Diagnosticul infecției cu HIV. Antigenul P24 ceea ce este analiza p24
Relevanța identificării Persoanele infectate cu HIV în stadiile incipiente ale infecției se datorează necesității unui studiu epidemiologic mai eficient, organizarea în timp util a necesarului măsuri preventive printre persoanele de contact, de asemenea posibilă aplicare terapie antiretrovirală cu ciclu scurt pentru a reduce sarcina virală pentru a îmbunătăți prognosticul. Informarea la timp a pacientului cu privire la infecție ajută la reducerea riscului de transmitere a bolii și la posibila sa participare la donație.
Diagnosticul infecției cu HIV înainte de apariția unui rezultat pozitiv al blotului imun (IB) este confirmat de detectarea antigenului p24 și / sau a acidului nucleic HIV în serul sanguin al pacientului.
Determinarea antigenului p24 utilizând testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este o modalitate simplă și economică de a demonstra prezența unei proteine \u200b\u200bvirale în sângele unui pacient datorită replicării virale intensive în primele săptămâni după infecție. Testul antigenului p24 este disponibil laboratoarelor cu capacități ELISA de rutină. Comparativ cu determinarea încărcăturii virale prin metoda reacției în lanț a polimerazei, este mai puțin costisitoare și laborioasă. În ciuda faptului că strategia de depistare a infecției în perioada seronegativă este cunoscută, acest test nu a fost încă inclus în algoritmul de diagnosticare a HIV. Se știe că cel mai mare procent de detectare a p24 se observă în seruri cu rezultate discutabile ale IB. Cu toate acestea, s-a demonstrat că sistemele de testare cu un prag analitic standard de sensibilitate (10 pg / ml) au o sensibilitate diagnostică insuficientă și o valoare predictivă a p24 detectat pentru includerea în procesul de diagnostic de rutină. În acest sens, dezvoltarea și implementarea unui sistem de testare pentru antigenul p24 cu sensibilitate analitică crescută este de mare interes.
Scopul acestei lucrări este de a evalua semnificația prognostică a detectării antigenului HIV p24 utilizând sisteme de testare cu diferite praguri de sensibilitate analitică la persoanele cu rezultate discutabile ale IB.
Într-un studiu retrospectiv al serurilor cu un rezultat nedefinit pentru anticorpii împotriva HIV în IB, utilizarea unui sistem de testare a antigenului p24 cu un prag de sensibilitate analitică de 0,5 pg / ml a relevat 50% dintre pacienții infectați și utilizarea unui sistem de testare care detectează 8 pg / ml - 22,9%. Utilizarea unui set suplimentar de reactivi pentru distrugerea complexului imunitar face posibilă creșterea detectării antigenului p24 până la 55,3%. Valoarea predictivă a prezenței infecției HIV cu teste suplimentare pentru antigenul p24 a fost de 91,7-96%. Introducerea unui test suplimentar pentru antigenul HIV p24 cu o sensibilitate analitică de 0,5 pg / ml în algoritmul de diagnostic HIV permite confirmarea diagnosticului HIV pentru stadiu timpuriu boli în cel puțin 13% din cazuri la persoanele cu un rezultat incert al IB. (A se vedea articolul: Neshumaev D.A. și colab. "Valoarea predictivă a detectării antigenului HIV p24 folosind sisteme de testare cu sensibilitate analitică crescută").
"Diagnostic clinic de laborator", 2009, nr.2, p. 40 - 42.
Diagnosticul clinic și de laborator al infecției cu HIV are trei direcții:
- Stabilirea faptului infecției cu HIV, diagnosticarea infecției cu HIV.
- Definirea etapei curs clinic boli și identificarea bolilor secundare.
- Predicția progresiei evoluției clinice a bolii, monitorizarea de laborator a eficacității tratamentului și efectele secundare ale medicamentelor antiretrovirale.
1. Stabilirea infecției cu HIV, diagnosticarea infecției cu HIV
Pentru a determina infecția cu HIV, se utilizează următorii indicatori specifici: anticorpi împotriva HIV, antigene HIV, ARN HIV și ADN provirus. Anticorpii împotriva HIV sunt determinați prin test imunosorbent legat de enzime (ELISA) sau imunoblotare, care este în esență un tip de ELISA. Antigenele (proteinele) HIV sunt determinate de ELISA. Cu ajutorul metodelor genetice moleculare de reacție în lanț a polimerazei (PCR) și ADNb, se pot determina ARN-ul HIV și ADN-ul de virus. Utilizarea unei metode suplimentare de hibridizare a acizilor nucleici cu sonde ADN specifice face posibilă verificarea specificității secvențelor ADN obținute în timpul PCR. Sensibilitatea PCR este detectarea genelor virale la una din cinci mii de celule.
În infecția primară, se observă următoarele dinamici ale markerilor HIV în sângele persoanelor infectate. În prima lună, ca urmare a activării procesului replicativ, are loc o creștere bruscă a încărcăturii virale (conținutul de ARN HIV în plasmă), apoi, datorită diseminării virusului și infecției masive a celulelor țintă din sânge și ganglioni limfatici, devine posibilă determinarea ADN-ului proviral. Faptul de a detecta ADN-ul de virus integrat în genomul celulei țintă este de o valoare diagnostic extrem de importantă.
Sarcina virală reflectă intensitatea procesului replicativ în celulele infectate. În perioada infecției primare, nivelul încărcăturii virale este diferit atunci când este infectat cu diferite subtipuri de HIV, dar dinamica modificărilor sale este aproximativ aceeași. Deci, atunci când este infectat cu subtipul B, de exemplu, dacă în prima lună după infecție încărcătura virală este de 700 de copii / ml, atunci în a doua lună există o scădere la 600, în a 3-a - 100, în a 4-a - la 50 copii / ml. O astfel de dinamică este observată pe fondul creșterii conținutului de anticorpi specifici împotriva HIV în sânge. Conținutul de ADN proviral din celulele mononucleare din sânge infectate cu HIV este caracterizat de o constanță relativă în primele 6 luni, cu fluctuații ușoare în unele subtipuri. Astfel, sarcinile de ARN și ADN nu sunt identice.
În etapa de incubație, de ceva timp, nu există formarea de anticorpi specifici împotriva HIV într-o cantitate suficientă pentru a determina metode de laborator... Înainte de înregistrarea anticorpilor, apariția în sânge a proteinei Nef, care reprimă procesul de replicare, și proteina structurală p24, sunt observate pentru un timp foarte scurt. Antigenul p24 poate fi detectat în sânge prin metoda testului imunosorbent legat de enzime încă din 1-2 ped după infecție și poate fi determinat până la a 8-a săptămână, apoi conținutul său scade brusc. Mai mult, în cursul infecției cu HIV, există o a doua creștere a conținutului de proteine \u200b\u200bp24 din sânge. Cade asupra formării SIDA. Dispariția proteinelor de bază libere (nelegate de anticorpi) p24 din sânge și apariția anticorpilor specifici împotriva proteinelor HIV marchează debutul seroconversiei (Fig. 9.6).
Viremia și antigenemia determină formarea de anticorpi IgM specifici (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Anticorpii liberi din clasele IgM și IgG împotriva proteinei p24 pot apărea începând cu a doua săptămână, conținutul lor crește în 2-4 săptămâni, atingând un anumit nivel, la care persistă luni (IgM) și ani (IgG) (Fig. 9.7).
Apariția seroconversiei complete, atunci când un nivel ridicat de anticorpi IgG specifici la proteinele structurale ale HIV p24, gp41, gp120, gp160 este înregistrat în sângele periferic, facilitează foarte mult diagnosticul infecției cu HIV. Anticorpii împotriva HIV apar la 90-95% dintre cei infectați în decurs de 3 luni de la infecție, la 5-9% - în perioada de la 3 la 6 luni de la momentul infecției și la 0,5-1% - la o dată ulterioară.
În ciuda faptului că anticorpii împotriva HIV apar ultimii, principalul indicator de diagnostic de laborator până în prezent este detectarea anticorpilor specifici prin ELISA și imunoblotare.
