilizate prin metode diferite, rezultatul este luat în considerare ca adevărat dacă coincide în ambele serii de studii după verificarea probelor de control care confirmă specificitatea și activitatea fiecărei serii de ser anti-Rhesus, adică în absența aglutinării cu eritrocite standard Rh-negative din același grup și prezența aglutinării cu eritrocite Rh-pozitive standard din același grup sau grup 0 (1) și în probele martor fără ser (reactiv ) anti-rhesus. Dacă se observă o reacție slabă sau îndoielnică atunci când se determină aderența Rh, atunci sângele acestei persoane trebuie reexaminat cu aceeași serie și cu alte seruri anti-Rh și este de dorit să se includă ser care conține anticorpi complet. Dacă, în același timp, toate seriile de seruri care conțin anticorpi incompleti dau, de asemenea, o reacție slabă sau îndoielnică, iar cu anticorpi complet reacția este negativă, aceasta înseamnă că eritrocitele conțin un tip slab de antigen Rh, așa-numitul factor. În aceste cazuri, afilierea Rh a sângelui pacientului sau a femeii însărcinate este indicată ca Rh-negativă (Rh-), iar afilierea Rh a sângelui donatorului ca Rh-pozitiv (Rh +), prevenind astfel transfuzia acestuia sânge destinatarilor Rh-negativi.

Determinarea factorului Rh poate fi efectuată și prin următoarele metode.

Determinarea factorului Rh Rh 0 (D) printr-o reacție de conglutinare folosind gelatină (într-o eprubetă încălzită la 46-48 ° C).

Determinarea factorului Rh Rho (D) printr-o reacție de conglutinare într-un mediu seric pe un plan încălzit.

Determinarea factorului Rh Rh 0 (D) prin reacția de aglutinare în mediu salin în eprubete mici. Reacția de aglutinare în mediu salin este adecvată pentru lucrul numai cu ser care conține anticorpi Rh complet.

Determinarea factorului Rh Rh 0 (D) folosind anticorpi monoclonali.

Determinarea factorului Rh Rho (D) folosind un test indirect Coombs.

19 Anemie. Clasificare și scurtă descriere. Etiologie și patogenia anemiilor. Anemia (din grecescul anemia - lipsa de sânge) este un grup mare de boli caracterizate printr-o scădere a cantității de hemoglobină sau hemoglobină și eritrocite pe unitate de volum de sânge. Anemiile sunt diferite în ceea ce privește etiologia, mecanismele de dezvoltare, tabloul clinic și hematologic, deci există multe diferite clasificări dar nu sunt suficient de perfecti. L.I. Idelson a propus o clasificare de lucru a anemiilor pentru clinicieni: 1) acută anemie post-hemoragică; 2) anemie cu deficit de fier; 3) anemie asociată cu sinteza afectată sau utilizarea porfirinelor (sideroblastice); 4) anemie asociată cu sinteza afectată a ADN-ului, ARN-ului (megaloblastic); 5) anemie hemolitică; 6) anemie asociată cu inhibarea proliferării celulelor măduvei osoase (hipoplazice, aplastice); 7) anemii asociate cu înlocuirea măduvei osoase hematopoietice cu un proces tumoral (metaplastic).

Anemia poate fi fie o boală independentă, fie simptom însoțitor sau o complicație a anumitor boli interne, infecțioase și cancer... Există anemii multifactoriale, adică geneză mixtă, de exemplu: anemie hemolitică cu deficit de fier, anemie aplastică cu componentă hemolitică etc.

Depinzând de:

1) valorile indicatorului de culoare disting între anemie:

Normocromatic (indicele de culoare 0.9-1.1);

Hipocromă (indicele de culoare mai mic de 0,85);

Hiperchromic (indicele de culoare mai mare de 1,15);

2) valoarea diametrului mediu al eritrocitelor:

Normocitar (diametrul mediu al eritrocitelor 7,2-7,5 microni)

Microcitar (diametrul mediu al eritrocitelor este mai mic de 6,5 microni),

Macrocitice (diametrul mediu al eritrocitelor este mai mare de 8,0 microni),

Megalocitar (diametrul mediu al eritrocitelor este mai mare de 12 microni);

3) valorile volumului mediu de eritrocite în femtolitri (fl, 1 fl este 1 micron 3):

Normocitar (volumul mediu al eritrocitelor 87 ± 5 fl);

Microcitar (volumul mediu al eritrocitelor este mai mic de 80 fl);

Macrocitice (volumul mediu al eritrocitelor este mai mare de 95 fl);

4) nivelul reticulocitelor din sângele periferic.

Regenerativ (numărul de reticulocite este de 0,5-5%);

Hiperregenerativ (numărul de reticulocite este mai mare de 5%);

Hipo- și sunt generatoare (numărul de reticulocite este redus sau sunt absente, în ciuda evoluției severe a anemiei).