Date prezentate în tabelul 9.2 [spectacol] și 9.3 [spectacol] , demonstrează în mod clar sensibilitatea ridicată a sistemelor moderne de testare a imunosorbenților legate de enzime la determinarea anticorpilor împotriva HIV, care este superioară sensibilității imunoblotării. În unele cazuri, la primirea unui rezultat primar pozitiv în ELISA, acesta poate fi confirmat în imunoblotare numai după 2-3 săptămâni.
| Tabelul 9.3. Un exemplu de monitorizare a seroconversiei (conform lui N. Fleury, 2000) | |||||
| Momentul determinării | Antigen P24, pg / ml | Anticorpi împotriva proteinelor HIV | |||
| ELISA, OP arr / OP cr ** | Imunoblotarea | ||||
| HIV DUO | Gen-screen | Uniformă | |||
| Pacientul 1 | |||||
| În primul rând | 17 | 1,24 | mai puțin de 1 | mai puțin de 1 | * |
| După 4 zile | 67 | 1,36 | 1,85 | mai puțin de 1 | - |
| În 7 zile | * | 2,33 | 6,84 | mai puțin de 1 | - |
| După 2 zile | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| Pacientul 2 | |||||
| În primul rând | 400 | 13 | mai puțin de 1 | mai puțin de 1 | - |
| În 5 zile | 450 | 18 | 2,11 | mai puțin de 1 | - |
| După 10 zile | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| Notă: * - nedeterminat ** - raportul dintre densitatea optică a probei de ser studiate și valoarea critică (prag) a densității optice |
|||||
La examinarea pacienților infectați cu HIV (infectați cu HIV) utilizând sisteme de testare imunoblotare de la companii de top din lume, anticorpii la gp160 și p24 / 25 sunt detectați în toate cazurile, anticorpii la alte proteine \u200b\u200bsunt detectați în 38,8-93,3% din cazuri (Tabelul 2). 9.4 [spectacol] ).
Dificultăți în detectarea anticorpilor la pacienții cu infecție cu HIV pot apărea în perioadele de viremie masivă și antigenemie, când anticorpii specifici disponibili în sânge sunt asociați cu particule virale, iar procesul de replicare depășește producția de noi anticorpi antivirali. Această situație poate apărea și dispărea în timpul procesului infecțios.
La pacienții cu un sistem imunitar slăbit inițial, viremia și antigenemia apar mai devreme și persistă nivel inalt înainte de rezultatul bolii. La astfel de pacienți, se observă un conținut scăzut de anticorpi liberi împotriva HIV, din două motive - producția insuficientă de anticorpi de către limfocitele B și legarea anticorpilor de către virioni și proteinele HIV solubile, prin urmare, pentru a determina infecția, testați sistemele sensibilitate crescută sau modificări ale metodelor de testare care implică etapa de eliberare a anticorpilor din complexele imune.
Cel mai adesea, o scădere a conținutului de anticorpi împotriva HIV din motivele indicate are loc în stadiul terminal, când anticorpii împotriva HIV din ser nu pot fi capturați nici prin testul imunosorbent legat de enzime, nici prin metoda imunoblotării (Western blot). Pe lângă apariția anticorpilor specifici împotriva HIV, răspunsul imun în primele 4 luni se caracterizează printr-o scădere a conținutului de celule CD4 + infectate din sânge și o creștere a celulelor CD8 +. Mai mult, conținutul celulelor care poartă receptorii CD4 și CD8 se stabilizează și rămâne neschimbat pentru o perioadă de timp. Creșterea conținutului de limfocite CD8 este o reacție de protecție, deoarece citotoxicitatea dependentă de celule este realizată de limfocitele CD8 +, care vizează distrugerea celulelor infectate cu HPV. Inițial, limfocitele citotoxice (CTL) reacționează la proteina reglatoare Nef a virusului, care joacă un rol important în reducerea încărcăturii virale (ARN) în plasma unei persoane infectate cu HIV în primele luni. Apoi se formează un răspuns de la CTL către alții, incl. proteine \u200b\u200bstructurale, HIV, ca urmare a cărora, la 12 luni de la infecție, efectul citotoxic crește semnificativ.
Scheme diagnostice de laborator Infecția cu HIV
Luând în considerare dinamica de mai sus a markerilor specifici ai infecției cu HIV în practică, este recomandabil să respectați următoarele scheme de diagnostic de laborator la adulți (Fig. 9.8-9.10).
Diagramele reflectă cele trei etape principale ale diagnosticului primar de laborator al infecției cu HIV:
- Screening.
- Referinţă.
- Expert.
Necesitatea mai multor etape ale diagnosticului de laborator se datorează în primul rând considerentelor economice. De exemplu, costul efectuării unui studiu expert cu ajutorul sistemelor de testare interne folosind metoda imunoblotării este de până la 40 USD, screening (folosind metoda ELISA) - aproximativ 0,2, adică raportul este 1: 200.
În prima etapă (Fig. 9.8), subiecții sunt testați pentru anticorpi împotriva HIV folosind un test imunosorbent legat de enzime, conceput pentru a detecta anticorpi împotriva ambelor tipuri de virus - HIV-1 și HIV-2.
Lizatul viral, proteinele recombinante și peptidele sintetice sunt utilizate de producători în sistemele de testare propuse ca bază antigenică. Fiecare dintre purtătorii enumerați ai determinanților antigenici HIV are propriile sale avantaje și dezavantaje. Prin urmare, atunci când alegeți kituri de testare de aproximativ costuri egale, ar trebui preferate kiturile cu cea mai mare sensibilitate (de preferință 100%). Printre sistemele de testare cu același cost și sensibilitate, este recomandabil să ne oprim asupra celor cu specificitate maximă.
Pe baza lizatului virusului, au fost create primele sisteme de testare pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV. În anii 1980, astfel de sisteme de testare au fost caracterizate printr-o sensibilitate mai mică de 100% și o specificitate scăzută, manifestată printr-un număr mare (până la 60%) de rezultate fals pozitive.
În timpul formării unui virion într-o cultură de limfocite, membrana sa este creată din membrana exterioară și, prin urmare, conține antigeni ai principalului complex de histocompatibilitate din clasele I și II. Această circumstanță provoacă reacții fals pozitive dacă anticorpi împotriva aloantigenelor de histocompatibilitate sunt prezenți în sângele pacienților.
Ulterior, pentru a obține un virus, s-a propus utilizarea unei culturi de macrofage, în care particulele virale se formează în principal intracelular prin înmugurire nu din membrana exterioară a celulei, ci din membranele reticulului endoplasmatic. Această tehnologie a redus numărul falsurilor pozitive.
Una dintre cele mai bune din punct de vedere al celor mai importante caracteristici - sensibilitate și specificitate - sunt testele recunoscute de imunosorbenți enzimatici, care utilizează o combinație de lizat viral purificat cu peptide sintetice, care sunt porțiunile cele mai semnificative din punct de vedere antigenic ale proteinelor virusului sau ale proteinelor recombinante.
Sensibilitatea sistemului de testare depinde și de caracteristicile celorlalte componente ale truselor. Astfel, sistemele de testare în care se utilizează conjugate care recunosc anticorpi nu numai din clasa IgG, ci și IgM și IgA, fac posibilă detectarea unei faze anterioare de seroconversie. Utilizarea sistemelor de testare pare promițătoare, cu ajutorul căreia este posibil să se determine simultan atât anticorpii antivirali, cât și antigenul p24, ceea ce face diagnosticarea de laborator a infecției cu HIV și mai devreme.
Rezultatul pozitiv primar trebuie verificat din nou prin reexaminarea probei în același sistem de testare, dar de preferință într-un lot diferit și de către un asistent de laborator diferit. Dacă se obține un rezultat negativ în timpul celui de-al doilea studiu, studiul se efectuează a treia oară.
După confirmarea unui rezultat pozitiv, se recomandă extragerea din nou a sângelui și testarea anticorpilor împotriva HIV ca primar. Eșantionarea repetată a sângelui ajută la prevenirea erorilor cauzate de etichetarea inexactă a tuburilor și completarea formularelor de trimitere.
Serul seric pozitiv în etapa de screening este trimis pentru studii de referință efectuate utilizând două sau trei sisteme de test ELISA foarte specifice. În cazul a două rezultate pozitive, se efectuează un studiu de specialitate folosind metoda imunoblotării.
Utilizarea testelor imunosorbente legate de enzime în diagnosticul de referință, care pot fi utilizate pentru diferențierea anticorpilor specifici împotriva HIV-1 și HIV-2, facilitează lucrările ulterioare și vă permite să studiați un eșantion pozitiv în stadiul de expert imediat folosind imunoblotarea adecvată (HIV-1 sau HIV-2) ...
O opinie a experților de laborator cu privire la infecția cu HIV se face numai pe baza unui rezultat Western blot pozitiv. La efectuarea diagnosticelor de specialitate, este necesar să se utilizeze nomenclatura genelor HIV și a produselor genetice propuse în 1990 de un grup de experți OMS (Tabelul 9.5 [spectacol] ).
Specificitatea benzilor de pe imunoblot trebuie evaluată foarte atent și cu atenție, utilizând rezultatele studiilor serurilor de control (pozitive și negative), care sunt efectuate în paralel cu studiul probelor experimentale, și o probă a imunoblotului cu desemnarea proteinelor HIV (atașată de producător la sistemul de testare). Interpretarea rezultatelor obținute trebuie efectuată în conformitate cu instrucțiunile atașate sistemului de testare. De regulă, criteriul pozitivității este prezența obligatorie a anticorpilor la două proteine \u200b\u200b(precursor, exterior sau transmembranar) codificate de gena env și posibila prezență a anticorpilor la produsele altor două gene structurale ale HIV - gag și pol (Tabelul 9.6 [spectacol] ).
| Tabelul 9.6. Criterii de interpretare pentru rezultatele imunoblotării pentru HIV-1 și HIV-2 (OMS, 1990) | |||
| Rezultat | HIV-1 | HIV-2 | |
| Pozitiv | +/- dungi pol +/- dungi gag | 2 benzi env (precursor, gp exterior sau gp transmembranar) +/- dungi pol +/- dungi gag |
|
| Negativ | Lipsa benzilor specifice HIV-1 | Lipsa benzilor specifice HIV-2 | |
| Incert | Alte profiluri care nu sunt văzute ca fiind pozitive sau negative | ||
În cazul obținerii unui rezultat îndoielnic, este necesară utilizarea listei de recomandări pentru clarificarea finală a rezultatelor imunoblotării (Tabelul 9.7 [spectacol] ).
| Tabelul 9.7. Recomandări pentru clarificarea definitivă a rezultatelor incerte ale imunoblotului (OMS, 1990) | |
| Prezența benzilor corespunzătoare proteinelor HIV | Interpretarea rezultatului, acțiuni ulterioare |
| HIV-1 | |
| Doar p17 | |
| Numai pentru P24 și gp160 | Acest model neobișnuit poate apărea la debutul seroconversiei. Repetați imediat proba. Dacă se obține același profil, este necesar să se ia oa doua probă pentru testare în imunoblotare la 2 săptămâni după prelevarea primei probe. |
| Alte profiluri | Aceste profiluri (gag și / sau pol fără env) pot indica seroconversie sau reacții nespecifice |
| HIV-2 | |
| Doar p16 | Poate fi clasificat ca negativ, nu sunt necesare definiții suplimentare |
| Am bandă cu sau fără gag / pol | Aceeași probă trebuie retestată folosind un lot diferit de reactivi. |
| Numai P24 sau gp140 | Acest profil neobișnuit poate apărea la debutul seroconversiei. Repetați imediat proba. Dacă se obține același profil, la 2 săptămâni după prelevarea primei probe, trebuie prelevată oa doua probă pentru testarea imunoblotării |
| Alte profiluri | Aceste profiluri (gag și / sau pol fără env) pot indica seroconversie sau reacții nespecifice. |
Conform recomandărilor Centrului științific și metodologic rus pentru prevenirea și controlul SIDA, se ia în considerare un rezultat pozitiv dacă există anticorpi la cel puțin una dintre proteinele gp41, gp120, gp160 în combinație cu anticorpi împotriva altor proteine \u200b\u200bspecifice HIV-1 sau fără acestea. Aceste recomandări sunt făcute pe baza experienței cu serurile copiilor din focare nosocomiale, în care anticorpii au fost adesea determinați doar la una dintre proteinele din învelișul virusului.
Majoritatea pacienților care au fost examinați inițial seropozitiv în ELISA aparțin fazei limfadenopatiei generalizate persistente (PGL) sau fazei asimptomatice. Prin urmare, pe un imunoblot (o bandă de nitroceluloză pe care sunt imobilizate proteinele HIV), de regulă, se determină următoarea combinație de anticorpi împotriva HIV-1: anticorpi împotriva proteinelor de acoperire env gp160, gp120 și gp41, codificate de gena env, în combinație cu anticorpi pentru proteinele de bază p24 (proteină nucleocapsidă, codificată de gena gag) și p31 / 34 (endonuclează codificată de gena pol).
Reacțiile pozitive cu numai proteine \u200b\u200bgag și / sau po pot apărea în faza incipientă a seroconversiei și indică, de asemenea, o infecție cu HIV-2 sau o reacție nespecifică.
În cazul obținerii unui rezultat dubios, este posibil să se utilizeze diverse tehnici metodologice pentru a clarifica faptul infecției cu HIV.
În funcție de capacitățile tehnice (disponibilitatea kiturilor și reactivilor de diagnosticare, echipamentelor cu echipamente speciale și pregătirea personalului), laboratorul expert efectuează studii de diagnosticare suplimentare (Figura 9.10).
În unele cazuri, se recomandă utilizarea metodelor genetice moleculare pentru determinarea secvențelor genetice ale HIV în ser, limfocite din sânge sau puncții ale ganglionilor limfatici. Verificarea specificității secvențelor de ADN obținute ca rezultat al PCR poate fi efectuată prin metoda de hibridizare a acizilor nucleici cu sonde ADN specifice.
Metodele de radioimunoprecipitare (RIP) și imunofluorescența indirectă (IFL) pot fi de asemenea utilizate pentru verificarea finală a serurilor cu rezultate discutabile în imunoblotare.
Detectarea ARN-ului HIV în plasma sanguină printr-o metodă calitativă sau cantitativă nu este semnificativă pentru diagnosticul infecției cu HIV. Un astfel de rezultat trebuie confirmat metode standard, cum ar fi imunoblotarea, la 2-4 luni după primirea răspunsului primar discutabil sau negativ.
Izolarea HIV în cultura celulară este adevărul suprem. Cu toate acestea, metoda este complicată, costisitoare și se realizează numai în laboratoare de cercetare special echipate.
Conținutul de celule CD4 + din sânge este un indicator nespecific, totuși în cazuri discutabile (ELISA "+", imunoblot "-", prezența semne clinice HIV / SIDA) poate fi folosit ca ghid pentru luarea deciziilor de către experți. Dacă în laborator este posibil să se efectueze doar imunoblotarea, atunci ar trebui să respectați recomandările prezentate în tabel. 9.7 și Fig. 9.9.
Persoanele a căror examinare serică de către experți a dat rezultate dubioase (incerte), cu excepția cazurilor de detectare a anticorpilor numai la p17 (HIV-1) sau p16 (HIV-2), trebuie retestate în termen de 6 luni (după 3 luni). În cazul adevăratei infecții cu HIV, după 3-6 luni, se observă o tendință „pozitivă” în spectrul anticorpilor - formarea suplimentară de anticorpi împotriva altor proteine \u200b\u200bale virusului. O reacție falsă este caracterizată de persistența unui model dubios de blot imunitar pentru o lungă perioadă de timp sau de dispariția benzilor suspecte. Dacă după perioada specificată rezultatele imunoblotării repetate sunt negative sau rămân îndoielnice, atunci în absența factorilor de risc, simptome clinice sau alți factori asociați cu infecția cu HIV, o persoană poate fi considerată seronegativă pentru anticorpi împotriva HIV-1 și HIV-2.
Rezultate fals pozitive datorită conținutului în sânge al pacienților de anticorpi împotriva aloantigenelor histocompatibilității, care fac parte din învelișul HIV, apar pe imunoblot sub formă de benzi la nivelurile gp41 și gp31. Motivele pentru alte reacții nespecifice (de exemplu, la p24, care se găsește adesea la indivizii cu procese autoimune) nu au fost încă clarificate.
Îmbunătățirea tehnologiei pentru producerea de teste imunosorbente legate de enzime a făcut posibilă atingerea unei sensibilități ridicate - până la 99,99%, în timp ce sensibilitatea metodei imunoblotante este de 97%. Prin urmare, un rezultat negativ în imunoblotarea cu rezultate pozitive în ELISA poate indica perioada inițială de seroconversie, caracterizată printr-un nivel scăzut de anticorpi specifici. Prin urmare, este necesar să se repete studiul după 1,5-2 luni, adică perioada de timp necesară pentru finalizarea seroconversiei, pentru atingerea concentrației de anticorpi specifici din sânge, suficientă pentru detectarea prin imunoblotare.