Numărul de reticulocite este un indicator al funcției regenerative a măduvei osoase în raport cu eritropoieza.

Anemiile normocromice includ posthemoragice acute (în primele zile după pierderea de sânge), hipo- și aplastice, hemolitice nesferocitare, hemolitice autoimune, metaplazice (cu leucemie, mielom etc.), precum și anemii care se dezvoltă cu tulburări endocrine (hipofuncție) ), glandele suprarenale boli renale, infecții cronice.

Anemiile hipocromice includ deficit de fier, siroblastic, unele mielotoxice, hemolitice (talasemie).

B12- (folic) -deficient, unele anemii hemolitice (microsferocitoza ereditară, dacă microsferocitele predomină printre eritrocitele din frotiu) sunt hipercromice. Uneori, anemia cu vitamina B1 2 -deficientă este normocromă.

Cele normocitare includ anemii hemolitice acute posthemoragice, aplastice, autoimune etc.

Anemiile microcitice includ deficit de fier, anemii sideroblastice, macrocitice - vigamin-B12- (folic) -anemii deficiente etc.

Cele regenerative includ anemii post-hemoragice; la hiperregenerative - anemii hemolitice, mai ales după o criză hemolitică; la hipo- și areregenerative - anemii hipoplazice, aplastice.

Măduva osoasă reacționează la dezvoltarea deficitului de fier, a anemiilor hemolitice prin iritare, hiperplazie a mugurii roșii. În cazul anemiilor hipoplazice, există o scădere progresivă a eritropoiezei până la epuizarea completă a acesteia.

20. Diagnosticul de laborator al anemiilor saturate cu fier și nesaturate cu fier. Anemie cu deficit de fier. Tipuri de deficit de fier. Testele de laborator care reflectă deficiența de fier în organism. Sângele periferic și modelul măduvei osoase în IDA. Diagnosticul de laborator al anemiei sideroblastice. Metabolismul și rolul fierului în organism

Fierul are o mare importanță pentru organism, face parte din hemoglobină, mioglobină și enzime respiratorii. Se distribuie pe mijloace fixe.

Fondul de hemoglobină. Fierul din hemoglobină reprezintă 60-65% din conținutul total de fier din organism.

Fond de rezervă. Acesta este fierul feritinei și hemosiderinei, care se depun în ficat, splină, măduvă osoasă, mușchi. Acesta reprezintă 30-40% din nivelul fierului din corp. Feritina este un complex solubil în apă de fier feric și proteină apoferritină, conținând 20% fier. Reprezintă o fracțiune labilă din rezerva de fier. Dacă este necesar, este ușor de utilizat pentru nevoile de eritropoieză. Hemosiderina este o proteină insolubilă în apă, care are o compoziție apropiată de feritină, dar conține o cantitate mai mare de fier - 25-30%. Este o fracție stabilă, ferm fixată din depozitele de fier ale corpului.

Fondul de transport este reprezentat de fier legat de proteina de transport, transferrina. Acesta reprezintă 1% din conținutul de fier din organism.

Fondul tisular este reprezentat de fier, enzime care conțin fier (citocromi, peroxidază etc.), mioglobină. Acesta reprezintă 1% din conținutul de fier din organism.

Conținutul total de fier din corpul adulților este de 4-5 g. Acesta intră în organism odată cu dieta. Conținut în produse de origine animală și vegetală (carne, în special carne de vită, ficat, ouă, leguminoase, mere, caise uscate etc.). Fierul se absoarbe mult mai bine din produsele de origine animală decât din alimentele vegetale, deoarece este conținut în ele sub formă de hem. Deci, 20-25% este absorbit din carne, 11% din pește, 3-5% din fierul conținut în produsele vegetale. Absorbția fierului este promovată acid ascorbic, acizii organici (citric, malic etc.), inhibă absorbția taninului, conținut ridicat de grăsimi în dietă. Absorbția fierului din Produse alimentare limitat. Pentru o zi, se absorb 2-2,5 mg de fier, pentru o scurtă perioadă de timp după sângerări severe, pot fi absorbite până la 3 mg de fier. Cantitatea principală de fier este absorbită în duoden și în partea inițială jejun... Cantități mici de fier pot fi absorbite în toate părțile intestinului subțire.