Un rezultat pozitiv (rezultate) al unui studiu la etapa de referință sau doar de screening al diagnosticului de laborator al infecției cu HIV, adică un rezultat pozitiv în orice imunoanaliza enzimatică, ca rezultat, nu este confirmat de metode expert, este interpretat ca prezența anticorpilor cu reacție încrucișată în sângele celor examinați. Reacția încrucișată se referă la legarea situsurilor nespecifice de către anticorpi pe proteinele sau peptidele HIV utilizate ca bază antigenică în sistemul de testare în care se obține un rezultat pozitiv.
În absența imunodeficienței și a semnelor clinice ale infecției cu HIV, astfel de persoane sunt considerate seronegative pentru anticorpii HIV și ar trebui eliminate din registru.
Diagnosticul final al infecției cu HIV se stabilește numai pe baza tuturor datelor clinice, epidemiologice și de laborator. Numai medicul curant are dreptul să informeze pacientul cu privire la diagnosticul infecției cu HIV.
Principala metodă de diagnostic confirmator (expert) de laborator a infecției cu HIV este imunoblotarea. Cu toate acestea, având în vedere sensibilitatea sa mai mică în comparație cu ELISA, un număr de cercetători au sugerat utilizarea unei combinații a mai multor sisteme de testare pentru determinarea finală a prezenței anticorpilor specifici împotriva HIV. De exemplu, G. van der Groen și colab. a propus o alternativă la metoda imunoblotării pentru verificarea rezultatelor pozitive ale etapei de screening a diagnosticului de laborator al infecției cu HIV. Acesta implică studiul materialului în paralel în trei sisteme de testare, care se bazează pe diferite metode de detectare a anticorpilor specifici împotriva HIV (mai multe variante ELISA, test de aglutinare) utilizând antigeni de natură diferită. Autorii au reușit să găsească astfel de combinații de sisteme de testare, a căror utilizare oferă 100% sensibilitate și specificitate în comparație cu rezultatele obținute în imunoblotare.
Costul ieftin al acestei metode de diagnostic expert este un avantaj incontestabil, cu toate acestea, lipsa informațiilor despre proteinele specifice ale virusului care au anticorpi în sângele pacientului nu permite evaluarea specificității reacției în fiecare caz individual, precum și urmărirea modificărilor spectrului anticorpilor într-un stadiu incipient de seroconversie.
Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți de mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Din momentul nașterii pentru o lungă perioadă de timp (până la 15 luni), anticorpii materni împotriva HIV pot circula în sângele acestor copii. Doar imunoglobulinele din clasa IgG pătrund în bariera placentară, prin urmare, detectarea nmmupoglobulinelor specifice HPV din clasele IgM și IgA la un copil permite confirmarea infecției, dar un rezultat negativ nu poate indica absența HIV.
Copiii sub 1 lună nu au încă replicare HPV, iar singura metodă de verificare este PCR. Determinarea antigenului p24 la copii cu vârsta peste 1 lună este, de asemenea, o metodă de confirmare.
Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a pătruns în bariera placentară. În orice caz, copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării și observării diagnostice de laborator în termen de 36 de luni de la naștere.
rezultate cercetări de laborator pentru markerii infecției cu HIV necesită o interpretare atentă și ar trebui să fie luată în considerare numai împreună cu datele din epidemiologic și examene clinice... Pe de altă parte, trebuie remarcat faptul că, în ciuda sensibilității ridicate a metodelor moderne, rezultatele negative ale cercetării nu pot exclude complet prezența infecției cu HIV. Prin urmare, un rezultat negativ al testului, de exemplu, prin imunoblotare, poate fi formulat doar ca absența anticorpilor specifici împotriva HIV-1 și HIV-2.
Diagnosticul infecției cu HIV la pacienții seronegativi
Calitatea sistemelor de testare utilizate în diagnosticul de laborator al infecției cu HIV se îmbunătățește în fiecare an, sensibilitatea acestora crește. Cu toate acestea, variabilitatea ridicată a HIV poate duce la apariția de noi tipuri, anticorpi la care s-ar putea să nu fie recunoscuți de sistemele de testare existente. În plus, există cazuri de răspuns umoral atipic al sistemului imunitar al gazdei la virus. Astfel, L. Montagnier a raportat în 1996 doi pacienți cu SIDA la care nu s-au detectat anticorpi specifici în sângele lor în ultimii câțiva ani; diagnosticul a fost făcut pe baza datelor clinice și a fost confirmat de laborator doar prin izolarea HPV-1 în cultura celulară. În astfel de cazuri, este necesar să se utilizeze recomandările OMS, conform cărora diagnostice clinice Infecția cu HIV la adulți și copii este posibilă dacă este prezentă una dintre cele 12 boli care indică SIDA:
- candidoză a esofagului, traheei, bronhiilor, plămânilor;
- criptococoză extrapulmonară;
- criptosporidioză cu diaree mai mult de o lună;
- leziuni ale citomegalovirusului asupra oricărui organ (cu excepția ficatului, a splinei și a ficatului, precum și a acestuia noduli limfatici la un pacient mai mare de 1 lună):
- o infecție cauzată de virusul herpes simplex care persistă mai mult de 1 lună la un pacient cu vârsta mai mare de 1 lună;
- limfomul creierului la un pacient mai mic de 60 de ani;
- pneumonie interstițială limfocitară la un copil sub 13 ani;
- infecție diseminată cauzată de bacterii din grupul Micobacterium avium intracellulare sau M. Kansassii;
- pneumocystis pneumonie;
- leucoencefalopatie multifocală progresivă;
- toxoplasmoza centrală sistemele nervoasela pacienții cu vârsta mai mare de 1 lună.
Prezența uneia dintre aceste boli face posibilă diagnosticarea infecției cu HIV în absența posibilității de a efectua un test de sânge de laborator pentru prezența anticorpilor la HIV sau chiar dacă se obține un rezultat seronegativ.
O sursă: Diagnostic de laborator medical, programe și algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Petersburg, Intermedica, 2001
În prezent, noile tehnologii de diagnostic permit identificarea cauzelor etiologice și patogenetice ale multor boli și afectează radical rezultatele tratamentului. Poate că cele mai impresionante rezultate ale introducerii acestor tehnologii în practica clinică au fost obținute în domeniul imunologiei și diagnosticului. boli infecțioase.
Sistemele de testare bazate pe imunoanaliza enzimatică și analiza imunochiluminiscenței permit detectarea anticorpilor din diferite clase, ceea ce crește semnificativ conținutul informațional al metodelor de sensibilitate clinică, analitică și specificitate pentru diagnosticul bolilor infecțioase. Trebuie remarcat faptul că cele mai semnificative progrese în diagnosticul infecțiilor sunt asociate cu introducerea metodei de reacție în lanț a polimerazei în practica de laborator, care este considerată „standardul de aur” în diagnosticul și evaluarea eficacității tratamentului unui număr de boli infecțioase.
Diverse materiale biologice pot fi utilizate pentru cercetare: ser, plasmă, răzuire, biopsie, lichid pleural sau cefalorahidian (LCR). În primul rând, metodele de diagnostic de laborator a infecțiilor vizează identificarea unor boli precum hepatita virala B, C, D, infecție cu citomegalovirus, infecții cu transmitere sexuală (gonoree, clamidie, micoplasme, ureaplasme), tuberculoză, infecție cu HIV etc.
Infecția cu HIV este o boală cauzată de virusul imunodeficienței umane (HIV), perioadă lungă de timp persistând în limfocite, macrofage, celule ale țesutului nervos, în urma cărora se dezvoltă o afectare lentă progresivă a sistemului imunitar și nervos al corpului, manifestată prin infecții secundare, tumori, encefalită subacută și alte modificări patologice.
Agenții cauzali ai infecției - virusuri de imunodeficiență umană de tipul 1 și 2 (HIV-1, HIV-2) - aparțin familiei retrovirusurilor, subfamilia virusurilor lente. Virionii sunt particule sferice cu diametrul de 100-140 nm. Particula virală are un înveliș fosfolipid exterior care conține glicoproteine \u200b\u200b(proteine \u200b\u200bstructurale) cu o anumită greutate moleculară măsurată în kilodaltoni. În HIV-1, acestea sunt gpl60, gpl20, gp41. Învelișul interior al virusului care acoperă nucleul este reprezentat și de proteine \u200b\u200bcu o greutate moleculară cunoscută - p17, p24, p55 (HIV-2 conține gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).
Genomul HIV include ARN și enzima transcriptază inversă (revers transcriptază). Pentru ca genomul retrovirusului să se conecteze cu genomul celulei gazdă, ADN-ul este sintetizat mai întâi pe șablonul de ARN viral folosind transcriptaza inversă. Apoi ADN-ul provirusului este introdus în genomul celulei gazdă. HIV are o variabilitate antigenică pronunțată, care este mult mai mare decât cea a virusului gripal.
În corpul uman, principala țintă a HIV este limfocitele T, care transportă cel mai mare număr de receptori CD4 la suprafață. După ce HIV pătrunde în celulă cu ajutorul revertazei, urmând modelul ARN-ului său, virusul sintetizează ADN-ul, care este încorporat în aparatul genetic al celulei gazdă (limfocite CD4) și rămâne acolo pe viață într-o stare de virus. Pe lângă limfocitele T-helper, sunt afectate macrofagele, limfocitele B, celulele neuroglia, mucoasa intestinală și alte celule. Motivul scăderii numărului de limfocite T (celule CD4) nu este doar efectul citopatic direct al virusului, ci și fuziunea acestora cu celule neinfectate. Împreună cu înfrângerea limfocitelor T la pacienții cu infecție HIV, există o activare policlonală a limfocitelor B cu o creștere a sintezei imunoglobulinelor din toate clasele, în special IgG și IgA, și epuizarea ulterioară a acestei părți a sistemului imunitar. Reglarea afectată a proceselor imune se manifestă, de asemenea, printr-o creștere a nivelului de α-interferon, β2-microglobulină și o scădere a nivelului de IL-2. Ca urmare a disfuncției sistemului imunitar, mai ales atunci când numărul de limfocite T (CD4) scade la 400 de celule în 1 μl de sânge sau mai puțin, apar condiții pentru replicarea necontrolată a HIV, cu o creștere semnificativă a numărului de virioni în diferite medii ale corpului. Ca urmare a înfrângerii multor părți ale sistemului imunitar, o persoană infectată cu HIV devine lipsită de apărare împotriva agenților patogeni ai diferitelor infecții.
Pe fondul creșterii imunosupresiei, se dezvoltă boli progresive severe care nu apar la o persoană cu un sistem imunitar care funcționează normal. Acestea sunt boli pe care Organizația Mondială a Sănătății (OMS) le-a definit ca markere SIDA sau boli indicator SIDA.
Boli indicator SIDA
Primul grup - boli inerente numai în imunodeficiența severă (CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.
Al doilea grup - boli care se pot dezvolta atât pe fondul imunodeficienței severe, cât și în unele cazuri fără aceasta.
Prin urmare, în aceste cazuri, este necesară confirmarea de laborator a diagnosticului.
Primul grup:
- candidoză a esofagului, traheei, bronhiilor;
- criptococoză extrapulmonară;
- criptosporidioză cu diaree mai mult de 1 lună;
- leziuni de citomegalovirus ale diferitelor organe, altele decât ficatul, splina sau ganglionii limfatici la un pacient cu vârsta peste 1 lună;
- o infecție cauzată de virusul herpes simplex, manifestată prin ulcere pe piele și mucoasă, care persistă mai mult de 1 lună, precum și bronșită, pneumonie sau esofagită de orice durată, care afectează un pacient cu vârsta peste 1 lună;
- sarcomul Kaposi generalizat la pacienții cu vârsta sub 60 de ani;
- limfomul creierului (primar) la pacienții cu vârsta sub 60 de ani;
- pneumonie interstițială limfocitară și / sau displazie limfoidă pulmonară la copii cu vârsta sub 12 ani;
- infecție diseminată cauzată de micobacterii atipice (complex micobacterium M. aviumintracellulare) cu localizare extrapulmonară sau localizare (pe lângă plămâni) în piele, ganglioni limfatici cervicali, ganglioni limfatici ai rădăcinilor plămânilor;
- pneumocystis pneumonie;
- leucoencefalopatie multifocală progresivă;
- toxoplasmoza creierului la pacienții cu vârsta peste 1 lună.
Al doilea grup:
- infecții bacteriene, combinate sau recurente, la copii cu vârsta sub 13 ani (mai mult de două cazuri în 2 ani de observație): sepsis, pneumonie, meningită, leziuni ale oaselor sau articulațiilor, abcese cauzate de tije hemofile, streptococi;
- coccidioidomicoză diseminată (localizare extrapulmonară);
- Encefalopatie HIV (demență HIV, demență SIDA);
- histoplasmoza cu diaree persistând mai mult de 1 lună;
- izosporoză cu diaree persistentă mai mult de 1 lună;
- sarcomul lui Kaposi la orice vârstă;
- limfomul creierului (primar) la persoane de orice vârstă;
- alte limfoame cu celule B (cu excepția bolii Hodgkin) sau limfoame cu imunofenotip necunoscut: limfoame cu celule mici (cum ar fi limfomul Burkitt etc.); sarcoame imunoblastice (limfoame imunoblastice, cu celule mari, histiocitice difuze, nediferențiate difuze);
- micobacterioză diseminată (nu tuberculoză) cu leziuni pe lângă plămânii pielii, ganglionii limfatici cervicali sau ilari;
- tuberculoză extrapulmonară (cu afectarea organelor interne, pe lângă plămâni);
- salmonella septicemie, recurentă;
- Distrofia HIV (epuizare, scădere dramatică în greutate).
Tabelul 1 (vezi linkul sursă de mai sus) enumeră bolile care definesc SIDA și agenții etiologici ai acestora.
Există multe clasificări ale SIDA.
Conform noii clasificări propuse de Centrele SUA pentru Controlul Bolilor (Tabelul 2 - vezi linkul către sursa de mai sus), diagnosticul SIDA este stabilit la persoanele cu un număr de celule CD4 mai mic de 200 / μL, chiar și în absența bolilor indicator SIDA.
Categoria B include diverse sindroame, dintre care cele mai importante sunt angiomatoza bacilară, candidoză orofaringiană, candidoză vulvovaginală recurentă, dificil de tratat, displazie cervicală, carcinom cervical, purpură trombocitopenică idiopatică, listerioză, neuropatie periferică.
Anticorpi împotriva HIV-1 și HIV-2 în sânge
Anticorpii împotriva HIV-1 și HIV-2 sunt absenți în mod normal în serul sanguin.
Determinarea anticorpilor împotriva HIV este principala metodă de diagnostic de laborator a infecției cu HIV. Metoda se bazează pe testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) - sensibilitatea este mai mare de 99,5%, specificitatea este mai mare de 99,8%. Anticorpii împotriva HIV apar la 90-95% dintre cei infectați în decurs de o lună de la infecție, la 5-9% - după 6 luni, la 0,5-1% - la o dată ulterioară. În stadiul SIDA, numărul anticorpilor poate scădea până când dispar complet.
Rezultatul cercetării este exprimat calitativ: pozitiv sau negativ.
Un rezultat negativ al testului indică absența anticorpilor împotriva HIV-1 și HIV-2 în serul sanguin. Laboratorul emite un rezultat negativ imediat după pregătirea sa. La primirea unui rezultat pozitiv - detectarea anticorpilor împotriva HIV - pentru a evita rezultatele fals pozitive în laborator, analiza se repetă de încă 2 ori.
Imunoblotarea anticorpilor împotriva proteinelor virale HIV din serul sanguin
Anticorpii împotriva proteinelor virale HIV sunt absenți în mod normal în serul sanguin.
Metoda ELISA pentru determinarea anticorpilor împotriva HIV este o metodă de screening. Când se obține un rezultat pozitiv, pentru a confirma specificitatea acestuia, se folosește metoda imunoblotării - Western-blot - contra precipitațiilor într-un gel de anticorpi din serul sanguin al pacientului cu diverse proteine \u200b\u200bvirale, separate prin greutate moleculară folosind electroforeză și aplicate nitrocelulozei. Sunt determinați anticorpii la proteinele virale gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 etc.
Conform recomandărilor Centrului rus pentru prevenirea și controlul SIDA, detectarea anticorpilor împotriva uneia dintre glicoproteinele gp41, gpl20, gpl60 ar trebui considerată un rezultat pozitiv. Dacă sunt detectați anticorpi împotriva altor proteine \u200b\u200bale virusului, rezultatul este considerat îndoielnic, un astfel de pacient ar trebui examinat de două ori - după 3 și 6 luni.
Absența anticorpilor împotriva proteinelor specifice HIV înseamnă că imunoanaliza enzimatică a dat un rezultat fals pozitiv. În același timp, în lucrările practice, atunci când se evaluează rezultatele metodei Western blot, este necesar să se ghideze după instrucțiunile furnizate de companie la „Kitul pentru Western blot”.
Metoda imunoblotării este utilizată pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV.