Absorbția fierului are loc în două etape: 1) mucoasa intestinală captează fierul furnizat împreună cu dieta; 2) fierul din mucoasa intestinală trece în sânge, este încărcat pe transferină și livrat la locurile de utilizare și la depozit. Transferrina transferă, de asemenea, fierul din fondurile și celulele sale ale sistemului mononuclear fagocitar, în care are loc distrugerea eritrocitelor, în măduva osoasă, unde este parțial utilizat pentru sinteza hemoglobinei și parțial depus sub formă de depozite de fier, ca precum și în alte locuri unde se depozitează fierul. De obicei 1/3 din transferină se leagă de fier. Se numește transferină legată sau fier seric. În mod normal, conținutul de fier seric la bărbați și femei este de 13-30 și respectiv 12-25 μmol / l. Partea transferrinei care nu este legată de fier se numește transferină liberă sau capacitatea nesaturată, latentă de legare a fierului în ser. Cantitatea maximă de fier pe care transferina s-ar putea atașa la saturație este denumită capacitate totală de legare a fierului seric (TIBC) (în mod normal 30-85 μmol / L). Diferența dintre TIBC și fierul seric reflectă capacitatea latentă de legare a fierului, iar raportul dintre fierul seric și TIBC, exprimat ca procent, reflectă procentul de saturație a transferinei cu fier (norma 16-50%). Pentru a judeca cantitatea de depozite de fier și corpul, efectuați:

Investigarea nivelului de feritină în ser prin metode radioimune;

Test desferal. Desferal (desferoxamină) este un chelator care, după ce a fost introdus în organism, se leagă selectiv de rezervele de fier, adică fierul de feritină și îl excretă în urină. Pacientul este injectat o dată intramuscular cu 500 mg de desferal, se colectează urină zilnică și se determină conținutul de fier. După administrarea desferalului, de la 0,8 la 1,2 mg de fier se excretă în mod normal în urină, în timp ce la pacienții cu anemie feriprivă sau în prezența unui deficit latent de fier, cantitatea de fier excretată în urină scade brusc;

Numărând în punctatul măduvei osoase numărul sideroblastelor, iar în sângele periferic - siderocitele. Sideroblastele sunt normoblaste, adică celule nucleate ale rândului roșu, în citoplasma cărora se relevă granule albastre din rezerve de fier - feritină. În mod normal, 20-40% din normoblaste sunt sideroblaste. Siderocitele sunt celule roșii din sânge în care se găsesc granule de feritină. În mod normal în sângele periferic: până la 1% din siderocite. Granulele de feritină din sideroblaste și siderocite sunt detectate cu o colorare specială cu albastru prusian.

Corpul se caracterizează prin pierderi fiziologice de fier cu urină, fecale, bilă, celule exfoliate ale mucoasei intestinale, cu transpirație, la tăierea părului și a unghiilor. Femeile pierd fier odată cu menstruația.

Dezvoltare anemie feriprivă precedată de deficit latent (latent) de fier. Pacienții au reclamații și Semne clinice, caracteristic piremiei cu deficit de fier, dar mai puțin pronunțată (slăbiciune, paloare moderată a pielii și a mucoaselor vizibile, dureri de cap, palpitații, adesea o perversiune a gustului și a mirosului, piele uscată, unghii fragile etc.). Examinarea nu relevă încă modificări ale conținutului de hemoglobină, eritrocite și alți indicatori ai sângelui periferic. Dar tulburările metabolismului fierului sunt dezvăluite: fier seric Capacitatea de legare a fierului totală și latentă a serului crește, procentul de saturație a transferinei scade și nivelul depozitelor de fier scade. Aceasta este sideropenia fără anemie. Deficitul latent de fier se poate dezvolta la orice vârstă, în special la femei, adolescenți și copii. Dacă deficiența de fier latentă nu este compensată, dar se adâncește, se frământă anemia cu deficit de fier.

Informații generale despre studiu

Grupul sanguin ABO este un sistem care reflectă prezența sau absența antigenelor pe suprafața celulelor roșii din sânge și a anticorpilor din plasma sanguină. ABO (citit ca „a-ba-zero”) este cel mai comun sistem de grupe sanguine din Rusia.

Eritrocitele de pe suprafața lor transportă molecule de semnalizare - antigene - aglutinogene. Cei doi antigeni principali încorporați în molecula eritrocitară sunt A și B. Grupările sanguine sunt determinate pe baza prezenței sau absenței acestor antigeni. Sângele persoanelor care au antigenul A pe eritrocitele lor aparține celui de-al doilea grup - A (II), sângele celor care au antigenul B pe eritrocitele lor aparține celui de-al treilea grup - B (III). Dacă atât antigenele A cât și B sunt prezente pe eritrocite, acesta este al patrulea grup - AB (IV). De asemenea, se întâmplă ca niciunul dintre acești antigeni să nu fie detectat în sânge pe eritrocite - atunci acesta este primul grup - O (I).

În mod normal, organismul produce anticorpi împotriva acelor antigene (A sau B) care nu se află pe eritrocite - acestea sunt aglutinine din plasma sanguină. Adică, la persoanele cu a doua grupă sanguină - A (II) - antigenii A sunt prezenți pe eritrocite, iar anticorpii împotriva antigenelor B vor fi conținuți în plasmă - sunt desemnați ca anti-B (beta-aglutinină). Deoarece aceiași antigeni (aglutinogeni) de pe suprafața eritrocitelor și aglutininelor din plasmă (A și alfa, B și beta) reacționează între ei și duc la „lipirea” eritrocitelor, acestea nu pot fi conținute în sângele unei singure persoane.