Antigen P24 în ser
Antigenul p24 este absent în serul sanguin.
Antigenul p24 este o proteină a peretelui nucleotidic al HIV. Stadiul manifestărilor primare după infecția cu HIV este o consecință a debutului procesului replicativ. Antigenul p24 apare în sânge la 2 săptămâni după infecție și poate fi detectat de ELISA în perioada de la 2 la 8 săptămâni. După 2 luni de la momentul infecției, antigenul p24 dispare din sânge. Mai târziu, în cursul clinic al infecției cu HIV, se constată o a doua creștere a conținutului de proteine \u200b\u200bp24 din sânge. Cade asupra formării SIDA. Sistemele de testare ELISA existente pentru detectarea antigenului p24 sunt utilizate pentru depistarea precoce a HIV la donatorii de sânge și copii, pentru determinarea prognosticului evoluției SIDA și pentru monitorizarea terapiei la pacienții cu SIDA. ELISA are o sensibilitate analitică ridicată, care permite detectarea antigenului HIV-1 p24 în ser la o concentrație de 5-10 pkg / ml și HIV-2 - mai mică de 0,5 ng / ml și specificitate. Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că nivelul antigenului p24 din sânge este supus variațiilor individuale, ceea ce înseamnă că doar 20-30% dintre pacienți pot fi detectați folosind acest studiu în perioada timpurie după infecție (Rose N.R. și colab., 1997).
Anticorpii împotriva antigenului p24 din clasele IgM și IgG apar în sânge începând cu a 2-a săptămână, ating un vârf în decurs de 2-4 săptămâni și rămân la acest nivel de diferite ori: anticorpi IgM - timp de câteva luni, dispărând în decurs de un an de la infecție, și anticorpii IgG pot dura ani de zile.
Algoritmul pentru diagnosticarea infecției cu HIV depinde de faza bolii și se caracterizează printr-o modificare a dinamicii anticorpilor de detecție din diferite clase (Fig. 1, 2 - vezi linkul către sursa de mai sus).
Rezultatul cercetării este exprimat calitativ - pozitiv sau negativ. Un rezultat negativ al testului indică absența anticorpilor împotriva HIV-1 și HIV-2 și antigen p24 în serul sanguin.
Laboratorul emite un rezultat negativ imediat după pregătirea sa. La primirea unui rezultat pozitiv - detectarea anticorpilor împotriva HIV-1 și HIV-2 și / sau antigenului p24 - pentru a evita rezultatele fals pozitive în laborator, analiza se repetă de încă 2 ori.
Indiferent de rezultatele testelor obținute, proba de sânge a pacientului și rezultatele a 3 teste sunt trimise de laborator la centrul regional SIDA pentru a confirma un rezultat pozitiv sau pentru a verifica un rezultat nedefinit. În astfel de cazuri, centrul regional SIDA va oferi răspunsul final pentru acest sondaj.
Detectarea HIV prin reacția în lanț a polimerazei (calitativă)
Detectarea HIV prin reacția în lanț a polimerazei - PCR (calitativ) se efectuează în scopul:
- rezolvarea rezultatelor discutabile ale studiilor de imunoblotare;
- pentru diagnosticarea precoce a infecției cu HIV;
- monitorizarea eficacității tratamentului antiviral;
- determinarea stadiului bolii SIDA (trecerea infecției la boală).
În cazul infecției primare cu HIV, metoda PCR permite detectarea ARN-ului HIV în sânge deja la 10-14 zile de la infecție.
Rezultatul cercetării este exprimat calitativ: pozitiv sau negativ. Un rezultat negativ al testului indică absența ARN-ului HIV în sânge.
Un rezultat pozitiv - detectarea ARN-ului HIV - indică faptul că pacientul este infectat.
Detectarea HIV prin reacția în lanț a polimerazei (cantitativă)
HIV este în mod normal absent în sânge.
Cuantificarea directă a ARN-ului HIV utilizând PCR permite o predicție mai precisă a ratei de dezvoltare a SIDA la persoanele infectate cu HIV decât determinarea numărului de celule CD4 și, prin urmare, o evaluare mai precisă a supraviețuirii acestora. Numărul ridicat de particule virale se corelează de obicei cu starea imunitară afectată severă și cu numărul scăzut de celule CD4. Numărul scăzut de particule virale se corelează în general cu o stare imunitară mai bună și cu un număr mai mare de celule CD4. Conținutul de ARN viral din sânge permite prezicerea tranziției bolii la stadiul clinic. Când conținutul de ARN-1 HIV este\u003e 74.100 copii / ml, aproape toți pacienții se dezvoltă tabloul clinic SIDA (Senior D., Holden E., 1996).
Persoanele cu HIV-1 din sânge\u003e 10.000 de exemplare / ml au 10,8 ori mai multe șanse de a dezvolta SIDA decât cele cu HIV-1 din sânge<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.
O indicație pentru tratamentul pacienților cu HIV a fost elaborată de un grup de experți din SUA. Tratamentul este indicat pacienților cu număr de celule CD4 din sânge<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20.000 de exemplare / ml (PCR). Evaluarea rezultatelor terapiei antiretrovirale la persoanele infectate cu HIV se efectuează prin reducerea nivelului seric al ARN-ului HIV.
Cu un tratament eficient, nivelul de viremie ar trebui să scadă de 10 ori în primele 8 săptămâni și să fie sub limita de detectare a metodei (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.
Astfel, până în prezent, multe metode de cercetare au fost introduse și utilizate în practica clinică pentru diagnosticarea infecției cu HIV, ca și pentru toate celelalte infecții virale. Dintre acestea, rolul principal este acordat cercetării serologice. Principalele metode pentru diagnosticarea infecțiilor cu HIV sunt prezentate în Tabelul 3 (vezi linkul către sursa de mai sus), unde sunt împărțite în funcție de importanța fiecărei metode de detectare a virușilor în patru niveluri:
- A - testul este de obicei folosit pentru confirmarea diagnosticului;
- B - testul este util în anumite circumstanțe pentru diagnosticarea anumitor forme de infecție;
- C - testul este rar utilizat în scop diagnostic, dar are o mare importanță pentru anchetele epidemiologice;
- D - testul nu este de obicei utilizat de laboratoare în scopuri de diagnostic.
Deoarece pentru diagnosticarea infecțiilor virale, pe lângă alegerea metodei optime de analiză, este la fel de important să identificați corect și să luați un biomaterial pentru cercetare, Tabelul 4 (a se vedea linkul către sursa de mai sus) oferă recomandări pentru alegerea biomaterialului optim pentru cercetarea infecției cu HIV.
Pentru a monitoriza infectarea cu HIV, ar trebui să se utilizeze capacitățile unui studiu cuprinzător al stării imune - determinarea cantitativă și funcțională a tuturor legăturilor sale: imunitatea umorală, celulară și rezistența nespecifică în general.
În condițiile moderne de laborator, principiul pe mai multe etape al evaluării stării imunologice include determinarea unei subpopulații de limfocite, imunoglobuline din sânge. La evaluarea indicatorilor, trebuie avut în vedere faptul că infecția cu HIV se caracterizează printr-o scădere a raportului dintre celulele T CD4 / CD8 mai mică de 1. Indicele CD4 / CD8 1,5-2,5 indică o stare normală, mai mult de 2,5 indică hiperactivitate, mai puțin 1.0 - indică imunodeficiența. De asemenea, raportul CD4 / CD8 poate fi mai mic de 1 în inflamația severă.
Acest raport este de o importanță fundamentală atunci când se evaluează sistemul imunitar la pacienții cu SIDA, deoarece HIV infectează și distruge selectiv limfocitele CD4, drept urmare raportul CD4 / CD8 scade la valori semnificativ mai mici de 1.
Evaluarea stării imunologice se bazează și pe identificarea defectelor generale sau „grave” în sistemul imunității celulare și umorale: hipergammaglobulinemie (concentrație crescută de IgA, IgM, IgG) sau hipogammaglobulinemie în stadiul terminal; o creștere a concentrației de complexe imune circulante; scăderea producției de citokine; slăbirea răspunsului limfocitelor la antigeni și mitogeni.
Încălcarea raportului dintre populații în totalul limfocitelor B este caracteristică imunității umorale insuficiente. Cu toate acestea, aceste modificări nu sunt specifice infecției cu HIV și pot apărea și în alte boli. Într-o evaluare cuprinzătoare a altor parametri de laborator, trebuie avut în vedere faptul că infecția cu HIV se caracterizează și prin: anemie, limfă și leucopenie, trombocitopenie, o creștere a nivelului de β2-microglobulină și proteină C-reactivă, o creștere a activității transaminazelor din serul sanguin.