Descoperirea sistemului de grup ABO a făcut posibilă înțelegerea de ce transfuziile de sânge au avut uneori succes și alteori au provocat complicații severe. A fost formulat conceptul de compatibilitate a grupelor de sânge. De exemplu, dacă o persoană cu un al doilea grup sanguin - A (II), care conține anticorpi împotriva antigenului B, este transfuzată cu un al treilea grup sanguin - B (III), va apărea o reacție între antigeni și anticorpi, ceea ce va duce la aderența și distrugerea globulelor roșii și poate avea consecințe grave până la moarte. Prin urmare, grupele de sânge în timpul transfuziei trebuie să fie compatibile.

Grupa sanguină este determinată de prezența sau absența aderenței eritrocitelor folosind seruri care conțin antigeni și anticorpi standard.

La centrele de transfuzie, pungile de sânge sau componentele de sânge de la donatori sunt etichetate „O (I)”, „A (II)”, „B (III)” sau „AB (IV)” pentru a vă ajuta să găsiți rapid sângele din grupul potrivit când este nevoie.

Pentru ce se folosește cercetarea?

Pentru a afla care sânge poate fi administrat în siguranță unui pacient. Este imperativ să vă asigurați că sângele donat este compatibil cu sângele destinatarului - persoana căreia îi va fi transfuzat. Dacă sângele donatorului sau componentele sale conțin anticorpi împotriva antigenelor conținute pe eritrocitele primitorului, atunci se poate dezvolta o reacție de transfuzie severă, cauzată de distrugerea eritrocitelor din patul vascular.

Când este programat studiul?

• Înainte de transfuzia de sânge - atât pentru cei care au nevoie de ea, cât și pentru donatori.

Transfuzia de sânge și a componentelor sale este cel mai adesea necesară în următoarele situații:

• • anemie severă
  • sângerări care apar în timpul sau după operație
  • leziuni grave
  • pierderi masive de sânge de orice origine,
  • boli oncologice și efecte secundare chimioterapie,
  • tulburări de coagulare a sângelui, în special hemofilia.
• Înainte de operație.

DISPOZIȚII GENERALE

Sistemul de grupare sanguină ABO este format din două grupuri de aglutinogeni - A și B și două aglutinine corespunzătoare din plasmă - alfa (anti-A) și beta (anti-B). Diverse combinații ale acestor antigeni și anticorpi formează patru grupe sanguine: grupa 0 (1) - ambii antigeni sunt absenți; grupa A (II) - numai antigenul A este prezent pe eritrocite; grupa B (III) - numai antigenul B este prezent pe eritrocite; grupa AB (IV) - antigenele A și B sunt prezente pe eritrocite.

Unicitatea sistemului ABO constă în faptul că în plasma persoanelor neimunizate există anticorpi naturali la antigenul absenți pe eritrocite: la persoanele din grupa 0 (1) - anticorpi împotriva A și B; la persoanele din grupa A (II) - anticorpi anti-B; la persoanele din grupa B (III) - anticorpi anti-A; indivizii din grupa AB (IV) nu au anticorpi împotriva antigenelor sistemului ABO.

În textul următor, anticorpii anti-A și anti-B vor fi denumiți anti-A și anti-B.

Determinarea grupei sanguine ABO se efectuează prin identificare antigene specificeși anticorpi (reacție dublă sau încrucișată). Anti-A și anti-B sunt detectate în serul sanguin folosind eritrocitele standard A (II) și B (III). Prezența sau absența antigenelor A și B pe eritrocite se stabilește folosind anticorpi monoclonali sau policlonali (seruri standard de hemaglutinare) de specificitate adecvată.

Determinarea grupei de sânge se efectuează de două ori: cercetare primară - în secția medicală (brigada de preparare a sângelui); cercetări confirmatorii - în secția de laborator. Algoritmul pentru efectuarea studiilor de laborator imunohematologice în timpul transfuziei de sânge este prezentat în Fig. 18.1.

Rezultatul determinării grupei sanguine este înregistrat în colțul din dreapta sus al foii de față a istoricului medical sau în jurnalul (cardului) donatorului cu data și semnat de medicul care a făcut determinarea.

În nord-vestul Rusiei, distribuția grupelor de sânge ale sistemului ABO în populație este următoarea: grupa 0 (I) - 35%; grupa A (II) - 35-40%; grupa B (III) - 15-20%; grupa AB (IV) - 5-10%.

Trebuie remarcat faptul că există diferite tipuri (variante slabe) atât de antigen A (într-o măsură mai mare) cât și de antigen B. Cele mai frecvente tipuri de antigen A - A 1 și A 2. Prevalența antigenului A 1 la indivizii din grupele A (II) și AB (IV) este de 80%, iar antigenul A 2 - aproximativ 20%. Probele de sânge cu A 2 pot conține anticorpi anti-A 1 care interacționează cu eritrocitele grupului A (II) standard. Prezența anti-A1 este detectată prin determinarea încrucișată a grupelor de sânge și prin efectuarea unui test pentru compatibilitatea individuală.

Pentru determinarea diferențiată a variantelor de antigen A (A 1 și A 2), este necesar să se utilizeze reactivi specifici (fitohemaglutinine sau anticorpi monoclonali anti-A 1. Pacienții din grupele A 2 (II) și A 2 B (IV) trebuie să să fie transfuzat cu hemocomponenți care conțin eritrocite, respectiv, din grupele A 2 (II) și A 2 B (IV). Se pot recomanda și transfuzii de eritrocite spălate: 0 (I) - pentru pacienții cu grupa sanguină A2 (II); 0 (I) și B (III) - pentru pacienții cu grupa sanguină A 2 B (II).

Tabelul 18.4. Rezultatele determinării grupului sanguin ABO
Rezultatele cercetării						Apartenența la grup a sângelui testat
eritrocite cu reactiv			ser (plasmă) cu eritrocite standard
anti-AB	anti-A	anti-B	0 (I)	A (II)	B (III)
-	-	-	-	+	+	0 (I)
+	+	-	-	-	+	A (II)
+	-	+	-	+	-	B (III)
+	+	+	-	-	-	AB (IV)
Denumiri: + - prezența aglutinării, - - absența aglutinării

Determinarea grupei sanguine conform sistemului ABO

Grupurile sanguine sunt determinate de seruri standard (reacție simplă) și eritrocite standard (reacție dublă sau încrucișată).

Grupa de sânge printr-o reacție simplă este determinată în mod necesar de două serii de seruri standard izohemaglutinate.

• Progresul determinării [spectacol] .

  Determinarea grupei sanguine se efectuează în condiții de iluminare bună și la temperaturi de la + 15 la + 25 ° C pe tablete. În partea stângă a tabletei scrieți 0 (1), în mijloc - A (II), în partea dreaptă - B (III). În mijlocul marginii superioare a tabletei, se notează numele donatorului sau numărul de sânge testat. Utilizați seruri standard active din trei grupuri (O, A, B) cu un titru de cel puțin 1:32, două serii. Serurile sunt plasate în rafturi speciale în două rânduri. Fiecare ser corespunde unei pipete etichetate. Serul grupului AB (IV) este utilizat pentru control suplimentar.

  Una - două picături de ser standard se aplică pe placă în două rânduri: ser din grupa 0 (1) - în stânga, ser din grupa A (II) - în mijloc, ser din grupa B (III) - pe dreapta.

  Picături de sânge dintr-un vârf de deget sau dintr-o eprubetă se aplică cu o pipetă sau o tijă de sticlă lângă fiecare picătură de ser și amestecate cu o tijă. Cantitatea de sânge trebuie să fie de 8-10 ori mai mică decât cea a serului. După amestecare, placa sau tableta se agită ușor cu mâna pentru a facilita aglutinarea celulelor roșii din sânge mai rapidă și mai precisă. Pe măsură ce începe aglutinarea, dar nu mai devreme de 3 minute mai târziu, se adaugă o picătură de soluție de clorură de sodiu 0,9% la picăturile de ser cu eritrocite, unde a avut loc aglutinarea, și observarea este continuată până la scurgerea 5 minute. După 5 minute, citiți reacția în lumină transmisă.

  Dacă aglutinarea este indistinctă, se adaugă o picătură de soluție de clorură de sodiu 0,9% la amestecul de ser și sânge, după care se ajunge la o concluzie cu privire la apartenența la grup (Tabelul 18.4).

• Rezultatele reacției [spectacol] .
  1. Absența aglutinării în toate cele trei picături indică faptul că nu există aglutinogen în sângele studiat, adică sângele aparține grupului 0 (I).
  2. Debutul aglutinării în picături cu serul 0 (I) și B (III) indică faptul că există aglutinogen A în sânge, adică sângele aparține grupului A (II).
  3. Prezența aglutinării în picături cu seruri din grupele 0 (I) și A (II) indică faptul că sângele testat conține aglutinogen B, adică sânge din grupa B (III).
  4. Aglutinarea în toate cele trei picături indică prezența aglutinogenilor A și B în sângele studiat, adică sângele aparține grupului AB (IV). Cu toate acestea, în acest caz, dat fiind că aglutinarea cu toate serurile este posibilă datorită unei reacții nespecifice, este necesar să se aplice două sau trei picături de ser standard din grupa AB (IV) pe o placă sau placă și să se adauge 1 picătură de test sânge pentru ei. Serul și sângele sunt amestecate și rezultatul reacției este observat timp de 5 minute.