în magazinul online: 10% reducere!
în laborator:
510freca
Expres
1 020frecacostul este indicat fără a lua în considerare costul prelevării de probe de material biologic
Adauga in cosul de cumparaturiAnticorpi împotriva HIV - un test de screening pentru diagnosticul infecției cu HIV.
Pregătirea rezultatelor analizei
Regulat *: predat înainte de 12:00 (11.00 în Podolsk) - 1 zi lucrătoare, predat după 12:00 (11.00 în Podolsk) - 2 zile lucrătoare
Timpul de pregătire pentru analiză în modul expres (Cito)
| Timpul de livrare | Disponibilitate | |
|---|---|---|
| Zilele saptamanii | Weekend-uri | |
| Clinică la Laboratorul CIR din Dubrovka | ||
| 08:00-12:00 | - | 1 zi |
| 12:00-20:30 | - | |
| Maryino, Novokuznetskaya, Voikovskaya | ||
| 08:00-12:00 | 09:00-12:00 | 1 zi |
| 12:00-20:30 | 12:00-17:00 | A doua zi, livrat la 8:00 |
| Butovo | ||
| 08:00-12:00 | 09:00-12:00 | 1 zi |
| Podolsk | ||
| 08:00-11:00 | 09:00-10:00 | 1 zi |
Valoarea analizelor
O analiză a anticorpilor împotriva HIV (virusul imunodeficienței umane, HIV, virusul imunodeficienței umane) detectează anticorpi din sânge care se formează în organism ca răspuns la infecția cu virusul.
HIV - Virusul imunodeficienței umane - un microorganism care provoacă SIDA (SIDA (sindromul imunodeficienței dobândite)).
Modalități de transmitere a virusului imunodeficienței umane
- sexual - în timpul contactului sexual neprotejat cu un partener infectat cu HIV. Riscul de infecție este cel mai mare în cazul actului sexual, cel mai mic în cazul actului sexual.
- contactul cu sânge infectat - atunci când utilizați ace, instrumente nesterile, când transfuzați sânge donat.
- cale de transmisie verticală- de la o mamă infectată cu HIV la un făt în timpul sarcinii, nașterii, alăptării.
Indicații pentru examinare
- Spitalizarea planificată
- Pregătirea pentru operație
- Planificarea sarcinii și sarcina (incluse în standardul de examinare)
- Sex casual neprotejat, schimbări frecvente ale partenerului sexual
- Prezența factorilor de risc pentru infecție (de exemplu, profesioniștii din domeniul sănătății)
- Plângeri: ganglioni limfatici umflați în mai multe zone, transpirații nocturne, febră prelungită (temperatură), scădere în greutate, diaree prelungită,
- Identificarea următoarelor boli sau combinații ale acestora: tuberculoză, candidoză, toxoplasmoză, recidive frecvente ale infecției cu herpesvirus, pneumonie cauzată de micoplasme, legionella, pneumocystis pneumonie, sarcom de Kaposi.
Când trebuie testat anticorpii HIV
- Spitalizarea planificată, pregătirea pentru operație: verificați la spital.
- Planificarea unei sarcini: în programul de pregătire a sarcinii.
- Sarcina: de cel puțin trei ori în timpul sarcinii, conform calendarului obstetric.
- Dacă există factori de risc pentru infecție - cel puțin o dată pe an.
- Infecție prezumtivă: timpul mediu pentru apariția anticorpilor în sânge este de 2 săptămâni de la momentul infecției, maximul este de 6 luni. De obicei, testele se fac după 1, 3 și 6 luni.
- În prezența plângerilor și detectarea bolilor enumerate mai sus: imediat.
Cum să fii testat în laboratoarele CIR?
Pentru a economisi timp, plasați o comandă pentru analiză în Magazin online! Plătind comanda dvs. online, veți obține o reducere 10% pentru întreaga comandă plasată!
Materiale conexe
Când rezultatele sunt necesare rapid, veniți la orice clinică CIR. Obțineți rezultatele testelor seara.
Screeningul prenatal nu este doar o evaluare a riscului de apariție a malformațiilor fetale, ci și o evaluare a riscurilor de complicații ale sarcinii - în cel mai scurt timp posibil!
Atenţie!În cazul reacțiilor pozitive și discutabile, termenul de emitere a rezultatului poate fi mărit până la 10 zile lucrătoare.
Anticorpi împotriva HIV 1, 2 tipuri, antigen p 24 - studiul anticorpilor specifici care au apărut în organism ca răspuns la infecția cu virusul imunodeficienței umane (HIV) 1, 2 tipuri și antigen p 24 al virusului imunodeficienței umane.
HIV(virusul imunodeficienței umane) - un virus din familia retrovirusului (virus cu replicare lentă), care infectează celulele sistemului imunitar uman (CD4, T-helpers) și provoacă sindromul imunodeficienței dobândite.
Perioada de incubație este de obicei de 3-6 săptămâni. În cazuri rare, anticorpii împotriva HIV încep să fie detectați doar la câteva luni sau mai mult după infecție. Nivelul concentrației lor poate scădea în mod vizibil în perioada terminală a bolii. În cazuri rare, anticorpii împotriva infecției cu HIV pot dispărea pentru o lungă perioadă de timp.
Antigen p 24 HIV 1,2 tipul detectat în serul sanguin indică un stadiu incipient al bolii. În primele câteva săptămâni după infecție, cantitatea de virus și antigen p24 din sânge crește rapid. De îndată ce anticorpii împotriva HIV 1, 2 încep să fie produși, nivelul de antigen p24 începe să scadă.
Determinarea antigenului p 24 face posibilă diagnosticarea infecției cu HIV în stadiile incipiente ale infecției, înainte de dezvoltarea anticorpilor.
Detectarea simultană a anticorpilor împotriva virusului HIV-1,2 și a antigenului virusului p 24 crește valoarea diagnosticului studiului.
Acest test detectează anticorpii împotriva HIV-1,2, precum și antigenul p24 al HIV-1,2. Analiza vă permite să diagnosticați infecția cu HIV în stadiile incipiente.
Modalități de transmitere a infecției:
- sexual;
- cu transfuzie de sânge;
- de la o mamă infectată la un nou-născut.
Infecția cu HIV - boala pe termen lung și gravă, care este însoțită de deteriorarea celulelor sistemului imunitar uman; metodele eficiente de tratament și mijloacele de prevenire specifică (vaccinuri) nu au fost încă dezvoltate împotriva acestuia.
Sursa virusului imunodeficienței este omul. Virusul la om poate fi izolat din lichidul seminal, secrețiile cervicale, limfocitele, plasma sanguină, lichidul cefalorahidian, lacrimile, saliva, urina și laptele matern, dar concentrația virusului în ele este diferită. Cea mai mare concentrație a virusului se găsește în următoarele medii biologice: material seminal, sânge, secreții cervicale.
Modalitățile prin care virusul poate fi transmis de la o persoană infectată la o persoană neinfectată sunt limitate.
Căi de transmitere a HIV
Există 3 moduri de transmitere a virusului imunodeficienței:
- Calea sexuală este cea mai frecventă. Infecția are loc în timpul contactului sexual neprotejat, în timp ce virusul pătrunde în organism prin membranele mucoase. Răni la nivelul mucoasei, ulcer, inflamație - cresc probabilitatea de infecție. Pentru persoanele cu infecții cu transmitere sexuală, riscul de infecție prin contactul cu o persoană infectată este de 2-5 ori mai mare. Pentru transmiterea virusului, este important nu numai gradul de intimitate al contactului, ci și cantitatea de agent patogen. Cu sexul neprotejat, o femeie este de aproximativ trei ori mai probabilă să fie infectată de un bărbat, deoarece o cantitate mai mare de virus pătrunde în corpul ei, iar femeia are o suprafață mult mai mare prin care virusul poate pătrunde în corp (mucoasa vaginală). Riscul de infecție este cel mai mare la actul sexual și cel mai puțin la actul oral.
- Contactul cu sângele unei persoane infectate: a) atunci când se utilizează ace comune, seringi, ustensile pentru prepararea medicamentelor, instrumente medicale nesterile; b) introducerea medicamentelor în prepararea cărora se folosește sânge; c) utilizarea, transfuzia de sânge de donator infectat și preparatele obținute din acesta (riscul este extrem de scăzut, deoarece toți donatorii, precum și sângele, sunt verificați cu atenție).