     Dacă nu are loc aglutinarea, sângele studiat este trimis la grupa AB (IV). Dacă apare aglutinarea cu serul grupului AB (IV), atunci reacția este nespecifică. În caz de slabă aglutinare și în toate cazurile îndoielnice, sângele este re-verificat cu seruri standard din alte serii.

Determinarea dublei reacții a grupei sanguine ABO
(conform serurilor standard și eritrocitelor standard)

Eritrocitele standard sunt 10-20% suspensie de eritrocite native proaspete (sau celule de testare spălate din conservant) din grupele 0 (I), A (II) și B (III) în soluție de clorură de sodiu 0,9% sau soluție salină de citrat. Eritrocitele standard native pot fi utilizate în decurs de 2-3 zile, cu condiția să fie depozitate în soluție salină izotonică la + 4 ° C. Eritrocitele standard conservate sunt depozitate la + 4 ° C timp de 2 luni și spălate din soluția de conservare înainte de utilizare.

Fiolele sau flacoanele cu seruri standard și eritrocite standard sunt plasate în rafturi speciale cu etichetare adecvată. Pentru a lucra cu reactivi de tipare, se utilizează pipete curate uscate, separate pentru fiecare reactiv. Pentru spălarea tijelor și a pipetelor din sticlă (plastic), pregătiți paharele cu soluție de clorură de sodiu 0,9%.

Pentru a determina grupul, luați 3-5 ml de sânge într-o eprubetă fără stabilizator. Sângele trebuie să se stabilească timp de 1,5-2 ore la o temperatură de + 15-25 ° C.

• Progresul determinării [spectacol] .

  Două picături (0,1 ml) de seruri standard din grupele 0 (I), A (II), B (III) din două serii se aplică pe placă. Conform fiecărui grup de seruri, se plasează o picătură mică (0,01 ml) de eritrocite standard din grupele 0 (I), A (II), B (III). O picătură de sânge testat se adaugă la serul standard și două picături de ser testat se adaugă la eritrocitele standard. Cantitatea de sânge trebuie să fie de 8-10 ori mai mică decât cea a serului. Picăturile sunt amestecate cu o tijă de sticlă și, prin agitarea tabletei în mâini timp de 5 minute, se monitorizează debutul aglutinării. Dacă aglutinarea este indistinctă, o picătură de soluție de clorură de sodiu 0,9% (0,1 ml) se adaugă suplimentar la amestecul de ser și sânge, după care se ajunge la o concluzie cu privire la apartenența grupului (Tabelul 18.4).

• Evaluarea rezultatelor determinării grupei sanguine a sistemului ABO [spectacol] .
  1. Prezența aglutinării cu eritrocite standard A și B și absența aglutinării în trei seruri standard din două serii indică faptul că serul de testare conține atât aglutinine, alfa cât și beta, iar eritrocitele de testare nu conțin aglutinogeni, adică sângele la grupul 0 (I) ...
  2. Prezența aglutinării cu seruri standard din grupele 0 (I), B (III) și cu eritrocite standard din grupa B (III) indică faptul că eritrocitele studiate conțin aglutinogen A, iar serul de testare conține aglutinină beta. Prin urmare, sângele aparține grupului A (II).
  3. Prezența aglutinării cu seruri standard din grupele 0 (I), A (II) și cu eritrocite standard din grupa A (II) indică faptul că eritrocitele de testare conțin aglutinogen B, iar serul de testare conține aglutinină alfa. Prin urmare, sângele aparține grupului B (III).
  4. Prezența aglutinării cu toate serurile standard și absența aglutinării cu toate eritrocitele standard indică faptul că ambele aglutinine sunt prezente în eritrocitele studiate, adică sângele aparține grupului AB (IV).

Determinarea afilierii grupului sanguin
folosind tsoliclone anti-A și anti-B

Tsoliklones anti-A și anti-B (anticorpi monoclonali împotriva antigenelor A și B) sunt concepute pentru a determina grupa sanguină a sistemului ABO uman în locul serurilor standard izohemaglutinante. Pentru fiecare determinare a grupelor de sânge, utilizați un lot de reactivi anti-A și anti-B.

• Progresul determinării [spectacol] .

  O picătură mare de tsoliclone anti-A și anti-B (0,1 ml) se aplică pe placă (placă) sub inscripțiile corespunzătoare: „Anti-A” sau „Anti-B”. Așezați lângă o picătură mică de sânge testat (raportul reactivului sanguin - 1:10), apoi reactivul și sângele sunt amestecate și progresul reacției este monitorizat prin agitarea ușoară a tabletei sau a plăcii.

  Aglutinarea cu tsoliclone anti-A și anti-B are loc de obicei în primele 5-10 secunde. Observarea trebuie efectuată timp de 2,5 minute, datorită posibilității unei apariții ulterioare a aglutinării cu eritrocite care conțin tipuri slabe de antigeni A sau B.