- De la mama infectată cu HIV (cale verticală) la făt în timpul sarcinii, prin canalul de naștere și alăptarea.
SIDA - stadiul terminal al infecției cu HIV
SIDA nu se dezvoltă imediat. La majoritatea persoanelor cu anticorpi împotriva virusului imunodeficienței, semnele clinice ale SIDA pot să nu apară timp de 2 până la 10 ani sau mai mult, iar cu un tratament de succes această perioadă este semnificativ crescută. Acest lucru se datorează faptului că durează suficient timp pentru a reduce numărul de celule T CD4 la un nivel în care sistemul imunitar este slăbit.
Virusul infectează și alte tipuri de celule, inclusiv celule ale sistemului nervos central și celule de sânge roșu și alb, în \u200b\u200bcare virusul pare să fie într-o stare „inactivă” pentru o lungă perioadă de timp înainte de a se înmulți activ. Factorii care influențează progresia bolii sunt diversi: caracteristici genetice, tulpina virusului, starea psihologică a pacientului, condițiile de viață și altele.
Evoluția bolii și durata etapelor depind, de asemenea, de faptul dacă persoana primește tratament și, dacă „da”, de ce medicamente.
4 etape ale infecției cu HIV
- Perioada de incubație („perioada ferestrei”) este perioada de la momentul infecției până la apariția în sângele uman a anticorpilor (proteinelor de protecție ale sistemului imunitar) la virus. În această perioadă, infecția nu se manifestă în niciun fel, toate testele sunt negative, dar persoana este deja contagioasă. Perioada de incubație poate dura până la 3 luni (în medie 25 de zile).
- Etapa manifestărilor primare. Durează în medie 2-3 săptămâni și se caracterizează printr-o creștere accentuată a cantității de virus din sânge. Această afecțiune se numește „boală seroconversie”, deoarece în acest moment anticorpii împotriva virusului apar în sânge în cantități suficiente pentru a fi detectați în timpul testelor. Această perioadă nu se manifestă la majoritatea oamenilor, dar 20-30% pot prezenta fenomene asemănătoare gripei: febră, ganglioni limfatici umflați, cefalee, dureri în gât, stare generală de rău, oboseală și dureri musculare. Această afecțiune dispare după 2-4 săptămâni fără tratament.
- Perioada asimptomatică. Vine după sfârșitul manifestărilor primare ale infecției și durează în medie până la 10 ani dacă nu este tratată. În această perioadă, sistemul imunitar luptă împotriva virusului din corpul uman: numărul de particule virale crește treptat și imunitatea scade. Spre sfârșitul acestei etape, persoanele infectate prezintă ganglioni limfatici măriți, transpirații nocturne, stare generală de rău și apar primele manifestări ale infecțiilor oportuniste care apar la om, cu o puternică slăbire a sistemului imunitar. Aceste infecții sunt cauzate de microorganisme care ne înconjoară și nu provoacă infecții la persoanele sănătoase. Un sistem imunitar slăbit poate duce, de asemenea, la dezvoltarea altor boli, cum ar fi cancerul.
- SIDA este ultima etapă a acestei boli și se caracterizează prin apariția unui număr de boli datorită slăbirii sistemului imunitar al organismului. De obicei, pacienții au un număr foarte mic de CD4 T; una sau mai multe infecții oportuniste severe (pneumonie pneumocystis, infecție fungică severă, tuberculoză etc.), care cauzează moartea în absența tratamentului; boli oncologice; encefalopatie (leziuni cerebrale, însoțite de dezvoltarea demenței).
Diagnosticul infecției cu HIV este un proces complex bazat pe date de laborator, examinări clinice și epidemiologice, testele de sânge de laborator jucând rolul principal în stabilirea diagnosticului.
Principala metodă de diagnostic de laborator este detectarea anticorpilor împotriva virusului folosind imunoanaliza enzimatică.
Procedura pentru efectuarea testelor de laborator pentru prezența antigenelor virusului imunodeficienței umane și a anticorpilor împotriva acestui virus este strict reglementată prin ordinele Ministerului Sănătății din Federația Rusă și include:
- stadiul studiului de screening (screening) prin metode de analiză imunosorbentă legată de enzime (ELISA) aprobate pentru utilizare;
- etapa de verificare (confirmativă) a cercetării prin metoda imunoblot în laboratorul centrului SIDA al orașului.
Diagnosticul de laborator al prezenței virusului imunodeficienței la copiii născuți de mame infectate cu acest virus are propriile sale caracteristici. Anticorpii materni la virus (clasa Ig G) pot circula în sângele copiilor până la 15 luni de la naștere. Absența anticorpilor împotriva virusului la nou-născuți nu înseamnă că acesta nu a pătruns în bariera placentară. Copiii mamelor infectate cu virusul imunodeficienței sunt supuși unui examen de laborator și diagnostic în termen de 36 de luni după naștere.
Până când nu se obține un rezultat pozitiv al imunoblotului și un rezultat negativ al studiului, o persoană este considerată sănătoasă și nu se iau măsuri anti-epidemice cu el.
Materialul pentru testarea anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței este sângele venos, care, de preferință, trebuie donat pe stomacul gol.
Desigur, testarea prezenței virusului este o problemă voluntară a fiecărei persoane. Testele pentru transportul virusului imunodeficienței nu pot fi prescrise forțat, fără acordul pacientului. Dar trebuie, de asemenea, să înțelegeți că cu cât este pus mai devreme diagnosticul corect, cu atât mai multe șanse aveți să trăiți o viață lungă și împlinită, chiar și purtătorul acesteia.
Indicații:
- umflarea ganglionilor limfatici în mai mult de două zone;
- leucopenie cu limfopenie;
- transpirații nocturne;
- pierderea accentuată în greutate dintr-un motiv neclar;
- diaree pentru mai mult de trei săptămâni de cauză necunoscută;
- febră de cauză necunoscută;
- planificarea sarcinii;
- pregătire preoperatorie, spitalizare;
- identificarea următoarelor infecții sau combinații ale acestora: tuberculoză, toxoplasmoză manifestă, infecție herpes-virală adesea recurentă, candidoză a organelor interne, nevralgie repetată de herpes zoster, cauzată de micoplasmă, pneumocistă sau pneumonie legionelă;
- sarcomul lui Kaposi la o vârstă fragedă;
- sex casual.
Se recomandă donarea de sânge dimineața, de la 8 la 12 ore. Sângele este extras pe stomacul gol sau după 4-6 ore de post. Este permisă consumul de apă fără gaz și zahăr. Supraîncărcarea alimentelor trebuie evitată în ajunul testării.
Reguli de înregistrare HIV:
Înregistrarea cererilor de cercetare în DNKOM se efectuează în funcție de pașaport sau de un document care îl înlocuiește (card de migrare, înregistrare temporară la locul de reședință, certificat de militar, certificat de la oficiul de pașapoarte dacă se pierde pașaport, card de înregistrare de la hotel). Documentul trimis trebuie să conțină informații despre înregistrarea temporară sau permanentă pe teritoriul Federației Ruse și o fotografie. În absența unui pașaport (un document care îl înlocuiește), pacientul are dreptul de a emite o cerere anonimă pentru livrarea biomaterialului. Cu o examinare anonimă, aplicației și eșantionului biomaterial primit de la client i se atribuie un număr cunoscut doar de pacient și personalul medical care a făcut comanda.
Rezultatele studiilor efectuate în mod anonim nu pot fi prezentate pentru spitalizare, examene profesionale și nu sunt supuse înregistrării în ORUIB.
Interpretarea rezultatelor
Testul anticorpului HIV 1/2 este de bună calitate. În absența anticorpilor, răspunsul este „negativ”. Dacă sunt detectați anticorpi împotriva HIV, studiul se repetă într-o altă serie. Dacă se repetă un rezultat pozitiv în imunoanaliza enzimatică, proba este trimisă pentru cercetare prin metoda de imunoblot de confirmare, care este „etalonul de aur” în diagnosticul HIV.
Rezultat pozitiv:
- Infecția cu HIV;
- rezultat fals pozitiv care necesită studii repetate sau suplimentare *;
- studiul nu este informativ la copiii cu vârsta sub 18 luni născuți de mame infectate cu HIV.
Rezultat negativ:
- neinfectat (au fost respectați termenii de diagnostic ai analizei);
- cursul seronegativ al infecției (anticorpii sunt produși târziu);
- stadiul terminal al SIDA (formarea anticorpilor împotriva HIV este afectată);
- studiul nu este informativ (termenii de diagnostic nu sunt îndepliniți).