• Evaluarea rezultatelor reacției de aglutinare cu tsoliclone anti-A și anti-B este prezentată în tabel. 18.4, care include și rezultatele determinării aglutininelor în serul donatorilor folosind eritrocite standard.

Dacă se suspectează aglutinare spontană la persoanele cu grupa sanguină AB (IV), se efectuează un studiu de control cu ​​soluție de clorură de sodiu 0,9%. Reacția ar trebui să fie negativă.

Ciclonii anti-A (roz) și anti-B (albastru) sunt produși atât în ​​formă nativă, cât și sub formă liofilizată în fiole de 20, 50, 100 și 200 doze cu un solvent atașat la fiecare fiolă, respectiv 2, 5, 10, 20 ml .

Un control suplimentar al corectitudinii determinării grupelor sanguine ABO cu reactivi anti-A și anti-B este reactivul monoclonal anti-AB („Hematolog”, Moscova). Este recomandabil să utilizați reactivul anti-AB în paralel atât cu serurile policlonale imune, cât și cu reactivii monoclonali. Ca urmare a reacției cu reactivul anti-AB, se dezvoltă aglutinarea eritrocitelor din grupele A (II), B (III) și AB (IV); eritrocitele din grupa 0 (I) nu au aglutinare.

EROARE DETERMINARE ACCESORII GRUP

Erorile la determinarea grupelor sanguine pot depinde de trei motive:

1. tehnic;
2. inferioritatea serurilor standard și a eritrocitelor standard;
3. caracteristicile biologice ale sângelui analizat.

Erorile din motive tehnice includ:

• a) dispunerea incorectă a serului pe farfurie;
• b) raporturi cantitative incorecte ale serurilor și eritrocitelor;
• c) utilizarea comprimatelor insuficient curate și a altor articole care intră în contact cu sângele. Trebuie să existe o pipetă separată pentru fiecare ser; numai soluția de clorură de sodiu 0,9% trebuie utilizată pentru clătirea pipetelor;
• d) înregistrarea incorectă a sângelui testat;
• e) nerespectarea timpului stabilit pentru reacția de aglutinare; cu grabă, când reacția este luată în considerare înainte de expirarea a 5 minute, este posibil ca aglutinarea să nu aibă loc în cazul în care în sângele testat sunt aglutinogeni slabi; dacă reacția este supraexpusă mai mult de 5 minute, picăturile se pot usca de pe margini, simulând aglutinarea, ceea ce va duce și la o concluzie eronată;
• f) absența aglutinării datorită temperaturii ambiante ridicate (peste 25 ° C). Pentru a evita această eroare, se recomandă utilizarea zerului special pregătit pentru lucrul în climă caldă; pentru a determina grupele de sânge pe o placă sau o tavă de plastic, a cărei suprafață exterioară a fundului este scufundată în apă rece.
• g) centrifugare necorespunzătoare: centrifugarea insuficientă poate duce la un rezultat fals negativ, iar centrifugarea excesivă poate duce la un fals pozitiv.

Erori datorate utilizării serurilor standard defectuoase și a eritrocitelor standard:

• a) serurile standard slabe cu un titru mai mic de 1:32 sau cu termen de valabilitate expirat pot provoca aglutinare tardivă și slabă;
• b) utilizarea serurilor standard sau a eritrocitelor inutilizabile, care au fost preparate nesterile și insuficient conservate, conduce la apariția aglutinării "bacteriene" nespecifice.

Erori în funcție de caracteristicile biologice ale sângelui analizat:

Erori în funcție de caracteristicile biologice ale eritrocitelor studiate:

• a) aglutinarea tardivă și slabă se explică prin forme „slabe” de antigene, eritrocite, mai des - prin prezența aglutinogenului slab A 2 în grupele A și AB. În același timp, în cazul determinării grupei sanguine fără a examina serul pentru prezența aglutininelor (reacție simplă), pot apărea erori, ca urmare a cărora sângele grupului A 2 B este definit ca grupul B (III ) și sângele A2 - ca grupa 0 (I). Prin urmare, pentru a evita erorile, determinarea grupei sanguine atât a donatorilor, cât și a primitorilor trebuie efectuată utilizând eritrocite standard (reacție dublă sau încrucișată). Pentru identificarea aglutinogenului A2, se recomandă repetarea studiului cu alte tipuri (loturi) de reactivi, folosind diferite sticlărie de laborator, cu o creștere a timpului de înregistrare a reacției.

  Reactivi specifici pentru clarificarea grupei sanguine în prezența variantelor slabe ale antigenului A (A1, A2, A3) prin metoda reacției de aglutinare directă sunt anti-A sl tsoliclon și anti-A reactiv).

• b) „panaglutinare” sau „autoaglutinare”, adică capacitatea sângelui de a da aceeași aglutinare nespecifică cu toate serurile și chiar cu ale sale. Intensitatea unei astfel de reacții slăbește după 5 minute, în timp ce adevărata aglutinare crește. Se găsește cel mai adesea la pacienții hematologici, oncologici, la pacienții arși etc. Pentru control, se recomandă evaluarea dacă aglutinarea eritrocitelor testate are loc în serul standard al grupei AB (IV) și ser fiziologic.

  Grupa sanguină cu „panaglutinare” poate fi determinată după spălarea eritrocitelor de trei ori. Pentru a elimina aglutinarea nespecifică, placa este plasată într-un termostat la temperatura de + 37 ° C timp de 5 minute, după care aglutinarea nespecifică dispare, dar cea adevărată rămâne. Se recomandă repetarea determinării folosind anticorpi monoclonali, stabilind testul Coombs.

  În cazul în care spălarea eritrocitelor nu dă rezultatul dorit, este necesar să recoltați o probă de sânge într-o eprubetă preîncălzită, așezați proba într-un recipient termic pentru a menține o temperatură de + 37 ° C și livrați la laborator pentru cercetare. Determinarea grupei de sânge trebuie efectuată la o temperatură de + 37 ° C, pentru care se utilizează reactivi preîncălziți, soluție salină și o tabletă.

• c) eritrocitele sângelui testat sunt pliate în „coloane de monede”, care pot fi confundate cu aglutinate în timpul macroscopiei. Adăugarea a 1-2 picături de soluție izotonică de clorură de sodiu, urmată de o balansare ușoară a plăcii, va distruge de obicei „bare de monede”.
• d) aglutinare mixtă sau incompletă: unele dintre eritrocite se aglutinează, iar altele rămân libere. Se observă la pacienții din grupele A (II), B (III) și AB (IV) după transplantul de măduvă osoasă sau în primele trei luni după transfuzia de sânge din grupa 0 (I). Eterogenitatea eritrocitelor periferice este verificată în mod clar în testul gel DiaMed.

Erori în funcție de caracteristicile biologice ale serului studiat:

• a) detectarea anticorpilor cu o specificitate diferită în timpul testării de rutină este rezultatul sensibilizării anterioare. Se recomandă determinarea specificității anticorpilor și selectarea eritrocitelor tipizate fără antigenul la care a fost detectată imunizarea. Un destinatar imunizat trebuie să selecteze individual un sânge donator compatibil;
• b) la detectarea formării „coloanelor de monede” a eritrocitelor standard în prezența serului testat, este recomandabil să confirmați rezultatul anormal folosind eritrocite standard din grupa 0 (I). Pentru a diferenția „bare de monede” și aglutinate adevărate, adăugați 1-2 picături de soluție izotonică de clorură de sodiu și agitați placa, în timp ce „bare de monede” sunt distruse;
• c) absența anticorpilor anti-A - sau anti-B. Eventual la nou-născuți și pacienți cu suprimarea imunității umorale;
total pagini: 10

LITERATURĂ [spectacol] .

1. Selecția imunologică a donatorului și a beneficiarului pentru transfuzii de sânge, componentele acestuia și transplanturi de măduvă osoasă / Comp. Shabalin V.N., Serova L.D., Bushmarina T.D. și alții - Leningrad, 1979. - 29 p.
2. Kaleko S.P., Serebryanaya N.B., Ignatovich G.P. și colab. Alosensibilizarea în terapia hemocomponentă și optimizarea selecției perechilor donator-receptor histocompatibile în armată spitale/ Metodic. recomandări.- Sankt Petersburg, 1994.- 16 p.
3. Transfuziologie practică / Ed. Kozinets G.I., Biryukova L.S., Gorbunova N.A. și colab. - Moscova: Triada-T, 1996. - 435 p.
4. Manual de transfuziologie militară / Ed. E. A. Nechaev. - Moscova, 1991 .-- 280 p.
5. Ghid pentru medicina transfuzională / Ed. E. P. Svedentsova. - Kirov, 1999.- 716s.
6. Rumyantsev A.G., Agranenko V.A. Transfuziologie clinică.- M.: GEOTAR MEDICINE, 1997.- 575 p.
7. Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Safe Blood Transfusion: A Guide for Physici- SPb.: Peter, 2000.- 320 p.
8. Shevchenko Yu.L., Zhiburt E.B., Serebryanaya N.B. Siguranța imunologică și infecțioasă a terapiei hemocomponente.- SPb.: Nauka, 1998.- 232 p.
9. Schiffman F.J. Fiziopatologia sângelui / Per. din engleză - M. - SPb.: Editura BINOM - dialect Nevsky, 2000. - 448 p.
10. Transfuzia de sânge în medicina clinică / Ed. P. L. Mollison, C. P. Engelfriet, M. Contreras. Oxford 1988 1233 p.

O sursă: Diagnostic de laborator medical, programe și algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Petersburg, Intermedica, 2001